专利名称：一种纤维素降解菌降解能力的判定方法
技术领域：
本发明涉及一种功能菌的筛选方法，具体地说涉及一种纤维素降解菌降解能力的判定方法，属微生物分离筛选技术领域。
背景技术：
纤维素是地球上储存量最大的可再生生物质资源，广泛存在于植物的枝叶和茎杆中。纤维素能被具有纤维素降解能力的微生物分解成相关产物，广泛应用于食品、化工、纺织、饲料、酿酒、石油、勘探、药物提取、及生物能源领域。纤维素利用的关键是纤维素降解菌(也叫纤维素分解菌)。因此，从自然界中分离筛选降解能力强的纤维素降解菌株非常重要。目前，通过以滤纸为唯一碳源的初筛培养基和羧甲基纤维素钠复筛培养基的方法能够从自然界中分离纯化得到纤维素降解菌。然后对分离出来的纤维素降解菌进行降解能力的判 定，从中筛选出具有广泛应用前景的降解能力强的菌株。而目前纤维素降解菌降解能力的判定，一般是通过比较其中纤维素酶活力来进行的。纤维素酶活力的测定方法有很多，包括内切葡聚糖酶活力测定、外切葡聚糖酶活力测定、3 -葡萄糖苷酶活力测定和滤纸酶活测定方法。这些方法测定过程非常繁琐且漫长。首先要把分离到的纤维素降解菌株接种到液体培养基中振荡培养6天左右，离心分离得到粗酶液。然后制备柠檬酸缓冲液，将粗酶液加入该缓冲液中，50°C保温一定时间。接着采用DNS法测定还原糖。DNS法测定还原糖的过程也是比较复杂繁琐的，需要采用分光光度计测定并制作相关糖的标准曲线。最后根据测定结果计算酶的活力，通过酶的活力比较纤维素降解菌的降解能力。因此，目前，关于纤维素降解菌降解能力的判定方法非常繁琐，且耗时较长。
发明内容
本发明拟解决现有技术的不足，提供一种快速、简便的纤维素降解菌降解能力的判定方法。本发明是这样实现的( I)按常规方法制作羧甲基纤维素钠培养基，冷却至20°C—80°C，加入灭菌的培养皿内，待培养基冷却后，把纤维素降解菌菌株接种于培养皿中，10°c—35°C培养3 h —96 h (2)用打孔器打取生长整齐一致的菌饼，置于盛有羧甲基纤维素钠培养基的培养皿中央，10°c—35°C培养；(3)培养3 h —96 h，十字交叉法测量菌落直径，并按下式计算菌丝生长速率菌丝生长速率=菌落直径-打孔器内直径，所得菌丝生长速率值越大表示纤维素降解菌降解能力越强。本发明的有益效果是本发明所提供的纤维素降解菌降解能力的判定方法快速、简便，为大量筛选纤维素降解菌提供了一种快捷的方法。
具体实施例方式下面对本发明的具体实施方式
作进一步详细描述实施例一(I)按常规方法制作羧甲基纤维素钠培养基，冷却至50°C，加入灭菌的培养皿内。待培养基冷却后，把纤维素降解菌菌株接种于培养皿中，28°C下培养24h ；(2)用打孔器打取生长整齐一致的菌饼，置于盛有羧甲基纤维素钠培养基的培养皿中央，28°C下培养；(3) 48h后，十字交叉法测量菌落直径，并按下式计算48小时菌丝生长速率菌丝 生长速率=菌落直径-打孔器内直径。所得菌丝生长速率值越大表示纤维素降解菌降解能力越强。实施例二 (I)按常规方法制作羧甲基纤维素钠培养基，冷却至20°C，加入灭菌的培养皿内。待培养基冷却后，把纤维素降解菌菌株接种于培养皿中，10°c下培养3h ；(2)用打孔器打取生长整齐一致的菌饼，置于盛有羧甲基纤维素钠培养基的培养皿中央，10°C下培养；(3) 3h后，十字交叉法测量菌落直径，并按下式计算3h菌丝生长速率菌丝生长速率=菌落直径-打孔器内直径。所得菌丝生长速率值越大表示纤维素降解菌降解能力越强。实施例三(I)按常规方法制作羧甲基纤维素钠培养基，冷却至80°C，加入灭菌的培养皿内。待培养基冷却后，把纤维素降解菌菌株接种于培养皿中，35°C下培养46h ；(2)用打孔器打取生长整齐一致的菌饼，置于盛有羧甲基纤维素钠培养基的培养皿中央，35°C下培养；(3)96h后，十字交叉法测量菌落直径，并按下式计算96h菌丝生长速率菌丝生长速率=菌落直径-打孔器内直径。所得菌丝生长速率值越大表示纤维素降解菌降解能力越强。实施例四基本同实施例三，不同之处在于纤维素降解菌菌株接种于培养皿中，35°C下培养的时间为68h。实施例五基本同实施例三，不同之处在于纤维素降解菌菌株接种于培养皿中，35°C下培养的时间为96h。
权利要求
1.一种纤维素降解菌降解能力的判定方法，其特征在于该判定方法的具体步骤如下(1)按常规方法制作羧甲基纤维素钠培养基，冷却至20°C—80°C，加入灭菌的培养皿内，待培养基冷却后，把纤维素降解菌菌株接种于培养皿中，10°c—35°C培养3 h —96 h ； (2)用打孔器打取生长整齐一 致的菌饼，置于盛有羧甲基纤维素钠培养基的培养皿中央，10°C—35°C培养； (3)培养3h —96 h，十字交叉法测量菌落直径，并按下式计算菌丝生长速率菌丝生长速率=菌落直径-打孔器内直径，所得菌丝生长速率值越大表示纤维素降解菌降解能力越强。
全文摘要
本发明涉及一种功能菌的筛选方法，具体地说涉及一种纤维素降解菌降解能力的判定方法，属微生物分离筛选技术领域。该判定方法的具体步骤如下按常规方法制作羧甲基纤维素钠培养基，冷却至20℃—80℃，加入灭菌的培养皿内，待培养基冷却后，把纤维素降解菌菌株接种于培养皿中，10℃—35℃培养3 h —96 h；用打孔器打取生长整齐一致的菌饼，置于盛有羧甲基纤维素钠培养基的培养皿中央，10℃—35℃培养；培养3 h —96 h，十字交叉法测量菌落直径，并按下式计算菌丝生长速率菌丝生长速率=菌落直径-打孔器内直径，所得菌丝生长速率值越大表示纤维素降解菌降解能力越强。本发明的优点在于判定方法快速、简便，为大量筛选纤维素降解菌提供了一种快捷的方法。
文档编号C12Q1/02GK102719513SQ20121024104
公开日2012年10月10日 申请日期2012年7月12日 优先权日2012年7月12日
发明者刘林, 叶敏, 李成云, 查友贵, 王静, 肖春, 范黎明 申请人:云南农业大学