专利名称：干扰素-γ抑制剂BCRF1蛋白质的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗与产生过量干扰素-γ(IFN-γ)有关疾病的方法和组合物，更具体地说，本发明涉及为有效降低IFN-γ含量，使用爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)蛋白BCRF1的方法和组合物。
免疫系统包括高度相互作用的各种组织、细胞类型和可溶因子的复合物。近来，有人认为一些疾病的免疫紊乱可能与免疫系统的某些组成不平衡有关，特别是细胞素[参见Mosmann等，Ann.Rev.Immunol.，卷7，145-173页(1989年);Cher等，J.Immunol.，卷138，3688-3694页(1987年);Mosmann等，Immunol.Today，卷8，223-227页(1987年)和Heinzed等，J.Exp.Med.，卷169，59-72页(1989年)]。
例如，有大量资料认为过量γ干扰素(IFN-γ)产生是引起与主组织相容复合基团(MHC)有关的自身免疫疾病的原因[参见Hooks等，NewEnglandJ.Med.，卷301，5-8页(1979年)(与自身免疫有关的血清的高IFN-γ含量)Basham等，J.Immunol，卷130，1492-1494页(1983年)(IFN-γ可增加MHC基团产物表达);Battazzo等，Lancet，1115-1119页(1983年12月11日)(与某些形式的自身免疫有关的异常MHC基团产物表达);Hooks等，Ann.N.Y.Acad，Sci.，卷301，21-32页(1980年)(与SLE患者的严重疾病有关的高含量IFN-γ和提高干扰素活性的组胺释放可被抗干扰素血清抑制);Jacob等，J.Exp.Med.，卷166，798-803页(1987年)(由封阻抗IFN-γ单克隆抗体改善和延迟小鼠全身性红斑狼疮病情的发作);和lwatani等，J.ClinEndocrin.andMetabol.卷63，695-708页(1986年)(抗IFN-γ单克隆抗体消除白凝集素-刺激T细胞诱导HLA-DR表达的能力)]。据假设，过量IFN-γ会引起MHC基团产物的不适当表达，而又对不适当表达MHC产物的细胞的组织产生自身免疫反应和显示这些产物的自身抗原。因此，McDevit提交[见ClinRes.，卷34，163-175页(1985年)];例如给以IFN-γ拮抗物，减少自身免疫患者的IFN-g含量，可获有益效果。
除如上所述之外，IFN-γ还可通过它在单核细胞上增加Fcε受体的数量和密度的能力在变态反应中起作用;它与类肉瘤病和牛皮癣的发病有关;以及认为扩大细胞中介免疫性，可在异型移植患者的组织排斥中起主要作用。
鉴于以上所述，有效地利用能减少IFN-γ含量的化合物极有利于治疗与不适当免疫应答有关的疾病，例如某些由寄生虫引起的疾病、变态反应和MHC有关的免疫疾病，包括风湿性关节炎、全身性红斑狼疮(SLE)，重症肌无力，胰岛素依赖糖尿病、甲状腺炎等。
本发明涉及治疗与产生高含量IFN-γ有关疾病的方法和组合物。本发明的方法包括下述步骤，即给以防治疾病量的BCRF1(由爱泼斯坦-巴尔病毒衍生的蛋白质)。本发明还包括产生重组体BCRF1的表达载体，纯化的BCRF1和用于本发明方法的药用组合物。本发明所用的优选BCRF1选自由下述氨基酸顺序限定的开式读码的成熟多肽Met Glu Arg Arg Leu Val Val Thr Leu Gln Cys Leu Val Leu Leu51015Tyr Leu Ala Pro Glu Cys Gly Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe202530Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys354045Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp Asn Leu Leu Leu Lys505560
Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala657075Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln808590Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ala Lys Asp His Val Asn Ser Leu95100105Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His110115120Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile125130135Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala140145150Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met155160165Thr Ile Lys Ala Arg170式中缩写词表示L型氨基酸，列举的这些氨基酸从N-末端开始。
