专利名称：人参皂甙Rg的制作方法
技术领域：
本发明属于中药有效成分医药新用途领域。人参皂甙Rg2(Ginsengnoside Rg2)最早是从人参根中分离出的化合物，因其含量甚低，分离困难，至今未被医药界所应用。根据报导(1)，红参的离体强心作用强于生晒参，而红参中人参皂甙Rg2的含量明显高于生晒参。故切步认为人参皂甙Rg2为人参强心作用的主要成分。按传统方法分离出人参皂甙Rg2以后。我们又进行了离体初试，结果该化合物对正常离体心脏无明显影响，而对戊巴比妥钠造衰的离体心脏有增加心肌收缩幅度的作用(2)。上述矛盾的实验结果难以证实人参皂甙Rg2对心、脑血管疾病的治疗作用。故此本发明采用整体动物、离体乳头肌以及培养心肌细胞等多种模型，系统地研究和证明了人参皂甙Rg2对心、脑血管疾病的治疗和预防价值实验证明，人参皂甙Rg2对在体心衰心脏、离体乳头肌(低钙条件下)以及培养心肌细胞(缺氧缺糖条件下)均有正性肌力作用，其作用方式与强心甙不同。人参皂甙Rg2的上述作用主要与心肌肌原纤维对Ca2+敏感性增加有关。实验还证明，该化合物对犬失血性休克、心源性休克、家免中毒性休克均有明显的治疗和预防作用。此外，人参皂甙Rg2对化学法和冠脉结扎法所致的心肌缺血及心心肌细胞凋亡有明显的治疗和预防作用。该化合物对颈总动脉结扎性脑细胞凋亡和体外颗粒神经元凋亡有明显的保护作用。该化合物还能明显减少动物断头脑缺血和颈总动脉结扎性脑缺血脑组织中CK、LDH的含量本发明证实了人参皂甙Rg2作为中药一类新药治疗休克、心衰、冠心痛、脑梗塞及老年性痴呆的应用价值，上述研究均按中药一类新药申报要求进行，即将开发成中药一类新药。人参皂甙Rg2特征如下1．分子式C42H72O132．分子量7843．结构式 4．分离路线人参茎叶→煎煮→溶媒提取及分离→人参皂甙Rg25．人参皂甙Rg2抗休克、抗心衰、抗心肌缺血及抗脑缺血活性抗休克实验依据(1)人参皂甙Rg2对急性缺血性心源性休克的影响取健康杂种犬30只，均分6组，用戊巴比妥钠麻醉，分离气管、颈动脉、股动脉及股静脉，分别连接人工呼吸机和RM-6000型多导生理记录仪，并分离主动脉根部，按放电磁流量计卡式探头。于冠状动脉前降支(LAD)根部、中部、末梢结扎后，分别记录BP、LVSP、LVEDP、±dt/dpmax、HR、呼吸率、CO，并由动静脉取血测AST、CK、LDH活性。观察iv不同剂量受试药物在不同时间内作用。各给药组数据与溶媒对照组进行组间t检验，用X±SD表示实测平均值±标准差及变化百分率(％)平均值±标准差，见表1。
a、对HR的影响人参皂甙Rg21.0mg·kg-1组给药后10～30min心率明显增快，与对照组比较P＜0.05，生脉对心率无明显影响。
b、对MAP的影响人参皂甙Rg21.0mg·kg-1组给药后10～120minMAP明显升高，人参皂甙Rg20.5mg·kg-1组给药后20～120minMAP明显升高。生脉组仅给药后30minMAP明显升高，其作用缓慢。
c、对LVSP的影响人参皂甙Rg2各剂量组对LVSP均有明显升高作用，维持时间久，均达到120min，生脉给药后10～60min明显升高LVSP。
d、对±dp/dtmax的影响人参皂甙Rg2各剂量组给药后10min即升高+dp/dtmax，且维持120min，生脉组30～60min明显升高+dp/dt max。
