混合液的用量为500mL，以流速2滴/秒，收集不同组分的洗脱液， 每瓶收集量为IOOmL,采用高通量筛选方法测定各组分对a -淀粉酶和a -葡萄糖苷酶的抑 制力；
[0045] (3)将步骤（2)所得的活性较高的洗脱液，用旋转蒸发仪将其浓缩至浸膏(旋转 蒸发仪温度设为35 °C，转速为55转/分钟)，并用体积分数为25%的甲醇水溶液溶解，进 行葡聚糖凝胶LH20柱层析（2X45cm)分离纯化，所述柱层析为：用体积比为80:0:20:0、 40:40:20:0、0:80:20:0、0:40:20:40的乙醇-甲醇-水-丙酮混合液洗脱直至无色，每种混 合液的用量为500mL，以流速2滴/秒，收集不同组分的洗脱液，每瓶收集量为IOOmL,采用 高通量筛选方法测定各组分对a-淀粉酶和a-葡萄糖苷酶的抑制力；
[0046] (4)将步骤（3)所得的活性较高的洗脱液，用旋转蒸发仪将其浓缩至浸膏(旋转 蒸发仪温度设为45 °C，转速为65转/分钟)，并用体积分数为35%的甲醇水溶液溶解，进 行葡聚糖凝胶LH20柱层析（2X45cm)分离纯化，所述柱层析为：用体积比为0:50:50:0、 20:50:30:0、40:40:20:0、50:30:20:10、50:20:30:20 的乙醇-甲醇-水-丙酮混合液洗脱 直至无色，每种混合液的用量为500mL，以流速2滴/秒，收集不同组分的洗脱液，每瓶收集 量为IOOmL,采用高通量筛选方法测定各组分对a-淀粉酶和a-葡萄糖苷酶的抑制力；
[0047] (5)将步骤（4)所得的活性较高的洗脱液，用旋转蒸发仪将滤液浓缩至浸膏(旋转 蒸发仪温度设为40°C，转速为60转/分钟)，真空干燥，即可。
[0048] 实施例2
[0049] -种高粱麸提取物的制备方法，包括如下步骤：
[0050] (1)将高粱麸粉碎，取200g高粱麸粉末，加入IL体积比为2 :2 :1的乙醇-丙酮-水 混合液振荡提取3h，超声提取30min，共提取3次，得浸提液，将浸提液用布氏漏斗抽滤，合 并滤液；
[0051] (2)将步骤（1)所得的提取液，旋转蒸发仪将滤液浓缩至浸膏(旋转蒸发仪温度设 为45°C，转速为65转/分钟)，真空干燥，即可。
[0052] 实施例3高粱麸提取物的活性研究
[0053] -、实验目的
[0054] 通过对比分析研究实施例1和实施例2所制得的高粱麸提取物对a_淀粉水解酶 和a-葡萄糖苷酶的影响。
[0055] 二、实验方法
[0056] 采用淀粉混浊度法测定高粱麸提取物对a _淀粉酶和a _葡萄糖苷酶抑制能力；
[0057] 上述淀粉池度法具体步骤为：将a -淀粉酶/ a -葡萄糖苷酶（a -amylase/ a -glucosidase)用磷酸盐缓冲液（pH6. 9, 0. 1M)溶解，得酶液(浓度为6U/mL)，-20°C保存。 称取1份玉米淀粉分散到50份磷酸缓冲液，混匀，然后加热糊化10分钟，取出后用磁力搅 拌子不停的搅拌。阿卡波糖（acarbose)用磷酸盐缓冲液溶解并稀释，实验用到的浓度系 列是2-10 y g/mL。高粱麸提取液根据抑制能力高低稀释不同浓度，实验用到的浓度系列是 0. 33-3. 33 ii g/mL。将20份不同浓度的样品和阿卡波糖分别加入到96孔板的相应位置，再 用12通道移液器加入20份a -淀粉酶/ a -葡萄糖苷酶，将96孔板放入荧光酶标仪，37°C 预热一定时间后，取出96孔板，再用12通道移液器加入60份淀粉糊化液，放回荧光酶标 仪，自动振荡摇匀，迅速开始读数。温度设为37°C，每2min测定一个点，共测定120min。测 定结束后，将软件记录的原始数据输出到Excel中进一步处理，计算每个浓度曲线下对应 的面积（AUC, area under curve)，利用以下公式计算样品的抑制能力：
[0058]
[0059] 样品的抑制能力用阿卡波糖当量（U mol/g)来表达。
[0060] 三、实验结果
[0061] 实施例1的结果参见图1和图2(图1和图2中仅给出部分浓度的实验数据)，从图1 和图2可知：该提取物对a -淀粉酶抑制能力IC5tl=I ii g/mL，阿卡波糖当量为5110. 38 ii mol AE/g (miromole carbose equivelent per gram raw material)，对 a -葡萄糖苷酶抑制 能力1〇5(|=21.71^/1111，阿卡波糖当量为 839.4111]1〇1六￡/^(111；[1'01]1〇16。31'13086 6911；[￥61611七 per gram raw material)0
[0062] 实施例2的结果为：该提取物对a -淀粉酶抑制能力IC5(I=6 ii g/mL，阿卡波糖当 量为851.7iimol AE/g，对a-葡萄糖苷酶抑制能力IC5(l=130.2iig/mL，阿卡波糖当量为 139.9 u mol AE/g。
[0063] 从上述实验结果可知，实施例1和实施例2所制得的高粱麸提取物均具有显著的 降血糖活性，且与实施例2所制得的高粱麸提取物相比，实施例1中所制得的高粱麸提取物 具有更高的降血糖活性。
[0064] 实施例4高粱麸提取物在面条中的应用
[0065] -、实验目的
[0066] 将实施例1制得的提取物与面粉和水混合，按常规方法制得面条，并通过体外模 拟消化实验研究该种面条的能量缓释效果。
[0067] 二、实验方法
