用胎盘细胞群治疗骨缺损的方法和组合物的制作方法

专利名称：用胎盘细胞群治疗骨缺损的方法和组合物的制作方法
技术领域：
本发明提供了分离的胎盘细胞，例如胎盘灌洗液，贴壁的和非贴壁的胎盘干细胞，胎盘干细胞群，包含该干细胞的组合物，获取该干细胞的方法，配制包含该干细胞的组合物的方法，和用该干细胞和组合物治疗骨缺损的方法。
2.
背景技术：
人类干细胞是能够产生多种成熟的人体细胞系的全能或多潜能前体细胞。有证据表明，干细胞可以用来再生许多(如果不是所有)组织，并恢复生理学和解剖学功能。许多不同类型的哺乳动物干细胞已经得到表征。例如，参见Caplan等人，美国专利号5，486，359(人间充质干细胞)；Boyse等人，美国专利号5，004，681 (胎儿和新生儿的造血干细胞和祖细胞)；Boyse等人，U.S.5, 192, 553 (同前)；Beltrami等人,Cell114(6):763-766(2003)(心脏干细胞);Forbes 等人，J.Pathol.197(4):510-518(2002)(肝干细胞)。脐血和取自脐带血的总有核细胞已被用于移植，以部分或全部恢复经历了消融疗法的患者的造血功能。3.发明概述本发明提供了分离的胎盘细胞，例如胎盘灌洗液，贴壁的和非贴壁的胎盘干细胞，胎盘干细胞群，包含该细胞的组合物，获得该胎盘细胞的方法，配制该组合物的方法，和用这些细胞治疗骨缺损的方法。本发明提供了分 离的干细胞和包含这种干细胞的细胞群，其中该干细胞存在于胎盘组织(例如羊膜、绒毛膜、胎盘小叶、脐带等)并可从中分离，它们在修复骨缺陷中有用。胎盘干细胞表现出干细胞的一个或多个特征(例如表现出与干细胞相关的标记，在培养中以未分化状态复制至少10-20次，分化成代表三个胚层的成体细胞等)，并能贴壁到组织培养基质(例如组织培养塑料，如组织培养皿或多孔板的表面)上。在一实施方案中，本发明提供了分离的非贴壁胎盘干细胞。在某些实施方案中，所述分离的干细胞是⑶34+的。在某些实施方案中，该分离的干细胞是⑶44-的。在某些实施方案中，该分离的干细胞是CD34+和CD44—的。在某些实施方案中，该分离的干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些实施方案中，该分离的干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些实施方案中，该分离的干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些实施方案中，该分离的干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些实施方案中，该分离的干细胞已经通过酶消化从人胎盘组织分离。在某些实施方案中，该分离的干细胞已经通过灌洗从人胎盘中分离。在某些实施方案中，当所述胎盘细胞群在允许矿化基质形成的条件下培养时，该分离的干细胞有利于在胎盘细胞群中形成矿化基质。在另一实施方案中，本发明提供了分离的非贴壁胎盘细胞的群。在某些实施方案中，该细胞群包括CD34+干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括CD44—干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括⑶34+和⑶44_干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括干细胞，其中至少有大约70%的所述细胞是⑶34+和⑶44_干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括干细胞，其中至少有大约90%的所述细胞是CD34+和CD44_干细胞。在某些实施方案中，该细胞群已经被扩增。在某些实施方案中，该细胞群已经被传代至少一次。在某些实施方案中，该细胞群已经被传代至少5次。在某些实施方案中，该细胞群已经被传代至少10次。在某些实施方案中，该细胞群已经被传代至少20次。在某些实施方案中，当所述胎盘细胞群在允许矿化基质形成的条件下培养时，该细胞群在胎盘细胞群中形成或有利于形成矿化基质。在另一方面，本发明提供了分离的⑶34+和⑶44_胎盘干细胞的群。在某些实施方案中，该干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些实施方案中，该干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些实施方案中，该干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些实施方案中，干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些实施方案中，至少约70%的该干细胞是⑶34+和⑶44_干细胞。在某些实施方案中，至少约90%的该干细胞是⑶34+和⑶44_的干细胞。在某些实施方案中，该细胞群已经被扩增。在某些实施方案中，该细胞群已经被传代至少一次。在某些实施方案中，该细胞群已经被传代至少5次。在某些实施方案中，该细胞群已经被传代至少10次。在某些实施方案中，该细胞群已经被传代至少20次。在某些实施方案中，当所述胎盘细胞群在允许矿化基质形成的条件下培养时，该细胞群在胎盘细胞群中形成或有利于形成矿化基质。在一实施方案中，本发明提供了分离的⑶200+或HLA-G+胎盘干细胞。在具体实施方案中，该干细胞是贴壁的。在另一具体实施方案中，所述细胞是CD200+和HLA-G+的。在具体实施方案中，所述干细胞是CD73+和CD105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38—或⑶45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38—和⑶45—的。在另一具体实施方案中，所述 干细胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+和⑶105+的。在另一具体实施方案中，当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，所述干细胞有利于在包括胎盘干细胞的分离的胎盘细胞的群中形成一个或多个拟胚体。在另一实施方案中，本发明提供了包括⑶200+、HLA-G+干细胞的分离的胎盘细胞的群。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在各种实施方案中，至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少在90%、或至少约95%或以上的所述分离的胎盘细胞是⑶200+、HLA-G+干细胞。在上述细胞群的一具体实施方案中，所述干细胞是CD73+和CD105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34'⑶38-或⑶45-的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+和⑶105+的。在其他具体实施方案中，所述细胞群已经被扩增，例如，传代至少一次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一具体实施方案中，所述细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，形成一个或多个拟胚体。在另一实施方案中，本发明提供了分离的⑶73+、⑶105+和⑶200+胎盘干细胞。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是HLA-G+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34_、CD38_或CD45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34—、⑶38—和⑶45—的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶34—、⑶38_、CD45—和HLA-G+的。在另一具体实施方案中，当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，所述干细胞有利于在包括该干细胞的分离的胎盘细胞的群中形成一个或多个拟胚体。在另一实施方案中，本发明提供了包括⑶73+、⑶105+、⑶200+干细胞的分离的胎盘细胞的群。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在各种实施方案中，至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少在90%、或至少约95%的所述分离的胎盘细胞为⑶73+、⑶105+、⑶200+干细胞。在所述细胞群的另一具体实施方案中，所述干细胞是HLA-G+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38—或⑶45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38—和⑶45—的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+的。在其他具体实施方案中，所述细胞群已经被扩增，例如，传代至少一次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一具体实施方案中，所述细胞群在允许拟胚体形成的条件下在培养中形成一个或多个拟胚体。本发明还提供了⑶200+和0CT-4+的分离的胎盘干细胞。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在另一具体实施方案中，该干细胞是CD73+和CD105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是HLA-G+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34_、CD38_或⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的。在另一具体实施方案中，当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，所述干细胞有利于在包括胎盘干细胞的分离的胎盘细胞的群中形成一个或多个拟胚体。在另一实施方案中，本发明提供了包括⑶200+、0CT-4+胎盘干细胞的分离的胎盘细胞的群。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在各种实施方案中，至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少 约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、或至少约95%的所述分离的胎盘细胞为⑶200+、0CT-4+干细胞。在上述细胞群的具体实施方案中，所述干细胞是CD73+和CD 105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是HLA-G+。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的。在其他具体实施方案中，所述细胞群已经被扩增，例如，已经被传代至少一次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一具体实施方案中，所述细胞群在允许拟胚体形成的条件下的培养时形成一个或多个拟胚体。在另一实施方案中，本发明提供分离的⑶73+和⑶105+胎盘干细胞，当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，其有利于在包括所述干细胞的分离的胎盘细胞的群中形成一个或多个拟胚体。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34_、0038_或0045_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是0CT4+的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是0CT4+、⑶34_、⑶38—和⑶45—的。本发明进一步提供了包括⑶73+、⑶105+胎盘干细胞的分离的胎盘细胞的群，其中，所述细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时形成一个或多个拟胚体。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在各种实施方案中，至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、或至少约95%的所述分离的胎盘细胞为CD73+、CD105+干细胞。在上述细胞群的具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38—或⑶45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38—和⑶45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是0CT-4+的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是0CT-4+、⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在其他具体实施方案中，所述细胞群已经被扩增，例如，已经被传代至少一次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。本发明还提供了分离的⑶73+、⑶105+和HLA-G+胎盘干细胞。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是0034_、0038_或0045_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34—、CD38—和CD45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是0CT-4+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD200+的。在另一更具体实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-、CD45_、0CT-4+和CD200+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞在允许拟胚体形成的条件下培养时有利于在包括胎盘干细胞的分离的胎盘细胞的群中形成一个或多个拟胚体。本发明还提供了⑶73+、⑶105+和HLA-G+胎盘干细胞的分离的胎盘干细胞的群。在具体实施方案中，该干细胞是贴壁的。在各种实施方案中，至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、或至少约95%的所述分离的胎盘细胞为⑶73+、⑶105+和HLA-G+干细胞。在上述细胞群的具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38—和⑶45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是0CT-4+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶200+的。在另一更具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和⑶200+的。在另一具体实施方案中，所述细胞群已经被扩增，例如，已经被传代至少一次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一具体实施方案中，所述细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时形成拟胚体。本发明还提供了分离的0CT-4+胎盘干细胞，在允许拟胚体形成的条件下培养时，其有利于在包括所述干细胞的分离的胎盘细胞的群中形成一个或多个拟胚体。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD73+和CD105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34_、CD38_或CD45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶200+的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34_、CD38-和 CD45-的。