人参皂甙Rg2各剂量组均明显升高-dp/dt max，维持时间30～60min，而生脉对-dp/dtmax无明显影响。
综上所述，人参皂甙Rg2对急性缺血性心源性休克犬有明显的治疗作用，其血流动力学指标等与对照组比较均有明显的改善。人参皂甙Rg2与生脉比较起效稍快，维持时间也比生脉长。
(2)人参皂甙Rg2对内毒素休克的影响a、人参皂甙Rg2对家兔心功能的影响取健康家兔42只，均分7组，除假手术组外均iv 1.0mg·kg-1大肠杆菌内毒素，10h后，按上述方法连接RM-6000型多导生理记录仪，按表2所示剂量iv受试药物，假手术组及模型组均iv等体积溶媒。记录给药前后不同时间MAP、HR、LVSP、LVEDP、IP(等容收缩压)、±dp/dt max、VPm(最大心肌收缩速度)以MAP＜10KPa，作为休克指标，观察所试药物对心功能的影响。
由表2所示，受试药物对内毒素家兔心功能影响如下①对MAP、LVSP的影响人参皂甙Rg2各剂量组在给药后15～120min，对MAP、LVSP明显的增加作用，参麦组在给药后30～60min对MAP、LVSP有明显的增加作用。
②对±dp/dt max的影响人参皂甙Rg2各剂量组在给药后15～120min内对±dp/dt max均有明显增加作用，参麦组仪在给药后60min时对±dp/dt max有明显的增加作用。
③对VPm、的影响人参皂甙Rg2各剂量组对VPm均有明显的增加作用，Rg2于4.0mg·kg-1组此作用持续时间15～120min，Rg22.0、mg·kg-1组此作用持续时间30～120min。参麦对VPm也有增加作用，参麦组仅在60min时有明显增加作用。
④对LVEDP的影响人参皂甙Rg2各剂量组对LVEDP均有明显的降低作用，且作用起效时间和作用强度随剂量的增大而增快和增强，此作用持续时间均维持至120min。参麦组也有降低LVEDP的作用，但持续时间为30～60min。
以上结果表明，人参皂甙Rg2对内毒素引起的休克家兔心功能有明显的改善作用。参麦注射液与Rg2比较起效慢，持续时间短。
b、对内毒素引起家兔微循环障碍的影响取日本大耳白兔29只，按表3均分5组，实验前用脱毛剂脱去两侧耳毛。局麻下插入股动脉和股静脉导管，用以观察动脉血压和iv药物。按表3所示剂量iv受试药物，对照组iv等体积溶媒，同时各组均iv内毒素5mg·kg-1，观察兔耳微动脉管径和流态变化，结果见表3。
结果，iv内毒素后2～3min，溶媒组动物有71.4％出现Ⅰ相血压下降，而参脉组有50％出现Ⅰ相血压下降，人参皂甙Rg20.85、1.7mg·kg-1分别有16.7％、37.5％出现Ⅰ相血压下降。iv内毒素后20min各组动物耳缘动脉血管管径均有明显改变，模型组先扩张，后持续收缩，直至一些动物微动脉收缩成线状，无血细胞通过。而给药组均能抑制内毒素所致微动脉收缩，并对血液流态有一定的改善作用。
总之，人参皂甙Rg2对内毒素所致动物微循环障碍有明显的改善作用，且其作用随剂量的增大而增强。
(3人参皂甙Rg2对失血性休克犬血流动力学的影响取健康犬、麻醉、连接RM-6000型多导生理记录仪。放血至MAP降到5.3KPa以下，稳定10分钟，按表4所示剂量分别iv受试药物，对照组iv等体积溶媒，分别记录MAP、LVSP、LVEDP、±dp/dt max、HR、呼吸率。于给药后4.5h取血，测LDO和SOD。记录给药后6h犬存活数。