图1是用于产生BCRF1的哺乳动物表达载体的图解说明。
图2是用于产生BCRF1的细菌表达载体的图解说明。
本发明涉及治疗与产生过量IFN-γ有关疾病的方法和组合物。本发明部分地基于下述发明核酸顺序编码近来发现的蛋白质即特定的细胞素合成抑制因子(CSIF)，具有与EBVBCRF1开式读码的高度同源性。EBV是地方性全体人中疮疹病毒群体，并且与一些疾病有关[参见Dillner等，Adv，CancerRes.，卷50，95-158页(1988年);Thorley-Lawson，Bilchim，Biophys.Acta，卷948，263-286页(1988年);Tasato，Adv.CancerRes.，卷49，75-125页(1987年)]。EBV具有双股DNA基团组，约172千碱基[见Baer等，Nature，卷310，207-211页(1984年)]。该基因组含有许多表面上看来相当于由EBV产生的蛋白质开式读码，其中之一是BCRF1。
本发明包括BCRF1开式读码的成熟多肽或蛋白质。就分泌蛋白而言，开式读码通常编码由成熟或分泌产物在其N-末端与信号肽共价连接组成的多肽。在成熟或活性多肽分泌之前分裂信号肽，该分裂部位可根据经验规则高度精确地预示[见VonHeijne，NucleicAcidsResearch，卷14，4683-4690页(1986年)]，精确的信号肽的氨基酸组分的作用对其功能而言似乎并不严格要求[见Randall等，Science，卷243，1156-1159页(1989年);Kaiser等，Science.卷235，312-317页(1987年)]。因此，成熟蛋白容易被编码信号肽的载体表达，其完全不同于由式Ⅰ定义的开式读码编码的载体。
宽范围表达系统(即宿主表达载体的结合)可用来生产本发明的蛋白质。可能的宿主细胞的类型包括(但并不限于)细菌、酵母菌、昆虫、哺乳动物等。许多可行的论证指导了具体表达系统的选择和/或修饰，例如参见(略举)Boer和Shepard的“大肠杆菌中最佳外来基因表达的策略”205-247页，Kroon编基团结构和表(JohnWiley和Sons，纽约，1983年)，论证一些大肠杆菌(E.Coli)表达系统，Kucherlapati等，CriticalReviewsinBiochemistry，卷16，版4，349-379页(1984年)和Banerji等，GeneticEngineering，卷5，19-31页(1983年)，论证转染和转化哺乳动物细胞的方法;Reznikoff和Gold编最大的基因表达(Butterworths，波士顿，1986年)论证大肠杆菌，酵母菌和哺乳动物细胞中的基因表达中选择的论题;以及Thilly，哺乳动物细胞技术(Butterworths，波士顿，1986年)论证哺乳动物的表达系统。此外，许多可行的论证描述了连接和/或操作具体cDNA和表达控制顺序，以产生和/或修饰适用于本发明的表达载体的技术和条件[例如参见Sambrook等，分子克隆实验室指南，第2版(ColdSpringHarborLaboratory，N.Y.1989年)]。
Riggs在美国专利4431739号中公开了大肠杆菌表达系统(本文引为参考文献)，特别适用于大肠杆菌高度表达的原核生物启动子有Boer在美国专利4551433号中公开了tac启动子(本文引为参考文献)，Remaut等在Gene卷15，81-92页(1981年)中公开了PL启动子(本文引为参考文献)。分泌表达载体也适用于大肠杆菌宿主，特别有用的是PIN-III-ompA载体[参见Ghrayeb等，EMBOJ.，卷3，2437-2442页(1984年)]，其中待转录的cDNA融合到编码ompA蛋白信号肽的大肠杆菌OmpA基因部分，继而产生待分泌到细菌的周质空间中的成熟蛋白。美国专利4336336号、4411994号、4332892号和4338397号也公开了用于原核生物的分泌表达载体(这些文献本文均引为参考文献)。大量的细菌菌株都适用于原核生物表达载体的宿主，所述菌株包括大肠杆菌，例如W3110(ATCCNo.27325)，JA221，C600，ED767，DH1，LE392，HB101，X1776(ATCCNo.31244)，X2282，RR1(ATCCNo.31343)MRC1;枯草杆菌;其它的肠杆菌，例如鼠伤寒少门氏菌(Salmonellatyphimurium)或灵杆菌(Serratiamarcescens)，以及各种假单胞菌。将用于衍生的细菌菌株(如大肠杆菌K12x1776)即用于真核生物蛋白表达的一般方法见CurtisIII的美国专利4190495号(本文引为参考文献)。除原核生物和真核生物的微生物之外，包括从多细胞生物衍生的细胞的表达系统也可用来生产本发明的蛋白质。值得推存的是哺乳动物表达系统，因为它们的后转译处理机制更可能产生生物活性的哺乳动物蛋白质。
