肽衍生物的制作方法

专利名称：肽衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及针对孤儿G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)具有配体活性的新型肽及其用途。
通过这种激素和神经递质与G蛋白偶联型受体的相互作用维持体内的平衡、对机体的生殖、个体的发育、代谢、生长、神经系统、循环系统、免疫系统、消化系统、代谢系统的调解等起着重要的调节作用。现在已知在这种生物体内机能的调节中，存在着各种各样的激素和神经递质的受体蛋白，它们对机体机能调解起着重要作用，然而作为未知的作用物质(激素和神经递质等)是否存在与其相对应的受体，至今有很多地方不清。
近年来，利用G蛋白偶联型受体蛋白质中的部分结构显示出氨基酸序列的类似性，根据聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction以下简称PCR)已经在探索编码新的受体蛋白的DNA，如很多配体不明的，所谓孤儿G蛋白偶联型受体蛋白已经被克隆出来(Libert，F.，et al.Science，244，569-572，1989，Welch，S.K.，et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.，209，606-613，1995，Marchese，A.，et al.，Genomics，23，609-618，1994，Marchese，A.，Genomics，29，335-344，1995)。另外，根据基因组DNA或cDNA的随机顺序决定，相继发现了新的G蛋白偶联型受体蛋白(Nomura，N.，et al.，DNA Research 1卷、27-35页、1994年)。然而，作为决定这些孤儿G蛋白偶联型受体蛋白的配体，一般采取的方法是只能从G蛋白偶联型受体蛋白的一级结构的类似性上推断它们。但是，多数孤儿G蛋白偶联型受体蛋白在很多情况下与已知的受体同源性较低，除了已知配体的受体亚型外，实际上仅靠一级结构的类似性推断其配体是困难的。从另一方面来看，尽管从基因分析中发现了很多孤儿G蛋白偶联型受体，但是还存在很多与其对应的未知配体，直到现在为止，真正鉴定出孤儿G蛋白偶联型受体配体的例子却很少。
最近，有人报道，在动物细胞中导入编码孤儿G蛋白偶联型受体蛋白cDNA，从而发现了新的类鸦片肽(Reinsheid，R.K.et al.，Science、270卷、792-794页、1995年、Menular，J.-C.，et al.，Nature 377卷、532-535页、1995年)。但这时很容易从与已知G蛋白偶联型受体蛋白的类似性上及组织分布中联想到配体应属于类鸦片肽的家族。有关在生物体内通过类鸦片受体作用研究和开发其物质的历史已久，并开发出各种的拮抗剂和激动剂。至此，从人工合成化合物组群中找出针对受体的激动剂，将激动剂作为探针，在受体cDNA导入细胞中验证受体的表达后，再找出与激动剂相同的具有细胞内信息传递的活性物质，对其进行纯化，进而确定配体的构造。
另外，有人报道在CHO细胞中导入编码蜗牛孤儿G蛋白偶联型受体(GRL104)的cDNA，在受体表达细胞中以特异细胞内游离钙浓度的上升作为指标而鉴定出新的生理活性肽(Cox，K.J.A.，et al.，J.Neurosci.，17(4)，1197-1205，1997)，这个新生理活性肽具有已知的leucokinin高同源性，GRL104还具有与已知leucokinin的反应性。在这些孤儿G蛋白偶联型受体蛋白中大致能被推定的配体几乎没有，尤其是在和已知的G蛋白偶联型受体蛋白家族类似性低时，根本没有配体的报道，所以推定配体是很难的。
关于孤儿G蛋白偶联型受体的报道之一是APJ(O′Dowd，B.F.，et al.，Gene，436，355-359，1993)。APJ与血管紧张素受体(AT1)同源性很低。针对APJ的天然配体和其部分肽，在Biochemical and BiophysicalReaearch Communications 251，471-476(1998)、WO 99/33976号(特願平10-220853号)等中被描述，然而有关在天然型配体中进行人工修饰形成的修饰物还处于未知的状态(例如，将天然型配体中的1个至数个构成氨基酸被其他氨基酸置换的修饰物，天然型配体1个至数个构成氨基酸的侧锁被适当的取代基取代的修饰物等等)。

发明内容
在中枢神经系统、循环系统、生殖系统、免疫系统、消化系统等部位表达的是针对孤儿G蛋白偶联型受体APJ在天然型配体中采用人工的方法加入肽的修饰，该肽与天然型配体相比，被认为在医药方面是有用的，然而直到现在与天然型配体相比作为药物等有用的肽的构造和机能还不清楚。
本发明人根据所述的课题，以该天然型配体修饰物的肽和上述受体蛋白结合性的变化作为指标，合成各种新肽，通过联想天然型配体的活性及特定部位，找到了作为药物更为有用的天然型配体的修饰物。
即，本发明提供(1)以式(I)P1-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-P2-P3-Gly-Pro-P4-P5[式中、P1表示氢原子或者由相同或不同且侧链可被取代的1-25个氨基酸组成的氨基酸残基或肽链，P2表示侧链可被取代的中性氨基酸残基或侧链可被取代的碱性氨基酸残基，P3表示侧链可被取代的中性氨基酸残基、侧链可被取代的芳香族氨基酸残基或侧链可被取代的碱性氨基酸残基，P4表示结合键或侧链可被取代的中性或芳香族氨基酸残基，P5表示①侧链可被取代的氨基酸残基或者其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物，②羟基或③侧链可被取代的氨基酸残基和侧链可被取代的氨基酸残基结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物，式-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-或-Gly-Pro-中的每个氨基酸残基的侧链均可被取代。]表示的肽或其酯或其酰胺或其盐；(2)根据(1)中所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中P1为氢原子、pGlu或Arg-Arg-Gln；(3)根据(2)中所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中P2为可被取代的His或可被取代的Ala；(4)根据(3)中所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中P3为可被取代的Arg或可被取代的Lys；(5)根据(1)中所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中-P4-P5为-Cha-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Pro-Phe、-Met-Pro-Phe、-Met-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Phe或-Met-Phe；(6)如下表示的根据(1)中所述的肽①Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、②Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、③Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、④Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、⑤Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、⑥Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)、⑦pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、⑧pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe或⑨Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Phe，或其酯或其酰胺或其盐；(7)以式(II)Q1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Q2-Gly-Q5-Q3-Q4[式中、Q1表示氢原子或者由相同或不同且侧链可被取代的1-25个氨基酸组成的氨基酸残基或肽链，Q2表示侧链可被取代的中性氨基酸残基、侧链可被取代的芳香族氨基酸残基或侧链可被取代的碱性氨基酸残基，Q3表示结合键或侧链可被取代的中性或芳香族氨基酸残基，Q4表示①侧链可被取代的氨基酸残基或者其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物，②羟基或③侧链可被取代的氨基酸残基和侧链可被取代的氨基酸残基结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物，Q5表示侧链可被取代的中性氨基酸残基，式-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-中的每个氨基酸残基的侧链均可被取代。]表示的肽或其酯或其酰胺或其盐；(8)根据(7)中所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中Q1为氢原子、pGlu或Arg-Arg-Gln；(9)根据(7)中所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中Q2为可被取代的Arg或可被取代的Lys；(10)根据(7)中所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中-Q3-Q4为-OH、-Met、-Met-Pro-Phe、-Met-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Pro-Phe、-Cha-Pro-Phe(Cl)、-Ala-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Phe(Cl)或-Cha；(11)根据(7)中所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中Q5为可被取代的Pro、可被取代的Gly或可被取代的Ala；(12)如下表示的根据(7)中所述的肽(i)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(ii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(iii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)、(iv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(v)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha、(vi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、(vii)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(viii)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met、(ix)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro、(x)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xi)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met、(xiii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xiv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Ala-Pro-Phe(Cl)、(xv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Met-Pro-Phe(Cl)、(xvi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe-Ala-Met-Pro-Phe(Cl)、(xvii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pyn、(xviii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Pyn、(xix)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Cha、或者(xx)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys(Me)2-Gly-Pro-Met-Pro-Phe，或其酯或其酰胺或其盐；(13)以式(III)R1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-R2-Pro-R3[式中、R1表示氢原子或者由相同或不同且侧链可被取代的1-25个氨基酸组成的氨基酸残基或肽链，R2表示可被取代的Cha、可被取代的Met或可被取代的Nle，R3表示可被取代的Phe(Cl)、可被取代的Phe、可被取代的Nal(2)、可被取代的Cha或可被取代的Tyr，式-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro或-Pro-中的每个氨基酸残基的侧链均可被取代。]表示的肽或其酯或其酰胺或其盐；(14)根据(13)中所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中R1为氢原子、pGlu或Arg-Arg-Gln；(15)如下表示的根据(13)中所述的肽①Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、②Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、③Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、④pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、⑤pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、⑥Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Nle-Pro-Tyr、⑦Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)、⑧pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)、或者⑨Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Cha，或其酯或其酰胺或其盐；(16)一种如下所示的肽(i)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met(O)、(ii)Arg-Arg-Lys(Arg-Arg)-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(iii)Arg-Arg-Arg-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(iv)Arg-Arg-Lys-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(v)Arg-Arg-Ala-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(vi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)、(vii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(viii)Arg-Arg-Phe-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(ix)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(x)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)、(xi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha、(xii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Leu-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xiii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)、(xiv)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xv)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Phe-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xvi)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha、(xvii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)、(xviii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Phe-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xix)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Leu-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xx)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe2、(xxi)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Mor、(xxii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Ala-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxiii)Arg-Pro-Arg-Ala-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxiv)Arg-Pro-Lys(Me)2-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xxv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxvi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Ac)c-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxvii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(C6)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxviii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Adi)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、或者(xxix)Arg-Pro-Ala-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)，或其酯或其酰胺或其盐；(17)一种含有(1)、(7)、(13)或(16)中所述的肽或其酯或其酰胺或其盐的药物；(18)根据(17)中所述的药物，其为中枢神经功能调节剂、循环功能调节剂、心脏功能调节剂、免疫功能调节剂、消化系统功能调节剂、代谢功能调节剂或生殖系统功能调节剂；(19)根据(17)中所述的药物，其为预防或治疗HIV感染或AIDS的药物；(20)根据(17)中所述的药物，其为含有SEQ ID NO19所示氨基酸序列的蛋白质或其盐的作用剂；(21)一种如(1)、(7)、(13)或(16)中所述肽或其酯或其酰胺或其盐在制备含有如(1)、(7)、(13)或(16)中所述肽或其酯或其酰胺或其盐的药物中的用途；以及(22)提供一种预防或治疗HIV感染或AIDS的方法，其特征在于，将(1)、(7)、(13)或(16)中所述肽或其酯或其酰胺或其盐投药于哺乳动物。
本发明又进一步提供，(23)一种如(17)中所述的药物，该药物为预防或治疗如下疾病痴呆、忧郁症、多动(微细脑障碍)综合征、认知障碍、不稳定障碍、精神分裂症、恐怖症、生长激素分泌缺陷、过食症、贪食症、高胆固醇血脂症、高甘油酯血脂症、高血脂症、高催乳激素血脂症、糖尿病、癌、胰腺炎、肾疾病、特纳氏综合征、神经症、类风湿关节炎、脊髓损伤、暂时性脑缺血发作、肌肉萎缩性侧索硬化症、急性心肌梗塞、脊髓小脑变性症、骨折、创伤、特应性皮炎、骨质疏松、哮喘、癫痫、不孕症、动脉硬化、肺气肿、肺水肿、乳汁分泌不全等。
具体实施例方式
本发明中所说的氨基酸残基，就是指氨基酸失去水分子形成肽键，在蛋白质或肽中的氨基酸残基不包括N末端或C末端部分的构造。例如，所说α-氨基酸残基是指，α-氨基酸(H2NC(R0)(R1)COOHR0及R1各自相同或不同，显示任意的取代基)失去水分子形成肽键，在蛋白质或肽中不包括N末端或C末端部分的-NHC(R0)(R1)CO-的构造。另一方面，N末端的氨基酸残基以H2NC(R0)(R1)CO-、C末端的氨基酸残基以-NHC(R0)(R1)COOH表示。还有，所说β-氨基酸是指(H2NC(R0)(R1)C(R2)(R3)COOHR0、R1、R2及R3表示各自相同或不同的任意取代基)失去水分子形成肽键，在蛋白质或肽中不包括N末端或C末端部分的-NHC(R0)(R1)C(R2)(R3)CO-的构造。另一方面，N末端的氨基酸残基以H2NC(R0)(R1)C(R2)(R3)CO-表示、C末端的氨基酸残基以-NHC(R0)(R1)C(R2)(R3)COOH表示。还有，所说γ-氨基酸(H2NC(RO)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)COOHR0、R1、R2、R3、R4及R5各自相同或不同，表示任意的取代基)是指失去水分子形成肽键，在蛋白质或肽中不包括N末端或C末端部分的-NHC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)CO-的构造。另一方面，N末端的氨基酸残基以H2NC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)CO-表示，C末端的氨基酸残基以-NHC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)COOH表示。更进一步，所说ε-氨基酸(H2NC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)C(R6)(R7)C(R8)(R9)COOHR0、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8及R9各自相同或不同，表示任意的取代基)失去水分子形成肽键，在蛋白质或肽中不包括N末端或C末端部分的-NHC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)C(R6)(R7)C(R8)(R9)CO-的构造。另一方面、N末端的氨基酸残基表示H2NC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)C(R6)(R7)C(R8)(R9)CO-，C末端的氨基酸残基表示-NHC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)C(R6)(R7)C(R8)(R9)COOH。
在本说明书中，作为氨基酸有天然氨基酸或非天然氨基酸，D-构型的氨基酸或L-构型的氨基酸，也可有α-、β-、γ-、ε-型的氨基酸。