表4表明
①对MAP的影响人参皂甙Rg2各剂量组给药后10～120min可明显升高MAP，参麦组给药后5～10min也明显升高MAP。
②对LVSP的影响人参皂甙Rg2各剂量组给药后均有升高LVSP的作用，除60min时0.5、1.0mg·kg-1和120min时0.5mg·kg-1组与对照组比较P＜0.05外，其余均有升高趋势。
③对±dp/dt max的影向人参皂甙Rg2各剂量组给药后10～120min可明显升高+dp/dt max，对-dp/dt max除5min时0.5mg·kg-1和120min时1.0mg·kg-1与对照组比较P＜0.05外，其余有升高趋势。
表5、6表明人参皂甙Rg2有明显降低失血性休克犬血清LPO含量、增强SOD活性、延长存活时间及提高存活率的作用。
以上表明，人参皂甙Rg2对犬失血性休克有明显保护作用，升高MAP、LVSP、±dp/dtmax，其作用缓慢持久。此外人参皂甙Rg2能减慢呼吸频率，减少LPO含量，增强SOD活性，减少动物死亡率，延长存活时间。
抗心衰实验依据(1)人参皂甙Rg2对戊巴比妥钠所致心衰血流动力学的影响取健康杂种犬30只，均分6组，麻醉、开胸，按观察指标插管，连接RM-6000型多导生理记录仪，分别记录平均动脉压(MAP)，左心室内压(LVSP)、舒张期末压(LVEDP)、心肌收缩最大速率(±dp/dt max)，心率(HR)等指标。由股动脉恒速输入戊巴比妥钠致心衰及休克，以±dp/dt max下降80％、平均动脉压及心输出量下降至40％，为心衰指标，由静脉推注受试药物，分别记录给药前、给药后不同时间的血流动力学指标。以给药前(心衰)为100％，计算给药后各指标变化百分率。
由表7可见，由戊巴比妥钠引起犬急性心力衰竭，其血流动力学指指标发明显变化，CO下降率59.17±14.96％，MAP下降率为69.93±9.854％等，表明此模型成功。稳定后iv受试药物，以各项指标的影响如下①对MAP的影响人参皂甙0.5mg·kg-1和Rg21.0mg·kg-1在给药后20～60min可明显增加MAP，参麦1g生药·kg-1组也可明显增加MAP，但与人参皂甙Rg2比较，参麦起效慢。
②对LVSP、LVEDP的影响人参皂甙Rg2各剂量组均能明显升高LVSP，明显降低LVEDP，与参麦比较起效快。
③对±dp/dt max的影响人参皂甙Rg2各剂量组均能明显升高±dp/dt max，在给药后5～60min内作用强度持续增加，参麦也有升高±dp/dt max的作用，但与Rg2比较，参麦起效慢。
④对HR、CO的影响人参皂甙Rg20.5mg·kg-1组给药后5～60min即可明显增加HR，人参皂甙Rg2各剂量组给药后10～60min均能明显增加CO，参麦也有增加HR、CO的作用。
以上结果表明，人参皂甙Rg2对由戊巴比妥钠诱发的犬急性心力衰竭有明显的保护作用，可增加MAP、LVSP、±dp/dt max、HR、CO，降低LVEDP，从而增强心功能。与参麦比较起效快。
(2)人参皂甙Rg2对豚鼠离体乳头肌作用的影响取豚鼠用木棒猛击头部，迅速取出心脏，用KH液洗去血液，取出乳头肌，将其底部固定于刺激电极上，腱索端用蛙心夹夹住迅速放入浴温控制在36℃20ml盛有KH液的浴槽中，通以95％O2、5％CO2混合气体，再将蛙心夹通过换能器连接于二导生理记录仪上，稳定30～60min后开始进行试验。每次加药后待收缩幅度恒定后(4～5min)，直至收缩幅度不再增大甚至缩小或出现自动节律性为止，再加第二个浓度。
