本发明涉及保健品及药品领域，具体是一种用深海鱼鱼肉制备活性多肽复配物的用途。
背景技术：
多肽从二十世纪初才开始受到关注，研究发现它区别于蛋白质区别于氨基酸，具有药物的作用。到了上个世纪九十年代才有了长足发展，在不断更新的技术指导下，多肽的应用范围越来越广，作用也越来越大，这才迈进了我们的生活，在我们生活中占据的份额越来越大，多肽类药物高效低毒特异性强具有区别于其他药物的特有优势，正不断影响着我们的生活。而且多肽潜力巨大，是生物科学发展的又一大突破和发展方向。
天然存在的海洋活性多肽由于在生物体中含量低，而且提取困难，难以实现大量生产供给所需，化学人工合成多肽成本昂贵。所以，人们更多地把目光投向开发蛋白酶解产物获得活性多肽这条途径上来。由于海洋生物生存的环境与陆地生物完全不同，如高压、低温、高温和高盐等极端环境，为了适应这些极端的海洋生物环境，海洋生物蛋白质无论氨基酸的组成还是氨基酸的序列都与陆地生物蛋白有很大的不同，同时，海洋生物蛋白资源无论在种类和数量上都远远大于陆地蛋白资源，并且未得到很好的开发。种类繁多的海洋蛋白氨基酸序列中，潜在着许多具有生物活性的氨基酸序列，用特异的蛋白酶水解，就释放出有活性的肽段。海洋生物蛋白资源是21世纪人类重要的蛋白类食物及生物活性物质的重要来源。我国目前的海洋生物蛋白资源总量在世界各国名列前茅，但我国目前的蛋白类水产品中，除一部分直接食用外，大部分通过简单的加工技术制成食品进入市场，加工技术落后，产品结构单一，产品的附加值低，使得产品在国际市场上的竞争力较差。因此，我国急需对海洋生物蛋白资源进行优化利用和高值化加工。
脑细胞是构成脑的多种细胞的通称。脑细胞主要包括神经元和神经胶质细胞。神经元细胞高度分化，不可再生，科学研究显示，人到40岁以后脑细胞数目会逐渐减少，一般人到死亡时脑细胞会消耗掉10%左右。大脑掌管语言、思维记忆及计算等活动，小脑掌握着人体的动作与协调能力，脑细胞的减少会导致人出现记忆力下降，智力减退等症状。
现有技术如授权公告号为cn101503728b的中国发明专利，公开了一种从青占鱼鱼骨中提取复合多肽液的方法。包括以下步骤：将青占鱼鱼骨洗净、绞碎，用去离子水浸泡；过滤除去去离子水，将鱼骨按1∶5-1∶10的质量比例的加入水，按鱼骨质量的1％-5％量按动物蛋白水解酶和中性蛋白酶的质量比为3∶1-1∶3的比例加入酶，调节ph在5.5-8.5，然后在45-70℃温度下酶解；将上述酶解液90-100℃加热，以使酶失活；用亚麻布过滤，滤液在2000-4000rpm离心10-15min，得到的上清液通过gpc凝胶净化，再过滤除菌得到复合多肽液。上述制备方法制备的到的复合多肽纯度不高，且在制备过程中损失量大，提取率不高。蛋白酶均采用陆地蛋白酶，不能对海洋蛋白进行很好的开发。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种用于保健品或药品，起到延长脑细胞寿命作用的用深海鱼鱼肉制备活性多肽复配物。本发明制备得到的活性多肽纯度高，产品中各成分有耦合作用，可有效延长人体脑细胞的寿命。
本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：用深海鱼鱼肉制备活性多肽复配物的用途，用于保健品或药品，起到延长脑细胞寿命作用。
用深海鱼鱼肉制备活性多肽复配物的制备方法，包括以下步骤：
