专利名称：卡铂前体脂质体注射剂及其制造方法
技术领域：
本发明涉及一种药物制剂及其制造方法，特别是涉及抗癌药物卡铂的新剂型及其制造方法。
迄今为止，治疗癌症的最有效途径除了手术治疗就是抗癌药结合化疗。卡铂是一种疗效显著的传统抗癌药，抗癌药卡铂的分子式为顺式-1，1-环丁烷二羧酸二氨铂，为白色粉末或结晶性粉末，易溶于水，水中溶解度为10mg/ml，对光敏感，易分解。作用机理为通过抑制肿瘤细胞DNA(脱氧核糖核酸)的合成而抑制肿瘤细胞的生长。
但在实际应用中，一种癌症被有效治疗的同时，卡铂及其产物对人体血液、肝脏和肾脏等正常组织所造成的严重损害也是不能忽略的，这不仅给癌症的治疗带来了难度，也给病人造成了严重的损失和经济负担。因此，为有效治疗癌症，提高抗癌药疗效，降低抗癌药毒副作用，开发研制高效低毒的抗癌药新品种势在必行。
脂质体作为抗癌药载体可以提高药物治疗指数，降低抗癌药毒性和减少抗癌药副作用并减少剂量。脂质体适合体内降解，无毒性和无免疫原性，脂质体的靶向性和长效作用更使脂质体在医学和生物学领域中倍受青睐。
常用的脂质体均为液体状态，脂质体在液体状态下存在着许多问题，如药物的渗漏、粒子的聚集以及磷脂在液体状态下的氧化、水解等，这些也影响了脂质体的工业化大生产，更影响了脂质体在临床上的应用。
为解决液体型脂质体的不稳定问题，本专利发明了一种稳定的、固体型的卡铂前体脂质体注射剂。
本发明的卡铂前体脂质体注射剂，由下列重量份数比的成分组成卡铂4000-12000磷脂500-1000
胆固醇 50-100氯化钠 9000冻干保护剂 100-1000其中，优选的是由下列重量份数比的成分组成的药物卡铂7500-8500磷脂750-900胆固醇 70-90氯化钠 9000冻干保护剂 400-600所述冻干保护剂选自氨基乙酸、山梨糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖、葡萄糖或它们的混合物。
本发明的另一目的是提供一种生产卡铂前体脂质体注射剂的方法。
一种生产卡铂前体脂质体注射剂的方法，包括以下步骤1)备置下述重量及体积份数比的原料卡铂 4000-12000毫克磷脂 500-1000毫克胆固醇50-100毫克氯化钠9000毫克氨基乙酸 100-1000毫克有机溶剂 500-700毫升蒸馏水1000毫升2)将卡铂溶解于蒸馏水中，加入氯化钠，得到与血浆等渗的卡铂水溶液；3)将磷脂和胆固醇用有机溶剂溶解，并高速注入到上述卡铂水溶液中；4)挥发除净有机溶剂；5)注入溶解于蒸馏水中的冻干保护剂，搅拌；6)真空冷冻干燥得到粉末状的固体卡铂前体脂质体注射剂。
所述冻干保护剂优选氨基乙酸、山梨糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖、葡萄糖或它们的混合物。所述有机溶剂优选氯仿、乙醚、乙醇或任意两种的混合物。
所述将卡铂溶解于蒸馏水中，加入氯化钠调整溶液与血浆等渗，将磷脂和胆固醇的有机溶剂高速注入卡铂氯化钠水溶液中，在注入溶解的过程中，应一直持续搅拌，并保持溶液温度维持在10℃-15℃。
所述挥发除净有机溶剂采用搅拌过夜的方法。
为了使冻干保护剂与卡铂的脂质体溶液能充分结合，所述加入冻干保护剂后，搅拌30-50分钟后，进行真空冷冻干燥。
所述真空冷冻干燥是在-50℃～-60℃，0.5～0.1mPa条件下进行的。
得到的固体卡铂前体脂质体注射剂为白色、疏松、流动性好的粉末状。称重、分装于5ml安瓿中，冲氮气，封口，灭菌，即可出厂。
临用前将安瓿中卡铂前体脂质体用注射用水溶解，则立即分散成均匀的卡铂脂质体水溶液，其有效活性成分为其中的卡铂脂质体，具体用量根据医嘱而定。扫描电镜测得本发明卡铂前体脂质体水合后脂质体的平均粒径小于1μm，75％的粒子粒径在200-600μm之间。