溶媒组、哇巴因组及人参皂甙Rg2正常KH液组(以下称正常人参皂甙Rg2组)，待乳头肌收缩稳定后，向浴槽内分别加入用KH液配制的同体积，不同浓度的哇巴因，人参皂甙及溶媒。
人参皂甙Rg2低钙KH液组(以下简称低钙人参皂甙Rg2组)，待乳头肌在正常KH液中稳定后，换低钙KH液，此时收缩幅度逐渐缩小，稳定后向浴槽内加入用低钙KH液配制的同体积，不同浓度的人参皂甙Rg2，按以下公式计算张力增加百分率张率增加百分率=给药后收缩幅度/给药前收缩幅度×100％从表8，
图1可以看出，人参皂甙Rg2对正常KH液中豚鼠乳头肌的收缩幅度有一定的增强作用，Rg2浓度在2.11×10-3mmol·L-1时作用最强，之后便不再增加。人参皂甙Rg2能明显增加低钙KH液中豚鼠乳头肌的收缩幅度，且与浓度增加呈较好的量效关系。低钙人参皂甙Rg2的回归曲线方程为Y=32.32X+134.902，求得ΔFC=(50％浓度)2.37×10-3mmol·L-1，从图1读得ΔFc max=188.7±55.1％。溶媒组有降低收缩幅度的趋势。
从表9、图2可以看出，哇巴因能明显增强豚鼠乳头肌收缩力，其收缩幅度随药物浓度的增加而增大，哇巴因的回归曲线方程为Y=106.09X+762.679，求得ΔFC=(50％浓度)1.91×10-7mmol·L-1，从图2读得ΔFc max=235.7±57.6％。
结果表明，在正常KH液中，哇巴因对乳头肌的作用强度超过人参皂甙Rg2；在低钙KH液中，人参皂甙Rg2对乳头肌收缩幅度有明显的增加作用。
(3)人参皂甙Rg2对培养心肌细胞搏动幅度的影响实验参照Harary等建立的方法培养心肌细胞，取出生后2～4天大白鼠乳鼠，分离心室肌，用胰蛋白酶消化、分离心肌细胞，用Eagle培养基制备细胞悬液，置37℃培养箱内孵育2天，待细胞出现同步化搏动时进行实验。
本实验心肌细胞缺氧缺糖模型，采用无糖Hank’s液培养基氮气饱和法，受试药物浓度分别为人参皂甙Rg20.05、0.025、0.0125mmol·L-1；哇巴因1mmol·L-1；参麦注射液0.4g生药·L-1正常培养心肌细胞与药物温孵时间4h，缺氧缺糖心肌细胞与药物温孵时间6h，已录给药前后搏动幅度变化百分率(％)。
结果人参皂甙Rg2在所用浓度下对正常培养心肌细胞搏动幅度均无明显影响，而参麦注射液增加19.3％，哇巴因增加30.4％；但人参皂甙Rg2对缺氧缺糖心肌细胞有明显增加搏动幅度的作用，分别为72.8％、48.2％、32.4％，而参麦和哇巴因分别增加18.1％和32.4％。
以上结果表明，人参皂甙Rg2仅对缺氧缺糖的心肌细胞有增加搏动幅度的作用，而对正常心肌作用不明显，这点与哇巴因有所不同。
(4)人参皂甙Rg2对去膜心肌肌原纤维Ca2+敏感性的影响去膜心肌肌原纤维制备及Ca2+·Mg2+-ATP酶活性测定参照Alous(1988)和Pagen(1984)等建立的方法，取犬心脏，匀浆，离心，取沉淀物加入Buffer溶液，反复离心，最终取沉淀物，用Buffer液调整蛋白含量为5mg·L-1。取制备好的肌原纤维蛋白液加入反应液和受试药物，30℃下温育10min，加入4mM的ATP启动反应，10min后加入1ml 15％的TAC终止反应。离心，取上清液用Bonting法测释放的无机磷(Pi)含量。单位以umol Pi·mg-1·h-1表示。
