一种具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料及其制备方法与流程

本发明涉及一种发酵饮料及其制备方法，尤其是一种具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料及其制备方法。
背景技术：
：恶性肿瘤是由于机体细胞失去正常调控,过度增殖而引起的疾病。过度增殖的细胞称癌细胞，癌细胞常可侵犯周围组织(浸润，invasion),甚至可经体内循环系统和/或淋巴系统转移到身体其他部分(癌症转移)。癌症有许多类型，而病症的严重程度取决于癌细胞所在部位、恶性程度及是否发生转移。一旦确诊，常以结合手术、化疗和放疗的方式进行治疗。如果癌症未经治疗，通常最终结果将导致死亡。现阶段，对于恶性肿瘤的传统疗法主要是采用放化疗治疗，传统化疗药物具有多种副作用，包括免疫抑制，黏膜损伤等，直接影响病人的生存质量，因此急需寻找化疗药物的代替药品。中医抗肿瘤主要归纳为祛邪和扶正两种方法，祛邪法分清热解毒、活血祛瘀、除痰散结、以毒攻毒法；扶正法即扶正培本，扶正法依人体阴阳气血、脏腑经络的孰盛孰衰而有的放矢，分健脾、养血、补肾、滋阴四法。主要以辨证治疗为主，能够有效控制肿瘤发展、提高生存时间、改善生存质量。很多中草药含有抗肿瘤成分，并通过多途径、多靶点抑制或杀灭肿瘤细胞。研究提示，中药抗癌机理主要有以下几个方面：细胞毒作用、诱导肿瘤细胞凋亡、诱导肿瘤细胞分化、抑制染色体端粒酶活性、抑制肿瘤血管生成、调节细胞信号传导、调节机体免疫功能、逆转癌细胞多药耐药作用等等，中药抗肿瘤具有副作用相对较小的优势，能够防止癌细胞复发、转移，改善患者免疫力，因此越来越广泛的在临床应用，但是由于中药抗肿瘤起效较慢，临床病人情况复杂，因此临床难以单独应用，具有一定的局限性，主要配合化疗、放疗、手术、生物治疗、热疗5种主流的肿瘤治疗方法。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题在于提供一种具有极高的水中悬浮率的具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料。本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料的制备方法。为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：一种具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料，有效成分由枸杞金银花共提物、糖液、乳酸菌、酵母菌和醋酸菌组成，其中，每500ml枸杞金银花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×103-1×1013cfu，酵母菌1×103-1×1013cfu，醋酸菌1×103-1×1013cfu。优选的，上述具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料，所述枸杞金银花共提物是由下述方法制备得到的：每10-80g干枸杞与10-80g金银花混合并加入500ml纯净水70-100℃浸提10-120min，40目筛过滤，滤出渣再用纯净水70-100℃浸提10-120min，40目筛过滤，将两次滤液合并在一起，即得。优选的，上述具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料，所述糖液是由下述方法制备得到的：每10-100g白砂糖与10-100g蜂蜜混合后加入300ml纯净水溶化过滤至澄清，即得。优选的，上述具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料，每500ml枸杞金银花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×1011cfu，酵母菌1×109cfu，醋酸菌1×1010cfu。优选的，上述具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料，所述干枸杞与金银花的质量比为7:3。