所述形成α-氨基酸、β-氨基酸、γ-氨基酸、ε-氨基酸侧链的基团，例如(1)C1-6烷基(如甲基、乙基、n-丙基、异丙基、n-丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、n-戊基等，但优选C1-3烷基等)、(2)氰基、(3)卤素(如氟、氯、溴、碘等)、(4)羟基-C1-6烷基(如羟甲基、羟乙基等)、(5)C1-6烷氧基(如甲氧基、乙氧基、n-丙氧基、异丙氧基、n-丁氧基、叔丁氧基等、优选C1-3烷氧基等)、(6)C1-6烷氧基-羰基(如甲氧基羰基、乙氧基羰基、异丙氧基羰基、叔丁氧基羰基等，优选C1-3烷氧基-羰基等)、(7)C1-4酰基(如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基等的甲酰基以及C2-4烷酰等)、(8)羟基、(9)用式-S(O)a-R21(式中，a为0～2的整数，R21为C1-6烷基(具体可举出与上述相同的例子))表示的基团(如甲硫基、甲基亚磺酰、甲磺酰、乙硫基、乙基亚磺酰、乙磺酰等)、(10)苄氧羰基、(11)对甲苯磺酰基、(12)氨基甲基、(13)巯基、(14)氨基、(15)磺基、(16)膦酰基、(17)二氧磷基、(18)羧基、(19)四唑基、(20)氨基-C1-6烷基(如氨基甲基、氨基乙基等)、(21)氨基烯丙基、(22)噻唑啉基、(23)噻吩基、(24)噁唑基、(25)呋喃甲酰基、(26)吡喃基、(27)吡啶基、(28)pyrazyl基、(29)吡嗪基、(30)嘧啶基、(31)哒嗪基、(32)吲哚基、(33)indozinyl基、(34)异吲哚基、(35)吡咯基、(36)咪唑基、(37)异噻唑啉基、(38)吡唑基、(39)苯并吡喃基、(40)嘌呤基、(41)喹嗪基、(42)喹啉基、(43)异喹啉基、(44)喹唑啉基、(45)喹喔啉基、(46)噌啉基、(47)吗啉基、(48)苯酰噻吩基、(49)苯并呋喃基、(50)苯并咪唑、(51)苯并咪唑基、(52)C3-8环烷基、(53)从上述(2)、(3)、(5)，从(17)、(20)中用(52)所述的取代基取代的C1-4烷基、(54)从上述(2)、(3)、(5)，从上述(17)、(20)中，用(52)所述的取代基取代的C1-4酰基如甲酰基、C2-4烷酰等的、(55)从上述(1)中，用(52)所述的取代基取代的C6-10芳基如苯基等(基、甲苯基、二甲苯基、苯乙烯基等)、(56)从上述(1)中，用(52)所述的取代基取代的C7-15芳烷基如苄基等(甲基苄基、对甲氧基苄基等)、(57)C7-15芳烷基(苄基、苯乙基、二苯甲基、萘甲基等)、(58)C6-10芳基(苯基、萘基、茚基等)、以及(59)氢原子等。
又，氨基酸残基的侧链和氮原子的结合也可以形成环(如脯氨酸等)、也可以由2个侧链结合形成环(如3-氨基降冰片烯羧酸等)。
作为α-氨基酸的例子有，例如，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、组氨酸、色氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、脯氨酸、哌啶酸、己氨酸，γ-甲基亮氨酸，tert-亮氨酸，正缬氨酸，高精氨酸，高丝氨酸，α-氨基异丁酸，α-氨基丁酸，鸟氨酸、α-氨基己二酸、苯甘氨酸、噻吩甘氨酸、环己甘氨酸、环己丙氨酸、噻吩丙氨酸、萘基丙氨酸、联苯丙氨酸、p-磷甲基苯丙氨酸、八羟基吲哚-2-羧酸、O-磷酪氨酸、金刚烷丙氨酸、苯基噻吩丙氨酸、吡啶丙氨酸、吡哌丙氨酸、吡嗪丙氨酸、喹啉丙氨酸、噻唑丙氨酸、同型半胱氨酸、同型苯丙氨酸、瓜氨酸、同型瓜氨酸、羟基脯氨酸(hydroxyproline)、α，β-二氨基丙酸、α，γ-二氨基丁酸、氨基丙二酸、1，2，3，4-四羟基异喹啉-3-羧酸、3-巯基缬氨酸、环亮氨酸、2-氨基-4-戊酸等。
所述β-氨基酸的例子有，例如β-丙氨酸、β-氨基丁酸、异天冬酰胺、3-氨基己二酸、3-氨基苯丙酸、3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸、3-氨基降冰片羧酸、3-氨基二环庚烷基羧酸等。
所述γ-氨基酸的例子有，例如γ-氨基丁酸、异谷氨酰胺、Statine、4-氨基-3-羟基-5-环己戊烷酸、4-氨基-3-羟基-5-苯基戊烷酸、6-氨基青霉烷酸、3-氨基金刚烷-1-羧酸等。
所述ε-氨基酸的示例有，例如、ε-氨基己酸、4-氨基甲基-环己羧酸等。
作为该天然氨基酸有，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、甲硫氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、组氨酸、色氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、脯氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸等。
作为非天然氨基酸有，例如己氨酸、γ-甲基亮氨酸、tert-亮氨酸、正缬氨酸、高精氨酸、高丝氨酸、氨基异丁酸、氨基己二酸(如α-氨基己二酸)、苯基甘氨酸、噻吩甘氨酸、环己甘氨酸、氨基丁酸、β-丙氨酸、环己丙氨酸、噻吩丙氨酸、萘基丙氨酸、金刚烷丙氨酸、苯基噻吩丙氨酸、吡啶丙氨酸、哌啶丙氨酸、吡嗪丙氨酸、喹啉丙氨酸、噻唑丙氨酸、异天冬酰胺、异谷氨酰胺、同型半胱氨酸、同型苯丙氨酸、同型瓜氨酸、羟基脯氨酸(hydroxyproline)、二氨基丙酸、二氨基丁酸、氨基苯甲酸、所述天然氨基酸、非天然氨基酸的N-甲基化物等。
被取代为上述那些氨基酸残基(的侧链)的取代基有，(1)C1-6烷基(如甲基、乙基、n-丙基、异丙基、n-丁基、异丁基、sec-丁基、tert-丁基、n-戊烷基等，但优选C1-3烷基等)、(2)氰基、(3)卤素(如氟、氯、溴、碘等)、(4)羟基-C1-6烷基(如羟甲基、羟乙基等)、(5)C1-6烷氧基(如甲氧基、乙氧基、n-丙氧基、异丙氧基、n-丁氧基、tert-丁氧基等，优选C1-3烷氧基等)、(6)C1-6烷氧基-羰基(如甲氧基羰基、乙氧基羰基、异丙氧基羰基、tert-丁氧基羰基等，优选C1-3烷氧基-羰基等)、(7)C1-4酰基(如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基等的甲酰基及C2-4烷酰等)、(8)羟基、(9)用式-S(O)a-R21(式中，a为0～2的整数，R21用C1-6烷基(具体可举出与上述相同的例子)表示的基团(如甲硫基、甲基亚磺酰、甲磺酰、乙硫基、乙基亚磺酰、乙磺酰等)、(10)苄氧羰基、(11)对甲苯磺酰基、(12)氨基甲基、(13)巯基、(14)氨基、(15)磺基、(16)膦酰基、(17)二氧磷基、(18)羧基、(19)四唑基、(20)氨基-C1-6烷基(如氨基甲基、氨基乙基等)、(21)氨基烯丙基、(22)噻唑啉基、(23)噻吩基、(24)噁唑基、(25)呋喃基、(26)吡喃基、(27)吡啶基、(28)pyrazyl基、(29)吡嗪基、(30)嘧啶基、(31)哒嗪基、(32)吲哚基、(33)indozinyl基、(34)异吲哚基、(35)吡咯基、(36)咪唑基、(37)异噻唑啉基、(38)吡唑基、(39)苯并吡喃基、(40)嘌呤基、(41)喹嗪基、(42)喹啉基、(43)异喹啉基、(44)喹唑啉基、(45)喹喔啉基、(46)噌啉基、(47)吗啉基、(48)苯酰噻吩基、(49)苯并呋喃基、(50)苯并咪唑、(51)苯并咪唑基、(52)C3-8环烷基、(53)氧代基、(54)从上述(2)、(3)、(5)中，从(19)、(22)中用(52)所述的取代基取代的C1-4烷基、(55)从上述(2)、(3)、(5)，上述(19)、(22)中用(52)所述的取代基取代的的C1-4酰基如甲酰基、C2-4烷酰等、(56)从上述(1)中，用(52)所述取代基取代的C6-10芳基如苯基等(基、甲苯基、二甲苯基、苯乙烯基等)、(57)从上述(1)中，用(52)所述的取代基取代的C7-15芳烷基如苄基等(甲基苄基、对甲氧基苄基等)、(58)C7-15芳烷基(苄基、苯乙基、二苯甲基、萘甲基等)、(59)C6-10芳基(苯基、萘基、茚基等)、(60)精氨酰基、(61)组氨酰基以及(62)精氨酰-精氨酰基等。
所述中性取代基有，(1)C1-6烷基(如、甲基、乙基、n-丙基、异丙基、n-丁基、异丁基、sec-丁基、tert-丁基、n-戊烷基等，但优选C1-3烷基等)、(2)氰基、(3)卤素(如、氟、氯、溴、碘等)、(4)羟基-C1-6烷基(如、羟甲基、羟乙基等)、(5)羟基、(6)氨基甲酰基、(7)巯基、(8)用式-S(O)a-R21(式中符号所表示的意义同前)表示的基团、(9)C6-10芳基(如苯基、萘基、茚基等)、(10)噻吩基、(11)噁唑基、(12)呋喃基、(13)吲哚基、(14)indozniyl基、(15)异吲哚基、(16)C3-8环烷基、(17)氧代基、(18)从上述(2)，(3)，(5)中，用(16)所述的取代基取代而来的C1-6烷基、(19)从上述(1)中，用(16)所述的取代基取代的C6-10芳基如苯基、萘基等(基、甲苯基、二甲苯基、苯乙烯基等)、(20)从上述(1)中，用(16)所述的取代基取代的C7-15芳烷基如苄基等(甲苄基、甲氧苄基等)。
所述酸性取代基，可列举以下各种基团分别用羧基、磺基、四唑基等取代的C1-4烷基、苯基、萘基等的C6-10芳基或苄基等的C7-15芳烷基、羧基。
所述碱性取代基包括，(1)氨基-C1-6烷基(氨基甲基、氨基乙基等)、(2)氨基丙烯基、(3)吡啶基、(4)pyrazyl基、(5)吡嗪基、(6)哒嗪基、(7)咪唑基、(8)吡唑基、(9)吡唑基、(10)吗啉基、(11)氨基、(12)从上述(3)中用(10)所述的取代基取代的C1-4烷基、(13)从上述(1)中用(11)所述的取代基取代的C7-15芳烷基如苄基等、(14)从上述(1)中用(11)所述的取代基取代的C6-10芳基如苯基、萘基等、(15)精氨酰基、(16)组氨酰基及(17)精氨酰-精氨酰基等。
在本说明书中，作为酸性氨基酸(残基)其氨基酸具体举例为，例如，在侧链上有羧基、磺基、四唑基之类的酸性基。作为其具体示例为谷氨酸、焦谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、同型半胱氨酸、3-(5-四唑基)丙氨酸、2-氨基-4-(5-四唑基)丁酸等。
在本说明书中，作为碱性氨基酸(残基)其氨基酸具体举例为，例如，组氨酸、精氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、二氨基丙酸、二氨基丁酸、高精氨酸等。作为侧链被取代的碱性氨基酸(残基)其具体地有，例如Nα-乙酰基精氨酸、Nε-甲苯磺酰基精氨酸、Nε-乙酰基赖氨酸、Nε-甲基赖氨酸、Nε-甲苯磺酰基赖氨酸等。
在本说明书中，作为中性氨基酸(残基)其氨基酸具体举例为，例如，丙氨酸、缬氨酸、正缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、别异亮氨酸、己氨酸、T-亮氨酸、γ-甲基亮氨酸、脯氨酸、苯基甘氨酸、苯基丙氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、羟基脯氨酸(hydroxyproline)、环己丙氨酸、萘基丙氨酸等。
在本说明书中，作为在侧链上有芳香族性氨基酸(残基)其氨基酸具体举例为，例如，色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、2-噻吩丙氨酸、组氨酸、吡啶丙氨酸(2-吡啶丙氨酸)、O-甲基酪氨酸等。作为在侧链上有侧链被取代的芳香族性氨基酸(残基)，其氨基酸的具体示列有，例如3-碘酪氨酸、p-磷甲基苯丙氨酸、O-磷酪氨酸等。
在本说明书中，作为在侧链上有羟基的氨基酸(残基)有，例如丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、羟基脯氨酸(hydroxyproline)等。
本发明中的肽以及肽链，按照惯例肽的标记描述，左端为N末端(氨基端)，右端为C末端(羧基端)。本发明的肽以及肽链其C末端通常为羧基(-COOH)或羧酸根(-COO-)，但是C末端也可以为酰胺(-CONH2)或酯化(-CO或)。其中所示酯中的R有，例如，C1-6烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、或正丁基等；C3-8环烷基包括环戊基和环己基等；C6-12芳基包括苯基和a-萘基等；C7-14芳烷基如苯基-C1-2烷基(如苯甲基、苯乙基、二苯甲基等)或a-萘基C1-2烷基(如a-萘甲基等)，此外还有通常适用于口服给药的酯如三甲基乙酰氧甲基。
当本发明的肽除了C末端以外还有羧基或羧酸根的时候，可被酰胺化或酯化，这些基团也包括在本发明的多肽之内。此时的酯可使用上述列出的C末端的酯等。
另外，在本发明的肽或肽链上也包括N末端氨基酸残基的氨基用取代基(①C2-6烷酰基如甲酰基、乙酰基等、C1-8酰基如胍基乙酰基、噻吩丙烯酰基、吡啶乙酰基等；②C1-6烷基如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、sec-丁基、tert-丁基、戊基、己基等；③C6-10芳基如苯基、萘基等或C7-16芳烷基如苄基、苯乙基等；④甲苯磺酰基、⑤苄基氧基羰基、⑥以式-S(O)a-R22(式中，aは表示0～2的整数，R22表示C1-6烷基(具体示例包括与上述相同的基团))表示的基(如，甲硫基、甲磺苯基、甲磺酰基、乙硫基、乙磺苯基、乙磺酰基等)、⑦t-丁氧基羰基、⑧N-9-芴基甲氧基羰基等)取代的衍生物；所述N末端在体内切割，形成的谷氨酰基焦谷氨酸化；分子内的氨基酸侧链上的取代基(如-OH、-SH、氨基、咪唑基、吲哚基、胍基等)受适当基团(C1-6烷酰基如C1-6酰基，如甲酰基、乙酰基等)保护，或为结合蛋白质如通过糖链连接的糖蛋白质等。
在上面所述的式(I)P1-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-P2-P3-Gly-Pro-P4-P5、式(II)Q1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Q2-Gly-Q5-Q3-Q4、及式(III)R1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-R2-Pro-R3中每个氨基酸残基(侧链)均可被取代，作为取代基，包括上面叙述过的取代基等。
在本说明书中，P1、Q1及R1表示「氢原子或者各自相同或不同且侧链可被取代的由1至25个氨基酸构成的氨基酸残基或肽链」。
所述在该「侧链可被取代的1至25个氨基酸」中的取代基，包括与上述的「在氨基酸残基的侧链上可被取代的取代基」相同的取代基等。
当P1、Q1以及R1表示「侧链可被取代的氨基酸残基」时，其优选可被取代的焦谷氨酸或侧链可被取代的谷氨酰胺，更优选焦谷氨酸或谷氨酰胺等。
所述在这种「侧链可被取代的氨基酸残基」、「可被取代的焦谷氨酸」、「侧链可被取代的谷氨酰胺」中的氨基酸残基的取代基，包括与上述的「可被取代为氨基酸残基的侧链的取代基」相同的取代基等。
又，所述「可被取代的焦谷氨酸」其中优选的取代基有，苄氧基羰基等。
P1、Q1及R1表示「各自相同或不同且侧链可被取代的由2至25个氨基酸构成的肽链」的时候，具体例子为，用式Y1-Y2(式中，Y1表示各自相同或不同且侧链可被取代的由1至17个氨基酸构成的氨基酸残基或肽链，Y2表示各自相同或不同且侧链可被取代的由1至8个氨基酸构成的氨基酸残基或肽链)表示的肽等。
用所述Y1及Y2表示的氨基酸残基或肽链中的氨基酸残基之侧链的取代基，包括与上述的「在氨基酸残基的侧链上可被取代的取代基」相同的取代基等。
上述Y1的具体例子为，例如用(a)式A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中A1-A17表示各自相同或不同，其侧链表示可被取代的氨基酸残基)，(b)式A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(c)式A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(d)式A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(e)式A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A1 5-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(f)式A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(g)式A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(h)式A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(i)式A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(j)式A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(k)式A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(l)式A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(m)式A13-A14-A15-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(n)式A14-A15-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(O)式A15-A16-A17(式中符号表示的意义同上)，(p)式A16-A17(式中符号表示的意义同上)或者(q)A17(A17表示的意义同上)表示的氨基酸残基或肽链等。
上述A1は表示其侧链可被取代的氨基酸残基，但优选有芳香族侧链的氨基酸残基，更优选有芳香族侧链的L-氨基酸残基，再优选L-酪氨酸等。
上述A2及A3分别表示相同或不同，并且其侧链可被取代的氨基酸残基，但优选使用侧链可被取代的中性氨基酸残基，更优选侧链可被取代的L-中性氨基酸残基，再优选A2为L-酪氨酸等，A3为L-缬氨酸等。
上述A4表示其侧链可被取代的氨基酸残基，但优选侧链可被取代的中性或碱性氨基酸残基，更优选侧链可被取代的L-中性或L-碱性氨基酸残基，再优选L-赖氨酸或Nε-乙酰赖氨酸等。
上述A5表示侧链可被取代的氨基酸残基，但优选侧链可被取代的中性氨基酸残基，更优选可被取代的L-脯氨酸，再优选L-脯氨酸。
上述A6及A9分别表示相同或不同，并且其侧链可被取代的氨基酸残基，但优选侧链可被取代的碱性氨基酸残基，更优选侧链可被取代的L-碱性氨基酸残基，再优选L-精氨酸等。
上述A7及A10分别表示相同或不同，并且其侧链可被取代的氨基酸残基，但优选在侧链上有羟基氨基酸残基或侧链可被取代的中性氨基酸残基等。
所述A7优选使用可被取代的甘氨酸，尤其优选使用甘氨酸等。
上述A8表示侧链可被取代的氨基酸残基，但优选L-脯氨酸和在侧链上有羟基的氨基酸残基，更优选L-丝氨酸、L-脯氨酸或羟基脯氨酸(hydroxyproline)。
作为上述A10优选在侧链上有羟基的氨基酸残基侧链或可被取代的中性氨基酸残基，更优选丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺等。
上述A11至A14分别表示相同或不同并且侧链可被取代的氨基酸残基，但优选可被取代的中性氨基酸残基，更优选A11为甘氨酸，A12为L-脯氨酸，A13为甘氨酸，A14为L-丙氨酸，L-脯氨酸等。
上述A15表示侧链可被取代的氨基酸残基，但优选有芳香族性侧链的氨基酸残基，更优选有芳香族性侧链的L-氨基酸残基，再优选L-色氨酸等。
上述A16表示侧链可被取代的氨基酸残基，但优选侧链可被取代的中性氨基酸残基，更优选具有氨基甲酰基的中性L-氨基酸残基，进一步优选L-谷氨酰胺。
所述具有氨基甲酰基的中性L-氨基酸残基，例如L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺等。
A17表示侧链可被取代的氨基酸残基，但优选侧链可被取代的中性氨基酸残基，更优选甘氨酸等。
作为上述Y2的具体示例使用以下所示的氨基酸残基或肽链等，例如①式B1-B2-B3-B4-B5-B6-B7-B8(式中B1至B8各自表示相同或不同并且侧链可被取代的氨基酸残基)，②式B2-B3-B4-B5-B6-B7-B8(式中各符号表示的意义同上)；③式B3-B4-B5-B6-B7-B8(式中各符号表示的意义同上)；④式B4-B5-B6-B7-B8(式中各符号表示的意义同上)；⑤式B5-B6-B7-B8(式中各符号表示的意义同上)；⑥式B6-B7-B8(式中各符号表示的意义同上)；⑦式B7-B8(式中各符号表示的意义同上)或⑧式B8(B8与上述表示的意义同上)。
上述B1は表示侧链可被取代的氨基酸残基，但优选侧链可被取代的中性氨基酸残基，更优选侧链可被取代的中性L-氨基酸残基，进一步优选侧链可被取代的甘氨酸，最优选甘氨酸等。
上述B2至B4表示各自相同或不同且侧链可被取代的氨基酸残基，但优选侧链可被取代的碱性氨基酸残基，更优选侧链可被取代的碱性L-氨基酸残基，进一步优选B2为L-精氨酸，B3为L-精氨酸，B4为L-赖氨酸等。
上述B5表示侧链可被取代的氨基酸残基，但优选有芳香族性侧链的氨基酸残基，更优选有芳香族性侧链的L-氨基酸残基，进一步优选L-苯丙氨酸等。
上述B6及B7表示各自相同或不同且侧链可被取代的氨基酸残基，但优选侧链可被取代的碱性氨基酸残基，更优选侧链可被取代的碱性L-氨基酸残基，进一步优选L-精氨酸等。
上述B8表示侧链可被取代的氨基酸残基，但优选侧链可被取代的谷氨酰胺，更优选L-谷氨酰胺等。
作为Y1和Y2的组合为用上述式(a)+上述式①表示的时候(即，x1用A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-B1-B2-B3-B4-B5-B6-B7-B8表示的时候，省略下面组合的说明)，可以举出以下情形用上述式(a)+上述式②表示的时候，用上述式(a)+上述式③表示的时候，用上述式(a)+上述式④表示的时候，用上述式(a)+上述式⑤表示的时候，用上述式(a)+上述式⑥表示的时候，用上述式(a)+上述式⑦表示的时候，用上述式(a)+上述式⑧表示的时候，用上述式(b)+上述式①表示的时候，用上述式(b)+上述式②表示的时候，
用上述式(b)+上述式③表示的时候，用上述式(b)+上述式④表示的时候，用上述式(b)+上述式⑤表示的时候，用上述式(b)+上述式⑥表示的时候，用上述式(b)+上述式⑦表示的时候，用上述式(b)+上述式⑧表示的时候，用上述式(c)+上述式①表示的时候，用上述式(c)+上述式②表示的时候，用上述式(c)+上述式③表示的时候，用上述式(c)+上述式④表示的时候，用上述式(c)+上述式⑤表示的时候，用上述式(c)+上述式⑥表示的时候，用上述式(c)+上述式⑦表示的时候，用上述式(c)+上述式⑧表示的时候，用上述式(d)+上述式①表示的时候，用上述式(d)+上述式②表示的时候，用上述式(d)+上述式③表示的时候，用上述式(d)+上述式④表示的时候，用上述式(d)+上述式⑤表示的时候，用上述式(d)+上述式⑥表示的时候，用上述式(d)+上述式⑦表示的时候，用上述式(d)+上述式⑧表示的时候，用上述式(e)+上述式①表示的时候，用上述式(e)+上述式②表示的时候，用上述式(e)+上述式③表示的时候，用上述式(e)+上述式④表示的时候，用上述式(e)+上述式⑤表示的时候，用上述式(e)+上述式⑥表示的时候，用上述式(e)+上述式⑦表示的时候，
用上述式(e)+上述式⑧表示的时候，用上述式(f)+上述式①表示的时候，用上述式(f)+上述式②表示的时候，用上述式(f)+上述式③表示的时候，用上述式(f)+上述式④表示的时候，用上述式(f)+上述式⑤表示的时候，用上述式(f)+上述式⑥表示的时候，用上述式(f)+上述式⑦表示的时候，用上述式(f)+上述式⑧表示的时候，用上述式(g)+上述式①表示的时候，用上述式(g)+上述式②表示的时候，用上述式(g)+上述式③表示的时候，用上述式(g)+上述式④表示的时候，用上述式(g)+上述式⑤表示的时候，用上述式(g)+上述式⑥表示的时候，用上述式(g)+上述式⑦表示的时候，用上述式(g)+上述式⑧表示的时候，用上述式(h)+上述式①表示的时候，用上述式(h)+上述式②表示的时候，用上述式(h)+上述式③表示的时候，用上述式(h)+上述式④表示的时候，用上述式(h)+上述式⑤表示的时候，用上述式(h)+上述式⑥表示的时候，用上述式(h)+上述式⑦表示的时候，用上述式(h)+上述式⑧表示的时候，用上述式(i)+上述式①表示的时候，用上述式(i)+上述式②表示的时候，用上述式(i)+上述式③表示的时候，用上述式(i)+上述式④表示的时候，
用上述式(i)+上述式⑤表示的时候，用上述式(i)+上述式⑥表示的时候，用上述式(i)+上述式⑦表示的时候，用上述式(i)+上述式⑧表示的时候，用上述式(j)+上述式①表示的时候，用上述式(j)+上述式②表示的时候，用上述式(j)+上述式③表示的时候，用上述式(j)+上述式④表示的时候，用上述式(j)+上述式⑤表示的时候，用上述式(j)+上述式⑥表示的时候，用上述式(j)+上述式⑦表示的时候，用上述式(j)+上述式⑧表示的时候，用上述式(k)+上述式①表示的时候，用上述式(k)+上述式②表示的时候，用上述式(k)+上述式③表示的时候，用上述式(k)+上述式④表示的时候，用上述式(k)+上述式⑤表示的时候，用上述式(k)+上述式⑥表示的时候，用上述式(k)+上述式⑦表示的时候，用上述式(k)+上述式⑧表示的时候，用上述式(l)+上述式①表示的时候，用上述式(l)+上述式②表示的时候，用上述式(l)+上述式③表示的时候，用上述式(l)+上述式④表示的时候，用上述式(l)+上述式⑤表示的时候，用上述式(l)+上述式⑥表示的时候，用上述式(l)+上述式⑦表示的时候，用上述式(l)+上述式⑧表示的时候，用上述式(m)+上述式①表示的时候，