1）脱脂：深海鱼鱼肉切成小块，加入2~4‰壳聚糖固定化脂肪酶，加入8~15倍体积的蒸馏水，于25~50℃下恒温酶解0.8~2.5h，酶解结束后灭酶，过滤得到脱脂深海鱼鱼肉。脂肪酶可将深海鱼鱼肉中的脂肪逐步水解成甘油和脂肪酸。固定化后的脂肪酶，其稳定性、酶活性、耐热性均有明显提高，并可重复使用；
2）脱腥：将脱脂深海鱼鱼肉浸于脱腥液中0.4~0.8h，浸泡温度为0~4℃；脱腥液成分及其重量份为茶多酚3~8份、纯水10~20份和葡萄籽提取物0.2~0.8份。上述脱腥液中成分协同作用，具有多种生物学活性，可以消除甲基硫醇化合物，并可以与氨基酸结合，具有一定的钝化酶类和杀菌作用，且成分天然，绿色安全；
3）分步酶解：将脱腥后的深海鱼鱼肉匀浆制成鱼糜，加入20~30倍体积水、5~8wt‰条斑紫菜蛋白酶、癸酸乙酯和dtt。其中，癸酸乙酯和dtt的加入量分别为条斑紫菜蛋白酶质量的1~5%和10~20%。酶解温度25~35℃，ph为7.0~9.0，酶解时间为30~40min，酶解结束后灭酶；加入1~3wt﹪风味蛋白酶，酶解ph为6.0~7.0，酶解温度为52~60℃，酶解时间为15~25min。深海鱼蛋白上有大量条斑紫菜蛋白酶的酶切位点，酶解后可得到长短不一的肽链，再用风味蛋白酶酶解可得到能有效延长脑细胞寿命的活性多肽。采用其他蛋白酶分步酶解不能得到上述活性多肽。癸酸乙酯和dtt通过范德华力和静电作用附着在条斑紫菜蛋白酶的表面，在一定程度上改变其三级结构，在提高条斑紫菜的活性的同时还可提高活性多肽的产量，但具体机理尚不明确；
4）等电点沉淀：将酶解液过滤，调节滤液的ph值为4.0~4.5，静置后离心取沉淀。在上述ph环境下，活性多肽呈电中性，微溶于水，大部分以沉淀形式从水溶液中分离出来；
5）二次超滤并纳滤：在等电点沉淀法得到的沉淀中加入5~10倍蒸馏水，完全溶解后先采用截留相对分子质量30~40kd的膜超滤，再采用截留相对分子质量4~8kd的膜超滤，最后将滤过液进行纳滤除盐。上述条件下，超滤过程中不会出现过厚的凝胶层，超滤速度也较为理想；
6）大孔树脂吸附洗脱：将纳滤后的液体浓缩，上样浓度为0.1~0.3g/ml，上样流速为0.4~0.6ml/min，洗脱剂体积为7.7~7.9bv，洗脱剂为蒸馏水，洗脱流速为0.8~1.4ml/min。大孔树脂对活性多肽进行吸附和解吸附，平衡吸附量可达14.23mg/g左右，静态吸附率达到90.15%左右和静态解吸率达到86.54%左右，可有效将活性多肽与其他杂质分开；
7）冷冻干燥：收集10~30min时间段的洗脱液，将其低温浓缩后冷冻干燥，预冻：-35~-45℃预冻3~5h；冷冻干燥：-45~-35℃，3~5pa冷冻干燥5~7h，-10~-5℃，10~20pa冷冻干燥2~3h；升华干燥：10~15℃，50~60pa升华干燥3~4h；解析干燥:7~14℃，3~5pa解析干燥2~4h，得到活性多肽。冻干整个过程都在程序的控制下，操作简单，工序简洁，自动化程度高，减少了人力、物力。低温下干燥能更好地保留活性多肽的活性；低压下干燥，活性多肽不易氧化，疗效更好；冻结时活性多肽形成“骨架”，干燥后保存原形，为多孔疏松结构且颜色基本不变，产品外观更加优良；复水性好，冻干活性多肽能迅速吸水还原成冻干前状态，使用方便；脱水彻底，活性多肽中含水量低，一般在1%-3%，且有利于长途运输和长期保存；