本发明还提供了包括0CT-4+胎盘干细胞的分离的胎盘细胞的群，其中，所述细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时形成一个或多个拟胚体。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在各种实施方案中，至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、或至少约95%的所述分离的胎盘细胞为0CT-4+干细胞。在上述细胞群的具体实施方案中，所述干细胞是⑶73+和⑶105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34—、CD38—或CD45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶200+的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述细胞群已经被扩增，例如，被传代至少一次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。本发明 进一步提供了本文所述的贴壁或非贴壁胎盘干细胞的分离群，该细胞群根据如下方法生成，该方法包括:灌洗已经排出了脐血并已经灌洗了的哺乳动物胎盘以除去残余血；用灌洗液灌洗所述胎盘；和收集所述灌洗液，其中灌洗后的所述灌洗液包括包含胎盘干细胞的胎盘细胞群；和从所述细胞群中分离多种所述胎盘干细胞。在具体实施方案中，该灌洗液流过脐静脉和脐动脉，然后在其从胎盘流出后收集。在另一具体实施方案中，所述灌洗液通过脐静脉，而从脐动脉收集，或通过脐动脉，而从脐静脉收集。本发明进一步提供了分离的胎盘干细胞或分离的胎盘干细胞的群，如本文所述，其根据如下方法生成，该方法包括:用组织裂解酶消化胎盘组织以获得包括胎盘干细胞的胎盘细胞群，并从所述胎盘细胞的残余物中分离多种胎盘干细胞。在具体实施方案中，所述胎盘组织是整个胎盘、羊膜、绒毛膜、羊膜和绒毛膜的组合，或上述任意几项的组合。在其他具体实施方案中，该组织裂解酶是胰蛋白酶或胶原蛋白酶。在更具体的实施方案中，本发明提供了分离的胎盘干细胞，其中所述干细胞相对于骨髓来源的间充质干细胞以可检测的更高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因为 ACTG2、ADARB1、AMIG02、ATRS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ1078U GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3, PJP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 / 或ZC3H12A，并且其中所述骨髓来源的干细胞已经进行过多次培养传代，其次数相当于所述胎盘干细胞的传代次数。在更具体的实施方案中，所述胎盘干细胞相对于骨髓来源的间充质干细胞以可检测的更高水平表达 ACTG2、ADARBl、AMIG02、ATRS-1、B4GALT6、BCHE、Cl lorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3, PJP2, RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLCl2A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A。在更具体的实施方案中，本发明还提供了分离的胎盘干细胞的群，其中所述干细胞群相对于骨髓来源的间充质干细胞群以可检测的更高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因为 ACTG2、ADARBU AMIG02、ATRS-U B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD`、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FU10781、GATA6、GPRl26、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3, PJP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和/或ZC3H12A，并且其中所述骨髓来源的干细胞的群已经进行过多次培养传代，其次数相当于所述胎盘干细胞的传代次数，其中所述骨髓来源的干细胞的群具有与所述分离的干细胞的群相当的细胞数。在更具体的实施方案中，所述分离的干细胞的群相对于骨髓来源的间充质干细胞群以可检测的更高水平表达ACTG2、ADARB1、AMIG02、ATRS-1、B4GALT6、BCHE、Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMU IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP, MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3、PJP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A。本发明还提供了包含一种或多种所述胎盘细胞，例如本发明所提供的胎盘灌洗液、胎盘灌洗细胞或胎盘干细胞的组合物，其中所述细胞已从胎盘分离。在优选实施方案中，所述包含胎盘细胞的组合物可用于修复骨缺损。因此，本发明提供了包含胎盘灌洗液，或从胎盘灌洗液中分离的细胞，例如来自胎盘灌洗液的总有核细胞的组合物。在一方面，本发明提供了包含胎盘灌洗液或胎盘灌洗细胞，例如来自胎盘灌洗液的总有核细胞的组合物。本发明进一步提供了包含胎盘干细胞的组合物，其中所述干细胞是分离的非贴壁胎盘干细胞。在某些实施方案中，所述干细胞是CD34+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶44_的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶34+和⑶44_的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些实施方案中，所述干细胞已通过酶消化从人胎盘中分离。在某些实施方案中，所述干细胞已通过灌洗从人胎盘分离。在某些实施方案中，当所述胎盘细胞群在允许矿化基质形成的条件下培养时，所述细胞有利于在胎盘细胞群中形成矿化基质。在另一个方面，本发明提供了包含胎盘干细胞的组合物，其中所述干细胞是分离的⑶34+和⑶44—干细胞。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些实施方案中，所述干细胞已通过酶消化从人胎盘中分离。在某些实施方案中，所述干细胞已通过灌洗从人胎盘分离。在某些实施方案中，当所述胎盘细胞群在允许矿化基质形成的条件下培养时，所述细胞有利于在胎盘细胞群中形成矿化基质。在某些实施方案中，所述组合物包含本发明所提供的分离的干细胞和诱导该干细胞分化成成骨细胞的化合物。在某些实施方案中，该组合物包含本发明所提供的分离的干细胞或分离的干细胞的群，和诱导所述干细胞群中的多种干细胞分化成成骨细胞的化合物。在某些实施方案中， 这种化合物是地塞米松或抗坏血酸。在某些实施方案中，本发明提供了包含分离的胎盘干细胞的组合物，其中所述干细胞是CD200+和HLA-G+的。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶73+和⑶105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38—或⑶45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34—、⑶38—和⑶45—的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+、⑶200+和HLA-G+的。在另一实施方案中，本发明提供了包含分离的胎盘干细胞的组合物，其中所述干细胞是CD73+、CD105+和CD200+的。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是HLA-G+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34_、CD38_或⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶34'⑶38'⑶45-和HLA-G+的。在另一实施方案中，本发明提供了包含分离的胎盘干细胞的组合物，其中所述干细胞是CD200+和0CT-4+的。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶73+和⑶105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是HLA-G+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34—、CD38—或CD45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在另一具体的实施方案中，所述干细胞是⑶34_、CD38' CD45' CD73+、CD105+ 和 HLA-G+ 的。在另一实施方案中，本发明提供了包含分离的⑶73+和⑶105+胎盘干细胞的组合物，其中，在允许拟胚体形成的条件下，所述干细胞有利于在包括所述干细胞的分离的胎盘细胞的群中形成拟胚体。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是0CT-4+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD200+的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是 OCT-4+、CD200+、CD34' CD38-和 CD45-的。在又一实施方案中，本发明提供了包含分离的⑶73+、⑶105+和HLA-G+胎盘干细胞的组合物。在具体实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是0CT-4+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD200+的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是0CT-4+、CD200+、CD34' CD38-和 CD45-的。在另一实施方案中，本发明提供了包含分离的0CT-4+胎盘干细胞的组合物，其中，在允许拟胚体形成的条件下，所述干细胞有利于在包括所述干细胞的分离的胎盘细胞的群中形成拟胚体。在具体实施方案中，所述干细胞是CD73+和CD105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34—、⑶38—和⑶45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶200+的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是CD73+、CD105+、CD200+、CD34-、CD38-和CD45-的。本发明还提供了包含胎盘干细胞群的组合物，该干细胞相对于骨髓来源的间充质干细胞群以可检测的更高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因选自:ACTG2、ADARB1、AMIG02、ATRS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FU10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMU IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP, MATN2、MEST, NFE2L3、NUAKU PCDH7、PDLIM3, PJP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A，并且其中所述骨髓来源的干细胞的群已经进行过多次培养传代，其次数相当于所述胎盘干细胞的传代次数。在上述组合物更具体的实施方案中，所述干细胞相对于骨髓来源的间充质干细胞群以可检测的更高水平表达 ACTG2、ADARBl、AMIG02、ATRS-l、B4GALT6、BCHE、Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FU10781、GATA6、GPRl26、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3, PJP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A，其中所述干细胞群与所述骨髓来源的间充质干细胞群具有相同的细胞数。在另一具体实施方案中，任何上述组合物均包含基质。在更具体的实施方案中，所述基质是三维支架。在另一更具体的实施方案中，所述基质包括胶原蛋白、明胶、层连蛋白、纤连蛋白、果胶、鸟氨酸或玻连蛋白。在另一更具体的实施方案中，该基质是羊膜或源自羊膜的生物材料。在另一更具体的实施方案中，所述基质包括细胞外膜蛋白。在另一更具体的实施方案中，所述基质包括合成化合物。在另一更具体的实施方案中，所述基质包括生物活性化合物。在另一更具体的实施方案中，所述生物活性化合物是生长因子、细胞因子、抗体或小于5000道尔顿的有机分子。在某些实施方案中，该基体是合成的可降解聚合物，例如，聚乳酸和聚羟基 乙酸。在某些实施方案中，该基质是可植入的支架底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物选自:β -磷酸三钙底物、β -磷酸三钙-胶原蛋白底物、胶原蛋白底物、磷酸钙底物、矿化人胎盘胶原蛋白底物、透明质酸底物以及陶瓷底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是β-磷酸三钙底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是β-磷酸三钙-胶原蛋白蛋白底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是胶原蛋白底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是磷酸钙底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是矿化人胎盘胶原蛋白底物。在另一实施方案中，本发明还提供了包含由以上任何干细胞或以上任何干细胞群调节的培养基的组合物。在具体实施方案中，任何这样的组合物包含不是来自胎盘的干细胞。在更具体的实施方案中，所述干细胞是胚胎干细胞。在另一更具体的实施方案中，所述干细胞是间充质干细胞。在另一更具体的实施方案中，所述干细胞是骨髓来源的干细胞。在另一更具体的实施方案中，所述干细胞是造血祖细胞。在另一更具体的实施方案中，所述干细胞是体细胞干细胞。在另一更具体的实施方案中，所述体细胞干细胞是神经干细胞、肝脏干细胞、胰腺干细胞、内皮干细胞、心脏干细胞或肌肉干细胞。在另一方面，本发明提供了包含由本发明所提供的胎盘干细胞或胎盘干细胞群调节的培养基的组合物。在某些实施方案中，该组合物包含由细胞群，如本发明提供的干细胞群调节的培养基。本发明还提供了生产细胞群的方法，该方法包括选择不贴壁到底物的细胞，并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群。在某些实施方案中，该方法还包括选择表达⑶34而不表达CD44的细胞，并增加例如与其他细胞分离的所述细胞的浓度，从而形成细胞群。在某些实施方案中，本发明提供了生成细胞群的方法，该方法包括选择如下细胞，其(a)不贴壁到底物，(b)表达CD34而不表达CD44，和(c)当所述胎盘细胞群在允许矿化基质形成的条件下培养时有利于在胎盘细胞群中形成矿化基质；和从其他细胞中分离所述细胞以形成细胞群·。在某些实施方案中，所述底物包括纤连蛋白。在某些实施方案中，所述方法还包括选择表达⑶9、⑶29、⑶54、⑶90、⑶166或上述的组合的的细胞。在某些实施方案中，所述方法还包括选择表达⑶31、⑶34、⑶117、⑶133、⑶200或上述的组合的细胞。在某些实施方案中，用抗体进行所述选择。在某些实施方案中，用流式细胞仪进行所述选择。在某些实施方案中，用磁性小珠进行所述选择。在某些实施方案中，用荧光激活细胞分类术进行所述选择。在某些实施方案中，扩增所述细胞群。在另一方面，本发明提供了非贴壁胎盘干细胞的群，其中，所述细胞已经被冷藏，且所述细胞群被装在容器中。在某些实施方案中，所述干细胞为⑶34+和⑶44_的。