图3所示，人参皂甙Rg20.1mmol·L-1能使去膜心肌肌原纤维活性升高，使酶活性-pCa曲线向左上方移位，即认为该药有Ca2+增敏作用。
预防和治疗心肌缺血实验依据(1)人参皂甙Rg2冠脉结扎犬心外膜电位、血清心肌三酶及心肌梗塞面积的影响实验方法请见“对心源性休克犬血流动力学的影响”一项，冠脉结扎手术完毕后，放置多点电极，记录心外膜电位(EECG)，同时测定血流动力学各指标，并由动、静脉取血测AST(谷草转氨酶)、CK(肌酸激酶)、LDH(乳酸脱氢酶)活性。实验6 h剖取心脏，按NBT染色法测定心肌梗塞而积，以心外膜电位ST段升高总mv数(∑-ST)和ST段抬高)2mv电极数(N-ST)为心肌缺血程度和范围。观察iv受试药物在不同时间的作用。
表10所示，人参皂甙Rg2及生脉注射液均能明显减小N-ST和减轻∑-ST。由表11可见，人参皂甙Rg2对心肌三酶和梗塞面积有明显的降低和减小作用，但生脉注射液的作用强度不及Rg2。
(2)人参皂甙Rg2对异丙肾上腺素所致大鼠心肌缺血的影响取大鼠，按表12所示剂量iv受试药物，对照组iv等体积溶媒，同时各组均ip异丙紧上腺素2mg·kg-1，每日1次，连续3次，分别测给药前及末次给药后不同时间心电图，并部取心脏，检查其坏死面积，以J点偏移和心肌坏死面积作为心肌缺血指标，观察所试药物的作用，结果见表12。
结果表明，人参皂甙Rg2能明显改善异丙肾上腺素所致的心电异常，能明显缩小心肌坏死面积。
(3)人参皂甙Rg2对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的影响取大鼠，连接11导联心电机，按表13所示剂量iv受试药物，对照组iv等体积溶媒，10分钟后各组均iv垂体后叶素0.5u·kg-1，记录给药前、给约后不同时间心电图，以J点偏移作为心肌缺血指标，结果见表13。
结果人参皂甙Rg2能明显改善由垂体后叶素所致心电图异常，表明该化合物有明显的抗冠状动脉痉挛性心肌缺血的作用。(4)参皂甙Rg2对大鼠冠脉结扎诱发心肌细胞凋亡的保护作用。
取SD雄性大鼠25只，均分5组①假手术组(左冠状动脉穿线不结扎)、②溶媒对照组(左冠状动脉结扎前3h iv 1m·kg-1溶媒)，③缺血再灌组(结扎前3h iv 1ml·kg-1溶媒，结扎后30min后松开结扎线，恢复血流20min)，④人参皂甙Rg21.0mg·kg-1、2.0mg·kg-1(结扎前3 h分别iv Rg21.0mg·kg-1、2.0mg·g-1其余同③)。实验结束后迅速取出心脏，采用TUNEL检测，流式细胞检测和DNA琼脂糖电泳法观察受试药物对心肌细胞调亡的保护作用。
TUNEL检测结果表明，假手术组和溶媒对照组凋亡细胞数为6％左右，而缺血再灌组凋亡细胞数明显增加，达21％左右，人参皂甙Rg21.0mg·kg-1组和2.0mg·kg-1组凋亡细胞分别为15％和8％，与缺血再灌组比较差异显著，见图4。
流式细胞检测表明，缺血再灌2h后，缺血再灌组在DNA直方图上呈典型的凋亡峰(AP峰)占41.5％，假手术组AP峰仅占9.2％，见图5。
