专利名称：粘柄丝膜菌菌剂制作方法
技术领域：
本发明涉及一种粘柄丝膜菌菌剂制作方法。
背景技术：
目前，外生菌根菌是一类与植物共生的大型真菌，是陆地生态系统中的重要组成部分，在生态系统的物质循环和能量流动中，担当重要的角色。外生菌根真菌与树木的根形成联合体，扩大了植物根的吸收面积，增强了植物对矿质元素、水分的吸收能力，已证明了菌根能促进植物对氮、磷、钾、铜、锌等元素和水分的吸收利用；另一方面，真菌也通过植物的根获得碳水化合物及其它营养物质，从而形成营养上的互利关系。菌根可以提高林木生长及抗病性，可应用于林木根部病害的生物防治。粘柄丝膜菌又名粘腿丝膜菌、趟子蘑、油蘑，可食，与松属、云杉属、栎属、鹅耳栎属、柳属、榛属的一些树种形成外生菌根关系。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用粘柄丝膜菌菌丝体发酵液提高樟子松苗木生长及抗性。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案是: (1)、粘柄丝膜菌子实体鉴别:子实体小至中等大，菌盖扁半球形至平展，部分中央稍突，直径4.0～9.5cm，红褐色、黄褐色，中部色稍深，粘滑，边缘平滑无条纹但有丝膜，菌褶较厚，密，初淡紫色或土黄色，后锈褐色，弯生或近直生，菌肉白色至浅黄色，菌柄圆柱形，向下渐粗，长4.8～9.0cm，粗2.5cm，污白色，下部带紫色，粘，具内菌幕残片，孢子椭圆形、扁球形，粗糙，淡锈色，(10～16)μm×(7～9)μm， (2)、菌种分离、纯化:采用组织分离法，无菌条件下，挑取菌柄与菌盖之间的组织接种于改良的马铃薯葡萄糖琼脂平板培养基上，待组织块上长出菌丝，将菌丝转接到改良的马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，改良的马铃薯葡萄糖琼脂培养基配方，马铃薯150-200g，葡萄糖17-20g，琼脂17-20g，柞树皮5-10g，水1000ml， (3)、菌株鉴定:采用分子生物学鉴定方法，将子实体与分离得到的菌丝体分别进行rDNA ITS序列鉴定、比对，以证明分离得到的菌株来自于所分离的子实体， (4)菌丝体发酵液培养:采用改良的马铃薯葡萄糖培养基配方，马铃薯180-250g，葡萄糖18-20g，磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B1 10mg，水1000ml，接种量10％-15％、装液量200-300mL/500mL、摇床转速120-140r/min、温度24℃-26℃、发酵天数15-20d， (5)菌剂制作:将上述发酵液无菌条件下粉碎，加入无菌水配成1(发酵液):5(无菌水)浓度。
本发明的优点是: (1)、提高樟子松苗木生长及抗性水平。同时对云杉苗木、红松苗木促生长及提高抗性水平效果显著。
(2)、采用苗木截根-菌液浸根的方式，对红皮云杉2年生换床苗接种粘柄丝膜菌菌丝体发酵液，130天苗木高生长提高24％、地径生长提高29％、过氧化氢酶活性提高42％、根系活力提高11％。接种苗木无病害发生。
具体实施例方式 下面对本发明的实施例作进一步详细描述。
实施例1、 (1)、粘柄丝膜菌子实体鉴别:子实体小至中等大，菌盖扁半球形至平展，部分中央稍突，直径4.0～9.5cm，红褐色、黄褐色，中部色稍深，粘滑，边缘平滑无条纹但有丝膜，菌褶较厚，密，初淡紫色或土黄色，后锈褐色，弯生或近直生，菌肉白色至浅黄色，菌柄圆柱形，向下渐粗，长4.8～9.0cm，粗2.5cm，污白色，下部带紫色，粘，具内菌幕残片，孢子椭圆形、扁球形，粗糙，淡锈色，(10～16)μm×(7～9)μm， (2)、菌种分离、纯化:采用组织分离法，无菌条件下，挑取菌柄与菌盖之间的组织接种于改良的马铃薯葡萄糖琼脂平板培养基上，待组织块上长出菌丝，将菌丝转接到改良的马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，改良的马铃薯葡萄糖琼脂培养基配方，马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，柞树皮6g，水1000ml， (3)、菌株鉴定:采用分子生物学鉴定方法，将子实体与分离得到的菌丝体分别进行rDNA ITS序列鉴定、比对，以证明分离得到的菌株来自于所分离的子实体， (4)、菌丝体发酵液培养:采用改良的马铃薯葡萄糖培养基配方，马铃薯200g，葡萄糖18g，磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B1 10mg，水1000ml，接种量12.5％、装液量300mL/500mL、摇床转速140r/min、温度26℃、发酵天数18d， (5)、菌剂制作:将上述发酵液无菌条件下粉碎，加入无菌水配成1(发酵液):5(无菌水)浓度。