在某些实施方案中，所述细胞被冷藏，且其中所述群被装在容器中，和其中所述干细胞在允许矿化基质形成的条件下培养时形成矿化基质。在某些实施方案中，所述容器是适于静脉内输液的袋。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO6个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO6个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO7个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5X107个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO8个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO8个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括IXlO9个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO9个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X 101°个所述干细胞。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过5次。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过10次。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过15次。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过20次。在某些实施方案中，所述干细胞已经在所述容器内被扩增。在某些实施方案中，所述细胞群被装在0.9%NaCl溶液中。在另一方面，本发明提供了能矿化基质的成骨细胞的生成方法，该方法包括在所述干细胞分化成成骨细胞的条件下，培养本发明所提供的多种干细胞或多种干细胞群，所述培养时间为足以使所述成骨细胞产生或有利于产生可检测量的富含钙和/或磷的矿化基质。在某些实施方案中，所述成骨细胞生成骨。在又一方面，本发明提供了制备基质的方法，该方法包括将本发明所提供的干细胞群与可植入的支架底物组合。在某些实施方案中，所述干细胞是非贴壁的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶34+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶44_的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶34+和⑶44_的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些实施方案中，至少大约70%的所述干细胞为⑶34+和⑶44_干细胞。在某些实施方案中，至少大约90%的所述干细胞为⑶34+和0044_干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括IXlO6个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO6个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO7个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO7个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO8个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO8个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO9个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO9个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO10个所述干细胞。在某些实施方案中，所述干细胞已经被传代至少、大约或不超过5次。在某些实施方案中，所述干细胞 已经被传代至少、大约或不超过10次。在某些实施方案中，所述干细胞已经被传代至少、大约或不超过15次。在某些实施方案中，所述干细胞已经被传代至少、大约或不超过20次。在某些实施方案中，所述细胞群已经被扩增。在某些实施方案中，所述可植入的支架底物选自磷酸三钙底物、磷酸三钙-胶原蛋白底物、胶原蛋白底物、磷酸钙底物、矿化人胎盘胶原蛋白底物、透明质酸底物以及陶瓷底物。在某些实施方案中，所述该可植入的支架底物是磷酸三钙底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是磷酸三钙-胶原蛋白底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是胶原蛋白底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是磷酸钙底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是矿化人胎盘胶原蛋白底物。在又一方面，本发明提供了配制可注射组合物的方法，该方法包括将胎盘干细胞群与可注射的透明质酸或胶原蛋白组合。在某些实施方案中，所述干细胞是非贴壁的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶34+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶44_的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶34+和⑶44_的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些实施方案中，至少大约70% 的所述干细胞为⑶34+和⑶44_干细胞。在某些实施方案中，至少大约90%的所述干细胞 为⑶34+和⑶44_干细胞。在某些其他实施方案中，所述胎盘干细胞是贴壁的。在某些具体 实施方案中，所述胎盘干细胞是⑶200+和HLA-G+的XD73+、⑶105+和⑶200+的KD200+和 0CT-4+的KD73+、⑶105+和HLA-G+的KD73+和⑶105+的，且当所述胎盘细胞群在允许拟胚 体形成的条件下培养时，其有利于在包括所述干细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个拟胚 体；或者0CT-4+的且当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，其有利于在包 括所述干细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个拟胚体；或其任意组合。在某些非贴壁胎盘 干细胞更具体的实施方案中，所述分离的⑶200+、HLA-G+干细胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+ 和 CD105+ 的；所述分离的 CD73+、CD105+ 和 CD200+ 干细胞是 CD34' CD38' CD45-和 HLA-G+ 的；所述分离的 CD200+、0CT-4+ 干细胞是 CD34'CD38'CD45'CD73+、CD105+ 和 HLA-G+ 的；如 权利要求1所述的分离的干细胞，其中所述⑶73+、⑶105+和HLA-G+干细胞是⑶34_、⑶45_、 0CT-4+和⑶200+的；有利于一个或多个拟胚体形成的所述分离的⑶73+和⑶105+干细胞是 0CT-4+、⑶34_、⑶38_和⑶45_的；和/或所述0CT-4+的且有利于一个或多个拟胚体形成的 分离的干细胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34'⑶38-和⑶45—的。在某些实施方案中，所述 胎盘细胞群已经被扩增。在某些实施方案中，所述组合物包含可注射透明质酸。在某些实 施方案中，所述组合物包含可注射胶原蛋白。本发明还提供了包含非贴壁干细胞和可注射 透明质酸或可注射胶原蛋白的组合物。在另一方面，本发明提供了治疗个体骨缺损的方法，该方法包括向有此需要的个 体给予包含本发明所提供的干细胞群的可植入或可注射组合物，从而治疗该个体的骨缺 损。在某些实施方案中，所述骨缺损是与癌症有关的溶骨性损伤、骨折、或脊柱如需要融合 的脊柱。在某些实施方案中，所述溶骨性损伤与多发性骨髓瘤、骨癌或转移性癌有关。在某 些实施方案中，所述骨折是非联合性骨折。在某些实施方案中，将包含非贴壁干细胞群的可 植入组合物给予所述个体。在某些实施方案中，可植入组合物通过外科手术植入，如植入到 骨缺损部位。在某些实施方案中，将包含非贴壁干细胞群的可注射组合物给予所述个体。在 某些实施方案中，可注射组合物通过外科手术给予到骨缺损区域。在某些实施方案中，将可 注射组合物系统性给药。在某些实施方案中，所述干细胞是非贴壁的。在某些实施方案中，所述干细胞是 ⑶34+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶44_的。在某些实施方案中，所述干细胞是 ⑶34+和⑶44—的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某 些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细 胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、 ⑶133+和⑶200+的。在某些实施方案中，至少大约70%的所述干细胞为⑶34+和⑶44—干细 胞。在某些实施方案中，至少大约90%的所述干细胞为⑶34+和⑶44_干细胞。在某些其他 实施方案中，所述胎盘干细胞是贴壁的。在某些具体实施方案中，所述胎盘干细胞是CD200+ 和 HLA-G+ 的；CD73+、CD105+ 和 CD200+ 的;CD200+ 和 0CT-4+ 的；CD73+、CD105+ 和 HLA-G+ 的； CD73+和CD105+的，且当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，其有利于在包 括所述干细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个拟胚体；或者0CT-4+的且当所述胎盘细胞群 在允许拟胚体形成的条件下培养时，其有利于在包括所述干细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个拟胚体；或其任意组合。在某些非贴壁胎盘干细胞更具体的实施方案中，所述分离的CD200+、HLA-G+干细胞是 CD34'CD38'CD45'CD73+和 CD105+ 的；所述分离的 CD73+、CD105+和CD200+干细胞是CD34' CD38' CD45—和HLA-G+的；所述分离的CD200+、0CT-4+干细胞是⑶34—、⑶38—、⑶45—、⑶73+、⑶105+和HLA-G+的；如权利要求1所述的分离的干细胞，其中所述CD73+、CD105+和HLA-G+干细胞是CD34'CD45'OCT_4+和CD200+的；有利于一个或多个拟胚体形成的所述分离的⑶73+和⑶105+干细胞是0CT-4+、⑶34_、⑶38—和⑶45—的；和/或所述0CT-4+的且有利于一个或多个拟胚体形成的分离的干细胞是⑶73+Q、⑶105+、⑶200+、⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在某些实施方案中，所述细胞群已经被扩增。在另一个方面，本发明提供了生成细胞群的方法，该方法包括选择如下细胞，其a)贴壁到底物，和b)表达CD34而不表达CD44，和从其他细胞中分离所述细胞以形成细胞群。在某些实施方案中，该方法还包括从其他细胞中分离所述细胞以形成细胞群。在某些实施方案中，生成细胞群的该方法包括选择如下细胞，其(a)贴壁到底物，(b)表达CD34而不表达CD44，和(c)当所述胎盘细胞群在允许矿化基质形成的条件下培养时，有利于在胎盘细胞群中形成矿化基质；和从其他细胞中分离所述细胞以形成细胞群。在某些实施方案中，所述底物包括纤连蛋白。在某些实施方案中，本发明提供了生成细胞群的方法，该方法包括选择如下细胞，其a)不贴壁到底物，和b)表达CD34而不表达CD44，和从其他细胞中分离所述细胞以形成细胞群。在某些实施方案中，所述方法还包括从其他细胞中分离所述细胞以形成细胞群。在某些 实施方案中，生成细胞群的该方法包括选择如下细胞，其(a)不贴壁到底物，(b)表达CD34而不表达CD44，和(c)当所述胎盘细胞群在允许矿化基质形成的条件下培养时，有利于在胎盘细胞群中形成矿化基质；和从其他细胞中分离所述细胞形成细胞群。在某些实施方案中，所述底物包括纤连蛋白。在某些实施方案中，所述方法包括选择表达至少以下之一的细胞:⑶9、⑶29、⑶54、⑶90、⑶166或以上的结合。在某些实施方案中，所述方法包括选择表达至少以下之一的细胞:⑶31、⑶34、⑶117、⑶133、⑶200或以上的结合。在某些实施方案中，用抗体进行所述选择。在某些实施方案中，用流式细胞仪进行所述选择。在某些实施方案中，用磁性小珠进行所述选择。在某些实施方案中，用荧光激活细胞分类法进行所述选择。在某些实施方案中，扩增所述细胞群。在某些实施方案中，所述干细胞为⑶34+和⑶44_的，其中所述细胞被冷藏，且其中所述细胞群被装在容器中。在某些实施方案中，所述细胞被冷藏，且其中所述细胞群被装在容器中，和其中所述干细胞在允许矿化基质形成的条件下培养时形成矿化基质。在某些实施方案中，所述容器是适于静脉内输液的袋。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO6个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO6个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括IXlO7个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO7个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO8个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5X108个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO9个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO9个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IOltl个所述干细胞。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过5次。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过10次。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过15次。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过20次。在某些实施方案中，所述干细胞已经在所述容器内被扩增。在某些实施方案中，所述细胞群被装在0.9%NaCl溶液中。在另一方面，本发明提供了生成成骨细胞的方法，该方法包括在所述干细胞分化成成骨细胞的条件下，培养多种胎盘干细胞或多种分离的胎盘干细胞的群，所述培养时间为足以使所述成骨细胞产生或有利于产生可检测量的矿化基质。在又一方面，本发明提供制备基质的方法，该方法包括将胎盘干细胞群与可植入的支架底物组合，其中所述干细胞是CD34+和CD44_的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些实施方案中，至少大约70%的所述干细胞为⑶34+和⑶44_干细胞。在某些实施方案中，至少大约90%的所述干细胞为CD34+和0044_干细胞。在某些实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在具体实施方案中，所述贴壁胎盘干细胞是⑶200+和HLA-G+的<D73+、⑶105+和⑶200+的KD200+和0CT-4+的KD73+、⑶105+和HLA-G+的KD73+和⑶105+的，且当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，其有利于在包括所述干细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个拟胚体；或者0CT-4+的且当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，其有利于在包括所述干细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个拟胚体；或其任意组合。