琼脂糖凝胶电泳结果显示，缺血再灌2h，缺血再灌组可见明显的DNA梯度条带(相当于180～200Dp的整数倍)，提示有DNA断裂和细胞凋亡，而假手术组仅在点样处出现基因组条带，人参皂甙Rg2 1.0mg·kg-1和2.0mg·kg-1组梯度茶带明显减弱，见图6。
总之，人参皂甙Rg2对缺血再灌注时心肌细胞凋亡、DNA断裂均有明显的保护作用。
治疗脑梗塞实验依据(1)人参皂甙Rg2对小鼠全脑缺血的影响①人参皂甙Rg2对小鼠断头张口喘气时间的影响取昆明种小鼠50只，均分5组，按表14所示剂量iv受试药物，10min后断头，立即按秒表记录小鼠断头至张口喘气停止时间，以该时间长短作为脑缺血指标，结果见表14。
结果表明，人参皂甙Rg2能明显延长小鼠断头张口喘气时间。
②人参皂甙Rg2对小鼠断头脑组织CK、LDH的影响取昆明种小鼠60只，均分5组，按表15所示剂量给iv受试药组，10min后断头，断头后15Sec立即取脑，迅速称重，以10倍量的冷生理盐水匀浆，3000Pr/min离心5min，取上清液，按肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH-L)试剂盒说明书方法用荷兰Ⅱ型半自动生化分析仪测CK及LDH含量，结果见表15。
结果，对缺血脑组织肌酸激酶(CK)含量有明显的降低作用，而对乳酸脱氢酶(LDH)含量仅Rg22.0mg·kg-1有降低作用，表明，人参皂甙Rg2对小鼠全脑缺血有明显的保护作用。
(2)人参皂甙Rg2对缺血性脑损伤的影响取体重250～270g的SD雄性大鼠66只，均分以下11组正常对照组，溶媒加缺血3h、4h、5h、6h等4组，Rg22.0mg·kg-1加缺血3h、4h、5h、6h等4组，缺血6h加Rg21.0mg·kg-1和缺血6h加Rg22.5mg·kg-1组。溶媒及Rg2均于脑缺血前3h预先静脉给药。
除正常对照组外，其余大鼠用戊巴比妥钠麻醉后，切开颈部止中线，分离右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)，将制备好的3-0号栓线(U.S.A)自ECA残端插入，经ICA进入大脑前动脉，以阻塞大脑中动脉血流。术后以出现典型Honer征(动脉躯体左转，左前肢偏瘫)为模型成功的标志。实验结束后迅速取脑，分别做如下处理采用TTC染色观察脑梗塞面积，结果见图7，图8。
采用DNA琼脂糖电泳观察DNA裂解，结果见图9。
采用流式细胞检测(FCM)观察凋亡峰(AP峰)，结果见图10。
结果，大鼠脑缺血6h经TTC染色显示正常脑组织为红色，而右侧大脑中动脉梗塞6h后脑组织为苍白色，见图7。
不同时间脑缺血(3h、4h、5h、6h)梗塞面积随时间的延长而增大，如果预先ivRg22.0mg·kg-1，则上述梗塞面积明显缩小，见图8A。不同剂量Rg2(1.0、2.0、2.5mg·k-1)可以明显减小缺血6h诱发的脑梗塞面积，并随Rg2剂量的增加，梗塞面积减小，见图8B。
琼脂糖电泳结果显示脑缺血6h凋亡梯度条带明显，预先ivRg2(1.0、2.0mg·kg-1)后，凋亡梯度条带消失，见图9。
流式细胞检测结果显示脑缺血6h后，凋亡(AP)峰明显，预先Rg2(1.0、2.0mg·kg-1)后AP峰明显减弱，结果见图10。