一些DNA肿瘤病毒已用作哺乳动物宿主的载体，特别重要的是包括与细菌复制控制顺序连接的SV40的复制，转录和/或转译控制顺序众多载体，例如由Okayama和Bery研制[参见MOI.Cell.Biol.，卷2，161-170页[1982年)]并由Takebe等人改进[参见Mol.Cell.Biol.卷8，466-472页(1988年)]的pcD载体(本文引为参考文献)。其它以SV40为基础的哺乳动物表达载体包括含腺病毒调节元素的载体[参见Kaufman和Sharp，Mol.CellBiol.，卷2，1304-1319页(1982年)，以及Clark，美国专利4675285号，这两篇文献本文均引为参考文献]。通常猴细胞是上述载体的最佳宿主，含有SV40定向顺序和完整的A基因的这类载体可在猴细胞中自主复制(可得到比非自主复制质粒更高的拷贝数和/或更稳定的拷贝数)。此外，含有SV40定向顺序、不含有不完整A基因的载体可以在COS7猴细胞中自主复制，获高拷贝数(但不稳定)[参见Gluzman，Cell，卷23，175-182页(1981年)，并且可从美国标准菌库(ATCC)得到保藏号(CRL1651)]。上述以SV40为基础的载体还能通过整合到宿主细胞DNA转化其它哺乳动物细胞，例如鼠L细胞。
用IFN-γ抑制测定法很容易测定本发明的BCRF1的生物活性，这类测定需要合成IFN-γ的细胞系或细胞群体。通常已用促细胞分裂剂和植物血细胞凝集素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞(PBL)可用作这类细胞群体。测定工作可概述如下将PHA刺激的PBL分裂成相等的两部分，含BCRF1的试样加到其中一部分，另一部分用作对照，若干天后，两种培养基的上清液用于IFN-γ试验，通常按标准ELISA测定法，采用市售的IFN-g单克隆和多克隆抗体[例如Genzyme，Inc，(波士顿MA)生产]进行测定。另外，测定的读出可以是IFN-γmRNA转录量，例如由RNA印迹法、PCR或类似的方法学测定。采用标准技术可得到PBL[例如参见Mishell等，细胞免疫学选择法(Freeman，纽约，1980年)]。
当本发明的多肽以溶解方式表达时，例如作为转化的酵母或哺乳动物细胞的分泌产物时，它们可按现有技术的标准方法纯化，即包括下述步骤硫酸铵沉淀，离子交换层析，凝胶过滤，电脉，亲合层析和/或类似技术;例如酶提纯和相关技术[见MethodsinEnzymology，22233-577页(1977年)]和Scopes，蛋白质的纯化原理和实践(Springer-Verlag，纽约，1982年]可提供这类提纯的指导。此外，当本发明的多肽以非溶解形式表达时，例如作为聚集体、包涵体等时，它们可以用现有技术的标准方法纯化;包括从碎裂的宿主细胞离心分离包涵体用促溶剂和还原剂溶解包涵体;稀释溶解的混合物和降低促溶剂和还原剂的浓度，使多肽获得生物活性构象。这些最后提及的若干方法参见下述文献(本文引为参考文献)Winkler等，Biochemistry，254041-4045页(1986年);Winkler等，Biotechnology，3992-998页(1985年);Koths等人的美国专利4569790号和欧洲专利申请86306917.5号和86306353.3号。
本文所用的“有效量”意指足以缓解因过量IFN-γ媒介引起疾病症状的量。用于具体患者的有效量可根据下述因素改变待治疗的病症状态，患者的全面健康状况，给药方法，副作用的严重程度等。一般，BCRF1作为药用组合物给药，包括有效量BCRF1和药用载体或赋形剂。药用载体可以是任何可配伍的、无毒的、适于把本发明组合物释放给患者的物质。通常，这种药物用于非肠道给药的组合物是众所周知的，例如Remington′sPharmaceuticalScience.第15版(MackPublishingCompany，Easton，PA1980年)另外，本发明的组合物可通过植入片药释放系统给入患者体内[参见Urquhart等，Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.，卷24，199-236页(1984年);Lewis，杀虫剂和药物的控制释放(PlenumPress，纽约，1981年)，美国专利3773919号和3270960号等]。
