一株土地类芽孢杆菌的制作方法

专利名称：一株土地类芽孢杆菌的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种类芽孢杆菌。
背景技术：
类芽胞杆菌属(PaenibacillusAsh, Priest&Collin, 1994)属于厚壁菌门，杆菌纲，芽胞杆菌目，类芽胞杆菌科。细胞呈杆状，革兰氏染色阳性、阴性或可变，以周生鞭毛运动。在膨大胞囊内有椭圆形芽孢，在营养琼脂上无可溶性色素。兼性厌氧或严格好氧。目前已至少记录了 39个种，类芽胞杆菌在自然界中分布广泛。对已知类芽胞杆菌的研究发现其具有极高的应用价值。例如，多粘类芽孢杆菌(P.polymyxa)能防治病原细菌、病原真菌、根结线虫等多种有害微生物，既能分泌多种肽类抗菌物质(如多粘菌素、粘菌素、环杆菌素、乔利肽菌素、多肽菌素、谷缬菌素、杀镰孢菌素等)，又能直接作用于细菌菌体，并能诱导宿主植物产生抗病性，还能通过固氮和溶解有机磷为宿主植物提供营养，促进植株生长。固氮类芽胞杆菌(P.azotofixans)对棒杆菌(Corynebacterium fimi)具有明显的抑制作用，并对重金属及抗生素具有较强的耐受能力。而且近几年还发现了一些具备新功能的类芽胞杆菌新种，Aguilera等2001年在橄榄压榨废料堆制的稻杆堆肥中发现了一株具有产生胞外多糖功能的新种P.s jamiIae ；Daane等于2002年在盐沼植物根际发现一株能够降解萘的新种P.naphthalenovorans ；Yoon等2003年发现了两株能够产生高效絮凝海藻的絮凝剂的新种P.kribbensis和P.terrae ；Horn等2005年在虫丘蝴内脏中发现了一株能产生N2O的新种P.anaericanus。土地类芽胞杆菌(P.s terrae)是2003年在印度发现的新种，目前有3个土地类芽胞杆菌菌株被做为功能菌株进行报道，分别是Paenibacillus terrae AM141菌株、HPL-003菌株和MH72菌株。Paenibacillus terrae AM141菌株可作为水藻收获的絮凝剂,HPL-003菌株可以产木聚糖酶，MH72菌株能产生N20`。氮、磷、钾是植物生长必需的大量营养元素，土壤耕作层中全磷含量为0.1
2.0g/kg，其中无机磷占全磷总量的15% 80%，其中大部分是难溶性的无机磷化合物，很难被植物直接利用；土壤耕作层中全钾含量为0.5 45g/kg，其中矿物性钾占全钾的90% 98%，很难被植物直接利用；农业生产上施用的磷肥和钾肥的利用率只有40% 60%，其余部分被土壤重新固定，由于作物对其利用率低、容易流失、造成严重的浪费和环境污染。

发明内容
本发明提供了一株土地类芽孢杆菌本发明土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae) NK3-4菌株,保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC N0.7011。本发明土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae) NK3-4属于类芽孢杆菌属(PaenibacillusAsh, Priest&Collin, 1994),保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2012年12月17日，保藏号为CGMCC N0.7011。土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae) NK3-4为革兰氏阳性菌，菌体为杆状，1.0 1.2 μ mX 3 4 μ m,能形成芽胞，形成芽胞时菌体近端膨大，胞囊明显膨胀，芽胞椭圆形，位于胞囊一端(如

图1所示)。土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae) NK3-4在娃酸盐鹿糖无氮培养基平板上，培养5 7天形成直径为I 2_左右的圆形菌落，单菌落中间隆起，边缘不整齐，表面湿润，半透明，菌苔浓稠，易挑起(如图2所示)。土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae)NK3-4在钾长石酵母粉培养基上菌落呈乳白色，半个玻璃珠状，圆形菌落，菌苔量多而粘，培养至后期菌落边缘不整齐，生长物可生长至培养基内部，使培养基裂开。土地类芽抱杆菌(Paenibacillus terrae) NK3-4通过16S rDNA序列比对分析，与Paenibacillus terrae AM141菌株(登录号为AF391124)亲缘关系最为接近，相似性为99%ο 土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae) NK3-4 的 16S rDNA 如 SEQ ID NO:1 所示。土地类芽抱杆菌(Paenibacillus terrae) NK3-4 又与 Paenibacillus terraeAM141相比存在明显的不同。土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae)NK3_4为革兰氏染色阳性，菌体长度为1.0 1.2μπιΧ3 4μπι，不能利用甘露醇，在2%NaCl中不生长；而Paenibacillus terrae AM141革兰氏染色可变，菌体长度为1.3 1.8 μ mX4 7 μ m,能利用甘露醇，在2%NaCl中生长。因此，判定土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae)NK3_4为土地类芽孢杆菌种的一株新菌株。本发明土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae) NK3-4革兰氏染色为阳性,卩引哚反应为阴性，M.R试验为阴性，V.P试验为阳性；在硅酸盐蔗糖无氮培养基上生长良好。土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae) NK3-4菌株能很好的利用葡萄糖、鹿糖、乳糖、羧甲基纤维素钠、腐殖 酸等作为碳源，能水解淀粉，不利用甘露醇；利用葡萄糖和蔗糖时产酸产气，利用乳糖、羧甲基纤维素钠、腐殖酸时产酸不产气，一般培养后基质PH值降低0.8 1.5。土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae) NK3-4能利用大多数氨基酸中的氮,能使明胶液化、使牛奶胨化，在l%NaCl中生长，在2%NaCl中不生长；最适生长温度为30 32°C，生长最适pH值为6.5 7.5。土地类芽抱杆菌(Paenibacillus terrae) NK3-4生理生化性状及对碳、氮源的利用情况如表I所示。表I
权利要求
1.一株土地类芽孢杆菌，其为土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae)NK3_4，保藏在中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC N0.7011。
全文摘要
一株土地类芽孢杆菌。它涉及一种类芽孢杆菌。土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae)NK3-4，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.7011。NK3-4具有固定空中的氮、分解矿物磷、矿物钾、难溶性硅和抑制植物病原菌的功能。土地类芽孢杆菌(Paenibacillus terrae)NK3-4在减少化肥施用量的情况下，仍可使水稻、玉米、大豆等作物增产，特别是与硅肥配合使用，水稻增产幅度更为显著。本发明用于农业领域。
文档编号C12R1/01GK103146622SQ201310097450
公开日2013年6月12日 申请日期2013年3月25日 优先权日2013年3月25日
发明者于文清, 刘文志, 李鹏, 胡广民, 隋文志, 赵晓锋, 田艳洪 申请人:黑龙江省农垦科学院农畜产品综合利用研究所, 黑龙江农垦三龙生物科技有限公司