专利名称：一种枯草芽孢杆菌203及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物保护领域，尤其涉及一种内生生防菌株，具体 地说涉及一种高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢杆菌203及其应用。
背景技术：
香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)侵染引起的一种毁灭性病害，是香蕉生产的毁灭性土 传病害。病原菌从受伤的根茎侵入，通过维管束向假茎及叶部蔓延， 堵塞木质部导管，直至植株枯萎死亡。香蕉枯萎病菌是土壤习居菌， 其厚垣孢子能够在土壤中存活8 10年。香蕉枯萎病在在珠江三角 洲香蕉产区的多个县市均有分布，近年有迅速发展的趋势。该病病 园病株率一般约为10% 40%，严重的达90%以上，以致蕉园丢荒， 危害极大。
目前对该病的防治尚无理想药剂和抗病品种， 一些栽培管理措 施只能起到局部的控制作用，寻找一种经济、安全、有效的防治方 法是当务之急，近年来，根际有益细菌的研究为香蕉枯蒌病的生物 防治提供了新途径，许多根际有益细菌也能够诱导植物产生系统抗 性，使植物获得广谱抗病能力。根际有益细菌诱导植物产生的防护 作用安全而有效，在植物病害生物防治中具有重要的应用价值。
从香蕉植株内分离筛选获得对香蕉枯萎病菌具有拮抗作用的生 防细菌菌株，对香蕉枯萎病的防治具有重要意义，但目前相关技术 仍旧很薄弱甚至空白。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的空白，提供一种枯草芽孢杆菌 203，是一种从香蕉植株内分离筛选获得对香蕉枯萎病菌具有拮抗作 用的生防细菌菌株，能够有效抑制香蕉枯萎病菌的生长，对香蕉枯 萎病的防治具有重要意义。
本发明的另一个目的是提供了所述高效防治香蕉枯萎病的枯草
芽孢杆菌203的制备方法。
本发明还有一个目的是提供了所述高效防治香蕉枯萎病的枯草 芽孢杆菌203在防止香蕉病灾害方面的多种应用。
本发明的技术方案是提供一种枯草芽孢杆菌203，所述枯草芽孢 杆菌203，万a"."〃s ^"'7j's 203,于2007年7月2日在湖北武汉 武昌珞珈山武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC N0:M207094。
本发明同时提供了所述高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢杆菌203
的制备方法，经平板对峙筛选获得。
本发明还提供了所述的高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢杆菌203
的应用，其一是对香蕉枯萎病菌4号小种的平板拮抗作用。
其二是防止香蕉植株主根部及维管束褐化或腐烂方面的应用。 其三是对番茄枯萎病菌、玉米弯孢叶斑病菌、胶孢炭疽病菌、棉
花枯萎病菌、棉花黄萎病菌或西瓜枯萎病菌的拮抗作用。 本发明的有益效果是 (1)枯草芽孢杆菌203为植物根际有益细菌，对香蕉枯蒌病菌抑制作用强，对多种病原真菌具有拮抗作用，具有拮抗细菌在植物病 害生物防治中所起到的非常重要的作用，例如种类和数量众多，在 植物根际根内、根际大量存在；对病原菌的作用方式多种多样；繁 殖速度快等优点，本发明通过大量实验证明枯草芽孢杆菌203菌株 能够有效抑制香蕉枯萎病菌的生长，抑菌谱广，对棉花枯萎病菌、棉 花黄萎病菌、西瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌、弯孢叶斑病菌、香蕉炭 疽病菌等多种病原真菌都有拮抗作用；环境安全性好，具有良好的开 发应用前景，尤其是对香蕉枯萎病的防治具有重要意义。
(2)本发明所述菌株培养条件简单、容易保存，易于工业化生 产，具有良好的开发应用前景。
图1枯草芽孢杆菌203对F0C4菌丝的抑制作用 图2接种30天后香蕉苗维管束症状 图3草芽孢杆菌203对番茄枯萎病菌的抑制作用 图4枯草芽孢杆菌203对炭疽病菌的抑制作用 图5枯草芽孢杆菌203对香蕉胶胞炭疽菌的抑制作用 图6枯草芽孢杆菌203对棉花枯萎病的抑制作用
具体实施例方式
下面结合具体实施例及附图对本发明作进一步详细的描述。 所述枯草芽孢杆菌203，^"7is 203，于2007年7
月2日在湖北武汉武昌珞珈山武汉大学中国典型培养物保藏中心保
藏，保藏号为CCTCC N0:M207094。实施例1 枯草芽孢杆菌203对香蕉枯萎病菌4号小种FOC4的平板 拮抗作用实验