卡铂前体脂质体注射剂中卡铂的体外制剂检测条件为高效液相色谱(HPLC)内标法。色谱条件为ODS-C18柱(250×4.6mm，10μm)，检测波长229nm，流动相5％的甲醇水溶液，流速1.0ml/min，柱温室温，内标尿苷。
本发明还检测了卡铂前体脂质体注射剂在生物体内的分布情况，由于卡铂前体脂质体注射剂在生物体内分布广，生物体组织中卡铂含量低，所以卡铂的生物体内组织分布由灵敏度高的原子吸收分光光度法进行检测。检测结果表明，卡铂前体脂质体注射剂中的卡铂与卡铂水制剂中的卡铂相比，生物体内组织分布特点有显著不同，表现在不同组织中药物浓度的变化。卡铂被制成脂质体后，使卡铂在肺、脾、肝组织中的药物浓度提高，而在肾和血中的药物浓度降低。卡铂在临床通常被用作治疗肺癌的抗癌药，并且卡铂的最主要毒性是对骨髓的抑制作用，使白细胞、血小板减少，卡铂脂质体提高了卡铂在靶器官肺组织中的浓度，降低了卡铂在血液和肾脏中的浓度，最终达到了降低毒性，提高治疗效果的作用。
卡铂前体脂质体注射剂的刺激性试验和溶血性试验结果表明，卡铂前体脂质体注射剂安全可靠，无刺激性，并且没有溶血反应。
由于本发明的卡铂前体脂质体注射剂水合后，卡铂脂质体的粒径小，对肺、脾组织有天然的靶向性，而在肾中浓度相对降低，因此提高了抗癌药卡铂在肺组织中的累积，降低了卡铂对肾脏的毒性。因此本发明的卡铂前体脂质体注射剂是一种低毒、高效的抗癌药物新剂型。同时，由于将卡铂前体脂质体以固体的形式贮存，临用前加入分散介质分散形成溶液型脂质体，不但方便了储存、运输，而且从根本上解决了液体型脂质体的不稳定问题。
本发明生产卡铂前体脂质体注射剂的方法工艺简单，不需要特殊的设备，因而生产成本低，适合于大规模的工业化生产。
下面结合附图及具体实施例对本发明做进一步说明。
图1为肺中卡铂浓度-时间变化曲线2为脾中卡铂浓度-时间变化曲线3为肝中卡铂浓度-时间变化曲线4为肾中卡铂浓度-时间变化曲线5为血中卡铂浓度-时间变化曲线图实施例2、生产卡铂前体脂质体注射剂与实施例1的步骤相同，不同的是原料的配方如下卡铂 11000毫克磷脂 400毫克胆固醇90毫克氯化钠9000毫克山梨酸及山梨醇的混合物(山梨酸∶山梨醇＝4∶6) 900毫克乙醚 600毫升蒸馏水1000毫升实施例3、生产卡铂前体脂质体注射剂与实施例1的步骤相同，不同的是原料的配方如下卡铂 3000毫克磷脂 950毫克胆固醇60毫克氯化钠9000毫克葡萄糖200毫克乙醇及乙醚的混合物(乙醇∶乙醚＝5∶5) 550毫升蒸馏水1000毫升实施例4、卡铂前体脂质体对卡铂在生物体内组织分布的影响实验设置了卡铂前体脂质体实验组和卡铂水溶液对照组两组，实验对象为小鼠，用相同卡铂活性成分的卡铂前体脂质体注射液和卡铂水溶液小鼠尾静脉注射，在不同的时间点分别将小鼠的不同脏器组织(肝、脾、肺、肾)取出，用最灵敏、先进的原子吸收法测定其中药物含量随时间的变化情况，同时还监测了小鼠血中药物浓度的变化情况，结果如图1、图2、图3、图4、图5所示。
从图1-5中可以看出，卡铂被制成卡铂前体脂质体注射剂后，改变了卡铂在生物体内的分布，使卡铂在肺、脾、肝中的生物利用度提高，而在肾和血中药物的生物利用度降低。
实施例5、卡铂前体脂质体注射剂的刺激性试验1、大耳白家兔兔耳缘皮下注射法试验方法选择健康无耳疾大耳白家兔6只，体重2.0-3.0kg，随机分两组。给药组耳缘皮下注射卡铂前体脂质体注射液0.05ml，对照组大耳白家兔耳缘皮下注射0.9％生理盐水注射液。观察一小时。
观察指标注射时，兔安静，无因刺激所致摇头动作，注射后，兔耳缘皮下有一药液鼓包，白色，给药兔耳无红肿，充血等受刺激现象。一小时后，可以看到，给药兔耳与对照组兔耳相比，兔耳给药局部药物吸收良好，无结硬块或坏死现象。
