专利名称：蝇蚧霉v-5菌株、使用该菌株的害虫防治方法和含有该菌株的微生物农药的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种蝇蚧霉(Lecanicillium muscarium)V-5菌株、使用该菌株的害虫防治方法和含有该菌株的微生物农药。本发明用于环境友好地、快速和长时间地害虫防治， 特别是在农业和园艺领域中。
背景技术：
一些丝状真菌是昆虫类和螨虫类的天敌，例如，属于轮枝菌(Verticillium)属和白僵菌(Beauveria)属的天敌丝状真菌已实际上用作杀虫剂。一些在过去分类为蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)的菌株基于分生孢子和瓶梗的形态学观察和β-微管蛋白基因的限制性片段长度多态性分析最近已重新分类为蝇蚧霉(Lecanicillium muscarium) 0 结果，本发明的菌株和商品名为MYC0TAL的菌株(由K0PPERT制备)重新分类为蝇蚧霉。 专利文献1公开了具有绿色植物表面粘着性能的微生物农药，其包含作为昆虫病原真菌 (entomopathogenic fungus)的具有对绿色植物表面的粘着活性的蜡蚧轮枝菌菌株，但是没有描述本发明的菌株。此外，作为杀虫剂的包含蝇蚧霉的微生物农药，MYC0TAL在市场上是作为蜡蚧轮枝菌可湿性粉剂，但是本发明菌株的菌落与MYC0TAL中含有的菌株的菌落不同。引用目录专利文献专利文献1 JP-A-2003-335612
发明内容
发明要解决的问题本发明的技术问题是提供一种新的丝状真菌菌株，所述菌株作为对环境安全、速效并且在对害虫的卵和幼虫喷雾处理的情况下杀虫效果优异的微生物农药是有用的。用于解决问题的方案为解决上述问题的目的，本发明人已发现比常规已知的属于蝇蚧霉的丝状真菌表现出目标害虫的更高死亡率和可在更短时间内防治目标害虫的本发明的菌株。即，本发明涉及蝇蚧霉V-5菌株(保藏编号FERM BP-11135)、使用该菌株的害虫防治方法及包含该菌株的微生物农药。(蝇蚧霉v-5菌株的分离和保藏申请)本发明的蝇蚧霉V-5菌株(下文称为本发明的菌株)是从日本滋贺县草津市西涉川2 丁目3番1号的石原产业(株)中心研究所(ISHIHARA SANGYO KAISHA, LTD.， CENTRAL RESEARCH INSTITUTE (2-3-1, Nishishibukawa, Kusatsu, Shiga, Japan))温室中的银叶粉虱分离的菌株。本发明的菌株基于其形态学性质(分生孢子梗上形成有椎形瓶梗的轮生体和在顶端上形成有块状的单个分生孢子，瓶梗长度为11. 2μπι-34. 3μπι，基部直径为1. 1 μ m-2. 7 μ m,分生孢子为椭圆或棍棒形并且其大小为1. 4 μ m_3. 4 μ mX 2. 1 μ m-7. 5 μ m， 菌落为白色至淡黄白色，并且没有观察到形成次生瓶梗)和基于微管蛋白基因的限制性片段长度多态性的结果(通过PCR扩增540bp的DNA片段和通过HaeIII消化形成360bp 和 180bp 的片段)，根据 R. Zare 和 W. Gams 等人的分类(Nova Hedwigia 73 :1-50,2001) 鉴定为蝇蚧霉。本发明的菌株在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心 (National Institute of Advanced Industrial Science andTechnology,International Patent Organism Depositary) (Chuo 6,1-1-1,Higashi,Tsukuba, Ibaraki, Japan) 1蝇蚧霉V-5菌株(保藏编号FERM BP-11135)并于2009年6月10日被该中心接收。其为具有杀虫和杀螨作用的丝状真菌，包含该菌株的微生物农药在防治害虫方面是有用的。发明的效果当使用本发明的菌株时，可显著有效地防治害虫。因为本发明的菌株繁殖能力优异，其可确保高细胞浓度并且还保持优异的杀虫效果。基于此，可以进行有效的害虫防治。 此外，因为其表现了对害虫卵期的杀虫效果，所以可以在早期实施有效的害虫防治。此外， 因为本发明使用丝状真菌，其还具有对环境显著高的安全性并且在需要速效性和持续效果的防治害虫的情况下也是有用的。
[图1]显示试验例3中本发明的菌株的菌落的照片。[图2]显示试验例3中从MYC0TAL分离的菌株的菌落的照片。