在某些非贴壁胎盘干细胞更具体的实施方案中，所述分离的⑶200+、HLA-G+干细胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+和 CD105+ 的；所述分离的 CD73+、CD105+ 和 CD200+ 干细胞是 CD34' CD38' CD45-和 HLA-G+的；所述分离的 CD200+、0CT-4+ 干细胞是 CD34'CD38'CD45'CD73+、CD105+ 和 HLA-G+ 的；如权利要求1所述的分离的干细胞，其中所述⑶73+、⑶105+和HLA-G+干细胞是⑶34_、⑶45_、0CT-4+和⑶200+的；有利于一个或多个拟胚体形成的所述分离的⑶73+和⑶105+干细胞是0CT-4+、⑶34_、⑶38_和⑶45_的；和/或所述0CT-4+的且有利于一个或多个拟胚体形成的分离的干细胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34'⑶38-和⑶45—的。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO6个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO6个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO7所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO7个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO8个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包·括5 X IO8个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO9个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO9个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IOltl个所述干细胞。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过5次。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过10次。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过15次。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过20次。在某些实施方案中，所述细胞群已经被扩增。在某些实施方案中，上述可植入的支架底物选自磷酸三钙底物、磷酸三钙-胶原蛋白底物、胶原蛋白底物、磷酸钙底物、矿化人胎盘胶原蛋白底物和透明质酸底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是磷酸三钙底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是磷酸三钙-胶原蛋白底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是胶原蛋白底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是磷酸钙底物。在某些实施方案中，该可植入的支架底物是矿化人胎盘胶原蛋白底物和/或支架。在又一方面，本发明提供了配制可注射组合物的方法，该方法包括将胎盘干细胞群与可注射的透明质酸或胶原蛋白组合，其中所述干细胞是CD34+和CD44_的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些实施方案中，至少大约70%的所述干细胞为⑶34+和⑶44_干细胞。在某些实施方案中，至少大约90%的所述干细胞为⑶34+和⑶44_干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群已经被扩增。在某些实施方案中，所述干细胞是贴壁的。在某些实施方案中，所述组合物包含可注射的透明质酸。在某些实施方案中，所述组合物包含可注射的胶原蛋白。本发明还提供了包含非贴壁干细胞群和可注射的透明质酸或胶原蛋白的组合物。在又一方面，本发明还提供了治疗个体骨缺损的方法，其包括向有此需要的个体给予包含干细胞群的可植入或可注射组合物，其中所述干细胞是CD34+和CD44—的，从而治疗个体的骨缺损。在某些实施方案中，所述骨缺损是(a)与癌症有关的溶骨性损伤，(b)骨折，或(c)需要融合的脊柱。在某些实施方案中，所述溶骨性损伤与多发性骨髓瘤、骨癌或转移性癌有关。在某些实施方案中，所述骨折是非联合性骨折。在某些实施方案中，将包含非贴壁干细胞群的可植入组合物给予所述个体。在某些实施方案中，可植入组合物通过外科手术植入。在某些实施方案中，将包含非贴壁干细胞群的可注射组合物给予所述个体。在某些实施方案中，可注射组合物通过外科手术给予到骨缺损区域。在某些实施方案中，将可注射组合物系统性给药。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些实施方案中，所述干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些实施方案中，至少大约70%的所述干细胞为⑶34+和⑶44_干细胞。在某些实施方案中，至少大约90%的所述干细胞为⑶34+和⑶44_干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群已被扩增。在又一方面，本发明还提供了 治疗个体骨缺损的方法，该方法包括向有此需要的个体给予包含干细胞群的可植入或可注射组合物，其中，所述干细胞是CD34-的，从而治疗个体的骨缺损。在某些实施方案中，所述骨缺损是(a)与癌症有关的溶骨性损伤，(b)骨折，或(C)需要融合的脊柱。在某些实施方案中，所述溶骨性损伤与多发性骨髓瘤、骨癌或转移性癌有关。在某些实施方案中，所述骨折是非联合性骨折。在某些实施方案中，将包含贴壁干细胞群的可植入组合物给予所述个体。在某些实施方案中，可植入组合物通过外科手术植入。在某些实施方案中，将包含贴壁干细胞群的可注射组合物给予所述个体。在某些实施方案中，可注射组合物通过外科手术给予到骨缺损区域。在某些实施方案中，将可注射组合物系统性给药。在非贴壁胎盘干细胞的更具体的实施方案中，所述分离的CD200+、HLA-G+干细胞是 CD34' CD38' CD45' CD73.和 CD105.的；所述分离的 CD73+、CD105.和 CD200.干细胞是CD34' CD38' CD45-和 HLA-G+ 的；所述分离的 CD200+、0CT-4+ 干细胞是 CD34' CD38' CD45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的；如权利要求1所述的分离的干细胞，其中所述⑶73+、⑶105+和HLA-G+干细胞是⑶34_、⑶45_、0CT-4+和⑶200+的；有利于一个或多个拟胚体形成的所述分离的CD73.和CD105.干细胞是OCT-4+、CD34' CD38-和CD45-的；和/或所述0CT-4+的且有利于一个或多个拟胚体形成的分离的干细胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34_、⑶38—和⑶45_的。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO6个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO6个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO7个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO7个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X IO8个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO8个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括IXlO9个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括5 X IO9个所述干细胞。在某些实施方案中，所述细胞群包括I X 101°个所述干细胞。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过5次。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过10次。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过15次。在某些实施方案中，所述干细胞传代不超过20次。在某些实施 方案中，所述细胞群已经被扩增。本发明还提供了生产哺乳动物胎盘来源的干细胞群的方法。在一实施方案中，例如，本发明提供了生产细胞群的方法，该方法包括选择如下细胞，其a)贴壁到底物，和b)表达CD200和HLA-G ;和从其他细胞中分离所述细胞以形成细胞群。在另一实施方案中，本发明提供了生产细胞群的方法，该方法包括选择如下细胞，其(a)贴壁到底物，和(b)表达⑶73、⑶105和⑶200 ;和从其他细胞中分离所述细胞以形成细胞群。在另一实施方案中，本发明提供了生产细胞群的方法，该方法包括选择如下细胞，其(a)贴壁到底物，和(b)表达CD200和0CT-4 ;和从其他细胞中分离所述细胞以形成细胞群。在另一实施方案中，本发明提供了生产细胞群的方法，该方法包括选择如下细胞，其(a)贴壁到底物，(b)表达CD73和CD105，和(c)当在允许拟胚体形成的条件下与胎盘细胞群一起培养时，有利于一个或多个拟胚体的形成；从其他细胞中分离所述细胞以形成细胞群。在另一实施方案中，本发明提供了生产细胞群的方法，该方法包括选择如下细胞，其(a)贴壁到底物，和(b)表达CD73、CD105和HLA-G ;和从其他细胞中分离所述细胞以形成细胞群。本发明还提供了生产细胞群的方法，该方法包括选择如下细胞，其(a)贴壁到底物，(b)表达0CT-4，和(c)当在允许拟胚体形成的条件下与胎盘细胞群一起培养时，有利于一个或多个拟胚体的形成；和从其他细胞中分离所述细胞以形成细胞群。在以上任何方法的具体实施方案中，所述底物包括纤连蛋白。在另一具体实施方案中，该方法包括选择表达ABC-p的细胞。在另一具体实施方案中，该方法包括选择表现出间充质干细胞特有的至少一种特征的细胞。在更具体的实施方案中，所述间充质干细胞特有的特征是表达⑶29、表达⑶44、表达⑶90、或者以上组合。在所述方法的另一具体实施方案中，用抗体进行所述选择。在另一更具体的实施方案中，用流式细胞仪进行所述选择。在另一具体实施方案中，用磁性小珠进行所述选择。在另一具体实施方案中，用荧光激活细胞分类法进行所述选择。在以上方法的另一具体实施方案中，扩增所述细胞群。本发明还提供了生产细胞系的方法，该方法包括用编码生长-启动蛋白质的DNA序列转化干细胞；和将所述干细胞暴露在促进所述生长-启动蛋白质生成的条件下。在具体实施方案中，所述生长-启动蛋白质是v-myc、N-myc、c-myc、p53、SV40大T抗原、多瘤病毒大T抗原、Ela腺病毒或人乳头状瘤病毒E7蛋白。在更具体的实施方案中，所述DNA序列是可调节的。在更具体的实施方案中，所述DNA序列可被四环素调节。在另一具体实施方案中，所述生长-启动蛋白质具有可调节活性。在另一具体的实施方案中，所述生长-启动蛋白质是温度敏感型突变体。
本发明还提供了冷藏的干细胞群。例如，本发明提供了 CD200+和HLA-G+干细胞群，其中所述细胞已经被冷藏，且其中所述细胞群被装在容器中。本发明还提供了 CD73+、CD105+、CD200+干细胞群，其中所述干细胞已经被冷藏，且其中所述细胞群被装在容器中。本发明还提供了⑶200+、0CT-4+干细胞群，其中所述干细胞已经被冷藏，且其中所述细胞群被装在容器中。本发明还提供了 CD73+、CD105+干细胞群，其中所述细胞已经被冷藏，且其中所述细胞群被装在容器中，和其中当所述干细胞在允许拟胚体形成的条件下与胎盘干细胞群一起培养时，有利于一个或多个拟胚体的形成。本发明还提供了⑶73+、⑶105+、HLA-G+干细胞群，其中所述细胞已经被冷藏，且其中所述细胞群被装在容器中。本发明还提供了 0CT-4+干细胞群，其中所述细胞已经被冷藏，且其中所述细胞群被装在容器中，和当所述干细胞在允许拟胚体形成的条件下与胎盘干细胞群一起培养时，有利于一个或多个拟胚体的形成。在任何上述的冷藏细胞群的具体实施方案中，所述容器是袋。在各种具体实施方案中，所述细胞群包括大约、至少或最多I X IO6个所述干细胞、5 X IO6个所述干细胞、I X IO7个所述干细胞、5 X IO7个所述干细胞、I X IO8个所述干细胞、5 X IO8个所述干细胞、I X IO9个所述干细胞、5X109个所述干细胞、或IXlOici个所述干细胞。在任何上述冷藏细胞群的其他具体实施方案中，所述干细胞已经传代大约、至少或不超过5次，不超过10次，不超过15次，或不超过20次。在任何上述冷藏细胞群的另一具体实施方案中，所述干细胞在所述容器中已经被扩增。本发明还包括制备矿化胶原蛋白基质的方法，该方法包括矿化胶原蛋白并将该矿化的胶原蛋白基质进行交联。在某些实施方案中，所述胶原蛋白是胎盘胶原蛋白。在某些实施方案中，所述胶原蛋白用磷酸钙进行矿化。在某些实施方案中，所述胶原蛋白用丁二醇二缩水甘油醚进行交联。在某些实施方案中，在矿化反应中磷酸钙与胶原蛋白的比例为5: 95,10: 90,15: 85,20: 80,25: 75,30: 70,35: 65,40: 60,45: 55,50: 50、55: 45,60: 40,65: 35,70: 30,75: 25,80: 20,85: 15,90: 10 或 95: 5。3.1.定义

如本文所用的术语“SH2”是指结合标记⑶105上的抗原决定部位的抗体。因此，称作SH2+的细胞是CD105+的。如本文所用的术语“SH3”和“SH4”是指结合标记⑶73上的抗原决定部位的抗体。因此，称作SH3+和/或SH4+的细胞是⑶73+的。如本文所用的术语“分离的干细胞”是指基本上与该干细胞所来源的组织如胎盘的其他非干细胞分离的干细胞。如果从所述干细胞中除去，例如在收集和/或培养该干细胞时除去了至少大约50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%的与该干细胞天然相关的非干细胞，则该干细胞是“分离的”。如本文所用的术语“分离的细胞的群”是指基本上与该细胞群所来源的组织如胎盘的其他细胞分离的细胞的群。如果从所述干细胞中除去，例如在收集和/或培养该干细胞时除去了至少大约50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%的与所述细胞群或来源于该细胞群的细胞天然相关的细胞，则该干细胞是“分离的”。如本文所用的术语“胎盘干细胞”是指来源于哺乳动物胎盘的干细胞或祖细胞，不考虑其形态、细胞表面标记或原代培养后的传代次数。然而，如本文所用的术语“胎盘干细胞”并不指滋养母细胞。如果细胞具有干细胞的至少一个特点，则该细胞被认为是“干细胞”，该特点例如与一种或多种干细胞相关的标记或基因表达图谱；在培养中复制至少10-40次的能力，分化成三种胚层细胞的能力；缺少成体(即已分化)细胞的特征等等。术语“胎盘干细胞”和“胎盘来源的干细胞”可互换使用。如本文所用的术语“胎盘灌洗液”是指已经流过胎盘如人胎盘的至少一部分如脉管系统的灌洗液，其包含在灌洗液流过胎盘的过程中所收集的多种细胞。如本文所用的术语“胎盘灌洗细胞”是指有核细胞，如从或可从胎盘灌洗液中分离的总有核细胞。如本文所用，当某个具体标记是可检测的，则干细胞对于该具体标记来说为“阳性的”。例如，胎盘干细胞是例如CD73阳性的，因为CD73在胎盘干细胞上以可检测的大于背景(与如同型对照相比)的量而可检测。当标记存在于所述细胞或被所述细胞表达且可用于将该细胞与至少另外一种细胞类型区别开或可用于选择或分离该细胞时，该细胞对于该标记来说是阳性的。如本文所用，“成骨细胞”是能够沉积骨的主要成分羟磷灰石或能够分化成能沉积轻磷灰石的细胞的细胞。具体地，“成骨细胞”预期包括通常称作成骨细胞或骨细胞的细胞。如本文所用，“基质”是指三维底物，其特征为具有分散在整个底物中的空隙。所述空隙适于在基质内例如生长细胞，如干细胞，胎盘来源的贴壁干细胞和/或成骨细胞。示例性基质包括但不限于磷酸三钙底物、磷酸三钙-胶原蛋白底物、胶原蛋白底物、磷酸钙底物、矿化人胎盘胶原蛋白底物、透明质酸底物以及陶瓷底物。优选地，该基质被基质空隙中存在的成骨细胞矿化。
4.