用上述式(m)+上述式②表示的时候，用上述式(m)+上述式③表示的时候，用上述式(m)+上述式④表示的时候，用上述式(m)+上述式⑤表示的时候，用上述式(m)+上述式⑥表示的时候，用上述式(m)+上述式⑦表示的时候，用上述式(m)+上述式⑧表示的时候，用上述式(n)+上述式①表示的时候，用上述式(n)+上述式②表示的时候，用上述式(n)+上述式③表示的时候，用上述式(n)+上述式④表示的时候，用上述式(n)+上述式⑤表示的时候，用上述式(n)+上述式⑥表示的时候，用上述式(n)+上述式⑦表示的时候，用上述式(n)+上述式⑧表示的时候，用上述式(o)+上述式①表示的时候，用上述式(o)+上述式②表示的时候，用上述式(o)+上述式③表示的时候，用上述式(o)+上述式④表示的时候，用上述式(o)+上述式⑤表示的时候，用上述式(o)+上述式⑥表示的时候，用上述式(o)+上述式⑦表示的时候，用上述式(o)+上述式⑧表示的时候，用上述式(p)+上述式①表示的时候，用上述式(p)+上述式②表示的时候，用上述式(p)+上述式③表示的时候，用上述式(p)+上述式④表示的时候，用上述式(p)+上述式⑤表示的时候，用上述式(p)+上述式⑥表示的时候，
用上述式(p)+上述式⑦表示的时候，用上述式(p)+上述式⑧表示的时候，用上述式(q)+上述式①表示的时候，用上述式(q)+上述式②表示的时候，用上述式(q)+上述式③表示的时候，用上述式(q)+上述式④表示的时候，用上述式(q)+上述式⑤表示的时候，用上述式(q)+上述式⑥表示的时候，用上述式(q)+上述式⑦表示的时候，及用上述式(q)+上述式⑧表示的时候，其中，优选用上述式(a)+上述式①表示的时候，用上述式(b)+上述式①表示的时候，用上述式(c)+上述式①表示的时候，用上述式(d)+上述式①表示的时候，用上述式(e)+上述式①表示的时候，用上述式(f)+上述式①表示的时候，用上述式(g)+上述式①表示的时候，用上述式(h)+上述式①表示的时候，用上述式(i)+上述式①表示的时候，用上述式(j)+上述式①表示的时候，用上述式(k)+上述式①表示的时候，用上述式(l)+上述式①表示的时候，用上述式(m)+上述式①表示的时候，用上述式(n)+上述式①表示的时候，用上述式(o)+上述式①表示的时候，用上述式(p)+上述式①表示的时候，及用上述式(q)+上述式①表示的时候。
其中更优选的例子有，用上述式(a)+上述式①表示的时候以及用上述式(b)+上述式①表示的时候。
用上述式(a)+上述式①表示的时候以及用上述式(b)+上述式①表示的时候，再优选的例子有，如下所示。
所说用上述式(b)+上述式①表示的时候，是指P1、Q1和/或R1用式A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-B1-B2-B3-B4-B5-B6-B7-B8(式中，A2至A17及B1至B8表示的意义同上)表示的情形，此时优选的具体示例有时为A2及A3为各自相同或不同，侧链可被取代的L-中性氨基酸残基，优选A2为L-亮氨酸等，A3为L-缬氨酸等，A4为侧链可被取代的L-中性或L-碱性氨基酸残基，优选L-谷氨酰胺、L-赖氨酸或Nε-乙酰赖氨酸等，A5为侧链可被取代的L-脯氨酸，优选L-脯氨酸等，A6及A9为各自相同或不同，侧链可被取代的L-碱性氨基酸残基，优选L-精氨酸等，A7为可被取代的甘氨酸，优选甘氨酸等，A8为L-脯氨酸或在侧链上有羟基的氨基酸残基，优选L-丝氨酸、L-脯氨酸或羟脯氨酸(hydroxyproline)等，A10为在侧链上有羟基的氨基酸残基或侧链可被取代的中性氨基酸残基，优选L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-天冬酰胺等，A11为甘氨酸，A12为L-脯氨酸，A13为甘氨酸，A14为L-丙氨酸或L-脯氨酸等，A15为具有芳香族侧链的L-氨基酸残基，优选L-色氨酸等，A16为具有氨基甲酰的中性L-氨基酸残基，优选L-谷氨酰胺、A17为中性氨基酸残基，优选甘氨酸等，B1为其侧链可被取代的中性L-氨基酸残基，优选可被取代的甘氨酸，更优选甘氨酸等、B2至B4为各自相同或不同且侧链可被取代的碱性L-氨基酸残基，优选B2为L-精氨酸，B3为L-精氨酸，B4为L-赖氨酸等，
B5为具有芳香族侧链的L-氨基酸残基，优选L-苯丙氨酸等，B6及B7为各自相同或不同且侧链可被取代的碱性L-氨基酸残基，优选L-精氨酸等，B8为侧链可被取代的谷氨酰胺，优选L-谷氨酰胺、L-焦谷氨酸等。
作为P1、Q1及R1，优选使用(1)氢原子、(2)Arg-Gln、(3)Arg、(4)Gln、(5)pGlu、或(6)Arg-Arg-Gln等。
进一步，所述P1更优选氢原子、pGlu或Arg-Arg-Gln，所述Q1更优选氢原子、pGlu或ARg-Arg-Gln，所述R1更优选氢原子、pGlu或Arg-Arg-Gln(再进一步优选氢原子或Arg-Arg-Gln)。
在本说明书中，P2表示侧链可被取代的中性氨基酸残基或侧链可被取代的碱性氨基酸残基，但优选侧链可被取代的L-丙氨酸、L-组氨酸等。
在本说明书中，P3和Q2表示侧链可被取代的中性氨基酸残基、侧链可被取代的芳香族氨基酸残基或者侧链可被取代的碱性氨基酸残基。所述对碱性氨基酸残基侧链的取代，包括有，C1-4酰基、甲苯磺酰基、C1-6烷基等。
所述C1-4酰基，例如有，甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基等以及C2-4烷酰等。
所述C1-6烷基，例如有甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、sec-丁基、tert-丁基、戊基、己基等。
所述P3和Q2，优选侧链可被取代的L-赖氨酸、侧链可被取代的L-己氨酸、或侧链可取代的L-精氨酸等，更优选侧链为C1-4酰基(例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基等的以及C2-4烷酰等)、C1-6烷基(例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、sec-丁基、tert-丁基、戊基、己基等)或用甲苯磺酰基取代的L-赖氨酸、L-己氨酸或L-精氨酸等，更优选L-赖氨酸、L-己氨酸、L-精氨酸、Nε-乙酰基赖氨酸、Nε-甲酰基赖氨酸、Nε-甲苯磺酰基赖氨酸、Ng-甲苯磺酰基精氨酸等。
进一步，所述P3和Q2，优选可被取代的L-精氨酸或可被取代的L-赖氨酸。
在本说明书中，P4及Q3表示结合键或侧链可被取代的中性或侧链可被取代的芳香族氨基酸残基。所述P4和Q3优选结合键，侧链可被取代的L-己氨酸、侧链可被取代的L-甲硫氨酸、侧链可被取代的L-甲硫氨酸硫氧化物或侧链可被取代的L-丙氨酸等，更优选包括结合键、L-己氨酸、L-甲硫氨酸、L-甲硫氨酸硫氧化物或者L-环己基丙氨酸等。
作为P4，特别优选L-己氨酸、L-甲硫氨酸或L-环己基丙氨酸等。作为Q3特别优选结合键、L-甲硫氨酸或L-环己基丙氨酸等。
在本说明书中，P5及Q4表示①侧链可被取代的氨基酸残基或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；②羟基或③侧链可被取代的氨基酸残基和侧链可被取代的氨基酸残基结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物。
所述P5及Q4优选①侧链可被取代的中性氨基酸残基或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；②羟基或③侧链可被取代的中性氨基酸残基和侧链可被取代的具有芳香族侧链的氨基酸残基结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物等。
所述P5及Q4进一步优选①侧链可被取代的L-脯氨酸或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；②侧链可被取代的4-氯苯丙氨酸或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；③侧链可被取代的2-萘基丙氨酸或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；④侧链可被取代的环己丙氨酸或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；⑤羟基或⑥可被取代的L-脯氨酸和以下情形的氨基酸(a)侧链可被取代的L-苯丙氨酸；(b)侧链可被取代的L-酪氨酸；(c)侧链可被取代的L-2-噻吩丙氨酸；(d)侧链可被取代的L-苯基甘氨酸或(e)由侧链可被取代的L-2-吡啶丙氨酸结合形成的二肽链，或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物等。
所述P5及Q4进一步优选如，(1)L-脯氨酸或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；(2)4-氯苯丙氨酸或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；(3)2-萘基丙氨酸或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；(4)环己丙氨酸或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；(5)羟基；(6)L-脯氨酸和L-苯丙氨酸结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物；(7)由L-脯氨酸和L-酪氨酸结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物；(8)L-脯氨酸和L-2-噻吩丙氨酸结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物；(9)L-脯氨酸和L-苯基甘氨酸结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物；(10)L-脯氨酸和4-氯苯丙氨酸结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物；(11)L-脯氨酸和2-萘基丙氨酸结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物；(12)L-脯氨酸和3-碘酪氨氨酸结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物；(13)L-脯氨酸和O-甲基酪氨酸结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物；或(14)L-脯氨酸和L-2-吡啶丙氨酸结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物等。
所述「-P4-P5」及「-Q3-Q4」，特别优选(1)-Nle-Pro-Phe、(2)-Nle-Pro-Tyr、(3)-Nle-Pro、(4)-Nle、(5)-Met-Pro-Phe、(6)-Nle-Pro-Thi、(7)-Nle-Pro-Phg、(8)-Nle-Pro-Pya(2)、(9)-Met(O)、(10)-Met-Phe(Cl)、(11)-Met-Pro-Phe(Cl)、(12)-Met-Pro-Nal(2)、(13)-Met-Nal(2)、(14)-Met-Cha、(15)-Cha-Pro-Phe、(16)-Cha、(17)-Met-Pro-Tyr(I)、(18)-Cha-Pro-Phe(Cl)、(19)-Cha-Phe(Cl)、(20)-Nle-Pro-Tyr(I)、(21)-Nle-Phe(Cl)、(22)-Cha-Pro-Tyr(I)、(23)-Cha-Tyr(I)、(24)-Cha-Phe、(25)-Met-Phe、(26)-Met-Pro-Tyr(Me)、(27)-OH、(28)-Met、(29)-Met-Pro-Phe、以及(30)-Ala-Pro-Phe(Cl)等。
另外，所述「-P4-P5」，优选(1)-Cha-Pro-Phe(Cl)、(2)-Cha-Pro-Phe、(3)-Met-Pro-Phe(Cl)、(4)-Met-Pro-Phe(5)-Cha-Phe、以及(6)-Met-Phe，特别优选(1)-Cha-Pro-Phe(Cl)、(2)-Cha-Pro-Phe、(3)-Met-Pro-Phe(Cl)、以及(4)-Met-Pro-Phe。再有，所述「-Q3-Q4」，特别优选(1)-Met-Pro-Phe(Cl)、(2)-Cha-Phe(Cl)、(3)-Cha-Pro-Phe(Cl)、(4)-Cha、(5)-Cha-Pro-Phe、(6)-OH、(7)-Met、(8)-Met-Pro-Phe、以及(9)-Ala-Pro-Phe(Cl)。
在该说明书中，Q5表示其侧链可被取代的中性氨基酸残基，优选可被取代的L-脯氨酸，优选可被取代的L-甘氨酸或可被取代的L-丙氨酸。
Q5特别优选L-脯氨酸，L-甘氨酸或L-丙氨酸。
在说明书中，R2表示可被取代的L-环己丙氨酸，优选L-环己丙氨酸。
在本说明书中，R3表示可被取代的L-苯丙氨酸，可被取代的L-2-萘基丙氨酸，可被取代的L-环己丙氨酸或可被取代的酪氨酸，优选L-4-氯苯丙氨酸、L-2-萘基丙氨酸、L-环己丙氨酸、L-苯丙氨酸或L-酪氨酸。
本发明肽的具体示例包括(1)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(2)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(3)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(4)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)、(5)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(6)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha、(7)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(8)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(9)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、(10)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(11)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、(12)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(13)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(14)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Nle-Pro-Tyr、(15)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、(16)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(17)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(18)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met、(19)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro、(20)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met(O)、(21)Arg-Arg-Lys(Arg-Arg)-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(22)Arg-Arg-Arg-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(23)Arg-Arg-Lys-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(24)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(25)Arg-Arg-Ala-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(26)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(27)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met、(28)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)、(29)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(30)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(31)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(32)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)、(33)Arg-Arg-Phe-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(34)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(35)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)、(36)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha、(37)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)、(38)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Leu-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(39)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)、(40)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)、(41)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(42)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(43)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Phe-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(44)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(45)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha、(46)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)、(47)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Phe、(48)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Phe-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(49)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Cha、(50)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Leu-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(51)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe2、(52)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Mor、(53)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Ala-Pro-Phe(Cl)、(54)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Met-Pro-Phe(Cl)、(55)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-N-MeAla-Met-Pro-Phe(Cl)、(56)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Ala-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(57)Arg-Pro-Arg-Ala-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(58)Arg-Pro-Ala-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(59)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)-NH2、(60)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pyn、(61)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Pyn、(62)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Cha、(63)Arg-Pro-Lys(Me)2-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(64)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys(Me)2-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(65)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(66)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Ac)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(67)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(C6)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、以及(68)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Adi)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)等。
所述用上述式(I)P1-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-P2-P3-Gly-Pro-P4-P5表示肽或其酯或其盐的具体示例包括①Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、②Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、③Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、④Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、⑤Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、⑥Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)、⑦pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、⑧pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、⑨Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Phe。