具体实施例方式本发明的菌株可通过将其原样施用或在任选用水稀释后作为微生物农药使用。其施用浓度和施用量依赖于不同的条件如害虫的种类、害虫的生长阶段和气候条件等而改变，但是作为每1公亩中本发明的菌株的孢子数，施用量通常为5 X IO6个孢子至5 X IO12个孢子，优选5 X IO7个孢子至5 X IO11个孢子。本发明的菌株可通过将其制成制剂作为微生物农药使用。在制备制剂的过程中， 可使用用于配制昆虫病原菌作为微生物农药的一般方法。如果需要，可通过与载体(例如， 固体载体和液体载体)、表面活性剂、其他配制佐剂等任意组合配制为粉剂、可湿性粉剂、混悬剂和油悬浮剂(oil flowable)等形态。其中，优选的形态是最初制成粉剂然后溶解于水以在使用前喷雾的可湿性粉剂。当将本发明的菌株制成可湿性粉剂并通过用水稀释而使用时，在以本发明的菌株浓度按施用溶液中的孢子数量计一般为每Iml为IO2个孢子至101°个孢子，优选每Iml为IO3个孢子至IO8个孢子的方式稀释可湿性粉剂后施用该菌株。固体载体的实例包括硅藻土、氢氧化钙、碳酸钙、滑石、白炭黑、高岭土、膨润土、高岭石、绢云母的混合物、粘土、碳酸钠、碳酸氢钠、硫酸钠、沸石和淀粉。此外，液体载体的实例包括溶剂如水、甲苯、二甲苯、溶剂石脑油、二噁烷、丙酮、异佛尔酮、甲基异丁基酮、氯苯、 环己烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮和酒精；植物油和矿物油如橄榄油、爪哇木棉油、蓖麻油、棕榈油、山茶油、椰子油、芝麻油、玉米油、米糠油、花生油、棉籽油、大豆油、菜籽油、亚麻籽油、桐油和液体石蜡；等。表面活性剂的实例包括阴离子表面活性剂，如脂肪酸盐、安息香酸盐、烷基磺化琥珀酸盐、二烷基磺化琥珀酸盐、聚羧酸盐、烷基硫酸酯盐、烷基硫酸盐、烷芳基硫酸盐、烷基二甘醇醚硫酸盐、硫酸醇酯盐(salt of alcohol sulfuric acid ester)、烷基磺酸盐、烷芳基磺酸盐、芳基磺酸盐、木质素磺酸盐、烷基二苯基醚二磺酸盐、聚苯乙烯磺酸盐、烷基磷酸酯盐、烷芳基磷酸盐、苯乙烯基芳基磷酸盐、聚氧乙烯烷基醚硫酸酯盐、聚氧乙烯烷芳基醚硫酸盐、聚氧乙烯烷芳基醚硫酸酯盐、聚氧乙烯烷基醚磷酸盐、聚氧乙烯烷芳基磷酸酯盐、 和萘磺酸与福尔马林的缩合物的盐；非离子表面活性剂，如失水山梨醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、脂肪酸聚甘油酯、脂肪酸醇聚二醇醚、炔二醇、乙炔醇、氧化烯嵌段共聚物、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷芳基醚、聚氧乙烯苯乙烯基芳基醚、聚氧乙烯二醇烷基醚、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油和聚氧乙烯脂肪酸酯；等。这些表面活性剂可改进喷雾时真菌菌体的可分散性和铺展性。其他配方佐剂的实例包括乳化剂、分散剂、稳定剂、润湿剂、混悬剂、展着剂、渗透剂、杀真菌剂等。乳化剂的实例包括木质素磺酸盐、藻酸盐等。分散剂的实例包括聚乙烯醇、 阿拉伯树胶、羧甲基纤维素等。稳定剂的实例包括酸性磷酸异丙酯、聚氧乙烯树脂酸(酯)、 松香酸盐等。润湿剂的实例包括二萘基甲烷二磺酸盐等。在使用本发明的菌株防治害虫的方法中，如果需要，使用喷雾器如动力喷雾器、肩挂式喷雾器、手动喷雾器，通过将其喷雾至害虫、害虫栖息地、待防治害虫的植物等而施用药剂。此外，施用中，该药剂可通过与不表现出对天敌丝状真菌不良影响的其他杀虫剂和杀螨剂以及肥料、杀菌剂、植物生长调节剂等混合而施用。通过本发明的害虫防治方法而防治的害虫实例包括粉虱类，如温室粉虱 (Trialeurodes vaporariorum) > S, (Bemisia tabaci)禾口 ttt iI^ Ml (Dialeurodes citri)；虫牙虫类，如桃虫牙(Myzus persicae)、棉虫牙(Aphis gossypii)、甘蓝虫牙(Brevicoryne brassicae)、爺无网虫牙(Aulacorthum solani)、萝卜虫牙(Lipaphis erysimi)、大卓戈长管虫牙(Macrosiphum euphorbiae)禾口葱虫牙(Neotoxoptera formosana)；叶虫茜类，如相結全爪螨(Panonychus citri)、苹果全爪螨(Panonychus