当非肠道给药时，与药用载体结合，以单位注射剂型配制BCRF1(例如溶液，混悬液或乳剂)，这种载体是固有无毒的，并且不起治疗作用，其实例是普通盐水，林格氏溶液，葡萄糖溶液和Hank溶液。也可采用非水载体，例如固定油类和油酸乙酯。最佳载体是5%葡萄糖/盐水。该载体可含少量添加剂，例如能提高等渗性和化学稳定性的物质(如缓冲剂和防腐剂)。最好将BCRF1配制成纯化型，基本无聚集体和其它蛋白质(浓度约为5至20μg/ml)。BCRF1以连续渗入为佳，使释放量为每日约50-800μg(即约1-16μg/kg/日)。该日渗连率可根据副作用监测，血细胞计数等改变。
实施例1COS7猴细胞的BCRF1表达采用可将放大的片段插入EcoR1消化的pcD(SRα)载体的引物，通过聚合酶链反应放大编码BCRF1开式读码的基因(图1)。插入片段的密码链如下所述(以大写字母给出开式读码)aattc ATG GAG CGA AGG TTA GTG GTC ACT CTG CAG TGC CTG GTG CTG47CTT TAC CTG GCA CCT GAG TGT GGA GGT ACA GAC CAA TGT GAC AAT92TTT CCC CAG ACC TAA GAG ATG CCT TCA GTC GTG TTA AAA CCT TTT137TCC AGA CAA AGG ACG AGG TAG ATA ACC TTT TGC TCA AGG AGT CTC182TGC TAG AGG ACT TTA AGG ATG CCA GGC CCT GTC AGA AAT GAT CCA227ATT CTA CCT GGA GGA AGT CAT GCC ACA GGC TGA AAC CAG GAC CCT272GAA GCC AAA GAC CAT GTC AAT TCT TTG GGT GAA AAT CTA AAG ACC317CTA CGG CTC CGC CTG CGC AGG TGC CAC AGG TTC CTG CCG TGT GAG362AAC AAG AGT AAA GCT GTG GAA CAG ATA AAA AAT GCC TTT AAC AAG407CTG CAG GAA AAA GGA ATT TAC AAA GCC ATG AGT GAA TTT GAC ATT452TTT ATT AAC TAC ATA GAA GCA TAC ATG ACA ATT AAA GCC AGG TGA g498通过BCRF1表达和/或限制消化的电泳型式识别以适当定向携带插入片的克隆。携带BCRF1基因的这类载体称为pBCRF1(SRα)，并在ATCC存储(保藏号为68193)。pBCRF1(SRα)在大肠杆菌MC1061中放大，采用标准技术分离并用来转染COS7猴细胞，详述如下转染前一天，将约1.5x106COS7猴细胞接种在各个100mm板上，置于含5%胎牛血清(FCS)和2mM谷氨酰胺的Dulbecco改进的伊格尔培养基(DME)中。为进行转染，通过用胰蛋白酶保温，从盘中移除COS7细胞，用无血清DME洗涤两次，悬浮于107细胞/ml的无血清DME中，取0.75ml整分与20μgDNA混合，转换至无菌的0.4cm electroporation试管中，10分钟后，这些细胞置于BioRad Gene Pulser设备中，在200伏，960μF下脉动，再过10分钟后，从试管中移除细胞，并且加到20ml含有5%FCS、2mM谷氨酰胺，青霉素、链霉素和庆大霉素的DME中，把该混合物整分成4份，分置于100mm组织培养盘中，在37℃、5%CO2下静置12-24小时后，用只含1%FCS的类似培养基代替该培养基，在37℃，5%CO2下再连续保温72小时，此后，收集培养基，测定其抑制IFN-γ合成的能力。
10ml整分的新鲜分离的PBL(约2x106细胞/ml)与PHA(100ng/ml)的培养基在37℃下保温，该培养基含有(ⅰ)90%DMA补充以5%FCS和2mM谷氨酰胺，(ⅱ)10%预先经过转染的pBCRF1(SRα)的COS7细胞的上清液。24小时后，分别获得和测定这些细胞和上清液中存在的IFN-γ mRNA或IFN-γ蛋白质。除了10%上清液取自预先经过转染的携带不相关cDNA插入片的质粒的COS7培养物之外，用相同方法试验对照组。与对照组相比，BCRF1处理过的试样显示约50%抑制IFN-γ合成。
