专利名称：一种检测转基因玉米品系Mon88017的试剂盒和寡核苷酸的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种检测转基因玉米品系Mon88017的试剂盒和寡核苷酸，属生物技术领域。
背景技术：
现如今，转基因技术在提高产量、改善品质、缓解粮食危机等方面作出了巨大贡献，同时，也为公众带来关于转基因生物安全的忧虑。在诸多争论中，转基因技术在作物种植中的应用仍迅猛发展，成为应用较快的农业新技术。随着转基因品系越来越多和转基因作物的种植面积逐年扩大，有关转基因技术的争议和质疑越来越多，我国也对转基因生物安全问题越来越重视。我国规定自2002年3月20日起，所有转基因农作物及其副产品都 应加以标志，这时候就需要一种行之有效的检测方法来对相关产品进行检测。环介导等温扩增法(loop-mediatedisothermal amplification, LAMP)是一种全新的核酸扩增方法，其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，在一种链置换DNA聚合酶的作用下，等温条件保温60分钟，即可完成核酸扩增反应。具有简单、快速、特异性强的特点。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，不依赖任何专门的仪器设备实现现场高通量快速检测，检测成本与检测所需时间远低于荧光定量PCR0目前国内外均未见利用-LAMP技术对转基因产品进行检测的相关报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一组特异性强、灵敏度高的用于检测转基因玉米品系Mon88017的LAMP寡核苷酸。本发明要解决的另一个技术问题是提供一种操作简单、结果准确的检测转基因玉米品系Mon88017的试剂盒。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案本发明提供了一组检测转基因玉米品系Mon88017的寡核苷酸,其为利用PrimerExplorer V4. 0在线软件(http://primerexplorer. jp/elamp4. 0. 0/index, html)设计的一组LAMP引物，由序列表SEQ ID No. I至序列表SEQ ID No. 5所示碱基序列的寡核苷酸组成；其中SEQ ID No. I为外侧上游引物，SEQ ID No. 2为外侧下游引物，SEQ ID No. 3为内侧上游引物，SEQ ID No. 4为内侧下游引物，SEQ ID No. 5为环状下游引物。详见表I。表I引物序列
权利要求
1.一组检测转基因玉米品系Mon88017的寡核苷酸，其特征在于由序列表SEQ IDNo. I至序列表SEQ ID No. 5所示碱基序列的寡核苷酸组成；其中SEQ ID No. I为外侧上游引物，SEQ ID No. 2为外侧下游引物，SEQ ID No. 3为内侧上游引物，SEQ ID No. 4为内侧下游引物，SEQ ID No. 5为环状下游引物。
2.一种检测转基因玉米品系Mon88017的试剂盒，其特征在于，由以下试剂组成 (1)LAMP反应液，其包括=ThermoPol缓冲液、甜菜碱、dNTPs、MgSO4、外侧上游引物、夕卜侦吓游引物、内侧上游引物、内侧下游引物、环状下游引物； 其中所述外侧上游引物是序列表SEQ ID No. I所示的核苷酸序列，外侧下游引物是序列表SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列，内侧上游引物是序列表SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列，内侧下游引物是序列表SEQ ID No. 4所示的核苷酸序列，环状下游引物是序列表SEQID No. 5所示的核苷酸序列； (2)Bst DNA 聚合酶；· (3)DEPC 7jC ； (4)阴性对照=DEPC水； (5)阳性对照转基因玉米品系Mon88017的标准品； (6)显色液SYBRGreen I染料。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述LAMP反应液中各种成分的使用终浓度为 IXThermoPol 缓冲液、I. 0 M 甜菜碱、I. 4 mM dNTPs,4. 0 mM MgS04、0. 2 u M外侧上游引物、0.2 PM外侧下游引物、I. 6 PM内侧上游引物、I. 6 PM内侧下游引物、0.8 yM环状下游引物。
全文摘要
本发明公开了一种检测转基因玉米品系Mon88017的试剂盒和寡核苷酸，具体涉及一组检测转基因玉米品系Mon88017的寡核苷酸，其具有序列表SEQIDNo.1至SEQIDNo.5所示的寡核苷酸序列，及含有这些寡核苷酸的试剂盒及其检测方法，本发明所述的试剂盒灵敏度高、特异性强、成本低、操作简便。
文档编号C12Q1/68GK102747161SQ201210253539
公开日2012年10月24日 申请日期2012年7月20日 优先权日2012年7月20日
发明者张蕾, 张西萌, 曾静, 马丹, 魏海燕 申请人:北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心