上述具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料的制备方法，具体步骤为：(1)按组方量将枸杞金银花共提物加糖液混合并加纯净水配平至1l，121℃，20min灭菌，待液体降温至室温，接入乳酸菌、酵母菌和醋酸菌，20-40℃发酵，发酵周期3-15d；(2)将发酵液在无菌条件下离心：2000-10000rpm离心5-20min，将上层澄清液体进行0.2μm微孔滤膜过滤除菌，灌装即得。本发明的有益效果是：上述具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料，经体外试验证明，对ht29(人结肠癌细胞株)s180(小鼠腹水型肉瘤细胞株)hpg2(人肝癌细胞株)体外72h抑制率分别为78.56％，82.13％，68.38％；s180细胞荷瘤小鼠实验中所述中药发酵饮料能够通过改善小鼠体内微生态环境，增强小鼠免疫力，有效抑制癌细胞在动物体内生长，其抑制率达到46.1％。并且能够提高小鼠摄食量，体重以及精神状态。可见，本发明所述中药发酵饮料，通过组分间的协同作用，可以有效抑制肿瘤生长，同时，饮料口感酸甜，适口性好，在动物实验过程中未发现动物非正常死亡或其他不良情况，表明该产品安全性较高，无毒副作用，有望在临床上替代或部分替代化疗药物，减少化疗药物用量，提高病人生存质量，节约大量医疗费用，其制备方法简单，具有广泛应用前景。附图说明图1是发酵饮料及水提物对ht29细胞抑制作用图；图2是发酵饮料及水提物对s180细胞抑制作用图；图3是发酵饮料及水提物对hepg-2细胞抑制作用图；图4是发酵饮料对小鼠摄食量的影响图；图5是发酵饮料对小鼠体重的影响图。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。实施例1一种具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料，有效成分由枸杞金银花共提物、糖液、乳酸菌(植物乳杆菌，lp45，石家庄一然生物科技有限公司)、酵母菌(发酵毕赤酵母，cicc20442，中国工业微生物菌种保藏管理中心)和醋酸菌(巴氏醋杆菌，cicc20064，中国工业微生物菌种保藏管理中心)组成，其中，每500ml枸杞金银花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×1011cfu，酵母菌1×109cfu，醋酸菌1×1010cfu。其中，所述枸杞金银花共提物是由下述方法制备得到的：每70g干枸杞与30g金银花混合并加入500ml纯净水90℃浸提100min，40目筛过滤，滤出渣再用纯净水80℃浸提80min，40目筛过滤，将两次滤液合并在一起，即得。所述糖液是由下述方法制备得到的：每50g白砂糖与50g蜂蜜混合后加入300ml纯净水溶化过滤至澄清，即得。上述具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料的制备方法，具体步骤为：(1)按组方量将枸杞金银花共提物加糖液混合并加纯净水配平至1l，121℃，20min灭菌，待液体降温至室温，接入乳酸菌、酵母菌和醋酸菌，30℃发酵，发酵周期10d；(2)将发酵液在无菌条件下离心：8000rpm离心15min，将上层澄清液体进行0.2μm微孔滤膜过滤除菌，灌装即得。实施例2一种具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料，有效成分由枸杞金银花共提物、糖液、乳酸菌(植物乳杆菌，lp45，石家庄一然生物科技有限公司)、酵母菌(双倒卵形红冬孢酵母菌，cicc31994，中国工业微生物菌种保藏管理中心)和醋酸菌(巴氏醋杆菌，cicc20056，中国工业微生物菌种保藏管理中心)组成，其中，每500ml枸杞金银花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×103cfu，酵母菌1×1013cfu，醋酸菌1×103cfu。