大丽轮枝菌培养基及其制备方法和培养大丽轮枝菌的方法
【专利摘要】本发明公开了一种大丽轮枝菌培养基，该大丽轮枝菌培养基含有1-3g/L的NaNO3、0.3-0.7g/L的KCl、0.5-2g/L的K2HPO4、0.005-0.015g/L的FeSO4、0.3-0.7g/L的MgSO4和5-15g/L的棉花组织粉末。本发明还提供了一种大丽轮枝菌培养基的制备方法和一种培养大丽轮枝菌的方法。本发明能够将大丽轮枝菌的产孢子量提高5倍以上。
【专利说明】大丽轮枝菌培养基及其制备方法和培养大丽轮枝菌的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业生物【技术领域】，具体地，涉及一种大丽轮枝菌培养基，一种大丽轮枝菌培养基的制备方法和一种培养大丽轮枝菌的方法。
【背景技术】
[0002]大丽轮枝菌(Verticillium dahlia),属于半知菌亚门轮枝菌属真菌。大丽轮枝菌的寄主范围极广，可为害38科660种植物，其中农作物184种，杂草153种。在中国，大丽轮枝菌的寄主植物至少涉及20科80种，例如向日葵、爺子、辣子、番茄、烟草、马铃薯、甜瓜、西瓜、黄瓜、花生、菜豆、绿豆、大豆、棉花、芝麻、甜菜等大田作物。其中，大丽轮枝菌能够引发棉花的黄萎病，因此研究大丽轮枝菌的生物学特征具有重大意义。
[0003]在大丽轮枝菌的研究过程中，经常需要大量使用大丽轮枝菌的孢子，但是，目前用于培养大丽轮枝菌的培养基(例如查比克培养基)在培养大丽轮枝菌时，产孢子量仍然较低。
【发明内容】
[0004]针对上述存在的问题和解决方法的不足，本发明将研发一种新的大丽轮枝菌培养基，并将其用于培养大丽轮枝菌，以实现提高大丽轮枝菌产孢子量的目的。
[0005]为了实现上述目的，本发明提供了一种大丽轮枝菌培养基，该大丽轮枝菌培养基含有 l-3g/L 的 NaN03、0.3-0.7g/L 的 KCl、0.5_2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.005-0.015g/L 的 FeSO4'0.3-0.7g/L的MgSO4和5-15g/L的棉花组织粉末。
[0006]另一方面，本发明还提供了一种大I?轮枝菌培养基的制备方法，该方法包括:(1)将棉花组织用液氮速冻并经过破碎和干燥，得到棉花组织粉末；(2)将所述棉花组织粉末与NANO3、KC1、K2HPO4、FESO4和MGSO4混合并配制为含有 l-3g/L 的 NaN03、0.3-0.7g/L 的 KC1、0.5-2g/L 的 K2HP04、0.005-0.015g/L 的 FeS04、0.3-0.7g/L 的 MgSO4 和 5-15g/L 的棉花组织粉末的大丽轮枝菌培养基。
[0007]再一方面，本发明还提供了一种培养大丽轮枝菌的方法，该方法包括:将大丽轮枝菌菌种接种到如上所述的大丽轮枝菌培养基中，并且进行孵育。
[0008]通过上述技术方案，本发明能够将大丽轮枝菌的产孢子量提高5倍以上。
[0009]本发明的其他特征和优点将在随后的【具体实施方式】部分予以详细说明。
【具体实施方式】
[0010]以下对本发明的【具体实施方式】进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的【具体实施方式】仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0011]本发明提供了一种大I?轮枝菌培养基，其中，该大I?轮枝菌培养基含有l-3g/L的NaN03、0.3-0.7g/L 的 KC1、0.5-2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.005-0.015g/L 的 FeS04、0.3-0.7g/L 的MgSO4和5-15g/L的棉花组织粉末。[0012]其中，为了进一步提高大丽轮枝菌的产孢子量，优选情况下，该大丽轮枝菌培养基含有 1.5-2.5g/L 的 NaN03、0.4-0.6g/L 的 KCl、0.8-1.2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.008-0.012g/L 的FeS04、0.4-0.6g/L 的 MgSO4 和 8_12g/L 的棉花组织粉末。
[0013]其中，所述棉花组织粉末可以来源于棉花植株的各个组成部分，包括但不限于根、茎、叶、花、果；为了进一步提高大丽轮枝菌的产孢子量，优选情况下，所述棉花组织粉末是由棉花植株的根和/或茎形成的粉末。