图1:来自灌洗液(A)、羊膜⑶、绒毛膜(C)、羊膜-绒毛膜板⑶或脐带(E)的胎盘干细胞的存活力。X轴上的数字表示得到干细胞的胎盘。

图2:通过FACS Cal ibur测得的来自灌洗液(A)、羊膜⑶、绒毛膜(C)、羊膜-绒毛膜板(D)或脐带(E)的HLA ABC7⑶45_/⑶347⑶133+细胞的百分比。X轴上的数字表示得到干细胞的胎盘。图3:通过FACS Aria测得的来自灌洗液㈧、羊膜⑶、绒毛膜(C)、羊膜-绒毛膜板⑶或脐带(E)的HLA ABC7⑶45_/⑶347⑶133+细胞百分比。X轴上的数字表示得到干细胞的胎盘。图4:从胎盘灌洗液得到的干细胞中的HLA-G、⑶10、⑶13、⑶33、⑶38、⑶44、⑶90、CD105、CD117、CD200 表达。图5:从羊膜得到的干细胞中的 HLA-G、CD10、CD13、CD33、CD38、CD44、CD90、CD105、CD117、CD200 表达。图6:从绒毛膜得到的干细胞中的HLA-G、⑶10、⑶13、⑶33、⑶38、⑶44、⑶90、CD105、CD117、CD200 表达。图7:从羊膜-绒毛膜板得到的干细胞中的HLA-G、⑶10、⑶13、⑶33、⑶38、⑶44、CD90、CD105、CD117、CD200 表达。图8:从脐带得到的干细胞中的 HLA-G、CD10、CD13、CD33、CD38、CD44、CD90、CD105、CD117、CD200 表达。
图9:从灌洗液㈧、羊膜⑶、绒毛膜(C)、羊膜-绒毛膜板⑶或脐带(E)得到的干细胞中的 HLA-G、CD10、CD13、CD33、CD38、CD44、CD90、CD105、CD117、CD200 表达的平均表达。图10:本研究中使用的羊膜/绒毛膜(AC)、脐带(UC)、骨髓来源的干细胞(BM-MSC)和人皮肤纤维母细胞(NHDF)细胞系的培养时间进程。所有培养均使用相同的接种和传代密度进行生长和增殖。圆圈表示培养用于RNA分离。在即将老化之前收集后期培养。在38-倍增时收集两个UC培养(UC-38)，以对比胰蛋白酶作用对基因表达的效果。所有其他培养在RNA分离之前在其培养瓶中直接水解。图11:羊膜/绒毛膜(AC)、脐带(UC)、骨髓来源的干细胞(BM-MSC)和人皮肤纤维母细胞(DF)中8215个基因的相对表达水平的线图。X轴上与每个细胞系名称相连的数字是指该细胞系在评估基因表达水平之前的培养天数。图表由GeneSpring软件分析的RNA表达数据生成。AC-03用作选择条件。图12:羊膜/绒毛膜(AC)、脐带(UC)、骨髓来源的干细胞(BM-MSC)和人皮肤纤维母细胞(DF)在AC-03中显示基因过量表达> 6倍的所有基因系列的子集。X轴上与每个细胞系名称相连的数字是指该细胞系在评估基因表达水平之前的培养天数。图表由GeneSpring软件分析的RNA表达数据生成。AC-03用作选择条件。图13:羊膜/绒毛膜(AC)、脐带(UC)、骨髓来源的干细胞(BM-MSC)和人皮肤纤维母细胞(DF)中通过倍数变化过滤发现的胎盘干细胞特异性或脐带干细胞特异性基因。X轴上与每个细胞系名称相连的数字是指该细胞系在评估基因表达水平之前的培养天数。图表由GeneSpring软件分析的RNA表达数据生成。AC-03用作选择条件。图14:在两种不同的培养基配方中培养的胎盘干细胞(图14A)和间充质干细胞(图14B)的碱性磷酸酶活性。

图15:在两种不同的培养基配方中培养的胎盘干细胞(图15A)的矿化。图16:在OS培养基而不是Anthro IB培养基中诱导的胎盘干细胞产生的矿物质沉积。图17:在两种不同的支架上生长的胎盘干细胞和间充质干细胞的生长时间进程。图18:在β -磷酸三钙底物上，OS培养基和Anthro IB培养基中生长的胎盘干细胞和间充质干细胞的电子扫描显微照相(20Χ)。图19:在β -磷酸三钙底物上，OS培养基和Anthro IB培养基中生长的胎盘干细胞和间充质干细胞电子扫描显微照相(5000Χ)。图20:间充质干细胞和从人灌洗胎盘细胞获得的干细胞的茜素红染色，其显示在OS培养基而不是DMEM中培养后发生钙矿化图21:在磷酸三钙底物存在的条件下，在OS培养基中培养10天后的间充质干细胞和干细胞的AP活性。图22:电子显微照片，其显示了胶原原纤维(Α行)和矿化胶原原纤维(B行)。图23:示意图，其显示了交联的矿化胶原蛋白的最终矿物质/胶原比例与所输入的矿物质/胶原蛋白比例接近。图24:移植后3周的头盖骨缺损的组织切片。在胎盘干细胞-HEAL0S 外植体中可看到在缺损内有大量骨沉积。
图25A-25C:移植后7周的头盖骨缺损的X射线分析。图25A:箭头所指为阳性对照外植体BMP-2+HEAL0S 。图25B:箭头所指为显示出骨沉积的胎盘干细胞+HEAL0S 外植体。图25C:单独的阴性对照HEAL0S 和无外植体的头盖骨缺损。图26:通过光密度分析法进行骨形成定量。增加的灰度(Y轴)表示增加的骨密度/沉积。X轴:治疗等级。
5.