其中，所述枸杞金银花共提物是由下述方法制备得到的：每80g干枸杞与10g金银花混合并加入500ml纯净水100℃浸提120min，40目筛过滤，滤出渣再用纯净水70℃浸提10min，40目筛过滤，将两次滤液合并在一起，即得。所述糖液是由下述方法制备得到的：每10g白砂糖与100g蜂蜜混合后加入300ml纯净水溶化过滤至澄清，即得。上述具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料的制备方法，具体步骤为：(1)按组方量将枸杞金银花共提物加糖液混合并加纯净水配平至1l，121℃，20min灭菌，待液体降温至室温，接入乳酸菌、酵母菌和醋酸菌，20℃发酵，发酵周期15d；(2)将发酵液在无菌条件下离心：10000rpm离心5min，将上层澄清液体进行0.2μm微孔滤膜过滤除菌，灌装即得。实施例3一种具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料，有效成分由枸杞金银花共提物、糖液、乳酸菌(植物乳杆菌，lp-g18，润盈生物工程(上海)有限公司)、酵母菌(酿酒酵母，cicc1002，中国工业微生物菌种保藏管理中心)和醋酸菌(巴氏醋杆菌，cgmcc1.24，中国普通微生物菌种保藏管理中心)组成，其中，每500ml枸杞金银花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×1013cfu，酵母菌1×103cfu，醋酸菌1×1013cfu。其中，所述枸杞金银花共提物是由下述方法制备得到的：每10g干枸杞与80g金银花混合并加入500ml纯净水70℃浸提10min，40目筛过滤，滤出渣再用纯净水100℃浸提120min，40目筛过滤，将两次滤液合并在一起，即得。所述糖液是由下述方法制备得到的：每100g白砂糖与10g蜂蜜混合后加入300ml纯净水溶化过滤至澄清，即得。上述具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料的制备方法，具体步骤为：(1)按组方量将枸杞金银花共提物加糖液混合并加纯净水配平至1l，121℃，20min灭菌，待液体降温至室温，接入乳酸菌、酵母菌和醋酸菌，40℃发酵，发酵周期3d；(2)将发酵液在无菌条件下离心：2000rpm离心20min，将上层澄清液体进行0.2μm微孔滤膜过滤除菌，灌装即得。实施例4一种具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料，有效成分由枸杞金银花共提物、糖液、乳酸菌(植物乳杆菌，lp-g18，润盈生物工程(上海)有限公司)、酵母菌(发酵毕赤酵母，cicc20442，中国工业微生物菌种保藏管理中心)和醋酸菌(汉氏葡糖酸醋杆菌，cgmcc1.1811，中国普通微生物菌种保藏管理中心)组成，其中，每500ml枸杞金银花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×1012cfu，酵母菌1×107cfu，醋酸菌1×109cfu。其中，所述枸杞金银花共提物是由下述方法制备得到的：每60g干枸杞与40g金银花混合并加入500ml纯净水80℃浸提60min，40目筛过滤，滤出渣再用纯净水80℃浸提40min，40目筛过滤，将两次滤液合并在一起，即得。所述糖液是由下述方法制备得到的：每60g白砂糖与40g蜂蜜混合后加入300ml纯净水溶化过滤至澄清，即得。上述具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料的制备方法同实施例1。实施例5一种具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料，有效成分由枸杞金银花共提物、糖液、乳酸菌(植物乳杆菌，lp-g18，润盈生物工程(上海)有限公司)、酵母菌(酿酒酵母，cicc1002，中国工业微生物菌种保藏管理中心)和醋酸菌(苹果醋酸杆状菌，cgmcc1.5116，中国普通微生物菌种保藏管理中心)组成，其中，每500ml枸杞金银花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×109cfu，酵母菌1×105cfu，醋酸菌1×107cfu。