[0014]其中，所述棉花植株可以为任意周龄的棉苗，优选是4-6周龄的棉苗。
[0015]本发明还提供了一种大丽轮枝菌培养基的制备方法，其中，该方法包括:(I)将棉花组织用液氮速冻并经过破碎和干燥，得到棉花组织粉末；(2)将所述棉花组织粉末与NaN03、KCUK2HPO4, FeSO4 和 MgSO4 混合并配制为含有 l_3g/L 的 NaN03、0.3-0.7g/L 的 KCl、0.5-2g/L 的 K2HP04、0.005-0.015g/L 的 FeS04、0.3-0.7g/L 的 MgSO4 和 5_15g/L 的棉花组织粉末的大丽轮枝菌培养基。 [0016]其中，为了进一步提高大丽轮枝菌的产孢子量，优选情况下，将所述棉花组织粉末与 NaN03、KCl、K2HPO4, FeSO4 和 MgSO4 混合并配置为含有 1.5-2.5g/L 的 NaN03、0.4-0.6g/L的 KCl、0.8-1.2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.008-0.012g/L 的 FeS04、0.4-0.6g/L 的 MgSO4 和 8_12g/L 的棉花组织粉末。
[0017]其中，所述棉花组织粉末可以来源于棉花植株的各个组成部分，包括但不限于根、茎、叶、花、果；为了进一步提高大丽轮枝菌的产孢子量，优选情况下，棉花组织粉末是由棉花植株的根和/或茎形成的粉末。
[0018]其中，所述棉花植株可以为任意周龄的棉苗，优选是4-6周龄的棉苗。
[0019]本发明还提供了一种培养大丽轮枝菌的方法，其中，该方法包括:将大丽轮枝菌菌种接种到如上所述的大丽轮枝菌培养基中，并且进行孵育。
[0020]其中，接种的条件可以包括:相对于每升的大丽轮枝菌培养基，大丽轮枝菌菌种的接种量为1-5X IO6Cfu ;所述孵育的温度为25-28°C。
[0021]本文中液体的体积为20°C下的体积。
[0022]以下通过实施例进一步详细说明本发明:
[0023]制备实施例1
[0024]将棉籽(合丰202，购自石家庄市万丰种业有限公司)种于商品蛭石和营养土 (购自北京繁星花卉有限公司)，温室培养(光周期14h，温度25°C，相对湿度85%)4-6周，得到4_6周龄的棉苗。
[0025]将上述得到的4-6周龄的棉苗清洗干净，取棉花植株的根和茎，剪碎，放入液氮中速冻并破碎为粉末，然后干燥，得到棉花组织粉末，备用。
[0026]实施例1
[0027]将2g 的 NaN03、0.5g 的 KClUg 的 K2HP04、0.01g 的 FeS04、0.5g 的 MgSO4 和 IOg 的制备实施例1的棉花组织粉末混合，并加水至1L，灭菌后得到本实施例的大丽轮枝菌培养基。
[0028]实施例2
[0029]将1.5g 的 NaN03、0.6g 的 KCl、0.8g 的 Κ2ΗΡ04、0.012g 的 FeS04、0.4g 的 MgSO4 和12g的制备实施例1的棉花组织粉末混合，并加水至1L，灭菌后得到本实施例的大丽轮枝菌
培养基。[0030]实施例3
[0031]将2.5g 的 NaNO3、0.4g 的 KCl、1.2g 的 K2HPO4、0.008g 的 FeSO4、0.6g 的 MgSO4 和 8g的制备实施例1的棉花组织粉末混合，并加水至1L，灭菌后得到本实施例的大丽轮枝菌培养基。
[0032]实施例4
[0033]将Ig 的 NaN03、0.7g 的 KCl、0.5g 的 Κ2ΗΡ04、0.015g 的 FeS04、0.3g 的 MgSO4 和 5g的制备实施例1的棉花组织粉末混合，并加水至1L，灭菌后得到本实施例的大丽轮枝菌培养基。
[0034]实施例5
[0035]将3g 的 NaN03、0.3g 的 KCl、2g 的 K2HP04、0.005g 的 FeS04、0.7g 的 MgSO4 和 15g 的制备实施例1的棉花组织粉末混合，并加水至1L，灭菌后得到本实施例的大丽轮枝菌培养基。
[0036]制备实施例2 [0037]将棉籽(合丰202，购自石家庄市万丰种业有限公司)种于商品蛭石和营养土 (购自北京繁星花卉有限公司)，温室培养(光周期14h，温度25°C，相对湿度85%)4-6周，得到4_6周龄的棉苗。
[0038]将上述得到的4-6周龄的棉苗清洗干净，取棉花植株的叶，剪碎，放入液氮中速冻并破碎为粉末，然后干燥备用。
[0039]实施例6