具体实施例方式5.1.胎盘干细胞和胎盘干细胞群胎盘干细胞是可从胎盘或其部分中获得的干细胞，其贴壁到组织培养的底物并能分化为非胎盘细胞型。胎盘干细胞可以来源于胎儿，也可以来源于母体(也就是说，可以具有母亲或胎儿的基因型)。胎盘干细胞群或包括胎盘干细胞的细胞群可包括完全来源于胎儿或母体的胎盘干细胞，也可包括来源于胎儿和母体的混合胎盘干细胞。胎盘干细胞和包括胎盘干细胞的细胞群可通过在下文讨论的形态、标记和培养特征进行识别和挑选。5.1.1.物理学和形态学特征本发明提供的非贴壁的CD34+干细胞在原代培养或细胞培养中培养时，通常不贴壁到组织培养底物。培养中的非贴壁干细胞通常呈现圆形，与从骨髓或外周血得到的CD34+干细胞类似。本发明提供的贴壁胎盘干细胞在原代培养或细胞培养中培养时，贴壁到组织培养底物，例如组织培养容器表面 (例如组织培养塑料)。培养中的胎盘干细胞通常认为呈成纤维细胞样星状外观，并具有许多从中央细胞体延伸出的细胞质突起。然而，所述胎盘干细胞从形态学上与相同条件下培养的成纤维细胞不同，因为该胎盘干细胞比成纤维细胞具有更多的这种突起。胎盘干细从胞形态学上也与造血干细胞不同，培养中的造血干细胞通常认为是更圆的或鹅卵石形形态。5.1.2.细胞表面、分子和基因标记非贴壁胎盘干细胞:在一实施方案中，本发明提供了分离的非贴壁胎盘干细胞。在某些实施方案中，所述分离的干细胞是CD34+的。在某些实施方案中，该分离的干细胞是⑶44—的。在某些实施方案中，该分离的干细胞是⑶34+和⑶44—的。在某些实施方案中，该分离的干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些实施方案中，该分离的干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些实施方案中，该分离的干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些实施方案中，该分离的干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些实施方案中，该分离的干细胞已经通过灌洗，或通过物理或生物化学裂解如酶消化胎盘组织从人胎盘中分离。在某些实施方案中，该分离的干细胞已经通过灌洗从人胎盘中分离。在某些实施方案中，当所述胎盘细胞群在允许矿化基质形成的条件下培养时，该分离的干细胞有利于在胎盘细胞群中形成矿化基质。在另一实施方案中，本发明提供分离的非贴壁胎盘细胞的群。在某些实施方案中，该细胞群包括CD34+干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括CD44_干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括⑶34+和⑶44_干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括干细胞，其中至少有大约70%的所述细胞是CD34+和CD44_干细胞。在某些实施方案中，该细胞群包括干细胞，其中至少有大约90%的所述细胞是⑶34+和⑶44_干细胞。在另一方面，本发明提供了分离的⑶34+和⑶44_胎盘干细胞的群。在某些实施方案中，该干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些实施方案中，该干细胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些实施方案中，该干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些实施方案中，干细胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些实施方案中，至少约70%的该干细胞是⑶34+和⑶44_干细胞。在某些实施方案中，至少约90%的该干细胞是⑶34+和⑶44-的干细胞。贴壁胎盘干细胞:本发明提供的贴壁胎盘干细胞和胎盘干细胞群表达多种可用来识别和/或分离所述干细胞或包括所述干细胞的细胞群的标记。本发明提供的贴壁胎盘干细胞和干细胞群(即两个或两个以上的胎盘干细胞)包括直接从胎盘或其任何部分(例如羊膜、绒毛膜、胎盘小叶、脐带等)获得的干细胞和含有干细胞的细胞群。胎盘干细胞群还包括培养中的贴壁胎盘干细胞群(即两个或两个以上)，以及容器如袋中的细胞群。然而，胎盘干细胞不是滋养母细胞。本发明提供的贴壁胎盘干细胞通常表达标记⑶73、⑶105、⑶200、HLA-G和/或0CT-4,而不表达CD34、CD38或CD45。胎盘干细胞也表达HLA-ABC(MHC-l)和HLA-DR。这些标记可用于识别胎盘干细胞，并将胎盘干细胞与其他类型的干细胞区别开来。因为所述胎盘干细胞能表达CD73和CD105，因此它们可有间充质干细胞样特征。然而，因为所述胎盘干细胞可表达CD200和HLA-G，胎儿特异性标记，因此它们可与既不表达CD200也不表达HLA-G的间充质干细胞，如骨髓来源的间充质干细胞区别开来。同样地，因为不表达CD34、CD38和/或CD45，因此将所述胎盘干细胞鉴定为非造血干细胞。然而，胎盘干细胞的某些亚类可表达例如CD34，其仍被认为是本发明所提供的胎盘干细胞。因此，在一实施方案中，本发明提供了分离的⑶200+或HLA-G+贴壁胎盘干细胞。在具体实施方案中，所述干细胞是胎盘干细胞。在具体实施方案中，该干细胞是CD200+和HLA-G+的。在具体实施方案中，所述干细胞是CD73+和CD105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34—、⑶38—或⑶45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34—、⑶38—和⑶45-的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+和⑶105+的。在另一具体实施方案中，所述CD200+或HLA-G+干细胞在允许拟胚体形成的条件下有利于在包括所述干细胞的胎盘细胞群中形成拟胚体。在另一实施方案中，本发明还提供从多种胎盘细胞中选择胎盘干细胞的方法，该方法包括选择CD200或HLA-G胎盘细胞，因而所述细胞为胎盘干细胞。在具体实施方案中，所述选择包括选择CD200+和HLA-G+的胎盘细胞。在具体实施方案中,所述选择包括也选择⑶73+和⑶105+的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括还选择⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括也选择⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+和CD105+的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择在允许拟胚体形成的条件下还有利于在包括所述干细胞的胎盘细胞群中形成拟胚体的胎盘细胞。

在另一实施方案中，本发明提供包括分离的⑶200+、HLA-G+胎盘干细胞的分离细胞群。在具体实施方案中，所述细胞群是胎盘细胞群。在另一具体实施方案中，该细胞群是分离的⑶200+、HLA-G+胎盘干细胞群。在各种实施方案中，至少大约10%、至少大约20%、至少大约30%、至少大约40%、至少大约50%、或至少大约60%的所述细胞为⑶200+、HLA-G+干细胞。优选地，至少大约70%的所述细胞为⑶200+、HLA-G+干细胞。更优选地，至少大约90%、95%、或99%的所述细胞为CD200+、HLA-G+干细胞。在所述分离细胞群的具体实施方案中，所述干细胞还是⑶73+和⑶105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞还是⑶34_、⑶38_或⑶45-的。在一更具体实施方案中，所述干细胞还是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+和⑶105+的。在另一实施方案中，所述分离细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时产生一个或多个拟胚体。在另一实施方案中，本发明提供从多种胎盘细胞中选择胎盘干细胞群的方法，该方法包括选择胎盘细胞群,其中至少大约10%、至少大约20%、至少大约30%、至少大约40%、至少大约50%、至少大约60%、至少大约70%、至少大约80%、至少大约90%、或至少大约95%的所述细胞是⑶200+、HLA-G+干细胞。在具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶73+和⑶105+的干细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34—、⑶38—或⑶45—的干细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+和CD105+的干细胞。在另一具体实施方案中，所述选择还包括选择在允许拟胚体形成的条件下培养时产生一个或多个拟胚体的胎盘干细胞群。在另一实施方案中，本发明提供了分离的⑶73+、⑶105+和⑶200+干细胞。在具体实施方案中，所述分离的干细胞是分离的贴壁胎盘干细胞。在另一具体实施方案中，所述干细胞是HLA-G+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34_、0038_和CD45_的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+的。在另一具体实施方案中，当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，所述分离的CD73+、CD105+和CD200+干细胞有利于在包括所述干细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个拟胚体。在另一实施方案中 ，本发明提供了从多种胎盘细胞中选择胎盘干细胞的方法，该方法包括选择⑶73+、⑶105+和⑶200+胎盘细胞，因而所述细胞是胎盘干细胞。在具体实施方案中，所述选择包括选择还是HLA-G+的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38_、⑶45_和!11^-6+的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶73+、⑶105+和⑶200+的干细胞，当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，其有利于在包括所述干细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个拟胚体。在另一实施方案中，本发明提供了包括⑶73+、⑶105+和⑶200+干细胞的分离细胞群。在具体实施方案中，所述干细胞是胎盘干细胞。在另一具体实施方案中，所述细胞群是分离的⑶73+、⑶105+和⑶200+胎盘干细胞的群。在各种实施方案中，至少大约10%、至少大约20%、至少大约30%、至少大约40%、至少大约50%、或至少大约60%的所述细胞为CD73+、⑶105+和⑶200+干细胞。在另一实施方案中，在所述细胞群中至少大约70%的所述细胞为⑶73+、⑶105+、⑶200+干细胞。在另一实施方案中，在所述细胞群中至少大约90%、95%或99%的所述细胞为CD73+、CD105+、CD200+干细胞。在所述细胞群的具体实施方案中，所述干细胞是HLA-G+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34_、0038_和CD45_的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+的。在另一具体实施方案中，所述细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时产生一个或多个拟胚体。在另一实施方案中，本发明提供了从多种胎盘细胞中选择胎盘干细胞群的方法，该方法包括选择胎盘细胞群，其中至少大约10%、至少大约20%、至少大约30%、至少大约40%、至少大约50%、至少大约60%、至少大约70%、至少大约80%、至少大约90%、或至少大约95%的所述细胞是⑶73+、⑶105+和⑶200+干细胞。在具体实施方案中，所述选择包括选择还是HLA-G+的干细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38_或⑶45—的干细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38—和⑶45—的干细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+的干细胞。在另一具体实施方案中，所述选择还包括选择在允许拟胚体形成的条件下培养时产生一个或多个拟胚体的胎盘细胞群。本发明还提供分离的⑶200+和0CT-4+干细胞。在具体实施方案中，该干细胞是⑶73+和⑶105+的。在具体实施方案中，该干细胞是胎盘干细胞。