一种白僵菌的固体培养基以及白僵菌的培养方法
【专利摘要】本发明提供了一种白僵菌的固体培养基以及白僵菌的培养方法，其中，本发明的固体培养基包括按质量比1：（1～1.2）：（1～1.2）的蛭石、麦麸以及玉米粉，将蛭石、麦麸以及玉米粉混合蒸汽灭菌40min得到；在此基础上，本发明将白僵菌接种液在加有硫酸庆大霉素的液体扩大培养基培养后，再接种于固体培养基中，在25～27℃培养7.5～8d后收获。本发明固体培养基具有良好的保湿性和透气性，能为白僵菌增殖提供丰富的N源和C源营养，原料经济易得。本发明的培养方法，操作简单，流程清晰，对生产环境和生产设备要求不高，生产成本较低，生产周期较短，在生产中不需要对培养基进行倒料，杜绝了生产中杂菌的污染问题，非常适合小型企业和生产单位快速生产白僵菌。
【专利说明】一种白僵菌的固体培养基以及白僵菌的培养方法
【技术领域】
[0001]本发明属于发酵培养【技术领域】，尤其涉及一种白僵菌的固体培养基以及白僵菌的培养方法。
【背景技术】
[0002]白僵菌是一种常见的具有杀虫广谱性的昆虫病原真菌，具有寄主范围广，致病力强，对人、畜和植物无毒害，不杀伤天敌，不污染环境，无化学农药残留、易于培养、防治成本具有竞争力等特点，是目前国内外研究应用最广泛的害虫生物防治病原真菌，已成功用于国内外数十种重大农、林业害虫的生物防治实践，并开发出多种白僵菌生物制剂用于商品化生产，白僵菌已是目前生物防治中应用最广、使用面积最大的生物病原真菌杀虫剂。白僵菌生物农药的生产和使用是解决化学农药残留污染问题的主要途径，已成为农业害虫防治的最主要措施之一，对保障农、林业绿色食品生产及食品安全和保护环境具有重要意义。[0003]白僵菌经济、快速大量增殖生产是白僵菌大量用于生物防治实践的前提条件。目前白僵菌大量培养的主要方式包括液态培养、固态培养和液固两相培养三种。其中液态培养的过程中白僵菌主要以芽生孢子和菌丝为主要产物，由于芽生孢子对害虫活性低，不易保存，因此传统液态培养并不适合作为制剂生产的方式。在固态培养的过程中，白僵菌可形成分生孢子，能够有效侵染虫体，而且易于保存，但是存在培养周期长，产量较低，产品质量不稳定的缺点。目前最常用的培养方式是液固两相培养，首先使用种子液进行液态培养获得大量菌丝体和芽生孢子，然后接种在固体培养基上进行二次培养，生产分生孢子。这种培养方式可缩短生产周期，保证大量培养的效率和所产孢子的质量，但需要尽量降低生产成本和缩短生产周期。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种白僵菌的固体培养基以及白僵菌的培养方法，旨在解决现有技术中所存在的培养周期长、产量较低、产品质量不稳定以及成本高等问题。
[0005]本发明是这样实现的，一种白僵菌的固体培养基，其特征在于，包括按质量比1:(I~1.2): (I~1.2)的蛭石、麦麸以及玉米粉，将蛭石、麦麸以及玉米粉混合蒸汽灭菌40min得到。
[0006]本发明进一步提供了上述白僵菌的培养方法，包括以下步骤:
[0007](I)加入5ml浓度为IO7孢子/mL的白僵菌接种液于150ml液态扩大培养基中，在27±1°C、220~250r/min震荡条件下培养72h ；
[0008](2)接入权利要求1的固体培养基，所述固体培养基放置在用灭菌报纸封口的灭菌罐头瓶中，每瓶固体培养基15g，接菌量为10~15ml/100g，加灭菌水量为50%~55%，罐头瓶放入8#夹链袋中封口，在25~27°C培养7.5~8d后收获。
[0009]优选地，在步骤(1)中，所述液态扩大培养基的制备过程包括:将Sg葡萄糖、2g蛋白胨、2g 酵母浸膏、0.2gNaH2P04,0.1gMgSO4^0.1gKCl 以及 200mlH20 在 121°C灭菌 40min，冷却后加入0.1%的硫酸庆大霉素。
[0010]本发明克服现有技术的不足，基于白僵菌的液固两相培养方式，摸索出了一种能快速大量培养白僵菌分生孢子的生产方法和简易培养基配方，以解决生产部门和基层农技部门白僵菌生产和使用的实际需要，提高我国白僵菌生物防治面积。