所述用上述式(II)Q1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Q2-G1y-Q5-Q3-Q4表示肽或其酯或其盐的具体示例包括(i)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(ii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(iii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)、(iv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(v)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha、(vi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、(vii)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(viii)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met、(ix)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro、(x)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xi)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met、(xiii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xiv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Ala-Pro-Phe(Cl)、(xv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Met-Pro-Phe(Cl)、(xvi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe-Ala-Met-Pro-Phe(Cl)、(xvii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pyn、(xviii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Pyn、(xix)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Cha、或(xx)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys(Me)2-Gly-Pro-Met-Pro-Phe。
所述用上述式(III)R1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-R2-Pro-R3(III)表示肽或其酯或其盐的具体示例包括①Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、②Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、③Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、④pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、⑤pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、⑥Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Nle-Pro-Tyr、⑦Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)、⑧pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)、⑨Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Cha。
进一步，本发明还涉及下列所示的肽或其酯或其盐(i)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met(O)、(ii)Arg-Arg-Lys(Arg-Arg)-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(iii)Arg-Arg-Arg-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(iv)Arg-Arg-Lys-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(v)Arg-Arg-Ala-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(vi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)、(vii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(viii)Arg-Arg-Phe-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(ix)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(x)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)、(xi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha、(xii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Leu-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xiii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)、(xiv)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xv)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Phe-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xvi)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha、(xvii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)、(xviii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Phe-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xix)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Leu-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xx)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe2、(xxi)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Mor、(xxii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Ala-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxiii)Arg-Pro-Arg-Ala-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxiv)Arg-Pro-Lys(Me)2-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xxv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxvi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Ac)c-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxvii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(C6)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxviii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Adi)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、或(xxix)Arg-Pro-Ala-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)。
作为本发明肽盐可以使用与生理上可接受的碱(如碱金属等)或酸(无机酸或有机酸)形成的盐，优选生理上可接受的酸加成盐。这类的盐有，与无机酸(例如，盐酸、磷酸、氢溴酸、硫酸)形成的盐，或与有机酸(例如，乙酸、甲酸、丙酸、延胡索酸、马来酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、草酸、苯甲酸、甲磺酸、苯磺酸)形成的盐等。
本发明制备的肽方法，可从人或温血动物的组织或细胞中将肽纯化得到天然型配体之后，按照后述的肽合成法加以适当的修饰而得，也可不以天然型配体作为原材料按照后述的肽合成法制备得到。
另外，当从人或温血动物组织或细胞中制备天然型配体时，首先将人或温血动物组织或细胞匀浆，然后用酸等抽提，通过盐析、透析凝胶过滤、反向层析、离子交换层析、亲和层析法等多种层析技术的联用来分离纯化该抽提物。
天然型配体的获得方法可以按照，如，WO 99/33976号(特願平10-220853号)描述的方法制备而得。
本发明的肽可用公知的肽合成方法制备。其肽的合成法，例如可以用固相合成法和液相合成法中的任意一种。即，当能够构成肽的那部分肽或氨基酸与其残余部分缩合，其产物有保护基时，通过除去保护基团可以制备目的肽。此时的公知缩合方法或除去保护基团方法例如在下列1)-5)中均有描述1)M.Bodanszly和M.A.Ondetti肽的合成，Interscience Publishers，纽约(1966)2)Schroeder和Luebke肽，Academic Press，纽约(1965)3)泉屋信夫等多肽合成的基础与实验，丸善公司(1975)4)矢岛治明和榊原俊平生物化学实验教材1，蛋白质化学IV，205(1977)5)矢岛治明主编药物开发续篇，卷14，肽合成，广川书店反应完成后，可将常规纯化方法如溶剂提取、蒸馏、柱层析、液相层析以及重结晶等进行组合以纯化分离本发明肽。当用上述方法获得的肽为游离形式时，可以用公知的方法或其改良方法将所述肽转化为相应盐；当所述肽以盐形式获得时，可以用公知的方法或改良方法将其转化为游离形式。
关于受保护的氨基酸或者肽的缩合反应，可以使用可用于肽合成的各种活性试剂，但尤其优选，三磷鎓类、四甲基脲类、碳二亚胺类等。所述三磷鎓类，有苯并三唑-1-基氧三螺旋吡咯烷基磷鎓六氟磷酸盐(PyBOP)、溴三螺旋吡咯烷基磷鎓六氟磷酸盐(PyBroP)、所述四甲基脲类，有2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，l，3，3-四甲基脲四氟硼酸酯、2-(5-降冰片烯-2，3-碳二亚胺)-1，1，3，3-四甲基脲四甲基硼酸酯、O-(N-琥珀酰胺基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸酯、所述碳二亚胺类，有DCC、N，N′-二异丙基碳二亚胺、N-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙酯)碳二亚胺等。在这些缩合当中，优选添加外消旋抑制剂(例如，HONB、HOBt、HOOBt等)。缩合反应的溶剂选自已知可用于肽缩合反应的溶剂。这样的溶剂有酰胺类如无水或含水的N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺以及N-甲基吡咯烷酮等；卤化烃类如二氯甲烷和氯仿等；醇类如三氟乙醇等；亚砜类如二甲亚砜等；叔胺类如吡啶等、醚类如二噁烷和四氢呋喃等；腈类如乙腈和丙腈等；酯类如乙酸甲酯和乙酸乙酯等；以及这些溶剂的适当混合物。反应温度从已知适用于肽成键反应的范围中选取，通常选约-20℃-50℃。活化的氨基酸衍生物通常以过量1.5～4倍的量使用。用茚三酮反应检验所述缩合反应程度；当所述缩合不充分时，可通过不除去保护基团而重复缩合反应来完成。当即使重复反应后仍未充分缩合时，用乙酸酐或乙酰咪唑将未反应的氨基酸乙酰化，以消除对后续反应的可能负影响。
用于该肽合成时保护初始氨基的保护基团有，例如Z、Boc、叔戊氧基羰基、异冰片基氧羰基、4-甲氧苄氧羰基、Cl-Z、Br-Z、金刚烷(adamantyl)氧基羰基，三氟乙酰基、邻苯二甲酰基、甲酰基、2-硝基苯基亚硫酰基、二苯硫膦基，以及Fmoc等。其羧基的保护基团有，例如R除了所述的C1-6烷基、C3-8环烷基、C7-14芳烷基外，还有2-金刚烷基、4-硝基苄基、4-甲氧苄基、4-氯苄基、苯甲酰甲基，苄氧羰基酰肼基、叔丁氧羰基酰肼基以及三苯甲基酰肼基等。
丝氨酸以及苏氨酸的羟基可以通过例如酯化作用或醚化作用来保护。适于酯化作用的基团有低级C2～4烷酰基如乙酰基等，芳酰基如苯甲酰基，以及来自有机酸的基团如苄氧羰基和乙氧羰基。适于醚化的基团有苯甲基、四氢吡喃基和叔丁基、三苯甲基(Trt)等。
适于保护酪氨酸中酚羟基的基团有，例如Bzl、Cl2-Bzl、2-硝基苄基、Br-Z和叔丁基等。
适于保护组氨酸中咪唑基的基团有，Tos、4-甲氧-2，3，6-三甲基苯磺酰基(Mtr)、DNP、Bom、Bum、Boc、Trt和Fmoc等。
作为精氨酸的胍基保护基，有Tos，Z，4-甲氧基-2，3，6-三甲苯磺酰基(Mtr)，p-甲氧苯磺酰基(MBS)，2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)，均三甲苯-2-磺酰基(Mts)、2，2，4，6，7-五甲基二羟基苯基呋喃-5-磺酰基(Pbf)、Boc、Z、NO2等。
作为赖氨酸侧链上氨基的保护基，有Z，Cl-Z，三氟乙酰、Boc、Fmoc、Trt、Mtr、4，4-二甲基-2，6-二氧环亚己基(dioxocyclohexylideneale)(Dde)等。
作为色氨酸的吲哚保护基，有甲酰基(For)、Z，Boc、Mts、Mtr等。
作为天冬酰胺、谷氨酰胺的保护基，Trt，呫吨基(Xan)、4，4’-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、2，4，6-三甲氧苄基(Tmob)等。
初始氨基酸中的活化羧基有相应的酸酐、叠氮化物、活化酯(带有醇的酯(如五氯苯酚、2，4，5-三氯苯酚、2，4-二硝基酚、氰甲基醇、对硝基苯酚、HONB，N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基邻苯二甲酰亚胺、HOBt)。将初始物质中待活化氨基酸的氨基活化时，可以使用其相应磷酰胺。
为了除去(脱离)保护基，在氢气流下用Pd-黑或Pd-碳等催化剂进行催化还原；用氢氟酸酐、甲磺酸、三氟甲磺酸、三氟醋酸、溴化三甲磺酰硅烷(TMSBr)、三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯、四氟硼酸、三(三氟)硼、三溴化硼或这些酸的混合液进行酸处理；用二异丙基乙胺、三乙胺、哌啶或哌嗪等碱进行碱处理；以及用液态氨中的钠还原等。用上述酸处理除去所述保护基团的反应通常在约-20℃～40℃进行。在酸处理中，添加阳离子清除剂以使反应有效进行，例如使用甲氧基苯、苯酚、硫代甲氧基苯、间甲酚、对甲酚或二甲基硫化物、1，4-丁二硫醇或1，2-乙二硫醇。此外，用苯硫酚处理以除去已知可作为组氨酸中咪唑的保护基团的2，4-二硝基苯基。用作色氨酸中吲哚的保护基团的甲酰基用下述方法去除在1，2-乙二硫醇或1，4-丁二硫醇存在时用上述酸进行处理，以及用氢氧化钠稀溶液和稀氨水等碱进行处理。
与起始物质之反应无关的官能团的保护、保护基的选择、该保护基的消除、以及与上述反应有关的官能团的活化，从公知的基团和公知的方法中适当选择。
获得目标肽的酰胺体的其它方法有，如使用酰胺物合成树脂合成固相或将羧基末端氨基酸的α-羧基酰胺化加以保护；然后，将肽链从氨基侧延伸至预期长度。然后，制备只将其中N-末端α-氨基的保护基团除去的肽以及只将其中C-末端羧基的保护基团除去的肽(或氨基酸)。将这两种肽浓缩在上述溶剂的混合液中。浓缩反应的细节同上。对浓缩所得被保护肽进行纯化后，通过上述方法除去所有的保护基团，获得所需粗制肽。该粗制肽可用各种已知的纯化方法进行纯化。冻干主要级分获得所需肽的酰胺物。
为了得到肽的酯物将羧基末端氨基酸的α-羧基与所要的乙醇类缩合，形成氨基酸酯以后，与肽酰胺物相同可以得到所要的肽酯物。
本发明肽也可进一步与功能或性质众所周知的蛋白质相结合形成的结合蛋白。
本发明中的肽可以用于；①探索本发明肽所具有的生理作用；②利用重组型受体蛋白的表达系统而进行受体结合分析系统的开发和筛选药物制品增补化合物；③开发新药，例如中枢神经功能调节剂、循环功能调节剂、心脏功能调节剂、免疫功能调节剂、消化系统调节剂、代谢功能调节剂或者生殖系统功能调节剂等。
尤其是通过使用后述的重组型G蛋白偶联型受体蛋白的表达系统而结合受体分析系，可以筛选人等温血动物特异的G蛋白偶联型受体-激动剂或拮抗剂，该激动剂或拮抗剂可用作治疗或预防各种疾病的药物。
再者，关于上述③，本发明的肽就是在中枢神经系统、循环系统、心脏、免疫系统、消化系统、代谢系统或生殖系统等中由表达的G蛋白质偶联型受体蛋白(APJ)作为配体进行识别，因此安全、低毒性可用作药物。本发明肽涉及中枢神经机能调节作用、循环机能调节作用、心脏机能调节作用、免疫机能调节作用、消化系统机能调节作用、代谢机能调节作用或生殖系统机能调节作用等，所以将上述激动剂或拮抗剂可以用作治疗或预防以下疾病的药物，例如疾病包括老年性痴呆、脑血管性痴呆、起因于系统变性型的变性疾病(diseases of system degenerative type)(如阿耳茨海默病、巴金和森氏病、皮克病、亨廷顿病等)的痴呆、起因于感染性疾病(如克-雅病等的迟发性病毒感染症等)的痴呆、起因于内分泌性·代谢性·中毒性疾病(如甲状腺机能低下症、维生素B12缺乏症、酒精中毒、各种药物中毒·金属中毒·有机化合物中毒等)的痴呆、起因于肿瘤性疾病(如脑肿瘤等)的痴呆、起因于外伤性疾病(如慢性硬膜下血肿等)的痴呆病、忧郁症、多动(微细脑障碍)综合征、认识障碍、不安障碍、精神分裂症、恐怖症、生长激素分泌障碍(如巨人症、末端肥大症等)、过食症、贪食症、高胆固醇血症、高甘油酯血症、高脂血症、高催乳激素血症、糖尿病(如糖尿病性并发症、糖尿病性肾病、糖尿病性神经障碍、糖尿病性视网膜病等)、癌症(如乳癌、淋巴性白血病、肺癌、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌等)、胰腺炎、肾病(如慢性肾减退、肾炎等)、特纳氏综合征、神经症、类风湿关节炎、脊髓损伤、暂时性脑缺血发作、肌肉萎缩性侧索硬化、急性心肌梗塞、脊髓小脑变性、骨折、创伤、特应性皮炎、骨质疏松、哮喘、癫痫、不孕症、动脉硬化、肺气肿、肺水肿或乳汁分泌减弱等疾病。本发明肽还可进一步用作改善术后营养状态的药物、升压药等。
除此之外，还可用作治疗或预防HIV感染、AIDS(Acquired ImmuneDeficiency Syndrome后天性免疫低下综合征)等的药物。
当本发明用作上述的药物时，可以按照常规方法进行实施。例如，必要时加糖衣或肠溶性膜制成片剂、胶囊、酏剂、微胶囊等剂型口服，或以可注射型制剂如与水或其它可药用液体组合的无菌溶液或悬浮液形式经非胃肠道给药。例如，该化合物或其盐与生理学上可接受的已知载体、调味剂、赋形剂、载色剂、防腐剂、稳定剂、粘合剂等制成药剂常用的单位剂型。控制制剂中的活性成分使得在给定范围内获得合适剂量。
可与片剂、胶囊等混合的添加剂包括，粘和剂如明胶、玉米淀粉、西黄耆胶和金合欢胶；赋形剂如结晶纤维素；膨胀剂如玉米淀粉、明胶和藻酸；润滑剂如硬脂酸镁；甜味剂如蔗糖、乳糖和糖精；加味剂如薄荷、akamono oil和樱桃。当单位剂型为胶囊形式时，可进一步将液体载体如油和脂肪同上述添加剂一起使用。可根据常规制药方法制备注射用无菌组合物，例如将活性成分与天然植物油如芝麻油和椰子油等溶解或悬浮在载体，如注射用的水溶液来制备药物。
用于注射的液体介质的例子包括，生理盐水、含有葡萄糖和其它辅助制剂(如D-山梨醇、D-甘露醇和氯化钠等)的等渗溶液，并可以进一步同合适的助溶剂如醇(如乙醇等)、聚醇(如丙二醇和聚乙二醇等)、非离子表面活性剂(如聚山梨酸酯80(TM)和HCO-50等)等结合使用。油性介质有芝麻油和豆油，它们可与助溶剂如苯甲酸苄酯和苯甲醇结合使用。
此外，上述的治疗/预防制剂可进一步与缓冲液(例如，磷酸盐缓冲液和乙酸钠缓冲液等)、镇静剂(例如苯扎氯胺和盐酸普鲁卡因等)、稳定剂(如人血清白蛋白、聚乙二醇等)、防腐剂(例如苯甲醇、酚等)、抗氧化剂等结合使用。由此制备的注射液一般装在合适的无菌的安瓿中。如此所获制剂安全、低毒，因此可投药于哺乳动物(例如，人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、绵羊、猪、牛、猫、狗、猴、黑猩猩等、)。
本发明肽的剂量依赖于症状等而异，一般来说，在对成人HIV感染症患者(体重60kg)口服给药时，正常剂量为大约0.1-100mg/天，优选大约1.0-50mg/天，更优选大约1.0-20mg/天；在对成人HIV感染症患者(体重60kg)非胃肠道给药时，单位剂量依赖于给药对象、靶器官、症状和给药方法等而变，但优选活性成分静脉注射，剂量为大约0.01-30mg/天，优选大约0.1-20mg/天，更优选大约0.1-10mg/天。对于其它动物种类，可以按每60kg体重换算相应给药剂量。
作为上述本发明肽的G蛋白偶联型受体蛋白，包括来自人或温血动物(如哺乳温血动物(兔子、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、豚鼠、牛、马、猪)，鸟类(如鸡、鸽、鸭、鹅、鹌鹑)等)的所有组织(例如垂体、胰腺、脑、肾脏、肝脏、生殖腺、甲状腺、胆囊、骨髓、肾上腺、皮肤、肌肉、肺、消化道、血管、心脏等)或细胞等的G蛋白偶联型受体蛋白，例如，只要含有与SEQ ID NO19表示的氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列即可。即，作为G蛋白偶联型受体蛋白，除了本说明书中的SEQ ID NO19表示的含有氨基酸序列的蛋白质等以外，可举出以下蛋白质等具有与本说明书中的SEQ ID NO19表示的氨基酸序列同源性约有90～99.9％的氨基酸序列，并且与本说明书中的SEQ ID NO19表示的具有氨基酸序列的蛋白质活性实质相同的蛋白质。
所述蛋白质的活性，有配体结合活性、信号传递活性等。所说基本上相同是指配体结合活性等性质相同。因此，配体结合活性的强弱，受体蛋白的分子量等其量的要素可以不同。
进一步，对于G蛋白偶联型受体蛋白来说，包括N末端Met的保护基团使用(例如C1-6酰基等的C2-6烷酰基等，烷酰基包括甲酰基、乙酰基等)保护的；Gln的N端部在机体内切割，被焦谷氨酸化的；分子内的氨基酸残基的侧链用适当的保护基团(例如C1-6酰基等的甲酰基、乙酰基等)保护进行，还包括结合蛋白该蛋白由糖链结合形成的所谓糖蛋白等。
作为G蛋白偶联型受体蛋白的盐，有与上述相同的肽盐。
G蛋白偶联型受体蛋白或其盐或其部分肽，可以从人或温血动物的组织或细胞根据本领域公知的蛋白质纯化方法制造，也可以按照前面叙述的肽合成法制造。
所述G蛋白偶联型受体蛋白的部分肽，在G蛋白偶联型受体蛋白分子中，可使用露出细胞膜外的部分等。也就是说，包含在分析G蛋白偶联型受体蛋白疏水端中细胞外区域(亲水性(Hydrophilic)部位)的部分肽。另外，也可用含有该疏水性(Hydrophobic)部位的含有部分肽。可使用每个结构域分别包含在每个肽中的肽，但也可是同时包含多个结构域的部分肽。
所述G蛋白偶联型受体蛋白的部分肽之盐，可使用与上述相同的肽之盐。
所述编码G蛋白偶联型受体蛋白的DNA，只要在本说明书中含有与SEQ ID NO19氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列并含有编码G蛋白偶联型受体蛋白的碱基序列均可。它们可以是基因组DNA、基因组DNA文库、来自组织·细胞的cDNA、来自组织·细胞的cDNA文库、合成DNA。用于文库的载体可以是噬菌体、质粒、粘粒、噬粒等。另外，使用依组织·细胞制得的RNA级分直接根据公知的RT-PCR法进行扩增。
具体地说，作为含有本说明中以SEQ ID NO19所示的氨基酸序列而编码G蛋白偶联型受体蛋白的DNA，可以使用本说明书中含有以SEQID NO20所示的碱基序列DNA等。
关于本发明肽或其盐(以下，简称为本发明肽等)等的用途，如下详细说明。(1)配体肽缺陷症的预防药物或治疗药物针对G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的本发明肽等所具有的作用来说，将本发明肽等可以用于治疗或预防配体肽或G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)缺陷症的药物。