在另一具体实施方案中，所述干细胞是HLA-G+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34—、CD38—和CD45—的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的。在另一具体实施方案中，当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，该干细胞有利于在包括所述干细胞的胎盘细胞群中产生一个或多个拟胚体。在另一实施方案中，本发明提供了从多种胎盘细胞中选择胎盘干细胞的方法，该方法包括选择CD200+或0CT-4+胎盘细胞，因而所述细胞为胎盘干细胞。在具体实施方案中，所述选择包括选择还是HLA-G+的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+、⑶105+和HLA-G+的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择在所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时还有利于在包括所述干细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个拟胚体的胎盘干细胞。本发明还提供了包括⑶200+、0CT-4+干细胞的分离细胞群。在具体实施方案中，所述干细胞为胎盘干细胞。在另一具体实施方案中，所述细胞群为CD200+、0CT-4+干细胞群。在各种实施方案中，至少大约10%、至少大约20%、至少大约30%、至少大约40%、至少大约50%、或至少大约60%的所述细胞为⑶200+、0CT-4+干细胞。在另一实施方案中，至少大约70%的所述细胞为所述⑶200+、0CT-4+干细胞。在另一实施方案中，至少大约90%、95%或99%的所述细胞为所述CD200+、0CT-4+干细胞。在所述分离细胞群的具体实施方案中，所述干细胞是⑶73+和⑶105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞为HLA-G+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞为CD34_、0038_和CD45_的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的。在另一具体实施方案中，所述细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时产生一个或多个拟胚体。

在另一实施方案中，本发明提供了从多种胎盘细胞中选择胎盘干细胞群的方法，该方法包括选择胎盘细胞群，其中至少大约10%、至少大约20%、至少大约30%、至少大约40%、至少大约50%、至少大约60%，至少大约70%、至少大约80%、至少大约90%、或至少大约95%的所述细胞是⑶200+、0CT-4+干细胞。在具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶73+和CD 105+的干细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是HLA-G+的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是CD34_、CD38_和CD45_的干细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的干细胞。本发明还提供了分离的⑶73+、⑶105+和HLA-G+干细胞。在具体实施方案中，所述干细胞为胎盘干细胞。在另一具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34—、CD38—和CD45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是0CT-4+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD200+的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是CD34—、CD38—、CD45—、0CT-4+和CD200+的。在另一具体实施方案中，当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，所述干细胞有利于在包括所述干细胞的胎盘细胞群中形成拟胚体。在另一实施方案中，本发明还提供了从多种胎盘细胞中选择胎盘干细胞的方法，该方法包括选择⑶73+、⑶105+和HLA-G+的胎盘细胞，因而所述细胞为胎盘干细胞。在具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是0CT-4+的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶200+的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择还是⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和CD200+的胎盘细 胞。在另一具体实施方案中，所述选择包括选择当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时还有利于在包括所述干细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个拟胚体的胎盘细胞。本发明还提供了包括⑶73+、⑶105+和HLA-G+干细胞的分离细胞群。在具体实施方案中，所述干细胞为胎盘干细胞。在另一具体实施方案中，所述细胞群为CD73+、CD105+和HLA-G+干细胞群。在各种实施方案中，至少大约10%、至少大约20%、至少大约30%、至少大约40%、至少大约50%、或至少大约60%的所述细胞为⑶73+、⑶105+和HLA-G+干细胞。在另一实施方案中，至少大约70%的所述细胞为所述⑶73+、⑶105+和HLA-G+的。在另一实施方案中，至少大约90%、95%或99%的所述细胞为所述⑶73+、⑶105+和HLA-G+干细胞。在上述细胞群的具体实施方案中，所述干细胞是CD34_、CD38_*CD45_的。在另一具体实施方案中，，所述干细胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞为0CT-4+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞为CD200+的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-、CD45_、0CT-4+和CD200+的。在另一实施方案中，本发明提供了从多种胎盘细胞中选择胎盘干细胞群的方法，该方法包括选择其中大部分所述细胞为CD73+、CD105+和HLA-G+的胎盘细胞群。在具体实施方案中，所述大部分细胞还是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述大部分细胞还是CD34_、CD38_和CD45_的。在另一具体实施方案中，所述大部分细胞还是CD200+的。在另一具体实施方案中，所述大部分细胞还是CD34_、CD38' CD45' 0CT-4+ 和 CD200.的。在另一实施方案中，本发明提供包括分离的⑶73+和⑶105+干细胞，当所述胎盘细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时，其有利于在包括所述干细胞的分离的胎盘细胞的群中形成一个或多个拟胚体。在具体实施方案中，所述干细胞是CD34_、CD38_*CD45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34—、CD38—和CD45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞是0CT-4+的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是0CT-4+、⑶34_、⑶38_和CD45-的。本发明还提供了包括⑶73+、⑶105+干细胞的分离的胎盘细胞的群，其中所述细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时形成一个或多个拟胚体。在具体实施方案中，所述干细胞为胎盘干细胞。在另一具体实施方案中，所述细胞群为CD73+、CD105+胎盘干细胞的群，其中所述细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时形成一个或多个拟胚体。在各种实施方案中，至少大约10%、至少大约20%、至少大约30%、至少大约40%、至少大约50%、至少大约60%、至少大约70%、至少大约80%、至少大约90%或至少大约95%的所述分离的胎盘细胞为⑶73+、⑶105+干细胞。在上述细胞群的具体实施方案中，所述干细胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞为⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述干细胞为0CT-4+的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是0CT-4+、CD34_、⑶38_和⑶45_的。在其它具体实施方案中，所述细胞群已经被扩增，例如已经被传代至少一次、至少三次、至少五次、至少10次、至少15次或至少20次。本发明还提供分离的0CT-4+干细胞，其在允许拟胚体形成的条件下培养时有利于在包括所述干细胞的分离的胎盘细胞的群中形成一个或多个拟胚体。在具体实施方案中，所述干细胞为⑶73+和⑶105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞为⑶34_、⑶38_或CD45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞为CD200+的。在更具体的实施方案中，所述干细胞为 CD73+、CD105+、CD200+、CD34' CD38-和 CD45-的。本发明还提供了包括0CT-4+干细胞的分离的胎盘细胞的群，其中所述细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时形成一个或多个拟胚体。在具体实施方案中，所述干细胞为胎盘干细胞。在另一具体实施方案中，所述细胞群为胎盘干细胞群，该胎盘干细胞是0CT-4+干细胞，其中所述细胞群在允许拟胚体形成的条件下培养时形成一个或多个拟胚体。在各种实施方案中，至少大约10%、至少大约20%、至少大约30%、至少大约40%、至少大约50%、至少大约60%、至少大约70%、至少`大约80%、至少大约90%或至少大约95%的所述分离的胎盘细胞为0CT-4+干细胞。在上述细胞群的具体实施方案中，所述干细胞是⑶73+和⑶105+的。在另一具体实施方案中，所述干细胞为CD34_、CD38_和CD45—的。在另一具体实施方案中，所述干细胞为⑶200+的。在更具体的实施方案中，所述干细胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在另一具体实施方案中，所述细胞群已经被扩增，例如已经被传代至少一次、至少三次、至少五次、至少10次、至少15次或至少20次。本发明还提供了通过酶消化(参见第5.2.3部分)或灌洗(参见第5.2.4部分)而得到的胎盘干细胞。例如，本发明提供根据以下方法产生的胎盘干细胞的分离群，该方法包括:灌洗已经排出了脐血并已经灌洗了的哺乳动物胎盘以除去残余血；用灌洗液灌洗所述胎盘；和收集所述灌洗液，其中灌洗后的所述灌洗液包括包含胎盘干细胞的胎盘细胞群；和从所述细胞群中分离多种所述胎盘干细胞。在具体实施方案中，该灌洗液流过脐静脉和脐动脉，然后在其从胎盘流出后收集。通过这种方法产生的胎盘干细胞群通常包括胎儿和母体细胞的混合。在另一具体实施方案中，所述灌洗液通过脐静脉，而从脐动脉收集，或通过脐动脉，而从脐静脉收集。通过这种方法产生的胎盘干细胞群通常基本上完全来源于胎儿，也就是说，如所述细部群中大于90%、95%、99%或99.5%的胎盘干细胞是来源于胎儿。在各种实施方案中，从胎盘灌洗液中获得的细胞群所包含的胎盘干细胞占所述胎盘细部群的至少大约50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99.5%。在另一具体实施方案中，通过灌洗收集的胎盘干细胞包括胎儿和母体细胞。在另一具体实施方案中，通过灌洗收集的胎盘干细胞至少大约50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99.5%为胎儿细胞。在另一具体实施方案中，本发明提供了包括通过灌洗收集的分离的胎盘干细胞的群的组合物，其中所述组合物包括至少部分用于收集所述胎盘干细胞的灌洗液。本发明还提供了本文所描述的胎盘干细胞的分离群，其根据以下方法产生，该方法包括:用组织裂解酶消化胎盘组织以获得包括胎盘干细胞的胎盘细胞群，并从所述胎盘细胞的残余物中分离多种胎盘干细胞。