专利名称：霉菌氧化物的生物发酵方法
技术领域：
本发明属于一种留体激素类药物霉菌发酵工艺，尤其是一种霉菌氧化物的生物发酵方法。
背景技术：
留体化合物类药物生产过程中，“霉菌氧化物”是制备激素类药物重要的中间体，通过生物发酵，使用“黑根霉(Rhizzopus nigricans)”将底物“沃氏氧化物”转化为“霉菌氧化物”，该过程受着诸多因素、条件的限制。虽多年来工艺不断改进，各项指标有所提高，但其转化率、收率、指标并无大的突破。近年来，随着激素类药物不断研制、开发，一些高效、低毒产品不断推向市场，“霉菌氧化物”这个重要的中间体，更加显现出它的重要地位。因此，在稳定产品质量前提下，改变突破现有工艺达到转化率、收率的高指标，产品的高产率尤显重要。据检索，专利文献CN102174630公开了一种留体激素类药物霉菌发酵工艺，尤其涉及到霉菌发酵生物合成制备霉菌氧化物新工艺，它是以碳源、氮源和消沫剂为主要原料，碳源:葡萄糖60 85kg ;氮源:玉米衆60 85kg ;蚕蛹粉10 20kg ;硫酸铵5 IOkg ；消沫剂:聚醚1000 2000ml ;搅拌反应，并在生物发酵过程中通入空气，在26±4°C搅拌反应，并在生物发酵过程中进行通气，经24-72h氧化反应，再经板框压滤脱水、吹干，将底物沃氏氧化物转化为含有霉菌氧化物的菌丝体，再经丙酮提取得到霉菌氧化物粗品，经甲苯、氯仿混合溶剂精制得到霉菌氧化物精品。本发明在上述发明的基础上，经过进一步研发，将培养基的成分经过科学配比，获得更加优良的培养基配方，收率获得很大提高。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的步骤之处，提供一种霉菌氧化物的生物发酵方法，本发明重新对发酵培养 基进行配伍，提出一种全新的培养基成分，大幅度提高产品转化率和收率。本发明的目的是通过以下技术方案实现的:—种霉菌氧化物的生物发酵方法，所用培养基的成分及重量份数如下:葡萄糖80-90玉米浆50-70蚕蛹粉2-10硫酸铵2-10棉籽蛋白2-10。而且，培养基还包括消泡剂。而且，所述消泡剂为聚醚消泡剂。而且，发酵的具体方法如下:
⑴将发酵培养基一次投入一级种子罐中，加水，搅拌均匀后，加入30%碱液，调整PH4.8-5.0,进行蒸汽灭菌，降温至27-28°C，接入“黑根霉”孢子悬浮液，通气搅拌下培养18-20h,镜检达标后形成一级种子液；⑵二级发酵罐培养基同一级发酵罐配比，灭菌，降温，移入一级种子液后，通气、搅拌、培养18-20h，镜检达标，投入底物“沃氏氧化物”，进行生物氧化至24-50h，取样镜检，及色谱测试底物达标后，提高温度至50-60°C时，培养结束获得霉菌氧化物培养液及菌丝体，放料滤干再提纯精制霉菌氧化物。本发明的优点和积极效果是:本发明在氮源的组分中首次使用了棉籽蛋白最为新的氮源配方，弥补蛋白质含量偏低，氨基酸配方不够合理等缺陷，同时棉籽蛋白中含有微量元素铁，不会给微生物的生长广生不良影响，进而提闻发酵效率，增加收率。
具体实施例方式下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。本发明的化学反应式是:
权利要求
1.种霉菌氧化物的生物发酵方法，其特征在于:所用培养基的成分及重量份数如下:葡萄糖80-90 玉米浆50-70 香蛹粉2_10 硫酸铵2-10 棉籽蛋白2-10。
2.据权利要求1所述的霉菌氧化物的生物发酵方法，其特征在于:培养基还包括消泡剂。
3.据权利要求1所述的霉菌氧化物的生物发酵方法，其特征在于:所述消泡剂为聚醚消泡剂。
4.据权利要求1所述的霉菌氧化物的生物发酵方法，其特征在于:发酵的具体方法如下: (1)将发酵培养基一次投入一级种子罐中，加水，搅拌均匀后，加入30%碱液，调整PH4.8-5.0,进行蒸汽灭菌，降温至27-28°C，接入“黑根霉”孢子悬浮液，通气搅拌下培养18-20h,镜检达标后形成一级种子液； ⑵二级发酵罐培养基同一级发酵罐配比，灭菌，降温，移入一级种子液后，通气、搅拌、培养18-20h，镜检达标，投入底物“沃氏氧化物”，进行生物氧化至24-50h，取样镜检，及色谱测试底物达标后，提高温度至50-60°C时， 培养结束获得霉菌氧化物培养液及菌丝体，放料滤干再提纯精制霉菌氧化物。
全文摘要
本发明涉及一种霉菌氧化物的生物发酵方法，将发酵培养基一次投入一级种子罐中，加水，搅拌均匀后，加入30%碱液，调整pH4.8-5.0，进行蒸汽灭菌，降温至27-28℃，接入“黑根霉”孢子悬浮液，通气搅拌下培养18-20h，镜检达标后移入二级发酵罐内；移入一级种子液后，投入底物“沃氏氧化物”，进行生物氧化至24-42h，取样镜检，及色谱测试底物达标后，提高温度至50-60℃时放料。本发明在氮源的组分中首次使用了棉籽蛋白最为新的氮源配方，弥补蛋白质含量偏低，氨基酸配方不够合理等缺陷，同时棉籽蛋白中含有微量元素铁，不会给微生物的生长产生不良影响，提高发酵效率，增加收率。
文档编号C12R1/845GK103088099SQ20121059483
公开日2013年5月8日 申请日期2012年12月31日 优先权日2012年12月31日
发明者宋香羿 申请人:天津太平洋化学制药有限公司