本发明属于食品加工领域，涉及酶法制备抗炎肽饮料，特别涉及的是一种皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料及其制备方法。
背景技术：
：生物体长期暴露于不同来源的活性氧和自由基中，过多的活性氧和自由基会引起细胞内氧化还原失衡，导致氧化应激，进而诱发体内炎症，同时激活炎症细胞分泌促炎细胞因子导致组织损伤、蛋白变性从而影响机体健康。研究表明，许多疾病都是由炎症引起的，如炎症性肠病、冠状动脉粥样硬化、阿尔兹海默症等。因此，寻找一种外源性的抗炎剂是治疗炎症介导疾病的一种重要手段。抗炎肽是一类对生物体有益的生物活性肽，其通过综合调控细胞因子的分泌、炎症介质合成释放和炎症信号通路调节机体炎症反应。适当摄入具有抗炎活性的物质可以降低体内促炎因子的含量，防止炎症的产生。常见的用于治疗炎症的药物有很多，例如青霉素、头孢、糖皮质激素类物质等，但都具有一定的副作用如依赖性、抗药性和过敏性等。天然抗炎剂相对比较安全，具有治疗或辅助治疗炎症的作用。中医古籍《医林纂要探源》记载皮蛋“泻肺热、醒酒、去大肠火、治泻痢。能散、能敛”；生活中，人们也一直把皮蛋作为一种良好的“去火”凉性食品。我们率先采用现代的实验方法与技术手段证实了皮蛋酶解多肽具有明显的抗炎活性。饮料是大众熟知并且普遍接受的口感丰富、食用方便、易于保藏的一种液体食品。饮料大致分为碳酸饮料、果蔬汁饮料以及功能性饮料等。其中功能性保健饮料其原料多为天然植物提取物、中草药、菌类提取物、矿物质、海产品提取物以及功能性添加剂，以皮蛋为蛋白源酶解得到的抗炎肽作为饮料的原料在国内外未涉及。目前，酶解蛋白制备生物活性肽的研究主要集中在抗氧化肽上。cn105254714a中公开了一种酶解乳酪蛋白制备抗氧化肽的方法，该方法通过离子交换柱层析进行分离、脱盐和浓缩。cn105820229a中公开了一种酶解鸭胗蛋白制备抗氧化肽的方法，该方法通过加入0.4％-0.6％的蛋白酶进行水解。cn105648005a中公开了一种酶解双髻鲨软骨蛋白制备抗氧化肽的方法，该方法经离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱纯化。但是关于抗炎肽的研究以及以皮蛋蛋白为源性的抗炎肽饮料等产品均未涉及。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种可降低体内促炎因子含量，防止炎症产生，具有预防和辅助治疗炎症的皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料及其制备方法。本发明的技术方案是：将皮蛋蛋白加水均质后过滤、蛋白酶水解、冻干成多肽冻干粉，再将其制成溶液，脱色后添加无花果水提物、甜味剂、增稠剂、酸味剂、果汁等充分溶解后混合搅拌均匀，均质、灌装、杀菌、包装成皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料。本发明所述的一种皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料的制备方法是：(1)将检验合格、清洗、消毒后的皮蛋去壳，取皮蛋蛋白，按质量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均质，过滤，调节滤液ph至1.5-11，滤液加热至35-60℃；(2)向步骤(1)所得蛋白溶液中加入蛋白酶，水解，灭酶、冷却、离心，取上清液冷冻干燥，制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)将皮蛋蛋白酶解多肽粉制成质量浓度为1％-5％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，调节多肽溶液ph至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保温吸附1h，过滤，收集滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入0.1％-0.5％无花果水提物、0.002％-12％的甜味剂、0.03％-0.25％的增稠剂、0.1％-0.5％的酸味剂和0.5％-2.5％的果汁后均质，灌装、杀菌、包装成成品饮料。步骤(2)中所述的蛋白酶可以是碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶等其中的一种或两种以上。蛋白酶的添加量为50万u-200万u/l蛋白液、水解时间为90-180min、酶解温度为35-60℃。在90℃灭酶10min，6000r/min离心15min。步骤(4)所述无花果水提物的制备方法是将无花果以质量比为1∶1.5浸泡在水中24h，沸水煮制1h，纱布过滤，滤液真空浓缩，浓缩液冷冻干燥得到无花果水提物粉末。步骤(4)的甜味剂可以是白砂糖、麦芽糖、果糖、甘草酸铵、甘草酸一钾、甘草酸三钾、乳糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇、罗汉果糖苷、安赛蜜、三氯蔗糖、索马甜、甜菊糖苷、甜蜜素、纽甜、阿力甜、阿斯巴甜、天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸、异麦芽酮糖等其中的一种或两种以上。步骤(4)的增稠剂可以是卡拉胶、果胶、黄原胶、槐豆胶、海藻酸钠、刺云实胶、醋酸酯淀粉、瓜尔胶、海藻酸钾、淀粉磷酸酯钠、β-环状糊精、可溶性大豆多糖、亚麻籽胶、皂荚糖胶、阿拉伯胶、甲基纤维素、结冷胶、聚丙烯酸钠、磷酸酯双淀粉、明胶、羟丙基二淀粉磷酸酯、琼脂、羟丙基甲基纤维素、酸处理淀粉、羧甲基纤维素钠、氧化淀粉、氧化羟丙基淀粉、乙酰化二淀粉磷酸酯、乙酰化双淀粉己二酸酯、海藻酸丙二醇酯、聚葡萄糖等其中的一种或两种以上。步骤(4)的酸味剂可以是柠檬酸、苹果酸、乳酸、磷酸、酒石酸、抗坏血酸、葡萄糖酸钠、琥珀酸等其中的一种或两种以上。步骤(4)的果汁可以是橙汁、苹果汁、草莓汁、柠檬汁等其中的一种或两种以上。步骤(4)所述的杀菌是在85℃下进行15min。本发明的优点在于：1.本发明制备得到的皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料可以降低体内促炎因子的含量，帮助机体抵抗炎症；同时与药物相比，食物可以长期食用，对于预防和辅助治疗如炎症性肠病等具有帮助。