例如，当有的患者在机体内，由于G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)减少，配体的生理作用(中枢神经机能调节作用，循环机能调节作用、心脏机能调节作用、免疫机能调节作用、消化系统机能调节作用、代谢机能调节作用或者生殖系统机能调节作用等)无法进行的时候，通过本发明肽等投药于该患者，促使该患者的体内的配体肽量的增加，可以充分发挥配体肽的作用。因此，本发明肽安全低毒，可以用作配体肽缺陷症的预防或治疗药物等。(2)针对G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)配体肽的定量法本发明肽等针对G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)或其盐以及该受体蛋白的部分肽或其盐具有结合性，因此，可以在体内将G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)或其盐或该受体蛋白的部分肽或其酰胺或其酯或其盐定量为合适的敏感浓度。
所述该G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的部分肽，可使用在G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)分子中，露出细胞膜外的部位等。也就是说，包含在分析G蛋白偶联型受体蛋白疏水端中细胞外区域(亲水性(Hydrophilic)部位)的部分肽。另外，也可用该疏水性(Hydrophobic)部位的含有部分肽。也可使用每个结构域分别包含在每个肽中的肽，但也可是同时包含多数结构域的部分肽。
G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)部分肽的酰胺、酯获得方法与上述本发明肽的酰胺或酯的获得方法相同。另外，所述G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)部分肽之盐，可以使用与上述本发明肽的盐相同。
本定量法，也可与竞争法结合起来一起使用。
也就是说，使被检体与本发明肽等接触，从而测定被检体中的G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)或其盐，或者G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的部分肽或其酰胺、其酯或其盐的浓度。更具体地说，可以按照如下①或②等所描述的本领域公知的方法或其改良的方法。①入江宽编「放射免疫分析」(讲谈社、昭和49年发行)②入江宽编「放射免疫分析」续编(讲谈社、昭和54年发行)(3)改变G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)和本发明肽等结合特性的化合物的筛选方法使用G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)或其盐，或者使用该部分肽或其酰胺或其酯或其盐，或者利用由重组型构建G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的表达系通过利用该表达系的受体结合分析系统，可以筛选使本发明肽和G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)之间的结合特性发生变化的化合物(如，肽、蛋白质、非肽性化合物、合成化合物、发酵产物等)或其盐。这种化合物包括，具有G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)介导的细胞刺激活性(例如，促进或抑制花生四烯酸释放、乙酰胆碱释放、细胞内钙离子释放、细胞内cAMP产生、细胞内cGMP产生、磷酸肌醇的产生、细胞膜电位变化、细胞内蛋白磷酸化、c-fos的激活和pH的降低等的活性)的化合物(G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)激动剂)；和不具有该细胞刺激活性的化合物(即G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)拮抗剂)。所谓[能使结合特性发生变化]包含两种情况，一种情况是抑制与本发明肽之间的结合，另一种情况是促进与本发明肽之间的结合。
也就是说，本发明提供一种筛选化合物或其盐的方法，该化合物或其盐改变G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)和本发明肽等结合特性，其特征在于，比较以下两种情形(i)使本发明肽等与G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)或其盐或该受体蛋白的部分肽或其盐接触；(ii)使本发明肽等及待测化合物与上述G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)或其盐或该受体蛋白的部分肽或其酰胺、其酯或其盐接触。
在本发明的筛选方法中，当以下两种情形存在时，即(i)使本发明肽等与上述的G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)或该受体蛋白的部分肽接触；(ii)使本发明肽等及待测化合物与上述G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)或该受体蛋白的部分肽接触，针对该G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)或该受体蛋白的部分肽与本发明肽等结合时测定并比较其结合量、细胞刺激活性等。
更具体地，本发明提供了①一种筛选方法，该方法是筛选一种化合物或其盐，该化合物或其盐能使本发明肽等和G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)结合性发生变化，其特征为，使一标记的本发明肽等与上述G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)或其盐或G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的部分肽或其酰胺、其酯或其盐接触的时候，和使标记的本发明肽等及待测化合与G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)其盐或G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的部分肽或其酰胺、其酯或其盐接触的时候，测定并比较针对标记的本発明肽等的该G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)或其盐或该部分肽或其酰胺、其酯或其盐的结合量；②一种筛选方法，该方法是筛选一种化合物或其盐，该化合物或其盐能使本发明肽等和G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)之间的结合特性发生变化，其中包括，使一标记的本发明肽同含有G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的细胞或该细胞的膜级分接触时，和使一标记的本发明肽等及待测化合物与含有G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的细胞或该细胞的膜级分接触时，测定并比较同该细胞或该细胞膜级分结合的标记本发明肽等的量；③一种筛选方法，该方法是筛选一种化合物或其盐，该化合物或其盐能使本発明肽等和G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)之间的结合特性发生变化，其中包括，使一标记的本发明肽，与通过培养含有编码G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的DNA的转化体而表达在细胞膜上的G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)接触时，和使一标记的本发明肽等及待测化合物，与通过培养含有编码G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的DNA的转化体而表达在细胞膜上的G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)接触时，测定并比较同该G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)结合的标记本发明肽等的G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)量；④一种筛选方法，该方法是筛选一种化合物或其盐，该化合物或其盐能使本发明肽等和G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)之间的结合特性发生变化，其中包括，使能活化G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的化合物(例如，本发明肽)同含有G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的细胞接触时，和能使活化G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的化合物及待测化合物与含有G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的细胞接触时，测定并比较G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)介导的细胞刺激活性(例如，促进或抑制花生四烯酸释放、乙酰胆碱释放、细胞内钙离子释放、细胞内cAMP产生、细胞内cGMP产生、磷酸肌醇的产生、细胞膜电位变化、细胞内蛋白磷酸化、c-fos的激活和pH的降低等的活性)；及⑤一种筛选方法，该方法是筛选一种化合物或其盐，该化合物或其盐能使本发明肽等和G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)结合性发生改变的化合物或其盐方法，其中包括，使一激活G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的化合物(如本发明肽等)与通过培养含有编码G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)DNA的转化体而表达在细胞膜上的G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)接触，和使一激活G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的化合物以及待测化合物与通过培养含有编码G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)DNA的转化体而表达在细胞膜上的G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)接触时，测定并比较G蛋白偶联型受体蛋白介导的细胞刺激活性(例如，促进或抑制花生四烯酸释放、乙酰胆碱释放、细胞内钙离子释放、细胞内cAMP产生、细胞内cGMP产生、磷酸肌醇的产生、细胞膜电位变化、细胞内蛋白的磷酸化、c-fos的激活和pH的降低等的活性)。
下面进一步说明所述筛选方法。
首先，作为用于本发明筛选方法的G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)，只要其含有所述G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)或G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的部分肽即可，但是优选含有G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)等的人、温血动物脏器的细胞膜级分。然而人的脏器最难获得，因此用于本发明筛选的通过重组体才适用于能大量表达G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)等。
在本发明筛选方法中，当使用含有G蛋白偶联型受体蛋白的细胞或该细胞膜级分时，可以按照随后所述方法。
在使用含有G蛋白偶联型受体蛋白的细胞时，该细胞可用戊二醛、福尔马林等固定。固定方法可以按照公知的方法实施。
可以使用的宿主的实例有，公知的大肠杆菌属的细菌、枯草杆菌属的细菌、酵母、昆虫或昆虫细胞、动物细胞等。
大肠杆菌属的细菌有，大肠杆菌(Escherichia coli)K12 DH1(美国国家科学院院刊，60，160(1968))、JM103(核酸研究，9，309(1981))、JA221(分子生物学杂志，120，517(1978))、HB101(分子生物学杂志，41，459(1969))、C600(遗传学，39，440(1954))等。
枯草杆菌属的细菌有，枯草杆菌M1114(基因，24，255(1983))、207-21(生物化学杂志，95，87(1984))等。
酵母有，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)AH22、AH22R、NA87-11A、DKD-5D、20B-12等。
昆虫的例子，可以使用家蚕的幼虫(前田等，自然，315，592(1985))。
就昆虫细胞而言，病毒为AcNPV时有草地夜蛾(Spodopterafrugiperda，Sf)的细胞、粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)中肠的MG1细胞、粉纹夜蛾卵的High FiveTM细胞、甘蓝夜蛾(Mamesatra brassicae)的细胞、Estigment a crea的细胞等；病毒为BmNPV时有家蚕(Bombyx mori)的N细胞(BmN细胞)等。可用的Sf细胞有Sf9细胞(ATCC CRL1711)和Sf21细胞(这两种细胞均由Vaughn，J.L.等在In Vivo，13，213-217(1977)中描述)。
动物细胞包括猴COS-7细胞、Vero、中华仓鼠细胞CHO、dhfr基因缺陷的中华仓鼠细胞CHO(以下，简称CHO(dhfr-)细胞)、小鼠L细胞、小鼠3T3细胞、小鼠骨髓瘤细胞、人HEK293细胞、人FL细胞、293细胞、C127细胞、BALB3T3细胞、Sp-2/O细胞。
细胞膜级分是指，用众所周知的方法破裂细胞并进行分级分离而制备的含有大量细胞膜的级分。细胞破裂的有效方法包括用Potter-Elvehjem匀浆器挤压、用Waring blender或Polytron(Kinematica)破裂、超声破裂、用French press加压使细胞通过细嘴喷射而破裂。细胞膜组分分离主要通过离心力来实现，如分级离心和密度梯度离心。例如，细胞破碎液在低速(500-3000rpm)离心一小段时间(通常为1-10分钟)，得到的上清，高速(15000-30000rpm)通常离心0.5-2小时。由此获得的沉淀部分用作细胞膜级分。细胞膜级分富含表达的G蛋白偶联型受体蛋白以及膜成分如细胞来源的磷脂和膜蛋白。
在含有该G蛋白偶联型受体蛋白等的细胞和细胞膜级分中，G蛋白偶联型受体蛋白的含量优选103-108分子/细胞，更优选105-107分子/细胞。随着表达量的增加，单位细胞膜级分的配体结合活性(比活)增加，因而不但可以构建高敏感筛选体系，而且可以在同一批获得大量的样品。
为了实施所述的①-③也就是筛选使本发明肽等与G蛋白偶联型受体蛋白之间的结合特性发生变化的化合物，通常使用合适的G蛋白偶联型受体蛋白级分和标记的本发明的肽等。所述G蛋白偶联型受体蛋白级分，优选天然型的G蛋白偶联型受体蛋白级分，或与其具有同等活性的重组型G蛋白偶联型受体蛋白级分。此处术语“同等活性”是指在配体结合活性等同。作为标记的配体，有标记的配体、标记的配体类似化合物等。例如它们用[3H]、[125I]、[14C]或[35S]等标记。
具体地说，为了筛选使本发明肽等与G蛋白偶联型受体蛋白之间的结合特性发生变化的化合物，首先，将含有G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的细胞或其膜级分悬浮于本方法的相应的缓冲液中，制备受体标样。可以使用缓冲液，只要它不干扰配体-受体结合。此类缓冲液有pH值约4-10(优选6-8)的磷酸缓冲液或Tris-HCl缓冲液。为了降低非特异结合，可任选在缓冲液中加入表面活性剂如CHAPS、Tween-80TM(Kao-Atlas公司)、毛地黄皂甘或脱氧胆酸等。为了抑制蛋白酶对受体或本发明肽的降解，可加入蛋白酶抑制剂如PMSF、亮抑蛋白酶肽、E-64(Peptide Institute)和胃蛋白酶抑制剂。将一定量(5000-500000cpm)的标记的本发明肽加入到0.01-10ml的受体溶液中，同时还存在有10-4M-10-10M的待测化合物。为了测定非特异性结合(NSB)，需提供一个含有过量未标记的本发明肽的反应管。在约0-50℃(优选约4-37℃)反应20分钟-24小时(优选30分钟-3小时)。在反应完成后，反应混合物用玻璃纤维滤纸等过滤，用适量的相同缓冲液洗涤。然后用液闪仪或λ-计数仪测定在玻璃纤维滤纸中的残留放射活性。在不存在拮抗物时，从其值(B0)中减去非特异结合值(NSB)而得到的(B0-NSB)，再乘以100％，此时，特异的结合量(B-NSB)，可以以有抑制拮抗能力的增补物质进行选择，例如，抑制低于50％的待测化合物。
上述为了实施用于筛选使本发明肽等和G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)之间的结合特性发生变化的化合物的方法可按照下述进行。用众所周知的方法或商品化的分析试剂盒来测定G蛋白偶联型受体蛋白介导的细胞刺激活性(例如促进或抑制花生四烯酸释放、乙酰胆碱释放、细胞内钙离子释放、细胞内cAMP产生、细胞内cGMP产生、磷酸肌醇的产生、细胞膜电位变化、细胞内蛋白的磷酸化、c-fos的激活和pH的降低的活性)。详细地说，首先，将含有G蛋白偶联型受体蛋白的细胞在多孔平板上培养。在筛选之前，先置换新鲜培养基或对细胞无毒的缓冲液，加入待测化合物并保温一定时间，然后提取细胞或回收上清将反应产物用各种方法进行定量。当利用细胞内的分解代谢酶测定作为细胞刺激活性指示剂的物质(例如花生四烯酸)的产生有困难时，可加入该分解代谢酶的抑制剂进行测定。可以检测cAMP产生的抑制等活性，作为细胞抑制活性，所述细胞受毛喉素等刺激而导致基本生产量增加。
测定细胞刺激活性而进行筛选时，需要合适的能表达G蛋白偶联型受体蛋白的细胞。其细胞优选具有天然型本发明G蛋白偶联型受体蛋白的细胞系、能够表达所述重组型G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的细胞系等。
其中待测化合物包括，例如肽、蛋白质、非肽性化合物、合成化合物、发酵产物、细胞提取液、植物提取液、动物组织提取液等，这些化合物可为新的或已知的化合物。
用于筛选使本发明肽等和G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)之间的结合特性发生变化的化合物或其盐的试剂盒中包含G蛋白偶联型受体蛋白或其盐、G蛋白偶联型受体蛋白的部分肽或其酰胺或其酯或其盐、含有G蛋白偶联型受体蛋白的细胞、或含有G蛋白偶联型受体蛋白的细胞膜级分、以及本发明的肽等。
本发明筛选试剂盒包括如下1.用于筛选的试剂(1)用于分析和冲洗的缓冲液加有0.05％牛血清白蛋白(Sigma)的Hanks’平衡盐溶液(Gibco)。
溶液用0.45μm孔径滤膜过滤除菌并在4℃贮存。或可以在临用时配制。
(2)G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)标样将表达G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的CHO细胞在12孔板上传代培养，每孔5×105细胞，37℃，5％CO2和95％空气保温培养两天。
(3)标记的本发明肽等用[3H]、[125I]、[14C]或[35S]标记的本发明肽溶解在适当的溶剂或缓冲液中，并贮存在4℃或-20℃。溶液在使用时用分析缓冲液稀释到1μM。
(4)本发明肽等的标准液将本发明肽等溶解于含有0.1％牛血清白蛋白(Sigma)的PBS使之浓度为1mM，-20℃保存。
2分析方法(1)用于表达本发明受体蛋白(APJ)的细胞在12孔板上进行培养。在用1ml的用于分析的缓冲液洗涤2次后，每孔加入490μl该缓冲液。
(2)加5μl的10-4M-10-10M的待测化合物溶液，向所述系统中加5μl的标记本发明肽等，得到的混合液在室温保温1小时。为了测定非特异结合，在所述系统中加5μl的10-3M的配体而不是待测化合物。
③去除孔中的反应混合液，将培养孔洗涤3遍，每次均用1ml的洗涤液。用0.2N NaOH-1％SDS溶解与细胞结合的标记本发明肽等，然后与4ml的液闪剂A(和光纯药)混合。
④用液闪计数仪(Beckman)测定放射性。其最大结合量用下式求得PMB＝[(B-NSB)/(B0-NSB)]×100PMB最大结合百分率B加样时的值NSB非特异结合量B0最大结合量利用本发明筛选方法或筛选用试剂盒而得到的化合物或其盐是，一种改变本发明肽等和G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)之间的结合(抑制结合或促进结合)的化合物，更详细地说，既是G蛋白偶联型受体介导的具有细胞刺激活性的化合物或其盐(所谓的G蛋白偶联型受体激动剂)、或者不具有该刺激活性的化合物(所谓的G蛋白偶联型受体拮抗剂)。所述化合物包括，例如肽、蛋白质、非肽性化合物、合成化合物、发酵产物、细胞提取液、植物提取液、动物组织提取液等，这些化合物可为新的或已知的化合物。
可以按照以下(i)或(ii)的方法对上述G蛋白偶联型受体激动剂或拮抗剂进行评价。(i)对前面谈到的筛选方法①～③的结合测定进行分析，得到使本发明肽等和G蛋白偶联型受体(APJ)之间的结合性发生改变的(尤其是，抑制结合的)化合物之后，测定该化合物是否具有上述G蛋白偶联型受体(APJ)介导的细胞刺激活性。具有细胞刺激活性的化合物或其盐是G蛋白偶联型受体激动剂，不具有该活性的化合物或其盐就是G蛋白偶联型受体抑制剂。(ii)(a)使待测化合物与含有G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的细胞接触，测定上述G蛋白偶联型受体(APJ)介导的细胞刺激活性。具有细胞刺激活性的化合物或其盐就是G蛋白偶联型受体的激动剂。(b)使G蛋白偶联型受体激活的化合物(例如，本发明肽等或G蛋白偶联型受体激动剂等)与含有G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的细胞接触时，与使G蛋白偶联型受体G(APJ)激活的化合物及待测化合物与含有G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的细胞接触时，测定并比较G蛋白偶联型受体(APJ)介导的细胞刺激活性。激活G蛋白偶联型受体(APJ)的化合物而降低细胞刺激活性的化合物或其盐就是G蛋白偶联型受体抑制剂。
由于该G蛋白偶联型受体激动剂具有针对G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的与本发明肽等所具有的生理活性相同的作用，因此与本发明肽等一样可以用作既安全又低毒的医药组合物。
相反，由于G蛋白偶联型受体拮抗剂能够抑制针对G蛋白偶联型受体蛋白(APJ)的本发明肽等所具有的生理活性，所以作为抑制该受体活性既安全又低毒的医药组合物是有益的。
因为本发明肽等涉及中枢神经机能调节作用、循环机能调节作用、心脏机能调节作用、免疫机能调节作用、消化系统机能调节作用、代谢机能调节作用或生殖系统机能调节作用等，所以将上述激动剂或拮抗剂可以用作治疗或预防以下疾病的药物，例如疾病为，老年性痴呆、脑血管性痴呆、起因于系统变性型的变性疾病(diseases of system degenerative tvpe)(如阿耳茨海默病、巴金和森氏病、皮克病、亨廷顿病等)的痴呆、起因于感染性疾病(如克-雅病等的迟发性病毒感染症等)的痴呆、起因于内分泌性·代谢性·中毒性疾病(如甲状腺机能低下症、维生素B12缺乏症、酒精中毒、各种药物中毒·金属中毒·有机化合物中毒等)的痴呆、起因于肿瘤性疾病(如脑肿瘤等)的痴呆、起因于外伤性疾病(如慢性硬膜下血肿等)的痴呆等的痴呆病、忧郁症、多动(微细脑障碍)综合征、认知障碍、不稳定障碍、精神分裂症、恐怖症、生长激素分泌缺陷、过食症、贪食症、高胆固醇血脂症、高甘油酯血脂症、高血脂症、高催乳激素血脂症、糖尿病、癌、胰腺炎、肾疾病、特纳氏综合征、神经症、类风湿关节炎、脊髓损伤、暂时性脑缺血发作、肌肉萎缩性侧索硬化症、急性心肌梗塞、脊髓小脑变性症、骨折、创伤、特应性皮炎、骨质疏松症、哮喘、癫痫、不孕症、动脉硬化、肺气肿、肺水肿、乳汁分泌降低等疾病。本发明肽等还可进一步用作催眠镇静剂、改善术后营养状态的药物、升压药、降压药等。
除此以外，还可用于治疗或预防HIV感染、AIDS(Acquired ImmuneDeficiency Syndrome后天性免疫缺陷综合症)等的药物。
利用上述的筛选法或筛选用试剂盒而得到的化合物或其盐，例如，可以使用与生理上可接受的盐。如与无机碱形成的盐、有机碱形成的盐、无机酸形成的盐、有机酸形成的盐、与碱性或酸性氨基酸形成的盐等。
作为与无机碱形成的盐有，碱金属盐如钠盐、钾盐等；碱土类金属盐如钙盐、镁盐等；以及铝盐、铵盐等。
与有机碱形成的盐有，例如，三甲基胺、三乙基胺、吡啶、甲基吡啶、2，6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、环己胺、二环己胺、N，N’-二苯乙烯二胺等形成的盐。