实施例2: (1)、粘柄丝膜菌子实体鉴别:子实体小至中等大，菌盖扁半球形至平展，部分中央稍突，直径4.0～9.5cm，红褐色、黄褐色，中部色稍深，粘滑，边缘平滑无条纹但有丝膜，菌褶较厚，密，初淡紫色或土黄色，后锈褐色，弯生或近直生，菌肉白色至浅黄色，菌柄圆柱形，向下渐粗，长4.8～9.0cm，粗2.5cm，污白色，下部带紫色，粘，具内菌幕残片，孢子椭圆形、扁球形，粗糙，淡锈色，(10～16)μm×(7～9)μm， (2)、菌种分离、纯化:采用组织分离法，无菌条件下，挑取菌柄与菌盖之间的组织接种于改良的马铃薯葡萄糖琼脂平板培养基上，待组织块上长出菌丝，将菌丝转接到改良的马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，改良的马铃薯葡萄糖琼脂培养基配方，马铃薯180g，葡萄糖20g，琼脂18g，柞树皮8g，水1000ml， (3)、菌株鉴定:采用分子生物学鉴定方法，将子实体与分离得到的菌丝体分别进行rDNA ITS序列鉴定、比对，以证明分离得到的菌株来自于所分离的子实体， (4)、菌丝体发酵液培养:采用改良的马铃薯葡萄糖培养基配方，马铃薯180g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B1 10mg，水1000ml，接种量10％、装液量250mL/500mL、摇床转速125r/min、温度23℃、发酵天数15d， (5)、菌剂制作:将上述发酵液无菌条件下粉碎，加入无菌水配成1(发酵液):5(无菌水)浓度。
实施例3、 (1)、粘柄丝膜菌子实体鉴别:子实体小至中等大，菌盖扁半球形至平展，部分中央稍突，直径4.0～9.5cm，红褐色、黄褐色，中部色稍深，粘滑，边缘平滑无条纹但有丝膜，菌褶较厚，密，初淡紫色或土黄色，后锈褐色，弯生或近直生，菌肉白色至浅黄色，菌柄圆柱形，向下渐粗，长4.8～9.0cm，粗2.5cm，污白色，下部带紫色，粘，具内菌幕残片，孢子椭圆形、扁球形，粗糙，淡锈色，(10～16)μm×(7～9)μm， (2)、菌种分离、纯化:采用组织分离法，无菌条件下，挑取菌柄与菌盖之间的组织接种于改良的马铃薯葡萄糖琼脂平板培养基上，待组织块上长出菌丝，将菌丝转接到改良的马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，改良的马铃薯葡萄糖琼脂培养基配方，马铃薯210g，葡萄糖17g，琼脂17g，柞树皮10g，水1000ml， (3)、菌株鉴定:采用分子生物学鉴定方法，将子实体与分离得到的菌丝体分别进行rDNA ITS序列鉴定、比对，以证明分离得到的菌株来自于所分离的子实体， (4)、菌丝体发酵液培养:采用改良的马铃薯葡萄糖培养基配方，马铃薯150g，葡萄糖19g，磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B110mg，水1000ml)，接种量15％、装液量240mL/500mL、摇床转速130r/min、温度28℃、发酵天数20d， (5)、菌剂制作:将上述发酵液无菌条件下粉碎，加入无菌水配成1(发酵液):5(无菌水)浓度。
权利要求
1.一种粘柄丝膜菌菌剂制作方法，其特征在于:
(1)、粘柄丝膜菌子实体鉴别:子实体小至中等大，菌盖扁半球形至平展，部分中央稍突，直径4.0～9.5cm，红褐色、黄褐色，中部色稍深，粘滑，边缘平滑无条纹但有丝膜，菌褶较厚，密，初淡紫色或土黄色，后锈褐色，弯生或近直生，菌肉白色至浅黄色，菌柄圆柱形，向下渐粗，长4.8～9.0cm，粗2.5cm，污白色，下部带紫色，粘，具内菌幕残片，孢子椭圆形、扁球形，粗糙，淡锈色，(10～16)μm×(7～9)μm，
(2)、菌种分离、纯化:采用组织分离法，无菌条件下，挑取菌柄与菌盖之间的组织接种于改良的马铃薯葡萄糖琼脂平板培养基上，待组织块上长出菌丝，将菌丝转接到改良的马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，改良的马铃薯葡萄糖琼脂培养基配方，马铃薯150-200g，葡萄糖17-20g，琼脂17-20g，柞树皮5-10g，水1000ml，
(3)、菌株鉴定:采用分子生物学鉴定方法，将子实体与分离得到的菌丝体分别进行rDNA ITS序列鉴定、比对，以证明分离得到的菌株来自于所分离的子实体，
(4)菌丝体发酵液培养:采用改良的马铃薯葡萄糖培养基配方，马铃薯180-250g，葡萄糖18-20g，磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B110mg，水1000ml，接种量10％-15％、装液量200-300mL/500mL、摇床转速120-140r/min、温度24℃-26℃、发酵天数15-20d，
(5)菌剂制作:将上述发酵液无菌条件下粉碎，加入无菌水配成1(发酵液):5(无菌水)浓度。
全文摘要
本发明涉及一种粘柄丝膜菌菌剂制作方法，本发明采用的工艺是粘柄丝膜菌子实体鉴别，菌种分离、纯化，菌株鉴定，菌丝体发酵液培养，菌剂制作。本发明提高樟子松苗木生长及抗性水平。同时对云杉苗木、红松苗木促生长及提高抗性水平效果显著。采用苗木截根-菌液浸根的方式，对红皮云杉2年生换床苗接种粘柄丝膜菌菌丝体发酵液，130天苗木高生长提高24％、地径生长提高29％、过氧化氢酶活性提高42％、根系活力提高11％。接种苗木无病害发生。
文档编号C12N1/14GK101376874SQ200710072709
公开日2009年3月4日 申请日期2007年8月28日 优先权日2007年8月28日
发明者宋瑞清, 余江勇 申请人:东北林业大学, 宋瑞清, 余江勇