[0068] 取40份浓度为150g/L的高粱麸水溶液与100份面粉于容器中混合成团后，加入 1000份水，沸水煮5分钟后，将面团匀质，并将pH值调为1. 9，加入33份胃蛋白酶，放入37°C 恒温水浴锅内消化30min，开启水浴锅振荡器不断震荡（200次/min)。胃消化期结束后，将 食糜的pH调至6. 9,然后再加入0.5份的a-淀粉酶溶液和a-葡萄糖苷酶溶液，将食糜转 移至大小为12Kda的透析袋中，置于含有5000份磷酸缓冲液的容器中继续消化3h，水浴锅 震荡频率为 200 次/min，温度 37°C。0、10、20、30、50、70、90、120、150、180min 时各取 20 份 消化液，利用DNS法测定消化液中还原糖含量。
[0069] 三、实验结果
[0070] 实验结果见图3,从图3可知：含有高粱麸提取物的面条明显比空白对照面条消化 得慢，即可有效降低餐后血糖的上升幅度，持续较长时间缓慢提供能量。
[0071] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并 不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员 来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保 护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【主权项】
1. 一种高粱麸提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 将高粱麸粉碎，加入体积比为（1. 5-2. 5) : (1. 5-2. 5) :1的乙醇-丙酮-水的混合 液进行提取，过滤，浓缩至浸膏； (2) 将步骤（1)所得的浸膏用甲醇溶液溶解，经葡聚糖凝胶LH20柱层析分离纯化， 所述柱层析为：先用体积比为0:100-50:50的乙醇-水的混合液洗脱，后用体积比为 50:50-70:30的丙酮-水的混合液洗脱至无色，收集洗脱液； (3) 将步骤（2)所得的洗脱液，浓缩至浸膏，并用甲醇溶液溶解，经葡聚糖凝胶LH20 柱层析分离纯化，所述柱层析为：用体积比为（80-0):(0-80):20:(0-40)的乙醇-甲 醇-水-丙酮的混合液洗脱直至无色，收集洗脱液； (4) 将步骤（3)所得的洗脱液，浓缩至浸膏，并用甲醇溶液溶解，经葡聚糖凝胶LH20柱 层析分离纯化，所述柱层析为：用体积比为（0-50) : (20-50) : (50-20) : (0-20)的乙醇-甲 醇-水-丙酮混合液洗脱直至无色，收集洗脱液； (5) 将步骤（4)所得的洗脱液，浓缩至浸膏，真空干燥，即可。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)所述柱层析为：先依次用 体积比为0:100、（28-32) : (68-72)、50:50的乙醇-水的混合液洗脱，再依次用体积比为 50:50、70:30的丙酮-水的混合液洗脱至无色，收集洗脱液。3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3)所述柱层析为：依次用体 积比为（78-80) :0:20:0、（38-42) : (38-42) :20:0、0: (78-80) :20:0、0: (38-42) :20: (36-40) 的乙醇-甲醇-水-丙酮混合液洗脱直至无色，收集洗脱液。4. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4)所述柱层析为：依次用体积 比为 0: (48-50) : (48-50) :0、（18-22) : (48-50) : (26-34) :0、（38-42) : (38-42) : (20-24) :0、 (48-50):(28-32):(20-22) :(8-12)、（48-50):(20-22): (28-32): (18-20)的乙醇-甲 醇-水-丙酮混合液洗脱直至无色，收集洗脱液。5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)所述混合液中乙醇：丙酮： 水的体积比为2 :2 :1。6. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)-(4)所述甲醇溶液的体积分 数为 25%-35%。7. -种如权利要求1-6任一项所述的方法制得的高粱麸提取物。8. 如权利要求7所述的高粱麸提取物在制备食品中的应用。9. 根据权利要求8所述的高粱麸提取物在制备食品中的应用，其特征在于，所述食品 为面条。10. 根据权利要求8所述高粱麸提取物在制备食品中的应用，其特征在于，所述面条主 要由下述重量份的原料制备而成：面粉95-105份、水35-45份和高粱麸提取物5-7份。
【专利摘要】本发明公开了一种高粱麸提取物及其制备方法和应用，所述方法包括如下步骤：将高粱麸粉碎，加入乙醇-丙酮-水混合液提取，过滤，浓缩至浸膏；再用甲醇溶液溶解，进行多次葡聚糖凝胶LH20柱层析分离纯化，收集洗脱液，浓缩至浸膏，真空干燥，即可。本发明所述制备方法简单易操作，经济适用；制得的高粱麸提取物对α-淀粉水解酶和α-葡萄糖苷酶具有较高的抑制力，将其添加于食品（例：面条等）中，可有效降低餐后血糖的上升幅度，持续较长时间缓慢提供能量防止低血糖，特别适合糖尿病患者和肥胖患者的食用。
【IPC分类】A23L1/10, A23L1/29
【公开号】CN104886437
【申请号】CN201410080861
【发明人】宋立霞, 周维彪, 刘绍泉, 黄德建
【申请人】苏州工业园新国大研究院, 新加坡国立大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2014年3月6日