2.本发明制备得到的皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料添加了无花果水提物，饮料澄清透明、酸甜适宜，口感柔滑细腻，消费者接受度较高。附图说明图1为皮蛋蛋白酶解多肽在tnf-α诱导的caco-2细胞模型中的抗炎作用结果。具体实施方式对本发明将通过以下实施例作进一步的说明。实施例1：一种皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料的制备方法，包括如下步骤：(1)将检验合格、清洗、消毒后的皮蛋去壳，取皮蛋蛋白，按质量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均质，过滤，调节滤液ph至10，滤液加热至60℃；(2)向步骤(1)所得的蛋白溶液中加入150万u碱性蛋白酶/l蛋白溶液，水解120min后90℃灭酶10min，冷却至室温，6000r/min离心15min后弃沉淀取上清液，将酶解液冷冻干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)将皮蛋蛋白酶解多肽粉制成质量浓度为3％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，将多肽溶液ph调节至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保温吸附1h，过滤，收集滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入0.3％无花果水提物、10％的白砂糖、0.1％皂荚糖胶、0.03％亚麻籽胶、0.2％的苹果酸和0.5％的苹果汁后均质，灌装、85℃杀菌15min，包装成抗炎肽饮料。实施例2：一种皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料的制备方法，包括如下步骤：(1)将检验合格、清洗、消毒后的皮蛋去壳，取皮蛋蛋白，按质量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均质，过滤，调节滤液ph至8，滤液加热至55℃；(2)向上述步骤所得的蛋白溶液中加入75万u碱性蛋白酶/l蛋白溶液和25万u木瓜蛋白酶/l蛋白溶液，水解180min后90℃灭酶10min，冷却至室温，6000r/min离心15min后弃沉淀取上清液，将酶解液冷冻干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)将皮蛋蛋白酶解多肽粉制成质量浓度为3％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，将多肽溶液ph调节至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保温吸附1h，过滤，收集滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入0.1％无花果水提物、6％的白砂糖、0.1％果胶、0.2％的苹果酸和1.5％的苹果汁后均质，灌装、85℃杀菌15min，包装成抗炎肽饮料。实施例3：一种皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料的制备方法，包括如下步骤：(1)将检验合格、清洗、消毒后的皮蛋去壳，取皮蛋蛋白，按质量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均质，过滤，调节滤液ph至7，滤液加热至50℃；(2)向上述步骤所得的蛋白溶液中加入50万u木瓜蛋白酶/l蛋白溶液和50万u中性蛋白酶/l蛋白溶液，水解180min后90℃灭酶10min，冷却至室温，6000r/min离心15min后弃沉淀取上清液，将酶解液冷冻干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)将皮蛋蛋白酶解多肽粉制成质量浓度为2％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，将多肽溶液ph调节至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保温吸附1h，过滤，收集滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入0.5％无花果水提物、8％的木糖醇、0.15％槐豆胶、0.05％酒石酸、0.15％柠檬酸和1.5％的柠檬汁后均质，灌装、85℃杀菌15min，包装成抗炎肽饮料。实施例4：一种皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料的制备方法，包括如下步骤：(1)将检验合格、清洗、消毒后的皮蛋去壳，取皮蛋蛋白，按质量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均质，过滤，调节滤液ph至8，滤液加热至40℃；(2)向上述步骤所得的蛋白溶液中加入200万u胰蛋白酶/l蛋白溶液，水解90min后90℃灭酶10min，冷却至室温，6000r/min离心15min后弃沉淀取上清液，将酶解液冷冻干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)将皮蛋蛋白酶解多肽粉制成质量浓度为4％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，将多肽溶液ph调节至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保温吸附1h，过滤，收集滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入0.3％无花果水提物、8％的麦芽糖、0.25％黄原胶、0.2％的乳酸和0.5％的草莓汁后均质，灌装、85℃杀菌15min，包装成抗炎肽饮料。