8）复配物的制备：按照10~20份活性多肽、5~10份胶原蛋白小肽、20~30份维生素c和3~5份dha混合制成粉剂或片剂或液剂得到活性多肽复配物。上述复配物中各成分有耦合作用，可有效抑制内源性核酸内切酶的产生，延缓细胞染色体的dna降解，从而延缓神经元细胞中凋亡程序的表达，有效延长其寿命。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明用深海鱼鱼肉制备的活性多肽复配物用于保健品或药品，起到延长脑细胞寿命作用。采用条斑紫菜蛋白酶和风味蛋白酶对深海鱼鱼肉进行分步酶解，制备得到的活性多肽低脂，无腥味，纯度高。复配物中各成分有耦合作用，可有效抑制内源性核酸内切酶的产生，延缓细胞染色体的dna降解，从而延缓神经元细胞中凋亡程序的表达，有效延长其寿命。
具体实施例
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
用深海鱼鱼肉制备活性多肽复配物的用途，用于保健品或药品，起到延长脑细胞寿命作用。
用深海鱼鱼肉制备活性多肽复配物的制备方法，包括以下步骤：
1）脱脂：深海鱼鱼肉切成小块，加入3‰壳聚糖固定化脂肪酶，加入10倍体积的蒸馏水，于30℃下恒温酶解2.0h，酶解结束后灭酶，过滤得到脱脂深海鱼鱼肉；
2）脱腥：将脱脂深海鱼鱼肉浸于脱腥液中0.6h，浸泡温度为2℃；脱腥液成分及其重量份为茶多酚5份、纯水16份和葡萄籽提取物0.5份；
3）分步酶解：将脱腥后的深海鱼鱼肉匀浆制成鱼糜，加入25倍体积水、6wt‰条斑紫菜蛋白酶、癸酸乙酯和dtt。其中，癸酸乙酯和dtt的加入量分别为条斑紫菜蛋白酶质量的3%和15%。酶解温度30℃，ph为8.0，酶解时间为35min，酶解结束后灭酶；加入2wt﹪风味蛋白酶，酶解ph为6.5，酶解温度为55℃，酶解时间为20min；
4）等电点沉淀：将酶解液过滤，调节滤液的ph值为4.2，静置后离心取沉淀；
5）二次超滤并纳滤：在等电点沉淀法得到的沉淀中加入8倍蒸馏水，完全溶解后先采用截留相对分子质量35kd的膜超滤，再采用截留相对分子质量6kd的膜超滤，最后将滤过液进行纳滤除盐；
6）大孔树脂吸附洗脱：将纳滤后的液体浓缩，上样浓度为0.2g/ml，上样流速为0.5ml/min，洗脱剂体积为7.8bv，洗脱剂为蒸馏水，洗脱流速为1.0ml/min；
7）冷冻干燥：收集10~30min时间段的洗脱液，将其低温浓缩后冷冻干燥，预冻：-40℃预冻4h；冷冻干燥：-35℃，2pa冷冻干燥6h，-7℃，15pa冷冻干燥2.5h；升华干燥：12℃，55pa升华干燥3.5h；解析干燥:12℃，4pa解析干燥3h，得到活性多肽；
8）复配物的制备：按照15份活性多肽、7份胶原蛋白小肽、27份维生素c和4份dha混合制成粉剂得到活性多肽复配物。
实施例2：
用深海鱼鱼肉制备活性多肽复配物的用途，用于保健品或药品，起到延长脑细胞寿命作用。
用深海鱼鱼肉制备活性多肽复配物的制备方法，包括以下步骤：
1）脱脂：深海鱼鱼肉切成小块，加入2‰壳聚糖固定化脂肪酶，加入12倍体积的蒸馏水，于35℃下恒温酶解2.5h，酶解结束后灭酶，过滤得到脱脂深海鱼鱼肉；
2）脱腥：将脱脂深海鱼鱼肉浸于脱腥液中0.7h，浸泡温度为4℃；脱腥液成分及其重量份为茶多酚6份、纯水20份和葡萄籽提取物0.6份；