枯草芽孢杆菌203经平板对峙筛选获得，所述筛选方法属于本领 域常规方法。在马铃薯蔗糖培养基PDA平板中央接入直径为5mm的 香蕉枯萎病菌4号小种FOC4菌丝块，随后在等距离FOC4菌丝块的 三角上放入直径为5mm的灭菌滤纸片，每片滤纸片上接入枯草芽孢 杆菌203培养液10叱，以不接地衣芽孢菌202培养液的平板为对照， 三次重复，25 28。C培养箱中培养5 7天，测定抑菌圈直径，由附 图1可见枯草芽孢杆菌203显著抑制香蕉枯萎病菌的生长。 实施例2枯草芽孢杆菌203防止香蕉植株主根部及维管束褐化或腐 烂实验
选择株高15cm左右的巴西香蕉幼苗，进行3种不同处理(1) 清水健株对照香蕉苗根部浸泡在无菌水中后直接移栽在营养钵中生 长；(2)将香蕉苗根部浸泡在枯草芽孢杆菌203培养液中30min后， 移栽至营养钵中，再将20mL的FOC4孢子悬浮液灌根接入营养钵土 壤中；(3)发病对照香蕉苗根部灌根接种20mLFOC4的孢子悬浮 液，不接种枯草芽孢杆菌203培养液。以上处理，每处理组20株。 之后26'C培养，分别于接种后10、 20天、30天调査发病率和病情指 数，三次重复。与对照相比，枯草芽孢杆菌203能有效地降低香蕉枯 萎病的发生程度，接种30天后效果最明显，根部及维管束褐化、腐 烂程度明显减轻，见附图2,其中A:清水接种对照，无褐变、无腐 烂现象；B、 C:同时接种枯草芽孢杆菌203接种液和F0C4孢子悬浮液，轻微褐变、无腐烂；F、 G、 H、 I:只接种F0C4孢子悬浮液，严 重褐变、腐烂。
实施例3枯草芽孢杆菌203对多种病原菌的拮抗作用
采用平板对峙法，测试枯草芽孢杆菌203对番茄枯萎病菌、玉米 弯孢叶斑病菌、胶孢炭疽病菌、棉花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、小麦 赤霉病菌、西瓜枯萎病菌等7种病原菌的拮抗效果，在PDA平板中央 接入直径为5mm的靶标菌丝块，随后在等距离F0C4菌丝块的三角上 放入直径为5mm的灭菌滤纸片，每片滤纸片上接入枯草芽孢杆菌203 培养液IOA，以不接地衣芽孢菌202培养液的平板为对照，28"C培 养箱中培养5 7天，测定抑菌圈直径。枯草芽孢杆菌203抑菌谱较 广，对棉花枯萎病菌等多种病原真菌具有拮抗作用，见表l以及附图 3。从附图3中可看到枯草芽孢杆菌203对番茄枯萎病菌的抑制作用; 附图4中可观察到枯草芽孢杆菌203对炭疽病菌的抑制作用；附图5 中可观察到枯草芽孢杆菌203对香蕉胶胞炭疽菌的抑制作用；附图6 中可观察到枯草芽孢杆菌203对棉花枯萎病的抑制作用。 表1枯草芽孢杆菌203对几种真菌的抑制作用 病原菌 抑制半径 棉花枯萎病 ++ 棉花黄萎病 +++ 西瓜枯萎病 ++ 番茄枯萎病 ++ 弯孢叶斑病 ++香蕉炭疽病 +++ —:无抑制作用
+:抑菌圈直径l 4mm ++:抑菌圈直径4 8mm +++:抑菌圈直径〉8mm
权利要求
1、一种枯草芽孢杆菌203，于2007年7月2日在湖北武汉武昌珞珈山武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NOM207094。
2、 一种权利要求1所述枯草芽孢杆菌203的制备方法，其特征 在于经平板对峙筛选获得。
3、 一种权利要求1所述枯草芽孢杆菌203的应用，其特征在于 对香蕉枯萎病菌4号小种的平板拮抗作用的应用。
4、 一种权利要求1所述枯草芽孢杆菌203的应用，其特征在于 防止香蕉植株主根部及维管束褐化或腐烂方面的应用。
5、 一种权利要求1所述枯草芽孢杆菌203的应用，其特征在于 对番茄枯萎病菌、玉米弯孢叶斑病菌、胶孢炭疽病菌、棉花枯萎病菌、 棉花黄萎病菌或西瓜枯萎病菌的拮抗作用应用。
全文摘要
本发明公开了一种枯草芽孢杆菌203，所述枯草芽孢杆菌203，Bacillus subtilis 203，于2007年7月2日在湖北武汉武昌珞珈山武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NoM207094。本发明同时公开了其制备方法以及应用，所述枯草芽孢杆菌203菌株经平板对峙、盆栽试验筛选获得，能够有效抑制香蕉枯萎病菌的生长，抑菌谱广，对棉花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、西瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌、弯孢叶斑病菌或香蕉炭疽病菌等多种病原真菌都有拮抗作用，环境安全性好，具有良好的开发应用前景。
文档编号C12R1/125GK101550402SQ20081018307
公开日2009年10月7日 申请日期2008年12月2日 优先权日2007年12月4日
发明者孙正祥, 王振中, 纪春艳 申请人:华南农业大学