其中，所述枸杞金银花共提物是由下述方法制备得到的：每70g干枸杞与20g金银花混合并加入500ml纯净水90℃浸提60min，40目筛过滤，滤出渣再用纯净水80℃浸提40min，40目筛过滤，将两次滤液合并在一起，即得。所述糖液是由下述方法制备得到的：每40g白砂糖与60g蜂蜜混合后加入300ml纯净水溶化过滤至澄清，即得。上述具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料的制备方法同实施例2。上述实施例中所述各组分用量按照相同比例增加或减少，所得各组分的重量份数关系均属于本发明的保护范围。上述实施例组方分析：枸杞性平味甘，具有养阴补血、滋补肝肾、益精明目的功效，常用于治疗肝肾虚损、精血不足所致的腰膝酸软、头晕、耳鸣、遗精等症。其主要活性成分为：枸杞多糖：枸杞多糖是一种水溶性多糖，是枸杞中最主要的活性成分，相对分子质量为68-200，成为国内外研究热点。其中又以枸杞多糖的免疫调节和抗肿瘤作用的研究最多。现已有很多研究表明枸杞多糖具有促进免疫、抗衰老、抗肿瘤、清除自由基、抗疲劳、抗辐射、保肝、生殖功能保护和改善等作用。甜菜碱：化学名称为1-羧基-n，n，n-三甲氨基乙内酯，在化学结构上与氨基酸相似，属于季胺碱类物质。甜菜碱是枸杞果、叶、柄中主要的生物碱之一。枸杞对脂质代谢或抗脂肪肝的作用主要是由于所含的甜菜碱引起的，它在体内起甲基供应体的作用。关于枸杞甜菜碱的研究仅限于国内在含量的测定、提取工艺和对枸杞植物的生理作用(增强耐盐性)研究方面，关于枸杞甜菜碱的药理药效研究很少。枸杞色素：枸杞色素是存在于枸杞浆果中的各类呈色物质，是枸杞籽的重要生理活性成分。主要包括-胡萝卜素、叶黄素和其他有色物质。枸杞所含有的类胡萝卜素则具有非常重要的药用价值。很多研究已经证明枸杞籽色素具有提高人体免疫功能、预防和抑制肿瘤及预防动脉粥样硬化等作用。胡萝卜素是枸杞色素的主要活性成分，具有抗氧化和作为维生素a的合成前体等重要的生理功能。金银花为清热解毒的良药。它性甘寒气芳香，甘寒清热而不伤胃。芳香透达而又可祛邪。化学成分主要有机酸、黄酮类、三萜皂甘、和挥发油等。金银花既能宣散风热，还善清热解毒，用于各种热性病，如生热，发疹，发斑、热毒疮痈咽喉肿痛等症，均效果显著。金银花的主要活性成分有：有机酸类：绿原酸类化合物是金银花的主要有效成分，包括绿原酸(chlorogenicacid)和异绿原酸(isochlorogenicacid),其中异绿原酸为一混合物它的异构体有7种，分别为4，5-二咖啡酸酰奎尼酸，3，4-二咖啡酸酰奎尼酸，3，5-二咖啡酸酰奎尼酸，1，3-二咖啡酸酸奎尼酸，3-阿魏酰奎尼酸，4-阿魏酰奎尼酸，5-阿魏酸奎尼酸，其它有机酸还有咖啡酸和棕榈酸。黄酮类1949年冲七太郎首先从金银花中分离出木犀草素(luteolin)，1961年他又分离出忍冬苷(lonicerin),1995年高玉敏等首次从金银花中分离出4个黄酮类化合物。三萜皂苷类:1990年陈敏等从金银花中分离出一个新的含有六个糖基的三萜皂苷。1993年茅青等也分离得到3个三萜皂苷。1994年陈敏等又分离出2个新的双咖啡酰基奎尼酸醋化合物。娄红祥等分离出三个三萜皂苷。挥发油等其它成分:挥发油是金银花的有效成分。通过气质联用分离出芳樟醇、双花醇、棕榈酸、二氢香苇醇、二十四碳酸甲酯、十八碳二烯酸乙酯、棕榈酸乙酯、1,1-联二环已烷等成分。金银花干花、鲜花成分差异较大。鲜花挥发油成分以芳樟醇为主，含量高达14％以上，而干花挥发油成分以棕榈酸为主，一般占26％以上。2002年邢俊波等首次从该植物中发现5-羟基7,4-二甲氧基黄酮，首次从该植物花蕾中发现槲皮素、忍冬苷、齐墩果酸和胡萝卜苷。金银花的药理作用主要为：抑菌、抗病毒，抗炎解热，利胆保肝，降血脂，提高免疫力等。体内试验表明，枸杞和金银花水提物经乳酸菌、酵母菌、醋酸菌发酵后，抗肿瘤能力显著提高。