实施例5：一种皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料的制备方法，包括如下步骤：(1)将检验合格、清洗、消毒后的皮蛋去壳，取皮蛋蛋白，按质量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均质，过滤，调节滤液ph至8，滤液加热至40℃；(2)向上述步骤所得的蛋白溶液中加入25万u木瓜蛋白酶/l蛋白溶液和25万u胰蛋白酶/l蛋白溶液，水解180min后90℃灭酶10min，冷却至室温，6000r/min离心15min后弃沉淀取上清液，将酶解液冷冻干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)将皮蛋蛋白酶解多肽粉制成质量浓度为5％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，将多肽溶液ph调节至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保温吸附1h，过滤，收集滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入0.2％无花果水提物、0.01％阿力甜、0.1％果胶、0.2％的苹果酸和0.5％的柠檬汁后均质，灌装、85℃杀菌15min，包装成抗炎肽饮料。实施例6：一种皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料的制备方法，包括如下步骤：(1)将检验合格、清洗、消毒后的皮蛋去壳，取皮蛋蛋白，按质量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均质，过滤，调节滤液ph至9，滤液加热至60℃；(2)向上述步骤所得的蛋白溶液中加入100万u碱性蛋白酶/l蛋白溶液和50万u中性蛋白酶/l蛋白溶液，水解150min后90℃灭酶10min，冷却至室温，6000r/min离心15min后弃沉淀取上清液，将酶解液冷冻干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)将皮蛋蛋白酶解多肽粉制成质量浓度为3％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，将多肽溶液ph调节至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保温吸附1h，过滤，收集滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入0.5％无花果水提物、7％麦芽糖、0.06％卡拉胶、0.1％的苹果酸和0.5％的草莓汁后均质，灌装、85℃杀菌15min，包装成抗炎肽饮料。实施例7：一种皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料的制备方法，包括如下步骤：(1)将检验合格、清洗、消毒后的皮蛋去壳，取皮蛋蛋白，按质量比皮蛋蛋白∶水＝1∶4加水，均质，过滤，调节滤液ph至1.5，滤液加热至37℃；(2)向上述步骤所得的蛋白溶液中加入100万u胃蛋白酶/l蛋白溶液，水解120min后90℃灭酶10min，冷却至室温，6000r/min离心15min后弃沉淀取上清液，将酶解液冷冻干燥制成皮蛋蛋白酶解多肽粉；(3)将皮蛋蛋白酶解多肽粉制成质量浓度为3％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液，将多肽溶液ph调节至4.0，加入5％活性炭，在50℃下保温吸附1h，过滤，收集滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入0.4％无花果水提物、5％的白砂糖、0.01％甜菊糖苷、0.06％卡拉胶、0.1％的苹果酸和0.5％的橙汁后均质，灌装、85℃杀菌15min，包装成抗炎肽饮料。试验例1：皮蛋蛋白酶解多肽的抗炎活性研究皮蛋蛋白酶解多肽的抗炎活性采用tnf-α诱导的caco-2细胞炎症模型进行评价。培养好的caco-2细胞加入皮蛋蛋白酶解多肽作用2h，然后加入tnf-α(2ng/ml)诱导4h，收集上清液测定il-8含量。结果如图1所示，从图中可以看出添加不同浓度(0.1、0.5、1、2.5、5、10mg/ml)的皮蛋蛋白酶解多肽均能抑制caco-2细胞中促炎细胞因子il-8的分泌，说明皮蛋蛋白酶解多肽具有较好的抗炎活性。试验例2：皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料的感官评定采用滋味、组织形态、色泽三个指标对实施例制得的皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料进行感官评定，三项指标得分之和即为皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料的感官得分。表1皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料的感观评分标准表2皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料的感官评定结果指标实施例1实施例2实施例3对比例1对比例2滋味(分)5855561518组织状态(分)2724252125色泽(分)1091098综合评分(分9588914551注：1)感官评定人数n＝8。2)感官评定结果四舍五入取整。试验例3：皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料的稳定性评价将实施例制得的皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料，分别放置在温度为4℃、25℃、38℃的环境中观察一个月，记录沉淀层厚度。表3皮蛋蛋白源性抗炎肽饮料在不同温度下的沉淀高度(mm)指标实施例1实施例2实施例3对比例1对比例24℃0000.070.0325℃0000.180.1138℃0.050.080.090.320.24本发明所述对比例1未添加无花果提取物，其他同实施例1；本发明所述对比例2与实施例1的不同之处在于：步骤(2)中碱性蛋白酶的添加量为210万u/l蛋白液、水解时间为80min，步骤(3)中将皮蛋蛋白酶解多肽粉制成质量浓度为6％的皮蛋蛋白酶解多肽溶液。当前第1页12