实施例2BCRF1在大肠杆菌中的表达下述编码顺序的成熟BCRF1的基因可在大肠杆菌中表达Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg51015Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu202530Val Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys354045
Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr505560Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ala657075Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg808590Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys95100105Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln110115120Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile125130135Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg.
140145将pBCRF1(SRα)的cDNA插入片再克隆到M13质粒，其中通过位点定向诱变进行两次修改第一次在成熟BCRF1多肽编码区的5′端形成Clal位点，第二次在成熟BCRF1多肽编码区的3′端形成BamH1位点。然后，突变顺序很容易地插入下文所述的TRPCll表达载体。
通过将合成一致的RBS片段与Clal联接子(ATGCAT)连接和将所得片段克隆到Clal限制的pMTllhc(预先经过修饰，含有Clal位点)，构建TRPCll载体。pMTllhc是一种小的(2，3千碱基)高拷贝，具有πVX质粒EcoRl-HindIII多联接子区的pBR322的AMPR、TETS衍生物[Maniatis等人在Molecnlar CloningALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory(1982年)中介绍了πVX]，经修饰含有Clal位点，即通过用EcoR1和BamH1限制pMTllhc，插入所得5-粘性末端，并用Clal联接子(CATCGATG)连接，由此恢复EcoR1和BamH1位点，用Clal位点代替Smal位点。从TRPCll构建中得到的一个转化株具有由Clal位点两侧的RBS纵列顺序。通过下述步骤移除Clal位点之一和部分第二次拷贝的RBS顺序在四个脱氧核苷酸三磷酸盐存在下，用Pstl消化该质粒，用Bal31核酸酶处理，用EcoR1限制和用T4DNA聚合酶处理，所得30-40bp片段通过PAGE回收，并克隆到Smal限制的pUC12。然后，从pKC101衍生的具有248bp大肠杆菌trpP的EcoR1片段[参见Nichols等，MethodsinEnzymology，卷101，155页(AcademicPress，N.Y.1983年)]克隆到EcoR1位点，完成TRPCll构建，如图2所示。TRPCll通过下述步骤用作BCRF1的载体先用Clal和BamH1消化，将其提纯，然后在标准连接溶液中与含编码成熟BCRF1的核苷酸顺序的M13的Clal-BamH1片段混合。含插入片的TRPCll(称作TRPCll-BCRF1)可在大肠杆菌K12菌株JM101(可从ATCC得到，保藏号为33876)中繁殖。
申请人已将携带pBCRF1(SRα)的大肠杆菌MC1061保藏在美国罗克维尔市美国标准菌库(ATCC)，保藏号为68193。根据美国标准菌库有关专利用途培养物保藏规定提供的条件，已于1989年12月20日保藏，以保证美国专利和商标局按照35USC122和37CRF1.14可以采用之，并且为使公众根据美国专利出版物也可知道，需要维持该菌株保藏。保藏菌株的有效性并不解释为许可实施本发明违背任何与专利法有关的政府官方授与的权利。
保藏已作改进，使之符合微生物保藏的布达佩斯条约的要求。
本发明的上述实施例的叙述已提供了示例和说明的目的，它们并不用来限制本发明公开的准确形式，并且按照上述教导，显然有可能作出许多改进和变更。选择和叙述这些实施例的目的是为更好阐明本发明的原理，从而使其它熟悉本领域的技术人员能够将本发明最佳利用于各种实施例，并作出适于预期的具体应用的各种改进。所附权利要求书旨在定义本发明的范围。
权利要求
1.治疗患者以控制与产生过量干扰素-γ有关疾病的方法，该方法包括给以治疗有效量BCRF1的步骤。