试验例(实验组采用实施例1所述中药发酵饮料)肿瘤细胞增殖抑制试验(mtt法)取对数生长期的ht29、s180、hepg-2细胞，用含有10％胎牛血清的rpmi-1640培养基调整细胞浓度2.0×104-1.0×105个/孔，接种于96孔细胞培养板，每孔200μl，37℃，5％co2培养，每孔加过滤除菌的发酵饮料或水提物20μl，采用mtt法观察12、24、48、72小时细胞凋亡情况，实验结果如图1-3所示。荷瘤小鼠实验实验动物：spf级昆明小鼠105只，体重20±3g荷瘤小鼠准备：昆明小鼠接种s180腹水瘤4d后，小鼠腹部膨大，颈椎脱臼处死，用75％乙醇浸泡5min消毒，在超净工作台内做腹部切口，暴露腹腔，用注射器抽出白色或淡黄色腹水，将腹水用无菌生理盐水稀释4-5倍，缓慢混匀，进行造模。采用腹股沟下接种：小鼠暴露腹股沟，75％酒精消毒，从腹股沟下1cm处30度角进针，至皮下改为平行进针，每只小鼠注射0.2ml腹水稀释液。小鼠分组及治疗方式见表1。表1组别治疗方式a：空白组(不造模)灌胃生理盐水b：阴性对照组灌胃生理盐水c：阳性对照组注射氟尿嘧啶0.2ml(20mg/kgbw)d：高剂量组灌胃发酵饮料原液0.4mle：中等剂量组灌胃发酵饮料2倍稀释液0.4mlf：低剂量组灌胃发酵饮料4倍稀释液0.4mlg：水提物组灌胃未发酵水提物0.4ml每组小鼠15只小鼠造模后第二天起每天进行治疗，治疗共进行7d，每天记录小鼠摄食量及体重，第9d处死小鼠，分离完整肿瘤组织，称重、记录。实验结果：发酵饮料对小鼠摄食量的影响：如图4所示，通过实验结果可以看出：化疗组摄食量最低且与正常组相比有显著差异，可见化疗对小鼠摄食量有较大影响，空白组摄食量最高，高剂量组摄食量最高，中剂量组和低剂量组摄食量依次减少，但均与化疗组有显著差异，且高于阴性对照组。水提物组摄食量高于化疗组，但差异并不显著。有上述实验可以看出，该饮料能够有效改善荷瘤小鼠摄食量。发酵饮料对小鼠体重影响：如图5所示，通过实验结果可以看出：化疗组小鼠体重显著降低，可见化疗对小鼠体重及营养状况有较大影响，空白组体重最高，高剂量组体重仅次于空白组，中剂量组和低剂量组体重依次减少，但均与化疗组有显著差异，且高于阴性对照组。水提物组体重高于化疗组，且差异显著。由上述实验可以看出，该饮料能够有效增加荷瘤小鼠体重。发酵饮料对小鼠肿瘤抑制率的影响，见表2：表2组别数量肿瘤重量(g)抑制率(％)a：空白组150--b:阴性对照组(不治疗)150.74±0.380c：阳性对照组(氟尿嘧啶)150.31±0.1657.8d：高剂量组150.40±0.2246.1e：中等剂量组150.54±0.2927.1f：低剂量组150.57±0.2822.3g：水提物组150.71±0.464.5通过实验结果可以看出：氟尿嘧啶对小鼠肿瘤抑制最强，抑制率达到58.7％，高剂量组对小鼠肿瘤抑制作用次之，达到46.1％，未经发酵的水提物组对小鼠肿瘤也有一定的抑制作用，但仅为4.5％。发酵饮料对小鼠肠道菌群影响，见表3：表3由上述实验结果可以看出，小鼠经化疗后，肠道菌群发生较大变化：肠杆菌、肠球菌、乳酸菌、双歧杆菌的数量都有显著下降。未经发酵的水提物对小鼠肠道菌群有一定的恢复和保护作用，且与化疗组相比有显著差异。高剂量组和中剂量组能够有效提高小鼠各种肠道菌群数量，且与水提物组有显著差异。通过体外试验发现，本发明所述中药发酵饮料对ht29(人结肠癌细胞株)s180(小鼠腹水型肉瘤细胞株)hpg2(人肝癌细胞株)体外72h抑制率分别为78.56％，82.13％，68.38％，而水提物的抑制率仅有：28.7％，38.03％，29.34％。通过s180细胞荷瘤小鼠实验，该产品能够通过改善小鼠体内微生态环境，增强小鼠免疫力，有效抑制癌细胞在动物体内生长，其抑制率达到46.1％。并且能够提高小鼠摄食量，体重以及精神状态。综上，枸杞和金银花共提物经醋酸菌、乳酸菌、酵母菌混合发酵后能够有效提高其抗肿瘤能力。与传统化疗方法比较，该发酵饮料抑瘤率虽低于氟尿嘧啶化疗但远远高于现有中药提取物，且具有口服可接受度高的优点，动物营养状况及摄食情况均有显著改善，且能够保护和修复肠道菌群。上述参照实施例对该一种具有抗肿瘤功效的中药发酵饮料及其制备方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。当前第1页12