与无机酸形成的盐有，例如，与盐酸、磷酸、氢溴酸、硫酸形成的盐。
与有机酸形成的盐有，例如，与乙酸、甲酸、丙酸、延胡索酸、马来酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、草酸、苯甲酸、甲磺酸、苯磺酸形成的盐等。
与碱性氨基酸形成的盐有，例如精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等形成的盐，与酸性氨基酸形成的盐有，如天冬氨酸、谷氨酸等形成的盐。
利用上述的筛选法或筛选用试剂盒而得到的化合物或其盐，当它们用作上述的药物时，可以同将所述本发明肽等用作药物实施的方法是一样的。
在说明书和附图
中，碱基和氨基酸的代码使用IUPAC-IUB生化命名委员会规定的或本领域通用的代码，如下例所示。对于有光学异构体的氨基酸，除非特别说明，均指L形式。
DNA 脱氧核糖核酸cDNA 互补的脱氧核糖核酸A 腺嘌呤T 胸腺嘧啶
G 鸟嘌呤C 胞嘧啶Y 胸腺嘧啶或胞嘧啶N 胸腺嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤或鸟嘌呤R 腺嘌呤或鸟嘌呤M 胞嘧啶或腺嘌呤W 胸腺嘧啶或腺嘌呤S 胞嘧啶或鸟嘌呤RNA 核糖核酸mRNA 信使核糖核酸dATP 脱氧腺苷三磷酸dTTP 脱氧胸腺嘧啶三磷酸dGTP 脱氧鸟苷三磷酸dCTP 脱氧胞嘧啶三磷酸ATP 腺苷三磷酸EDTA 乙二胺四乙酸SDS 十二烷基硫酸钠EIA 酶免疫测定Gly或G甘氨酸Ala或A丙氨酸Val或V缬氨酸Leu或L亮氨酸Ile或I异亮氨酸Ser或S氨酸Thr或T苏氨酸Cys或C半胱氨酸Met或M蛋氨酸Glu或E谷氨酸Asp或D天冬氨酸
Lys或K赖氨酸Arg或R精氨酸His或H组氨酸Phe或F苯丙氨酸Tyr或Y酪氨酸Trp或W色氨酸Pro或P脯氨酸Asn或N天冬酰胺Gln或Q谷氨酰胺pGlu 焦谷氨酸Me甲基Et乙基Bu丁基Ph苯基Nle 己氨酸Thi 2-噻吩基丙氨酸Phg 苯基甘氨酸Pya(2)2-吡啶丙氨酸Adi(NH2) 2-氨基己二酸-6胺HyP 羟基脯氨酸(hydroxyproline)Ac-ArgNα-乙酰精氨酸Lys(Ac) Nε-乙酰赖氨酸Lys(Me) Nε-甲基赖氨酸Lys(Tos) Nε-甲苯磺酰基赖氨酸Arg(Tos) Nε-甲苯磺酰基精氨酸Phe(Cl) 4-氯苯丙氨酸Nal(2)2-萘基丙氨酸Cha 环己丙氨酸Met(O)甲硫氨酸亚砜
Tyr(Me)O-甲基酪氨酸Tyr(I) 3-碘酪氨酸又，在本说明书中频繁使用的取代基、保护基以及试剂均用下列符号表示。
Tosp-甲苯磺酰基HONB N-羟基-5-降冰片烯基-2，3-二羧酰亚胺Bzl苄基Z 苄氧羰基Br-Z 2-溴苄氧羰基Cl-Z 2-氯苄氧羰基Boct-丁氧基羰基HOBt 1-羟基苯并三唑DCCN、N’-二环己基碳二亚胺TFA三氟乙酸Fmoc N-9-芴基甲氧基羰基DNP二硝基苯酚Bum叔丁氧甲基Trt三苯甲基Pbf2，2，4，6，7-五甲基二苯并呋喃-5-磺酰基HOOB 3-羟基-4-氧基-3，4-二羟基-1，2，3-苯并三嗪TFE三氟乙醇HOAt 1-羟基-7-氮杂苯并三唑PyBrop 溴吡咯烷基磷鎓六氟磷酸TMS-Br 溴化三甲基甲硅烷基TC 三唑烷-4(R)-酰胺基Bom苄氧甲基NMPN-甲基吡咯烷酮PAM苯乙酰胺甲基
DCM二氯甲烷DMFN，N-二甲基甲酰胺DIEA N，N-二异丙基乙胺Clt2-氯三苯甲基For甲酰基Lys(Arg-Arg) Nε-精氨酸-精氨酸-赖氨酸AM 氨基甲基Pyn1-芘基丙氨酸Mor吗啉N-MeAlaN-甲基丙氨酸Lys(Me)2Nε-二甲基赖氨酸Dap二氨基丙酸Mmt4-甲氧基三苯甲基Adi乙二酰基Dap(C6) Nβ-己酰二氨基丙酸DIPCDI N，N’ -二异丙基碳二亚胺NMe2 二甲胺Dap(Ac)Nβ-乙酰二氨基丙酸Dap(Adi) Nβ-己二酰二氨基丙酸本说明书序列表中的编号表示如下〔SEQ ID NO1〕表示在后述实施例1中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO2〕表示在后述实施例2中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO3〕表示在后述实施例3中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO4〕表示在后述实施例4中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO5〕表示在后述实施例5中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO6〕表示在后述实施例6中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO7〕表示在后述实施例7中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO8〕表示在后述实施例8中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO9〕表示在后述实施例9中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO10〕表示在后述实施例10中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO11〕表示在后述实施例11中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO12〕表示在后述实施例12中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO13〕表示在后述实施例13中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO14〕表示在后述实施例14中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO15〕表示在后述实施例15中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO16〕表示在后述实施例16中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO17〕表示在后述参考例1中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO18〕表示在后述参考例2中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO19〕表示APJ的氨基酸序列。〔SEQ ID NO20〕表示编码〔SEQ ID NO19〕氨基酸序列的DNA碱基序列。〔SEQ ID NO21〕表示在后述实施例17中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO22〕表示在后述实施例18中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO23〕表示在后述实施例19中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO24〕表示在后述实施例20中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO25〕表示在后述实施例21中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO26〕表示在后述实施例22中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO27〕表示在后述实施例23中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO28〕表示在后述实施例24中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO29〕表示在后述实施例25中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO30〕表示在后述实施例26中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO31〕表示在后述实施例27中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO32〕表示在后述实施例28中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO33〕表示在后述实施例29中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO34〕表示在后述实施例30中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO35〕表示在后述实施例31中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO36〕表示在后述实施例32中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO37〕表示在后述实施例33中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO38〕表示在后述实施例34中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO39〕表示在后述实施例35中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO40〕表示在后述实施例36中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO41〕表示在后述实施例37中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO42〕表示在后述实施例38中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO43〕表示在后述实施例39中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO44〕表示在后述实施例40中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO45〕表示在后述实施例41中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO46〕表示在后述实施例42中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO47〕表示在后述实施例43中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO48〕表示在后述实施例44中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO49〕表示在后述实施例45中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO50〕表示在后述实施例46中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO51〕表示在后述实施例47中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO52〕表示在后述实施例48中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO53〕表示在后述实施例49中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO54〕表示在后述实施例50中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO55〕表示在后述实施例51中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO56〕表示在后述实施例52中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO57〕表示在后述实施例53中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO58〕表示在后述实施例54中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO59〕表示在后述实施例55中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO60〕表示在后述实施例56中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO61〕表示在后述实施例57中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO62〕表示在后述实施例58中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO63〕表示在后述实施例59中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO64〕表示在后述实施例60中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO65〕表示在后述实施例61中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO66〕表示在后述实施例62中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO67〕表示在后述实施例63中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO68〕表示在后述实施例64中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO69〕表示在后述实施例65中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO70〕表示在后述实施例66中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO71〕表示在后述实施例67中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO72〕表示在后述实施例68中得到的肽的氨基酸序列。
将该树脂200mg(39.8mmol)用3ml混合液TFA，thioanisole，m-cresol，H2O，ethanedithiol，triisopropylsilane(80∶5∶5∶5∶2.5∶2.5)室温下，搅拌2小时，然后在反应溶液里加入乙醚，使之析出白色粉末，离心分离后，除去上清液重复3次操作。用水抽提残渣後，冻结干燥，得到白色粉末91.7mg。将所得粗肽52.2mg用经过TSK GEL ODS 120T层析柱(20×300mm)制备好的的HPLC，将A液0.1％TFA-水、B液含有0.1％TFA的乙腈，按照A/B81/19～71/29进行直线型浓度梯度析出(60分)，收集包括所要物质在内的级分，冻结干燥，得到15.5mg白色粉末。质谱分析(M+H)+1858.7(计算值1859.0)HPLC析出时间19.7分析出条件层析柱YMC ODS AM-301，S-5μm，120A(4.6×100mm)分离液使用A液0.1％TFA-水、B液含有0.1％TFA的乙腈，对A/B100/0～50/50的直线型浓度梯度析出时间为25分流速1.0ml/分以下，实施例2～实施例16以及参考例1的化合物均与实施例1一样，通过固相合成和除去保护、纯化制备。每种化合物的质谱分析(M+H)+值(测定值及计算值)及HPLC保存时间(分)于表1所示。
将该树脂1g，于AcOH∶TFE∶DCM(1∶2∶7)20ml中室温下，搅拌2小时，然后过滤除去树脂，蒸馏溶剂用乙醚结晶，得到362mg的保护肽(Boc-Gln-Arg(Pbf)-Pro-Arg(Pbf)-Leu-Ser(tBu)-His(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH)。
按照顺序缩合H-Tyr(Bzl)-OBzl·HClにBoc-Pro，Boc-Nle，Boc-Pro，得到217.8mg的Boc-Pro-Nle-Pro-Tyr(Bzl)-Bzl。
将Boc-Gln-Arg(Pbf)-Pro-Arg(Pbf)-Leu-Ser(tBu)-His(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH的100mg和HOAt 8.04mg溶于1ml的DCM∶DMF(4∶1)中，在冰水下添加62.2mg的DIEA 38.5μl，PyBrop 34.20mg，H-Pro-Nle-Pro-Tyr(Bzl)-OBzl。HCl(用4N-HCl/l，4二氧六环处理Boc-Pro-Nle-Pro-Tyr(Bzl)-OBzl并制备)62.2mg，然后，冰浴，室温搅拌1hr。将枸橼酸结晶加入溶液内中和之後，蒸馏溶剂，加水用氯仿萃取析出的固体。用1N盐酸、饱和小苏打水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸馏溶剂，加乙醚过滤粉末，进一步从乙酸乙酯和乙醚中再沉淀纯化，得到122.27mg的Boc-Gln-Arg(Pbf)-Pro-Arg(Pbf)-Leu-Ser(tBu)-His(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Pro-Nle-Pro-Tyr(Bzl)-OBzl。
将该保护肽63.6mg的置于thioanisole 1089μl，m-cresol 122μl，triisopropylsilane 238.5μl，TFA 4.7ml中室温搅拌90分钟，然后加TMS-Br1.23ml，冰水中搅拌1个小时后，在20℃的水浴上进一步地搅拌1hr。反应后，除去反应溶液，给残渣加乙醚，使之析出白色粉末，离心分离，然后除去上清液重复3次操作。用水抽提残渣，再冻结干燥，通过采用了50％醋酸水溶液的SephadexG-25凝胶过滤柱过样，将主要的级分于80％AcOH中，70℃加热2hr，然后用水稀释溶液，冻结干燥。将得到的粗肽再用经过TSK GELODS 120T柱(20×300mm)制备好的HPLC，对A液0.1％TFA-水、B液含有0.1％TFA的乙腈A/B85/15～75/25进行直线型浓度梯度析出(60分)，收集包括所要物质在内的级分，冻结干燥，得到白色粉末29.18mg。质谱分析(M+H)+1532.0(计算值1531.9)HPLC析出时间14.6分溶出条件层析柱Wakosil 5C18T(4.6×100mm)分离液使用A液0.1％TFA-水、B液含有0.1％TFA的乙腈，对A/B95/5～45/55进行直线型浓度梯度析出(25分)流速1.0ml/分实施例51 Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe2(SEQID NO55)的制造将市售的4-sulfamylbutyryl AM resin(1.09mmol/g)lg与DMF中Fmoc-Gly-OH 356mg(1.199mmol)，PyBOP 567mg(1.09mmol)，DIEA 0.417ml(2.398mmol)室温下反应30min。过滤后，用DMF洗涤树脂，在DMF中Ac2O1.03ml(10.9mmol)，pyridine 0.882ml(10.9mmol)室温下反应2hr。用DMF和MeOH洗涤树脂，干燥后，用piperidine处理树脂，测定游离的Fmoc基吸光数值，得到1.0496g(Fmoc-Gly含量0.295mmol/g)的Fmoc-Gly-4-sulfamylbutyryl AM resin。
用Fmoc-Gly-4-sulfamylbutyryl AM resin与实施例1做法相同进行固相合成，加入最后的Arg，用Boc基取代Fmoc基。在NMP中用ICH2CN和DIEA活化该树脂之后，再用50％-NHMe2水溶液处理，取出保护肽。与实施例1相同，用TFA，thioanisole，m-cresol，H2O，ethanedithiol，triisopropylsilane(80∶5∶5∶5∶2.5∶2.5)处理该肽，进一步纯化HPLC，得到所要的目的物。实施例52Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Mor(SEQ IDNO56)的制造用吗啉替代实施例51的50％-NHMe2水溶液，进行同样处理，纯化得到所要的目的物。
同实施例1一样进行固相合成和除去保护、纯化，得到实施例53～64的化合物。
通过Mmt将市售的Wang resin和侧链氨基进行保护而形成的Fmoc-Dap(Mmt)，与实施例1的做法相同进行固相合成。将得到的树脂与实施例1处理相同纯化该树脂，得到所需的目的物。实施例66Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Ac)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)(SEQ ID NO69)的制造用1％TFA/5％triisopropylsilane/94％DCM处理在实施例65中得到的树脂，仅仅除去Dap侧链的保护基Mmt，用醋酸酐进行乙酰化之后，与实施例65的处理方法相同进行纯化，获得所要的目的物。实施例67Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(C6)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)(SEQ ID NO70)的制造取代实施例66的醋酸酐，用己酸和DIPCDI修饰氨基，同理得到所要的目的物。实施例68Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Adi)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)SEQ ID NO71)的制造用己二酸替代实施例67的己酸，得到所需的目的物。
上述实施例51～68的化合物的质谱分析值(M+H)+(测定值及计算值)以及HPLC保存时间(分)如表3所示。表3


(实施例60及实施例61的HPLC条件为C0-90％，AcCN/45min，Flow1ml/min，YMC ODS AM-301，S-5μm，120A(4.6×100mm)。)实验例1毛喉素刺激抑制产生cAMP活性的测定在24-well组织培养平板上以3×10cells/well密度接种了WO 99/33976号(特願平10-220853号)实施例7所描述的CHO-A10clone 6细胞，过夜培养。0.2mM 3-isobutyl-1-methylxantine(IBMX)、含有0.05％牛血清白蛋白的Hanks′balanced salt solution(HBSS)作为分析缓冲液，在每个孔内用500μl的分析缓冲液洗涤2次之后，37℃保温30分钟。再用500μl的分析缓冲液洗涤1次之后，各孔分别添加500μl的标样，该标样溶解于添加有1μM毛喉素的分析缓冲液，37℃保温30分钟。准备2种保温孔，一种为用于确定作为细胞产生cAMP的基本量(basal level)，用不加毛喉素的分析缓冲液进行保温，另一种为用于确定由于毛喉素刺激产生cAMP的最大量(maximum level)，用含有毛喉素的分析缓冲液保温。保温结束后，用500μl的分析缓冲液洗涤每个小孔，然后在各小孔内加入Amersham公司的cAMP EIA system配有的lysis buffer 1B 500μl，提取cAMP。按照试剂盒的说明要求，在每个提取液(100μl)中进行cAMP量的测定。cAMP产生的抑制活性，根据maximum level和加有标样的well内cAMP量之差(cAMP产生的抑制量)求得，再进一步求出针对由于毛喉素的刺激产生cAMP增大量(maximum level和basal level之差)的百分率，从其用量反应曲线中求出EC50的数值。表4表根据实验例1的方法测定的实施例1～16的化合物活性，表5表示根据实验例1的方法测定的实施例17～50的化合物活性，表6表示根据实验例1的方法测定的实施例51～68的化合物活性。表4

表5


表6


实验例2受体结合分析-1根据乳酸过氧化酶法，用参考例1化合物按照以下操作制备125I标记物。对20μl肽的0.1mM水溶液，在0.1M HEPES-NaOH/pH7.0里，加入20μl浓度为10μg/ml的乳酸过氧化酶(Sigma)、20μl的Iodine-125(Amersham、IMS-30、74MBq)、20μl的稀释了6000倍30％过氧化氢(和光纯药)水溶液，通过涡流式混合仪混合之后，室温下保温10分钟。加入600μl的含有0.1％TFA的蒸留水停止反应，然后通过TSKgel ODS-80TM CTR 4.6×100mm层析柱的反相HPLC分离，分别取出反应生成的标记物最多部分。等量的、与分析缓冲液(50mM Tris-HCl/pH7.5，5mM EDTA，0.5mM PMSF，20μg/ml leupeptin，0.1μg/ml pepstatin A，4μg/ml E-64(肽研究所)，0.1％牛血清白蛋白)混合，-30℃保存直至使用为止。