(3)人参皂甙Rg2对体外培养小脑颗粒神经元的保护作用①小脑颗粒神经元培养及凋亡模型取新生7天的SD大鼠乳鼠，无菌断头取小脑，镜下除去血管和脑膜，剪成小块，用0.06％胰酶消化15min，加入胰酶抑制剂和血清终止消化，收集细胞悬液，离心(1500rpm,5min)弃上清液，沉淀加入BME和Eegle′s培养液，调整细胞密度106个·ml-1，种植在预先铺有多聚赖氨酸的培养皿中，37℃培养24h后加入Ara-C抑制胶质细胞生长，7d后用于实验。
缺氧缺糖诱发凋亡模型取培养7d的神经细胞，培养液换用无糖Eagle培养基，放置含95％N2+5％CO2的二氧化碳培养箱内，37℃培养6h后作为凋亡模型用于实验。
低钾诱导凋亡模型取培养7d神经细胞(25mM Kcl)，丢培养液，加入含5mM KCl的DME/F12培养液中，37℃培养16h后，做为纸钾诱发凋亡模型用于实验。
Hoechest 33258荧光染色参照文献方法进行，Hoechest 33258(8μg/ml)，具体方法略。
DNA琼脂糖电泳方法略结果光镜和相差显微镜下显示正常神经元胞体椭圆，突起清晰缺氧缺糖6h后胞体缩小，轴突断裂或消失，给予人参皂甙Rg220μg和40μg预处理后细胞形态明显好转，结果见图11、12。
Hoechast 33258荧光染色显示缺氧缺糖6h后可见大量凋亡小体，核裂群，给予不同浓度人参皂甙Rg2后调亡小体(白色)明显减少，并且此作用与剂量呈正比，结果见Hoechest33258染色图13.14。
DNA电泳结果显示不同浓度的人参皂甙Rg2可明显减少氧缺糖6h诱发的DNA裂群，给药后凋亡梯度条带消失。结果见图15、16。
在低钾诱导神经凋亡模型中必现不同浓度的人参皂甙Rg2尚可拮抗低钾诱发的神经元损伤，结果见荧光染色和DNA电泳。
溶血试验将人参皂甙Rg2配成0.5％溶液，按药典方法配制红细胞悬液，加样，37℃恒浴，结果3h内各管均无溶血。
急性毒性试验取小鼠60只，18～20g，雌雄各半，禁食不禁水12h，室温15～18℃,iv人参皂甙Rg2，观察7日内动物死亡数，按Biss法计算LD50，结果人参皂甙Rg2小鼠LD50为330.06±19.17mg·kg-1。
图1为人参皂甙Rg2及溶媒对豚鼠离体乳头肌收缩幅度的影响图。
图2为哇巴因对豚鼠离体乳头肌收缩幅度的影响图。
图3为人参皂甙Rg2对pCa和钙、镁-ATP酶活性反应曲线的影响图。
图4为人参皂甙Rg2对大鼠冠脉结扎诱发心肌细胞凋亡的保护作用，采用TUNEL检测法的检测图。
图5、为人参皂甙Rg2对大鼠冠脉结扎诱发心肌细胞凋亡的保护作用，采用流式细胞检测法的检测图。
图6为人参皂甙Rg2对大鼠冠脉结扎诱发心肌细胞凋亡的保护作用，采用DNA琼脂糖电泳检测法的检测图。
图7为TTC染色脑梗塞模型图。
图8为人参皂甙Rg2对脑梗塞面积的影响图。
图9为人参皂甙Rg2对缺血性脑损伤的影响，采用DNA琼脂糖电泳法的检测图。
图10为人参皂甙Rg2对缺血性脑损伤的影响。采用流式细胞检测法的检测图。
图11为人参皂甙Rg2对体外培养小脑颗料神经元的保护作用，采用相差显微镜检测法的检测图。
图12为人参皂甙Rg2对体外培养小脑颗料神经元的保护作用，采用光显微镜检测法的检测图。
图13、14为人参皂甙Rg2对体外培养小脑颗料神经元的保护作用，采用Hoechest33258荧光染色检测法的检测图。
图15、16为人参皂甙Rg2对体外培养小脑颗料神经元的保护作用，采用DNA琼脂糖电泳检测法的检测图。
