专利名称：制备提纯灵菌红素的方法
技术领域：
本发明属于制药技术领域，具体涉及一种制备提纯灵菌红素的方法。
背景技术：
灵菌红素(Prodigiosin)，其结构如式(I)所示，正式名称为2-methyl_3-pe ntyl-6-methoxyprodiginine)，是 Prodiginin 白勺一禾中，是由粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)和多种放线菌(Str印tomyces)等细菌合成的一类次级代谢产物。灵菌红素， 又名灵菌素、灵杆菌素，具有三吡咯环骨架结构，其中的一个吡咯环C2上带有一个甲基，C3 上则有一个戊基。
权利要求
1.一种制备提纯灵菌红素的方法，其特征在于所述方法包括先培养粘质沙雷氏菌 (Serratia marcescens)LTH_2 菌株，然后从粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)LTH_2 菌株代谢产物中分离纯化获得灵菌红素的步骤；所述粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens) LTH-2菌株现在已经保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2011209。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法具体包括以下步骤(1)用粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens) LTH-2生产菌株，经粘质沙雷氏菌母种发酵培养，提取红色代谢产物并浓缩得到灵菌红素粗品；(2)对灵菌红素粗品使用硅胶柱层析法进行初步分离纯化，所述初步分离纯化的条件是洗脱液采用石油醚、乙酸乙酯混合物进行梯度洗脱；梯度控制的条件为起始阶段石油醚与乙酸乙酯的体积比为50:1，中间阶段采用的石油醚与乙酸乙酯的体积比为20 :1和10 1，最后阶段石油醚与乙酸乙酯的体积比为5 :1，收集石油醚与乙酸乙酯的比例为5:1时的洗脱下来的组分并浓缩形成灵菌红素次纯品；(3)对灵菌红素次纯品通过高效液相色谱分离法进行进一步纯化，高效液相色谱分离法的条件是色谱柱采用C18柱，柱温控制在观！，流动相采用甲醇、0. 1%冰乙酸，进行梯度洗脱，梯度洗脱的条件是0 5min采用体积比占65%的甲醇以及体积比占35%的0. 1% 冰乙酸混合流动相洗脱；5. 01 i:3min只采用甲醇洗脱；13. θΓ 5. ^iin采用体积比占65% 的甲醇以及体积比占35%的0. 1%冰乙酸混合流动相洗脱；以双波长监测灵菌红素纯化过程①检测波长为535nm，参比波长为630nm ；②检测波长为254nm，参比波长为360nm ；根据颜色变化和色谱检测器信号的变化，收集2. 0 4. Omin时间段的红色组分，即可得到含有甲醇和0. 1%冰乙酸的灵菌红素溶液，并旋转蒸发去除甲醇形成灵菌红素高纯品。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述方法步骤(1)中粘质沙雷氏菌母种通过以下方法制备在牛肉膏蛋白胨培养生产发酵母种，将颜色深红的菌株接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，并将此菌株作为发酵母种菌株使用。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述方法步骤(1)中发酵培养粘质沙雷氏菌母种的方法是接种生产发酵母种于发酵培养基中发酵生产，发酵条件是通气培养，生产温度控制在^ 30°C得到发酵液；所述的发酵培养基为液体培养基，培养基以其组分的重量百分比计包括牛肉膏5重量份数；蛋白胨 10重量份数；NaCl 5重量份数；蒸馏水 100重量份数；所述液体培养基的PH值控制在6. 8 7. 5。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述方法步骤(1)灵菌红素粗品是通过将发酵液离心，上清液用乙酸乙酯萃取，沉淀物溶解于甲醇，合并上清液中的乙酸乙酯红色萃取物和沉淀物中的甲醇红色提取物得到含灵菌红素的混合液，将含灵菌红素的混合液浓缩后溶解于乙酸乙酯，去除不溶物得到灵菌红素粗品。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述方法步骤(3)中旋转蒸发去除甲醇再经真空低温冷冻干燥除去溶剂形成灵菌红素高纯品。
全文摘要
本发明公开了一种制备提纯灵菌红素的方法，该方法是用粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)生产菌株，经粘质沙雷氏菌母种发酵培养，提取红色代谢产物并浓缩得到灵菌红素粗品；然后对灵菌红素粗品通过硅胶柱层析法、高效液相色谱分离法进行纯化，再通过真空低温冷冻干燥获得灵菌红素高纯品。该方法制备的高纯品产品纯度为≥98%，而且生产方法高效，使用的有机溶剂可以旋转蒸发而回收循环利用。
文档编号C12R1/43GK102311981SQ20111020199
公开日2012年1月11日 申请日期2011年7月19日 优先权日2011年7月19日
发明者吴巍, 尹立红, 杨飞, 浦跃朴 申请人:东南大学