ulmi)、二斑叶螨(Tetranychus urticae)禾口神泽氏叶觸(Tetranychus kanzawai)；莉马类，如花莉马(Frankliniella intonsa)、西花蓟马(Frankliniella occidentalis)、棕榈蓟马(Thrips palmi)禾口茶黄蓟马(Scirtothrips dorsalis)；锈螨类，如皮氏刺皮瘿螨(Aculops pelekassi)和番茄刺皮瘿螨(Aculops lycopersici)；潜叶虫类，如三叶草斑潜蝇(Liriomyza trifolii)；螟蛾类；甘蓝夜蛾类；天牛类，如马库白星天牛(Anoplophora malasiaca)和菊天牛(Phytoecia rujiventris)；等。要防治的害虫的优选实例包括粉虱类、蓟马类等。此外，待防治害虫的植物的实例包括果树、如橙树、苹果树、梨树、桃树、葡萄树、无花果树和樱桃果树；茶树；蔬菜类，如茄子、黄瓜、西红柿、菠菜、卷心菜和欧芹；水果类，如草莓、瓜类和西瓜；花树类，如玫瑰花树、菊花树、康乃馨树、樱桃树和山茶花树；观叶植物，如秋海棠；等。使用本发明的菌株作为母株通过自然突变或诱导突变得到的突变菌株只要其具有与本发明的菌株相同的特征也包含于本发明的菌株之内。制备这些突变菌株的方法的实例包括常规已知的方法，如其中对母株用诱变剂如紫外线照射和亚硝基胍(NTG)进行人工突变处理然后选择具有优异杀虫效果的菌株的方法。接下来，描述本发明的具体实施方案，但是本发明不应限制于这些实施方案。(1) 一种用于防治害虫的方法，所述方法包括用本发明的菌株处理害虫。
(2)根据⑴中所述的方法，其中所述害虫是选自由粉虱类、蚜虫类、叶螨类、蓟马类、锈螨类、潜叶虫类、螟蛾类、甘蓝夜蛾类和天牛类组成的组的至少一种。(3)根据⑴中所述的方法，其中所述害虫是粉虱类。(4)根据(1)中所述的方法，其中所述害虫是蓟马类。实施例试验例1 (对烟粉虱卵的喷雾试验)试验方法(1)将4个种植有一株叶期黄瓜(品种=Hokushin)的直径为7cm的盆置于昆虫箱 (260X340X340mm)中并使B类烟粉虱成虫产卵7小时。将其中以该方式产卵的各盆转移至保持在25°C在黑暗条件下的昆虫室中每天8小时并静置以使粉虱生长。产卵5天(烟粉虱卵期)后，记录产于黄瓜叶上的卵数。(2)使用喷雾枪，将已稀释和调整至给定浓度的喷雾液体(分生孢子混悬剂，制备后2小时内)以每4个盆中的喷雾水量变为50ml的方式一次喷雾至各盆的茎叶部分。喷雾后立即将它们转移至盖着的塑料容器(保持于100%湿度，底部填充水)中并使其在25°C 在黑暗条件下静置15小时。此后，使黄瓜叶在与(1)相同条件下的昆虫室中静置。(3)使用立体显微镜判断烟粉虱的生或死以计算药液喷雾处理后7天(烟粉虱1 和2龄幼虫期)、13天(烟粉虱2和3龄幼虫期)、19天(烟粉虱4龄幼虫期)和沈天(烟粉虱羽化痕(post-emergence)期)的死亡率。关于这一点，为了比较，还使用通过将前述商品名MYC0TAL(由K0PPERT制备)稀释以得到作为实际浓度的分生孢子浓度3. OX 106/ml 而制备的喷雾液体来实施试验。试验结果如表1所示。试验结果[表 1]
权利要求
1.一种蝇蚧霉V-5菌株(保藏编号=FERM BP-11135)。
2.一种用于防治害虫的方法，其包括用权利要求1所述的菌株处理害虫。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述害虫是选自由粉虱类、蚜虫类、叶螨类、蓟马类、锈螨类、潜叶虫类、螟蛾类、甘蓝夜蛾类和天牛类组成的组中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述害虫是粉虱类。
5.根据权利要求3所述的方法，其中所述害虫是蓟马类。
6.一种微生物农药，其包含权利要求1所述的菌株。
全文摘要
需要一种对环境安全、速效并且在对害虫的卵和幼虫喷雾处理的情况下杀虫效果优异的微生物农药。本发明提供一种使用蝇蚧霉V-5菌株(保藏编号FERM BP-11135)防治至少一种选自由粉虱类、蚜虫类、叶螨类、蓟马类、锈螨类、潜叶虫类、螟蛾类、甘蓝夜蛾类和天牛类组成的组的害虫的方法；和包含所述菌株的微生物农药。
文档编号C12N1/14GK102171327SQ20098013139
公开日2011年8月31日 申请日期2009年8月11日 优先权日2008年8月11日
发明者加岛崇之, 小川宗和, 荒木智史 申请人:石原产业株式会社