可消化整个或部分胎盘以获得胎盘干细胞。在具体实施方案中，例如，所述胎盘组织是整个胎盘、羊膜、绒毛膜、羊膜和绒毛膜的组合，或上述任意几项的组合。在其它具体实施方案中，所述组织裂解酶是胰蛋白酶或胶原蛋白酶。在各种实施方案中，从消化的胎盘中获得的细胞群所包含的胎盘干细胞占所述胎盘细胞群的至少大约 50%、60%、70%、80%、90%、95%、99% 或至少 99.5%。基因图谱证实分离的贴壁胎盘干细胞和分离的胎盘干细胞的群可以与其他细胞如间充质干细胞，如骨髓来源的干细胞相区分。本文所述的贴壁胎盘干细胞可以基于一个或多个基因的表达与间充质干细胞相区分，该基因的表达与骨髓来源的间充质干细胞相比特异于胎盘干细胞或脐带干细胞。具体地，贴壁胎盘干细胞可以基于一个或多个基因的表达与间充质干细胞相区分，该基因在胎盘干细胞中的表达显著高于在间充质干细胞中的表达(至少高2倍)，其中该一个或多个基因是ACTG2、ADARBU AMIG02、ATRS-U B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP,MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3, PJP2、RTN1、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、 VTN、ZC3H12A或以上任意组合，其中当所述干细胞在相同条件下生长时，这些基因在胎盘干细胞或脐带干细胞中的表达显著高于在骨髓来源的干细胞中的表达。在具体实施方案中，该胎盘干细胞特异性或脐带干细胞特异性基因是CD200。这些基因的表达水平可用于证实胎盘细胞群的身份，以鉴定细胞群包括至少多种胎盘干细胞等。身份得到确认的胎盘干细胞群可以是克隆的，如从单个胎盘干细胞扩增形成的胎盘干细胞群，或者混合的干细胞群，如包括从多个胎盘干细胞扩增的单种胎盘干细胞的细胞群，或包括胎盘干细胞和至少一种其他类型的细胞的细胞群。这些基因的表达水平可用来选择贴壁胎盘干细胞群。例如，如果细胞群样品中一个或多个这些基因的表达显著高于同等的间质干细胞群，则选择这种细胞群如克隆扩增细胞的细胞群。这种选择可以是针对多种胎盘干细胞群、多种身份未知的细胞群等细胞群。与所述一个或多个基因在间充质干细胞对照中的表达水平相比，贴壁胎盘干细胞可基于一个或多个这种基因的表达水平进行选择。在一实施方案中，所述一个或多个基因在包括相当量间充质干细胞的样品中的表达水平用作为对照。在另一实施方案中，在一定条件下检测的胎盘干细胞的对照是代表所述一个或多个基因在所述条件下在间充质干细胞中的表达水平的数值。
上述贴壁或非贴壁胎盘干细胞的分离群和胎盘干细胞群一般可包括大约、至少或不超过1 X IO5,5 X 1O5U X 1O6,5 X 1O6U X 1O7,5 X 1O7U X 1O8,5 X 1O8U X 10\5 X 1O9,
1X 101C1、5 X 101Q、1 X 1O11个或更多个胎盘干细胞。5.1.3.生长培养本文所述的胎盘干细胞的生长，对于任何哺乳动物细胞，在某种程度上取决于所选择用于生长的特定培养基。在最佳条件下，胎盘干细胞的数量通常在3-5天增加一倍。在培养中，本发明提供的胎盘干细胞在培养中贴壁到底物上，例如，组织培养容器的表面(例如，组织培养皿塑料，纤维涂层塑料等)，并形成单层。包括本发明所提供的胎盘干细胞的分离的贴壁胎盘细胞的群在适当条件下培养时形成拟胚体，也就是在贴壁干细胞层顶部生长出三维细胞集群。拟胚体内的细胞表达与早期干细胞相关的标记，例如0CT-4、Nanog、SSEA3和SSEA4。拟胚体内的细胞通常不贴壁到培养底物上，如本发明所述的胎盘干细胞，但在培养中仍然会附着到贴壁细胞上。拟胚体细胞的生存依赖于贴壁胎盘干细胞，因为在没有贴壁干细胞的情况下就不会形成拟胚体。因此，贴壁胎盘干细胞有利于在包括该贴壁胎盘干细胞的胎盘细胞群中生长出一个或多个拟胚体。不受理论约束，认为拟胚体的细胞在贴壁胎盘干细胞上生长如同胚胎干细胞在饲养层细胞上生长一样。间充质干细胞，如骨髓间充质干细胞在培养中不会形成拟胚体。5.2.得到胎盘干细胞的方法5.2.1.干细胞收集组合物本发明还提供了收集和分离胎盘干细胞的方法。一般地，用生理学上可接受的溶液，如干细胞收集组合物从哺乳动物胎盘获得干细胞。干细胞收集组合物在2005年12月29日提交的、题为"收集胎盘干细胞和保存器官的改进培养基"的相关美国临时申请60/754，969中有详细描述。所述干细胞收集组合物可包括适于收集和/或培养干细胞的任何生理学上可接受的溶液，例如盐溶液(例如磷酸盐缓冲液、Kreb’ s溶液、改良的Kreb’ s溶液、Eagle’s溶液、0.9%氯化钠等)、培养基(如DMEM、H.DMEM等)等等。所述干细胞收集组合物可包括旨在保存胎盘干细胞，也就是从收集时间到培养时间内防止胎盘干细胞死亡或延迟胎盘干细胞死亡、减少细胞群中胎盘干细胞的死亡数量等的一种或多种成分。这些成分可以是例如细胞凋亡抑制剂(如Caspase抑制剂或JNK激酶抑制剂)、血管扩张剂(例如硫酸镁、抗高血压药物、心房利钠肽(ANP)、促肾上腺皮质激素、促肾上腺皮质激素释放激素、硝普钠、肼屈嗪、三磷酸腺苷、腺苷、吲哚美辛或硫酸镁、磷酸二酯酶抑制剂等)、坏死抑制剂(如2-(1Η- Π引哚-3-基)-3_戍基氨基马来酰亚胺、批咯烧二硫代氨基甲酸盐、或氯硝西泮)、TNF-a抑制剂和/或携氧全氟化碳(例如过氟辛基溴化物、过氟辛基溴化物等)。所述干细胞收集组合物可以包括一种或多种组织降解酶，如金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、中性蛋白酶、RNA酶或DNA酶等。这些酶包括但不限于胶原酶(如胶原酶Ι、Π、ΙΙΙ或IV，溶组织梭状芽孢杆菌的胶原酶等)、分散酶、嗜热菌蛋白酶、弹性蛋白酶、胰蛋白酶、LIBERASE、透明质酸酶等。所述干细胞收集组合物可以包括杀菌或抑菌有效量的抗生素。在某些非限制性实施方案中，该抗生素是大环内酯类抗生素(如妥布霉素)、头孢菌素(如头孢氨苄、头孢拉定、头孢呋辛、头孢丙烯、头孢克罗、头孢克肟或头孢羟氨苄)、克拉霉素、红霉素、青霉素(如青霉素V)或喹诺酮类药物(如氧氟沙星、环丙沙星或氟哌酸)、四环素、链霉素等。在特定的实施方案中，所述抗生素是对革兰氏(+)和/或革兰氏(-)细菌例如绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌等有活性的。所述干细胞收集组合物也可以包括一种或多种如下化合物:腺苷(约ImM至约50mM) ；D-葡萄糖(约20mM至约IOOmM);镁离子(约ImM至约50mM);分子量大于20，000道尔顿的大分子，在一实施方案中，以足以维持内皮完整性和细胞生存的量存在(例如，合成或天然产生的胶体，多糖如右旋糖酐或聚乙二醇，大约25g/L至约100g/L或约40g/L至60g/L);抗氧化剂(如叔丁对甲氧酚、丁基化羟基甲苯、谷胱甘肽、维生素C或维生素E，大约25μΜ至约ΙΟΟμΜ);还原剂(例如N-乙酰半胱氨酸，约0.1mM至约5mM);防止钙进入细胞的试剂(如维拉帕米，约2 μ M至25 μ M);硝酸甘油(例如约0.05g/L至约0.2g/L);抗凝血剂，在一实施方案中，以足以帮助防止残余血液凝固的量存在(如肝素或水蛭素，以约1000单位/L至约100，000单位/L的浓度存在)；或含有阿米洛利的化合物(例如阿米洛利、乙基异丙基阿米洛利、环己烷阿米洛利、二甲基阿米洛利或异丁基阿米洛利，约Ι.ΟμΜ至约5 μ Μ)。5.2.2.胎盘收集和处理一般来说，在出生排出后立即回收人胎盘。在一个实施方案中，在知会同意并获取患者的完整病史且将该病史与所述胎盘关联后，从患者回收胎盘。优选地，在分娩后继续记录病史。这种病史可用于协调胎盘或从其收集的干细胞的后续使用。例如，根据病史，人胎盘干细胞可用作与该胎盘相关联的婴儿，或该婴儿的父母、兄弟姐妹或其他亲属的个性化药物。回收胎盘干细胞之前，除去脐带血和胎盘血。在某些实施方案中，在分娩后，回收胎盘中的脐血。可对胎盘进行常 规的脐带血回收处理。通常情况下使用针或套管，在重力的帮助下从胎盘抽血(见例如Anderson的美国专利号5，372，581 ；Hessel等人的美国专利号5，415，665)。该针或套管通常置于脐静脉处，并轻轻按摩胎盘，以帮助从胎盘排出脐血。这种胳血回收可进行商业操作，如 LifeBank USA, Cedar Knolls, N.J.，ViaCord, Cord BloodRegistry and Cryocell。优选地,胎盘通过重力排干,而不需要其他操作，以尽量减少脐血回收期间对组织的损伤。通常情况下，胎盘会从分娩室或出生室运送到另一位置，例如实验室以通过例如灌洗或组织分离回收脐血和收集干细胞。胎盘最好使用无菌热绝缘运输设备运输(维持胎盘温度在20-28°C之间)，例如夹紧胎盘脐带近端，将胎盘置于无菌封口塑料袋中，然后放在绝缘容器中。在另一实施方案中，胎盘用脐带血收集试剂盒运输，该脐带血收集试剂盒基本如2005年9月19号提交的未决美国专利申请11/230，760中所述。优选地，胎盘在分娩后四至二十四小时送到实验室。在某些实施方案中，在回收脐带血之前夹紧脐带近端，优选夹紧插入到胎盘盘的4-5cm(厘米)处。在其他一些实施方案中，在回收脐血后进一步处理胎盘前夹紧脐带近端。在干细胞收集之前，可以将所述胎盘保存在无菌条件和室温或5至25°C (摄氏)下。在灌洗胎盘以除去任何剩余脐带血前，胎盘可被保存超过48小时，优选四至二十四小时。该胎盘优选5至25°C (摄氏)保存在抗凝血剂溶液中。合适的抗凝血剂溶液是本领域公知的。例如，可以使用肝素或华法林钠溶液。在优选实施方案中，该抗凝血剂溶液包含肝素的溶液(如在1:1000溶液中l%w/w)。在收集胎盘干细胞之前，抽干血的胎盘优选保存不超过36小时。哺乳动物的胎盘或其部分，一旦如上所述被常规地收集和制备，可以用任何已知的方式处理，例如可以灌洗或裂解，例如用一个或多个组织裂解酶消化，以获取干细胞。5.2.3.胎盘组织的物理裂解和酶消化在一实施方案中，干细胞从哺乳动物胎盘通过物理裂解，如酶消化所述器官收集。例如，该胎盘或其部分可以被如碾、剪、绞、切、剁、浸等，同时与本发明所提供的干细胞收集组合物接触，并随后用一种或多种酶消化该组织。该胎盘或其部分也可被物理裂解，并用一种或多种酶消化，然后将得到的材料浸泡在或混合到干细胞收集组合物中。任何物理裂解方法都可以使用，只要该裂解方法使多种、优选大多数、更优选所述器官中的至少60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%的细胞保持存活，这可通过例如台盼蓝不相容法测定。在物理裂解和/或酶消化和干细胞回收之前，可以将所述胎盘解剖成部分。例如，胎盘干细胞可从羊膜、绒毛、脐带、胎盘小叶、或其任何组合中得到。优选地，胎盘干细胞从包括羊膜和绒毛膜的胎盘组织获得。通常情况下，胎盘干细胞可以通过小块胎盘组织裂解得到，例如，约 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900或约1000立方毫米体积的胎盘组织块。优选的干细胞收集组合物包含一种或多种组织裂解酶。酶消化优选采用酶的组合，如基质金属蛋白酶和中性蛋白酶的组合，例如胶原酶和分散酶的组合。在一实施方案中，胎盘组织的酶消化使用基质金属蛋白酶、中性蛋白酶和消化透明质酸的粘液溶解酶的组合，如胶原·酶、分散酶和透明质酸酶的组合，或LIBERASE(Boehringer MannheimCorp.，Indianapolis, Ind.)和透明质酸酶的组合。可以用来裂解胎盘组织的其他酶包括木瓜蛋白酶、去氧核糖核酸酶、丝氨酸蛋白酶如胰蛋白酶、糜蛋白酶、或弹性蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可被血清中的α 2微球蛋白抑制，因此用于消化的培养基通常不含血清。EDTA和DNA酶常用于酶消化过程中提高细胞回收的效率。消化产物优选被稀释，以避免干细胞陷入粘稠的消化物中。可以使用组织消化酶的任意组合。组织消化酶的典型浓度包括例如50_200U/mL的胶原酶I和胶原酶IV、l-10U/mL的分散酶和10_100U/mL的弹性蛋白酶。可组合使用蛋白酶，也就是说，可以在相同消化反应中使用两种或两种以上的蛋白酶，或顺序使用，以释出胎盘干细胞。例如，在一实施方案中，胎盘或其一部分首先用2mg/mL适量的胶原酶I消化30分钟，接着用0.25%的胰蛋白酶37°C下消化10分钟。优选地在使用其它酶后再使用丝氨酸蛋白酶。在另一个实施方案中，通过向含有干细胞的干细胞收集组合物中，或者在用干细胞收集组合物分离干细胞前向解离和/或消化组织的溶液中添加螯合剂(例如，乙二醇双(2-氨基乙醚)-N，N, N’，N’ -四乙酸(EGTA)或乙二胺四乙酸(EDTA))，以进一步解离组织。可以理解，当整个的胎盘或胎盘的一部分同时含有胎儿和母体细胞(例如，胎盘的一部分包含绒毛膜或绒毛小叶)时，收集的胎盘干细胞将同时包含来源于胎儿和母体的胎盘干细胞的混合物。当胎盘的部分不含有或只含有可忽略量的母体细胞时(例如，羊膜)，收集的胎盘干细胞将几乎只含有胎儿的胚胎干细胞。
5.2.4.胎盘灌洗胎盘干细胞也可通过灌洗哺乳动物胎盘得到。灌洗哺乳动物胎盘以获得干细胞的方法在例如Hariri的美国申请
发明者詹姆士·W·爱丁格, 罗伯特·J·哈黎里, 王佳伦, 叶倩, 克利斯登·S·拉巴左, 马里安·佩雷拉, 萨沙·道恩·阿布拉门逊 申请人:人类起源公司