6、本发明实施方法人参皂甙Rg2可与相应药用载体结合制备成各种剂用于休克、心肌缺血及脑缺血治疗。其实施方法如下表
表1 人参皂甙Rg2对急性缺血性心源性休克犬血流动力学的影响(n=5,X±SD)
与对照组比较 * P＜0.05,* * P＜0.01,* * * P＜0.001
表2 人参皂甙Rg2对内毒素休克家兔心功能的影响(n=6,X±SD)
与溶媒组比较 * P＜0.05,* * P＜0.01
表3 人参皂甙Rg2对内毒素所致家兔微循环障碍的影响
与对照组比较* P＜0.05* * P＜0.01
表4 人参皂甙Rg2对失血性休克犬血流动力学的影响(n=5,X±SD)
与对照组比较*P＜0.05 * * P＜0.01 * * * P＜0.001
表5．人参皂甙Rg2对失血性休克犬血清LPO、SOD的影响(n=5,X±SD)
注与对照组比较* P＜0.05 * * P＜0.01 * * * P＜0.001
表6．人参皂甙Rg2对失血性休克犬存活率和总放血量的影响
注与对照组比较 * P＜0.05 * * P＜0.01
表7 人参皂甙Rg2对戊巴比妥钠所致心力衰竭及休克犬血流动力学的影响(n=5,X±SD)
与对照组比较 * P＜0.05,* * P＜0.01,* * * P＜0.001
表8 人参皂甙Rg2及溶媒对豚鼠离体乳头肌收缩幅度的影响(n=10) 表9 哇巴因对豚鼠离体乳头肌收缩幅度的影响(n=10,X±SD)
表10 人参皂甙Rg2对急性心肌缺血犬心外膜电流的影响(n=5,X±SD)
与对照组比较 * P＜0.05,* * P＜0.01 * * * P＜0.001
表11人参皂甙Rg2对急性缺血犬血清心肌三酶及梗塞面积的影响(n=5,X±SD)
与对照组比较 * P＜0.05,* * P＜0.01,* * * P＜0.001
表12．人参皂甙Rg2对异丙肾上腺素致大鼠心肌缺血的影响(X±SD)
注与对照组比较* P＜0.05,* * P＜0.01,* * * P＜0.001
表13．人参皂甙Rg2对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的影响(X±SD)
注与对照组比较 * P＜0.05 * * * P＜0.01 * * * P＜0.001
表14人参皂甙Rg2对小鼠断头张口喘气时间的影响(X±SD)
与对照组比较 * P＜0.05,* * P＜0.01
表15 人参皂甙Rg2对小鼠断头脑组织CK、LDH的影响
与对照组比较 * P＜0.05,* * P＜0.01,* * * P＜0.00权利要求
1.用人参皂甙Rg2(包括混合或单一构型)制备抗体克、抗心衰、抗心肌缺血、抗脑缺血(厥脱、胸痹、中风)及抗老年性痴呆的新药(包括中西药复方制剂)，
2.根据权力要求书1、药物的制型是注射剂(粉针剂和溶液注射剂)、片剂(糖衣片和薄膜衣片)、胶囊剂(普通和微型胶囊)、气雾剂、栓剂(肛门和阴道栓)、口粘膜贴剂、口嚼片、糖浆剂及其他口服液等各种剂型。
全文摘要
本发明属于中药有效成分医药新用途。人参皂甙Rg
文档编号A61K31/7042GK1309969SQ0110211
公开日2001年8月29日 申请日期2001年1月21日 优先权日2000年1月31日
发明者李龙云, 田建明, 金毅 申请人:吉林省中医中药研究院, 吉林省复生药业有限公司