专利名称：葡萄糖醛酸转移酶ugt1a1的特异性探针底物及应用的制作方法
技术领域：
本发明属医药技术领域，具体涉及一种葡萄糖醛酸转移酶UGTlAl的特异性探针底物及其应用。
背景技术：
葡萄糖醒酸转移酶(Uridinediphosphate-glucuronosy I transferase, UGT)超家族是机体内重要的II相代谢酶，催化化合物与辅因子尿苷二磷酸葡糖醛酸(UDPGA)结合，从而增加底物的亲水性，使其能更 有效地从尿或胆汁中排出体外，这是机体的一个重要的解毒过程。多种外源性物质，如SN-38和亚硝胺类化合物，以及内源性物质，如胆红素和雌二醇的脱毒都通过葡萄糖醛酸化途径来实现。人UGT可以分为4个家族:UGT1，UGT2，UGT3和UGT8。其中最重要的参与药物结合反应的酶属于UGTl和UGT2家族。目前，已被鉴定的UGT亚型有25个，包括UGTlA中的16个以及UGT2B中的7个亚型。UGT2B在人肝脏中的表达量比UGTlA更丰富。其中，UGT2B4的含量最高，UGT2B15次之。值得注意的是，UGTlAl，1A4，1A6，1A9在人肝脏中都有中等程度的表达，但UGT1A3在人肝脏中表达量极低，同时UGT1A7，UGT1A8及UGT1A10仅在人肠道中表达。在UGTlA中，UGTlAl和人体健康的关系最为密切。它的基因缺失会影响胆红素的代谢，从而导致严重的高胆红素血症如Crigler-Najjar综合症和Gilbert’s综合症。此夕卜，UGTlAl也是SN-38，一种广泛使用的抗癌药物伊立替康的活性代谢产物的主要代谢酶，UGTlAl的活性缺失被证明和伊立替康的毒性相关。因此，在患者用药前，用IAl探针底物对其体内的IAl酶活性进行探测，对于临床安全用药有着重要意义。目前，已经报道的最有可能成为UGTlAl的探针底物有3个，分别是胆红素，雌二醇和依托泊甙，但是，由于胆红素和雌二醇属于内源性化合物，不能作为体内探针使用，而依托泊甙又具有细胞毒性，也限制了它成为体内IAl探针底物。因此，UGTlAl的特异性探针药物的开发具有重要的临床意义。本发明中补骨脂二氢黄酮甲醚具有代谢产物单一(仅生成一个单葡萄糖醛酸化产物)、代谢酶高选择性(肝脏主要由UGTlAl代谢，少量1A3参与极少部分代谢)、代谢产物易检测等特点。此外，补骨脂二氢黄酮甲醚作为一种天然的黄酮类化合物，具有毒性低的特点，因此其作为体内UGTlAl的探针更加安全。
发明内容
本发明的目的是提供一种葡萄糖醛酸转移酶UGTlAl的特异性探针底物及其应用，该特异性探针底物是B环4’位具有羟基的黄酮类化合物补骨脂二氢黄酮甲醚，与目前已报道的探针/标准底物雌二醇相比，补骨脂二氢黄酮甲醚的代谢产物单一，更易于检测；与已报道的探针/标准底物依托泊甙相比，具有安全性更高的优点。因此，用补骨脂二氢黄酮甲醚作为探针底物评估人肝等生物样品中UGTlAl的酶活性，具有显著的优势。
本发明提供了一种葡萄糖醛酸转移酶UGTlAl的特异性探针底物，该特异性探针底物是B环4’位具有羟基的黄酮类化合物补骨脂二氢黄酮甲醚，其结构式见式(I )。
权利要求
1.一种葡萄糖醛酸转移酶UGTlAl的特异性探针底物，其特征在于:该特异性探针底物是具有C-4’羟基的二氢黄酮类化合物，其结构式见式(I)。
2.一种利用权利要求1所述特异性探针底物定量测定生物体系中UGTlAl酶活的方法，其特征在于:采用上述式(I)化合物作为底物，通过定量检测单位时间内的底物消除量或其葡萄糖醛酸产物的生成量来测定各生物样品及细胞中UGTlAl酶的活性。
3.按照权利要求2所述利用特异性探针底物定量测定生物体系中UGTlAl酶活的方法，其特征在于:所述方法条件为:底物浓度介于l/l(TlOKm之间；孵育体系pH介于5.5^10.5之间；反应温度介于2(T60°C之间。
4.按照权利要求2所述利用特异性探针底物定量测定生物体系中UGTlAl酶活的方法，其特征在于:所述产物生成率或底物转化率低于10%。
5.权利要求1所述 特异性探针底物的应用，其特征在于:该特异性探针底物用于各种重组UGT1A1、人及动物组织制备液及各类组织细胞中UGTlAl酶活的定量测定；也用于体内探针，评估胆红素代谢酶UGTlAl的个体及种属差异。
全文摘要
本发明提供了一种葡萄糖醛酸转移酶UGT1A1的特异性探针底物及其应用，该特异性探针底物是具有C-4'羟基的二氢黄酮类化合物，其酶活测定的流程如下选择补骨脂二氢黄酮甲醚的C-4’羟基-O-葡萄糖醛酸化代谢为探针反应，通过定量检测单位时间内补骨脂二氢黄酮甲醚的消除量或其葡萄糖醛酸化代谢产物的生成量来测定各生物样品、细胞、在体及整体器官中UGT1A1酶的活性。本发明可用于不同种属、不同个体来源生物样本中UGT1A1酶活的定量评估，以及不同来源的动物组织细胞培养液及细胞制备物中UGT1A1酶活的定量测定，以期实现对重要药物代谢酶UGT1A1处置药物能力的评估。
文档编号C12Q1/48GK103146804SQ201310044800
公开日2013年6月12日 申请日期2013年2月4日 优先权日2013年2月4日
发明者杨凌, 葛广波, 夏杨柳, 朱亮亮, 吕侠, 何桂元, 宁静 申请人:中国科学院大连化学物理研究所