培养CHO-A10细胞，用含有5mM EDTA的PBS从培养箱中回收细胞之后，悬浮于不含牛血清白蛋白的所述分析缓冲液。使用Polytron匀浆器(Kinematica)，在12,000rpm，15秒匀浆3次，离心(1000×g、4℃、10分钟)之后，回收上清液。对于沈殿的，再次进行同样操作，每次收集上清液，然后进行100,000×g、4℃，1小时离心，回收沈殿部分(膜级分)。将膜级分再悬浮于少量的缓冲液中，用聚四氟乙烯匀浆器匀浆化，-80℃保存直到使用为止。
结合分析按照以下的条件进行实施。在聚丙烯性质的96孔平板上制备100μl溶液，其中包括0.25μg膜级分终浓度为100pM的125I标记化合物、被检物、分析缓冲液，室温下保温1.5个小时。在孔里加有代替被检物的1μM非标记化合物进行非特异结合量的测定。保温结束后使用96孔对应的细胞收集器(Packard)及过滤元件(GF/C、Packard)进行分离，在滤器上收集膜级分。使滤器充分干燥之后，加入Microcinti O(Packard)，用TOP记数仪(Packard)，测定滤器上与膜级分共同被收集的标记物的量。从它们各自的测定值减去非特异结合量，然后，针对没有添加检测物的孔(结合总量)通过检测物的添加求出减少了的结合量的比例(抑制率)，再进一步从每个检测物的用量-抑制曲线中求出IC50值(表7～表9)。表7

表8


表9

实验例3受体结合分析-2与实验例2的做法相同，利用参考例2化合物根据每个被检物的用量-抑制曲线求出IC50值(表10～表12)。
表10


表11


表12


工业上的利用因为本发明肽衍生物涉及中枢神经机能调节作用、循环机能调节作用、心脏机能调节作用、免疫机能调节作用、消化系统机能调节作用、代谢机能调节作用或生殖系统机能调节作用等，所以将上述激动剂或拮抗剂可以用作治疗或预防以下疾病的药物，例如疾病为，老年性痴呆、脑血管性痴呆、起因于系统变性型的变性疾病(diseases of system degenerative type)(如阿耳茨海默病、巴金和森氏病、皮克病、亨廷顿病等)的痴呆、起因于感染性疾病(如克-雅病等的迟发性病毒感染症等)的痴呆、起因于内分泌性·代谢性·中毒性疾病(如甲状腺机能低下症、维生素B12缺乏症、酒精中毒、各种药物中毒·金属中毒·有机化合物中毒等)的痴呆、起因于肿瘤性疾病(如脑肿瘤等)的痴呆、起因于外伤性疾病(如慢性硬膜下血肿等)的痴呆等的痴呆病、忧郁症、多动(微细脑障碍)综合征、认识障碍、不安障碍、精神分裂症、恐怖症、生长激素分泌障碍(如巨人症、末端肥大症等)、过食症、贪食症、高胆固醇血症、高甘油酯血症、高脂血症、高催乳激素血症、低血糖症、垂体功能低下、垂体性幼稚型、糖尿病(如糖尿病性并发症、糖尿病性肾病、糖尿病性神经障碍、糖尿病性视网膜病等)、癌症(如乳癌、淋巴性白血病、肺癌、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌等)、胰腺炎、肾病(如慢性肾减退、肾炎等)、特纳氏综合征、神经症、类风湿关节炎、脊髓损伤、暂时性脑缺血发作、肌肉萎缩性侧索硬化、急性心肌梗塞、脊髓小脑变性、骨折、创伤、特应性皮炎、骨质疏松、哮喘、癫痫、不孕症、动脉硬化、肺气肿、肺水肿或乳汁分泌减弱等疾病。本发明肽衍生物还可进一步用作催眠镇静剂、改善术后营养状态的药物、升压药、降压药等。
除此之外，还可用作治疗或预防HIV感染、AIDS(Acquired ImmuneDeficiency Syndrome后天性免疫低下综合征)等的药物。
序列表<110>武田药品工业株式会社(Takeda Chemical Industries.Ltd.)<120>肽衍生物<130>2702WOOP<150>JP 12-87114<151>2000-03-23<150>JP 12-28889l<151>2000-09-19<160>72<210>1<211>15<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl)<400>1Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met Pro Xaa1 5 10 15<210>2<211>15<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十三个位置上代表Cha，Xaa在第十五个位置上代表Phe(Cl)<400>2Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Cha Pro Xaa1 5 10 15<210>3<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl)<400>3Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met Pro Xaa15 10<210>4<211>11<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十一个位置上代表Phe(Cl).<400>4Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Xaa Xaa15 10<210>5<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十二个位置上代表Phe(Cl).<400>5Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa15 10<210>6<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Cha.<400>6Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Cha1 5 10<210>7<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十二个位置上代表Phe(Cl).<400>7Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10<210>8<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl).<400>8Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Xaa1 5 10<210>9<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一个位置上代表pGlu，Xaa在第十一个位置上代表Cha.<400>9Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Xaa Pro Phe1 5 10<210>10<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一个位置上代表pGlu，Xaa在第十三个位置上代表Phe(Cl).<400>10Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Xaa1 5 10<210>11<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Cha.<400>11Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Xaa Pro Phe1 5 10<210>12<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十二个位置上代表Phe(Cl).<400>12Arg Pro Arg Leu Phe Ala Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10<210>13<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十二个位置上代表Phe(Cl).<400>13Arg Pro Arg Leu Phe His Lys Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10<210>14<211>15<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Nle.<400>14Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Xaa Pro Tyr1 5 10 15<210>15<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Cha.<400>15Arg Pro Arg Leu Phe His Lys Gly Pro Xaa Pro Phe1 5 10<210>16<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl).<400>16Arg Pro Arg Leu Phe Hi s Lys Gly Pro Met Pro Xaa1 510<210>17<211>36<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Nle.<400>17Leu Val Gln Pro Arg Gly Ser Arg Asn Gly Pro Gly Pro Trp Gln Gly1 5 10 15Gly Arg Arg Lys Phe Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly20 25 30Pro Xaa Pro Tyr35<210>18<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一个位置上代表pGlu，Xaa在第十一个位置上代表Nle.<400>18Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Xaa Pro Tyr1 5 10<210>19<211>380<212>PRT<213>未知<220><223><400>19Met Glu Glu Gly Gly Asp Phe Asp Asn Tyr Tyr Gly Ala Asp Asn Gln1 5 10 15Ser Glu Cys Glu Tyr Thr Asp Trp Lys Ser Ser Gly Ala Leu Ile Pro20 25 30Ala Ile Tyr Met Leu Val Phe Leu Leu Gly Thr Thr Gly Ash Gly Leu35 40 45Val Leu Trp Thr Val Phe Arg Ser Ser Arg Glu Lys Arg Arg Ser Ala50 55 60Asp Ile Phe Ile Ala Ser Leu Ala Val Ala Asp Leu Thr Phe Val Val65 70 75 80Thr Leu Pro Leu Trp Ala Thr Tyr Thr Tyr Arg Asp Tyr Asp Trp Pro85 90 95Phe Gly Thr Phe Phe Cys Lys Leu Ser Ser Tyr Leu Ile Phe Val Asn100 105 110Met Tyr Ala Ser Val Phe Cys Leu Thr Gly Leu Ser Phe Asp Arg Tyr115 120 125Leu Ala lle Val Arg Pro Val Ala Asn Ala Arg Leu Arg Leu Arg Val130 135 140Ser Gly Ala Val Ala Thr Ala Val Leu Trp Val Leu Ala Ala Leu Leu145 150 155 160Ala Met Pro Val Met Val Leu Arg Thr Thr Gly Asp Leu Glu Asn Thr165 170 175Thr Lys Val Gln Cys Tyr Met Asp Tyr Ser Met Val Ala Thr Val Ser180 185 190Ser Glu Trp Ala Trp Glu Val Gly Leu Gly Val Ser Ser Thr Thr Val195 200 205Gly Phe Val Val Pro Phe Thr Ile Met Leu Thr Cys Tyr Phe Phe Ile210 215 220Ala Gln Thr Ile Ala Gly His Phe Arg Lys Glu Arg Ile Glu Gly Leu225 230 235 240Arg Lys Arg Arg Arg Leu Leu Ser Ile Ile ValVal Leu Val Val Thr245 250255Phe Ala Leu Cys Trp Met Pro Tyr His Leu Val Lys Thr Leu Tyr Met260 265 270Leu Gly Ser Leu Leu His Trp Pro Cys Asp Phe Asp Leu Phe Leu Met275 280 285Asn Ile Phe Pro Tyr Cys Thr Cys Ile Ser Tyr Val Asn Ser Cys Leu290 295 300Asn Pro Phe Leu Tyr Ala Phe Phe Asp Pro Arg Phe Arg Gln Ala Cys305 310 315 320Thr Ser Met Leu Cys Cys Gly Gln Ser Arg Cys Ala Gly Thr Ser His325 330 335Ser Ser Ser Gly Glu Lys Ser Ala Ser Tyr Ser Ser Gly His Ser Gln340 345 350Gly Pro Gly Pro Asn Met Gly Lys Gly Gly Glu Gln Met His Glu Lys355 360 365Ser Ile Pro Tyr Ser Gln Glu Thr Leu Val Val Asp370 375 380<210>20<211>1140<212>DNA<213>未知<220><223><400>20ATGGAGGAAG GTGGTGATTT TGACAACTAC TATGGGGCAG ACAACCAGTC TGAGTGTGAG 60TACACAGACT GGAAATCCTC GGGGGCCCTC ATCCCTGCCA TCTACATGTT GGTCTTCCTC120CTGGGCACCA CGGGAAACGG TCTGGTGCTC TGGACCGTGT TTCGGAGCAG CCGGGAGAAG180AGGCGCTCAG CTGATATCTT CATTGCTAGC CTGGCGGTGG CTGACCTGAC CTTCGTGGTG240ACGCTGCCCC TGTGGGCTAC CTACACGTAC CGGGACTATG ACTGGCCCTT TGGGACCTTC300TTCTGCAAGC TCAGCAGCTA CCTCATCTTC GTCAACATGT ACGCCAGCGT CTTCTGCCTC360ACCGGCCTCA GCTTCGACCG CTACCTGGCC ATCGTGAGGC CAGTGGCCAA TGCTCGGCTG420AGGCTGCGGG TCAGCGGGGC CGTGGCCACG GCAGTTCTTT GGGTGCTGGC CGCCCTCCTG480GCCATGCCTG TCATGGTGTT ACGCACCACC GGGGACTTGG AGAACACCAC TAAGGTGCAG540TGCTACATGG ACTACTCCAT GGTGGCCACT GTGAGCTCAG AGTGGGCCTG GGAGGTGGGC600CTTGGGGTCT CGTCCACCAC CGTGGGCTTT GTGGTGCCCT TCACCATCAT GCTGACCTGT660TACTTCTTCA TCGCCCAAAC CATCGCTGGC CACTTCCGCA AGGAACGCAT CGAGGGCCTG720CGGAAGCGGC GCCGGCTGCT CAGCATCATC GTGGTGCTGG TGGTGACCTT TGCCCTGTGC780TGGATGCCCT ACCACCTGGT GAAGACGCTG TACATGCTGG GCAGCCTGCT GCACTGGCCC840TGTGACTTTG ACCTCTTCCT CATGAACATC TTCCCCTACT GCACCTGCAT CAGCTACGTC900AACAGCTGCC TCAACCCCTT CCTCTATGCC TTTTTCGACC CCCGCTTCCG CCAGGCCTGC960ACCTCCATGC TCTGCTGTGG CCAGAGCAGG TGCGCAGGCA CCTCCCACAG CAGCAGTGGG 1020GAGAAGTCAG CCAGCTACTC TTCGGGGCAC AGCCAGGGGC CCGGCCCCAA CATGGGCAAG 1080GGTGGAGAAC AGATGCACGA GAAATCCATC CCCTACAGCC AGGAGACCCT TGTGGTTGAC 1140<210>21<211>15<212>PRT<213>人工序列<223><400>21Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 15<210>22<211>13<212>PRT<213>人工序列<223><400>22Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Metl 5 10 13<210>23<211>12<212>PRT<213>人工序列<223><400>23Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro1 5 10 12<210>24<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Met(O)<400>24Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Xaa1 5 10 13<210>25<211>15<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Lys(Arg-Arg)<400>25Arg Arg Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 15<210>26<211>15<212>PRT<213>人工序列<223><400>26Arg Arg Arg Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 15<210>27<211>15<212>PRT<213>人工序列<223><400>27Arg Arg Lys Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 15<210>28<211>12<212>PRT<213>人工序列<223><400>28Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met Pro Phe15 10 12<210>29<211>15<212>PRT<213>人工序列<223><400>29Arg Arg Ala Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe15 10 15<210>30<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>30Xaa Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>31<211>10<212>PRT<213>人工序列<223><400>31Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met1 5 10<210>32<211>11<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl)<400>32Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Xaa1 5 10 11<210>33<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>33Xaa Arg Pro Arg Leu Ser Ala Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>34<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>34Xaa Arg Pro Arg Leu Ser Arg Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>35<211>12<212>PRT<213>人工序列<223><400>35Arg Pro Arg Leu Phe Ala Arg Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 12<210>36<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Nal(2)<400>36Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Xaa1 5 10 12<210>37<211>15<212>PRT<213>人工序列<223><400>37Arg Arg Phe Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 15<210>38<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>38Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Arg Gly Pro Met Pro Phe15 10 13<210>39<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一个位置上代表pGlu，Xaa在第十二个位置上代表Phe(Cl)<400>39Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Xaa1 5 10 12<210>40<211>11<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Cha<400>40Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Xaa1 5 10 11<210>41<211>11<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十一个位置上代表Phe(Cl)<400>41Arg Pro Arg Leu Phe His Lys Gly Pro Xaa Xaa1 5 10 11<210>42<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>42Xaa Arg Pro Arg Leu Ser Leu Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>43<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一个位置上代表pGlu，Xaa在第十三个位置上代表Nal(2)<400>43Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Xaa1 5 10 13<210>44<211>11<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Nal(2)<400>44Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Xaa1 5 10 11<210>45<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>45Xaa Arg Pro Arg Leu Ser Arg Arg Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>46<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>46Xaa Arg Pro Arg Leu Phe Arg Arg Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>47<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>47Xaa Arg Pro Arg Leu Ser Phe Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>48<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>48Xaa Arg Pro Arg Leu Phe His Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 