2.按权利要求1的方法，其中所述BCRF1选自由下述氨基酸顺序限定的开式读码的成熟蛋白质Met Glu Arg Arg Leu Val Val Thr Leu Gln Cys Leu Val Leu Leu5 10 15Tyr Leu Ala Pro Glu Cys Gly Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe20 25 30Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys35 40 45Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp Asn Leu Leu Leu Lys50 55 60Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala65 70 75Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln80 85 90Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ala Lys Asp His Val Asn Ser Leu95 100 105Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His110 115 120Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile125 130 135Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala140 145 150Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met155 160 165Thr Ile Lys Ala Arg.170
3.按权利要求2的方法，其中所述给药步骤包括静脉注射所述BCRF1的量为1-10mg/kg体重/天。
4.按权利要求2的方法，其中所述成熟蛋白质由下述氨基酸顺序定义Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg5 10 15Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu20 25 30Val Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys35 40 45Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr50 55 60Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ala65 70 75Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg80 85 90Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys95 100 105Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln110 115 120Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile125 130 135Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg.140 145
5.能抑制干扰素-γ合成的蛋白质选自由权利要求1所述式Ⅰ氨基酸顺序限定的开式读码的成熟蛋白质。
6.由权利要求4所述氨基酸顺序定义的权利要求5的蛋白质。
7.能在宿主中表达BCRF1蛋白质的表达载体。
8.按权利要求7的表达载体，其中所述BCRF1蛋白质选自由权利要求1所述式Ⅰ氨基酸顺序定义的开式读码的成熟蛋白质。
9.按权利要求8的表达载体，其中所述宿主是哺乳动物。
10.按权利要求9的表达载体，它包括pBCRF1(SRα)。
11.按权利要求10的表达载体，其中所述宿方是细菌。
12.按权利要求11的表达载体，它包括TRPC11-BCRF1。
全文摘要
本文介绍BCRF1蛋白质和产生它们的表达载体用以治疗与产生过量IFN-γ有关的疾病。含BCRF1蛋白质的本发明组合物可用以治疗各种疾病，包括变态反应，牛皮癣，组织排斥和有关MHC的自免疫疾病。
文档编号C12N15/65GK1052608SQ90110079
公开日1991年7月3日 申请日期1990年12月19日 优先权日1989年12月20日
发明者凯文·W·穆尔, 罗伯特·A·卡斯特尔莱恩 申请人:先灵公司