[0040]将2g 的 NaN03、0.5g 的 KClUg 的 K2HP04、0.01g 的 FeS04、0.5g 的 MgSO4 和 IOg 的制备实施例2的棉花组织粉末混合，并加水至1L，灭菌后得到本实施例的大丽轮枝菌培养基。
[0041]对比例I
[0042]制备查比克培养基，即2g NaNO3,0.5g 的 KClUg 的 K2HP04、0.018g 的 FeS04、0.5g的MgSO4和30g的蔗糖混合并加水至1L，灭菌后得到本实施例的大丽轮枝菌培养基。
[0043]测试实施例1
[0044]将大丽轮枝菌菌种(Verticillium dahliae,中国农业科学院植物保护研究所简桂良研究员惠赠)分别接种在实施例1-6和对比例I的大丽轮枝菌培养基中，相对于每升的大丽轮枝菌培养基，大丽轮枝菌菌种的接种量为IX IO6Cfu,在28°C下孵育5天，血球计数板法统计孢子数量，结果显示不同处理之间孢子形态完全一致，但孢子数量具有明显差异，具体如表1所示。
[0045]表1
[0046]
【权利要求】
1.一种大丽轮枝菌培养基，其特征在于，该大丽轮枝菌培养基含有l-3g/L的NaN03、0.3-0.7g/L 的 KCl、0.5-2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.005-0.015g/L 的 FeS04、0.3-0.7g/L 的 MgSO4 和5-15g/L的棉花组织粉末。
2.根据权利要求1所述的大丽轮枝菌培养基，其中，该大丽轮枝菌培养基含有1.5-2.5g/L 的 NaN03、0.4-0.6g/L 的 KCl、0.8-1.2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.008-0.012g/L 的 FeSO4'0.4-0.6g/L的MgSO4和8-12g/L的棉花组织粉末。
3.根据权利要求1或2所述的大丽轮枝菌培养基，其中，所述棉花组织粉末是由棉花植株的根和/或茎形成的粉末。
4.根据权利要求3所述的大丽轮枝菌培养基，其中，所述棉花植株是4-6周龄的棉苗。
5.一种大丽轮枝菌培养基的制备方法，其特征在于，该方法包括: (1)将棉花组织用液氮速冻并经过破碎和干燥，得到棉花组织粉末； (2)将所述棉花组织粉末与NaNO3、KCl、K2HP04、FeSO4和MgSO4混合并配制为含有l_3g/L 的 NaN03、0.3-0.7g/L 的 KC1、0.5_2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.005-0.015g/L 的 FeS04、0.3-0.7g/L 的MgSO4和5-15g/L的棉花组织粉末的大丽轮枝菌培养基。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其中，将所述棉花组织粉末与NaN03、KCl、K2HPO4,FeSO4 和 MgSO4 混合并 配置为含有 1.5-2.5g/L 的 NaN03、0.4-0.6g/L 的 KCl、0.8-1.2g/L 的Κ2ΗΡ04、0.008-0.012g/L 的 FeS04、0.4-0.6g/L 的 MgSO4 和 8_12g/L 的棉花组织粉末。
7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其中，棉花组织粉末是由棉花植株的根和/或茎形成的粉末。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其中，所述棉花植株是4-6周龄的棉苗。
9.一种培养大丽轮枝菌的方法，其特征在于，该方法包括:将大丽轮枝菌菌种接种到权利要求1-4中任意一项所述的大丽轮枝菌培养基中，并且进行孵育。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，接种的条件包括:相对于每升的大丽轮枝菌培养基，大丽轮枝菌菌种的接种量为1-5X IO6Cfu ;所述孵育的温度为25-28°C。
【文档编号】C12R1/645GK103602598SQ201310587450
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年11月20日 优先权日:2013年11月20日
【发明者】戴小枫, 肖红利, 李蕾, 陈捷胤, 祁伟彦, 孔志强 申请人:中国农业科学院农产品加工研究所