l3<210>49<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一个位置上代表pGlu，Xaa在第十二个位置上代表Cha<400>49Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Xaa1 5 10 12<210>50<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一个位置上代表pGlu，Xaa在第十二个位置上代表Nal(2)<400>50Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Xaa1 5 10 12<210>51<211>11<212>PRT<213>人工序列<223><400>51Arg Pro Arg Leu Phe Ala Arg Gly Pro Met Phe1 5 10 11<210>52<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>52Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Phe Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>53<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Cha<400>53Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Xaa1 5 10 12<210>54<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>54Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Leu Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>55<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表NMe2<400>55Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Xaa1 5 10 12<210>56<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Mor<400>56Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Xaa1 5 10 12<210>57<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl)<400>57Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Ala Pro Xaa1 5 10 12<210>58<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl)<400>58Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Gly Met Pro Xaa1 5 10 12<210>59<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第九个位置上代表N-MeAla，Xaa在第十二个位置上代表Phe(Cl)<400>59Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Xaa Met Pro Xaa1 5 10 12<210>60<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十二个位置上代表Phe(Cl)<400>60Arg Pro Arg Leu Ser His Ala Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>61<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十二个位置上代表Phe(Cl)<400>61Arg Pro Arg Ala Ser His Lys Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>62<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十二个位置上代表Phe(Cl)<400>62Arg Pro Ala Leu Ser His Lys Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>63<211>11<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十一个位置上代表Pyn<400>63Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Xaa Xaa1 5 10 11<210>64<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十二个位置上代表Pyn<400>64Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>65<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十三个位置上代表Cha<400>65Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Gly Xaa1 5 10 13<210>66<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第三个位置上代表Lys(Me)2<400>66Arg Pro Xaa Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 12<210>67<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第七个位置上代表Lys(Me)2<400>67Arg Pro Arg Leu Ser Ala Xaa Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 12<210>68<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第六个位置上代表Dap，Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十二个位置上代表Phe(Cl)<400>68Arg Pro Arg Leu Ser Xaa Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>69<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第六个位置上代表Dap(Ac)，Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十二个位置上代表Phe(Cl)<400>69Arg Pro Arg Leu Ser Xaa Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>70<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第六个位置上代表Dap(C6)，Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十二个位置上代表Phe(Cl)<400>70Arg Pro Arg Leu Ser Xaa Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>71<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第六个位置上代表Dap(Adi)，Xaa在第十个位置上代表Cha，Xaa在第十二个位置上代表Phe(Cl)<400>71Arg Pro Arg Leu Ser Xaa Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 1权利要求
1.一种以式(I)P1-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-P2-P3-Gly-Pro-P4-P5[式中，P1表示氢原子或者由相同或不同且侧链可被取代的1-25个氨基酸组成的氨基酸残基或肽链，P2表示侧链可被取代的中性氨基酸残基或侧链可被取代的碱性氨基酸残基，P3表示侧链可被取代的中性氨基酸残基、侧链可被取代的芳香族氨基酸残基或侧链可被取代的碱性氨基酸残基，P4表示结合键或侧链可被取代的中性或芳香族氨基酸残基，P5表示①侧链可被取代的氨基酸残基或者其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物，②羟基或③侧链可被取代的氨基酸残基和侧链可被取代的氨基酸残基结合形成的二肽链或其C末端羧基可被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物，式-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-或-Gly-Pro-中的每个氨基酸残基的侧链均可被取代。]表示的肽或其酯或其酰胺或其盐。
2.根据权利要求1所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中P1为氢原子、pGlu或Arg-Arg-Gln。
3.根据权利要求1所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中P2为可被取代的His或可被取代的Ala。
4.根据权利要求1所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中P3为可被取代的Arg或可被取代的Lys。
5.根据权利要求1所述的肽或其酯或其酰胺或其盐，其中-P4-P5为-Cha-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Pro-Phe、-Met-Pro-Phe、-Met-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Phe或-Met-Phe。
6.如下表示的根据权利要求1所述的肽①Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；②Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；③Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe；④Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)；⑤Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；⑥Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)；⑦pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；⑧pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe或⑨Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Phe，或其酯或其酰胺或其盐。
7.一种以式(II)Q1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Q2-Gly-Q5-Q3-Q4[式中，Q1表示氢原子或者由相同或不同且侧链可被取代的1-25个氨基酸组成的氨基酸残基或肽链，Q2表示侧链可被取代的中性氨基酸残基、侧链可被取代的芳香族氨基酸残基或侧链可被取代的碱性氨基酸残基，Q3表示结合键或侧链可被取代的中性或芳香族氨基酸残基，Q4表示①侧链可被取代的氨基酸残基或者其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的氨基酸衍生物，②羟基或③侧链可被取代的氨基酸残基和侧链可被取代的氨基酸残基结合形成的二肽链或其C末端羧基被还原为羟甲基或甲酰基的肽衍生物，Q5表示侧链可被取代的中性氨基酸残基，式-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-中的每个氨基酸残基的侧链均可被取代。]表示的肽或其酯或其酰胺或其盐。
8.根据权利要求7所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中Q1为氢原子、pGlu或Arg-Arg-Gln。
9.根据权利要求7所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中Q2为可被取代的Arg或可被取代的Lys。
10.根据权利要求7所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中-Q3-Q4为-OH、-Met、-Met-Pro-Phe、-Met-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Pro-Phe、-Cha-Pro-Phe(Cl)、-Ala-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Phe(Cl)或-Cha。
11.根据权利要求7所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中Q5为可被取代的Pro、可被取代的Gly或可被取代的Ala。
12.如下表示的根据权利要求7所述的肽(i)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)；(ii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)；(iii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)；(iv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；(v)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha；(vi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe；(vii)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(viii)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met；(ix)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro；(x)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xi)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met；(xiii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xiv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Ala-Pro-Phe(Cl)；(xv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Met-Pro-Phe(Cl)；(xvi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe-Ala-Met-Pro-Phe(Cl)；(xvii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pyn；(xviii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Pyn；(xix)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Cha；或者(xx)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys(Me)2-Gly-Pro-Met-Pro-Phe，或其酯或其酰胺或其盐。
13.一种以式(III)R1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-R2-Pro-R3[式中，R1表示氢原子或者由相同或不同且侧链可被取代的1-25个氨基酸组成的氨基酸残基或肽链，R2表示可被取代的Cha、可被取代的Met或可被取代的Nle，R3表示可被取代的Phe(Cl)、可被取代的Phe、可被取代的Nal(2)、可被取代的Cha或可被取代的Tyr，式中-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro或-Pro-的每个氨基酸残基的侧链均可被取代。]表示的肽或其酯或其酰胺或其盐。
14.根据权利要求13所述肽或其酯或其酰胺或其盐，其中R1为氢原子、pGlu或Arg-Arg-Gln。
15.如下表示的根据权利要求13所述的肽①Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；②Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；③Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)；④pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe；⑤pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)；⑥Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Nle-Pro-Tyr；⑦Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)；⑧pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)；或者⑨Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Cha，或其酯或其酰胺或其盐。
16.一种如下所示的肽(i)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met(O)；(ii)Arg-Arg-Lys(Arg-Arg)-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(iii)Arg-Arg-Arg-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(iv)Arg-Arg-Lys-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(v)Arg-Arg-Ala-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(vi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)；(vii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(viii)Arg-Arg-Phe-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(ix)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(x)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)；(xi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha；(xii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Leu-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xiii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)；(xiv)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xv)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Phe-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xvi)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha；(xvii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)；(xviii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Phe-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xix)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Leu-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xx)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe2；(xxi)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Mor；(xxii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Ala-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；(xxiii)Arg-Pro-Arg-Ala-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；(xxiv)Arg-Pro-Lys(Me)2-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xxv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；(xxvi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Ac)c-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；(xxvii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(C6)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；(xxviii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Adi)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；或者(xxix)Arg-Pro-Ala-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)，或其酯或其酰胺或其盐。
17.一种含有权利要求1、7、13或16所述的肽或其酯或其酰胺或其盐的药物。
18.根据权利要求17所述的药物，其为中枢神经功能调节剂、循环功能调节剂、心脏功能调节剂、免疫功能调节剂、消化系统功能调节剂、代谢功能调节剂或生殖系统功能调节剂。
19.根据权利要求17所述的药物，其为预防或治疗HIV感染或AIDS的药物。
20.根据权利要求17所述的药物，其为含有SEQ ID NO19所示氨基酸序列的蛋白质或其盐的作用剂。
21.一种根据权利要求1、7、13或16所述肽或其酯或其酰胺或其盐在制备包含权利要求1、7、13或16所述肽或其酯或其酰胺或其盐的药物中的用途。
22.一种预防或治疗HIV感染或AIDS的方法，其特征在于，将权利要求1、7、13或16所述肽或其酯或其酰胺或其盐投药于哺乳动物。
全文摘要
本发明涉及G蛋白偶联型受体蛋白配体识别的一种新肽衍生物。本发明的肽衍生物可以用于①利用重组型受体蛋白表达系来开发受体结合分析系统和筛选药品增补化合物；②开发药物如，中枢神经功能调节剂、循环功能调节剂、心脏功能调节剂、免疫功能调节剂、消化系统功能调节剂、代谢功能调节剂或生殖系统功能调节剂等。
文档编号A61P3/00GK1419563SQ01807077
公开日2003年5月21日 申请日期2001年3月22日 优先权日2000年3月23日
发明者北田千惠子, 西泽直城, 日沼州司, 细谷昌树 申请人:武田药品工业株式会社