[0011]其中，本发明的固体培养基中，蛭石作为填充基质能改善和扩大白僵菌与营养物质的接触面，同时保证培养基的保湿性和透气性，改善固体培养基的物理性质，有利于白僵菌的快速增殖。麦麸和玉米粉作为固体培养基的营养物质为白僵菌增殖提供丰富的N源和C源营养，其原料经济易得，能保证白僵菌大量增殖的营养需要。
[0012]此外，本发明的白僵菌的培养方法，操作简单，流程清晰，对生产环境和生产设备要求不高，生产成本较低，生产周期较短，在生产中不需要对培养基进行倒料，杜绝了生产中杂菌的污染问题，非常适合小型企业和生产单位快速生产白僵菌。
【具体实施方式】
[0013]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0014]实施例1
[0015](I)白僵菌的固体培养基的制备:
[0016]将5g蛭石、5~6g麦麸以及5~6g玉米粉混合蒸汽灭菌40min得到。
[0017](2)液态扩大培养基的制备:
[0018]将Sg 葡萄糖、2g 蛋白胨、2g 酵母浸膏、0.2gNaH2P04、0.lgMgS04、0.1gKCl 以及200mlH20混合后得到的混合物蒸汽灭菌40min，冷却后加入混合物质量分数0.1%硫酸庆大
霉素O
[0019]实施例2
[0020]一种白僵菌的培养方法，包括以下步骤:
[0021](I)加入5ml浓度为IO7孢子/mL的白僵菌接种液于实施例1中的150ml液态扩大培养基中在27 ± I °C、220~250r/min转震荡培养72h ；
[0022](2)接入实施例1中的固体培养基，所述固体培养基放置在用灭菌报纸封口的灭菌罐头瓶中，每瓶固体培养基15g，接菌量为10~15ml/100g，灭菌水量50%~55%，罐头瓶放入8#夹链袋中封口，在25~27°C培养7.5~8d后收获。
[0023](3)将收获产物进行测量，烘干前产分生孢子量达3.7X IO9孢子/g，烘干后单位产孢量每克达100亿个以上。
[0024]相比于 现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果:
[0025]1.培养基配方和制作方法简单，材料易得，成本低廉，分生孢子产量高。
[0026]2.白僵菌的培养方法操作简单，生产工艺流程清晰，生产周期短，分生孢子产量闻。
[0027]3.对生产环境和生产设备要求低，可操作性强，生产成本较低，非常适合小型企业和生产单位快速生产白僵菌用于害虫生物防治需要。
[0028]4.在生产中不需要对培养基进行倒料，杜绝了生产中杂菌的污染问题，能生产出纯净的白僵菌，产品质量高。
[0029]以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的 任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种白僵菌的固体培养基，其特征在于，包括按质量比1: (1~1.2): (1~1.2)的蛭石、麦麸以及玉米粉，将蛭石、麦麸以及玉米粉混合蒸汽灭菌40min得到。
2.一种白僵菌的培养方法，其特征在于包括以下步骤: (1)加入5ml浓度为IO7孢子/mL的白僵菌接种液于150ml液态扩大培养基中，在27 ± 1 °C、220~250r/min震荡条件下培养72h ； (2)接入权利要求1的固体培养基，所述固体培养基放置在用灭菌报纸封口的灭菌罐头瓶中，每瓶固体培养基15g，接菌量为10~15ml/100g，加灭菌水量为50%~55%，罐头瓶放入8#夹链袋中封口，在25~27°C培养7.5~8d后收获。
3.如权利要求2所述的白僵菌的培养方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述液态扩大培养基的制备过程包括:将8g葡萄糖、2g蛋白胨、2g酵母浸膏、0.2gNaH2P04、0.1gMgSO4、0.1gKCl以及200mlH20在121°C灭菌40min，冷却后加入0.1%的硫酸庆大霉素。
【文档编号】C12R1/645GK103881930SQ201410123023
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2014年3月28日 优先权日:2014年3月28日
【发明者】赵奎军, 于洪春, 宋龙腾, 戴长春, 裴海英 申请人:东北农业大学