3）分步酶解：将脱腥后的深海鱼鱼肉匀浆制成鱼糜，加入20倍体积水、5wt‰条斑紫菜蛋白酶、癸酸乙酯和dtt。其中，癸酸乙酯和dtt的加入量分别为条斑紫菜蛋白酶质量的4%和18%。酶解温度30℃，ph为8.0，酶解时间为35min，酶解结束后灭酶；加入2wt﹪风味蛋白酶，酶解ph为6.5，酶解温度为55℃，酶解时间为20min；
4）等电点沉淀：将酶解液过滤，调节滤液的ph值为4.2，静置后离心取沉淀；
5）二次超滤并纳滤：在等电点沉淀法得到的沉淀中加入8倍蒸馏水，完全溶解后先采用截留相对分子质量35kd的膜超滤，再采用截留相对分子质量6kd的膜超滤，最后将滤过液进行纳滤除盐；
6）大孔树脂吸附洗脱：将纳滤后的液体浓缩，上样浓度为0.2g/ml，上样流速为0.5ml/min，洗脱剂体积为7.8bv，洗脱剂为蒸馏水，洗脱流速为1.0ml/min；
7）冷冻干燥：收集10~30min时间段的洗脱液，将其低温浓缩后冷冻干燥，预冻：-40℃预冻4h；冷冻干燥：-35℃，2pa冷冻干燥6h，-7℃，15pa冷冻干燥2.5h；升华干燥：12℃，55pa升华干燥3.5h；解析干燥:12℃，4pa解析干燥3h，得到活性多肽；
8）复配物的制备：按照15份活性多肽、7份胶原蛋白小肽、27份维生素c和4份dha混合制成片剂得到活性多肽复配物。
实施例3：
用深海鱼鱼肉制备活性多肽复配物的用途，用于保健品或药品，起到延长脑细胞寿命作用。
用深海鱼鱼肉制备活性多肽复配物的制备方法，包括以下步骤：
1）脱脂：深海鱼鱼肉切成小块，加入4‰壳聚糖固定化脂肪酶，加入15倍体积的蒸馏水，于25℃下恒温酶解2.5h，酶解结束后灭酶，过滤得到脱脂深海鱼鱼肉；
2）脱腥：将脱脂深海鱼鱼肉浸于脱腥液中0.6h，浸泡温度为4℃；脱腥液成分及其重量份为茶多酚8份、纯水18份和葡萄籽提取物0.5份；
3）分步酶解：将脱腥后的深海鱼鱼肉匀浆制成鱼糜，加入25倍体积水、5wt‰条斑紫菜蛋白酶、癸酸乙酯和dtt。其中，癸酸乙酯和dtt的加入量分别为条斑紫菜蛋白酶质量的3%和15%。酶解温度30℃，ph为8.0，酶解时间为35min，酶解结束后灭酶；加入2wt﹪风味蛋白酶，酶解ph为6.5，酶解温度为55℃，酶解时间为20min；
4）等电点沉淀：将酶解液过滤，调节滤液的ph值为4.5，静置后离心取沉淀；
5）二次超滤并纳滤：在等电点沉淀法得到的沉淀中加入8倍蒸馏水，完全溶解后先采用截留相对分子质量30kd的膜超滤，再采用截留相对分子质量5kd的膜超滤，最后将滤过液进行纳滤除盐；
6）大孔树脂吸附洗脱：将纳滤后的液体浓缩，上样浓度为0.2g/ml，上样流速为0.5ml/min，洗脱剂体积为7.8bv，洗脱剂为蒸馏水，洗脱流速为1.0ml/min；
7）冷冻干燥：收集10~30min时间段的洗脱液，将其低温浓缩后冷冻干燥，预冻：-40℃预冻4h；冷冻干燥：-35℃，2pa冷冻干燥6h，-7℃，15pa冷冻干燥2.5h；升华干燥：12℃，55pa升华干燥3.5h；解析干燥:12℃，4pa解析干燥3h，得到活性多肽；
8）复配物的制备：按照15份活性多肽、7份胶原蛋白小肽、27份维生素c和4份dha混合制成液剂得到活性多肽复配物。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。