结论卡铂前体脂质体注射剂给家兔耳缘皮下注射后，对兔耳组织无刺激损伤作用。
2.大耳白家兔点眼法试验方法选择健康无眼疾大耳白家兔6只，体重2.0-3.0kg。兔单侧眼中滴加卡铂前体脂质体注射液0.2ml，对侧家兔眼中滴入0.9％生理盐水注射液0.2ml。观察30分钟。
观察指标滴药前，兔眼清澈，眼中无分泌的异物。单侧兔眼滴药、对侧兔眼滴生理盐水时，兔安静，无因刺激所致摇头动作。单侧兔眼滴药后，观察30分钟，与对侧兔眼比较，兔眼无眼分泌物过多，红肿，眨眼等异常现象发生。
结论卡铂前体脂质体注射剂给家兔滴眼后，对兔眼组织无刺激损伤作用。
3、小白鼠静脉注射法试验方法选择健康昆明种小白鼠10只，体重20.0-25.0g，随机分两组。一组5只小鼠，尾静脉注射0.2ml卡铂前体脂质体注射液，对照组5只小鼠，尾静脉注射同剂量0.9％生理盐水。
观察指标给药后一小时内，观察给药小鼠无任何异常行为，无刺激性反应，小鼠活动和饮食不受影响，所注射的卡铂前体脂质体注射剂对血管无刺激性。
结论卡铂前体脂质体注射剂给小鼠尾静脉注射后，对小鼠血管静脉组织无刺激损伤作用。
4、小白鼠腹腔注射法试验方法选择健康昆明种小白鼠10只，体重20.0-25.0g，随机分两组。一组5只小鼠，腹腔注射0.3ml卡铂前体脂质体注射液，对照组5只小鼠，腹腔注射同剂量0.9％生理盐水。
观察指标给药后至给药后一小时内，观察给药小鼠无任何异常行为，无刺激性扭体反应，小鼠活动和饮食不受影响，所注射的卡铂前体脂质体注射剂无刺激性。
结论卡铂前体脂质体注射剂给小鼠腹腔注射后，对小鼠腹腔组织无刺激损伤作用。
在上述各实验中，试验动物均未见有刺激性异常反应。试验结果表明，卡铂前体脂质体注射剂安全可靠。
实施例6、卡铂前体脂质体注射剂的溶血和红细胞凝集试验试验方法取家兔一只，心脏取血10ml，玻璃棒搅除纤维蛋白原，使成脱纤血液，加入100ml生理盐水摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水洗涤4次至上清液不显红色，将所得红细胞3ml，加生理盐水150ml，制备成2％红细胞混悬液代用。
取试管7支，标明1-7号，按下表排比，依次加入2％红细胞混悬液和生理盐水，置37℃恒温箱内30分钟，然后加入不同量的卡铂前体脂质体注射液，第6管为阴性对照管，第7管为阳性溶血样本。摇匀后，置37℃恒温箱内约隔20分钟观察一次，观察至6小时，1-5管与6管相比，上清液的澄清度相同，均未出现透明红色和红棕色絮状沉淀物，7管血细胞完全溶血，1-5管与7管相比，现象完全相反。试验结果见表1表1 卡铂脂质体冻干粉注射剂溶血、凝集试验试管编号 1 2 3 4 5 6 7受试药液(ml) 0.10.20.30.40.5 0 0生理盐水(ml) 2.42.32.22.12.02.50去离子水(ml) 0 0 0 0 0 02.52％红细胞混悬液(ml) 2.52.52.52.52.52.5 2.5结果判断1-5管在2-6小时内，其上清液与6管相比基本相同，均未出现透明红色和棕色絮状沉淀物。1-5管在2-6小时内，与7管相比，则现象完全相反，7管出现了全部的红色溶血现象。
结论卡铂前体脂质体注射剂无凝血、无红细胞凝集作用，注射剂安全可靠，可供临床注射用药。
权利要求
1.卡铂前体脂质体注射剂，由下列重量份数比的成分组成卡铂 4000-12000毫克磷脂 500-1000毫克胆固醇 50-100毫克氯化钠 9000毫克冻干保护剂 100-1000毫克
2.根据权利要求1所述的卡铂前体脂质体注射剂，其特征在于所述注射剂由下列重量份数比的成分组成卡铂 7500-8500磷脂 750-900胆固醇 70-90氯化钠 9000冻干保护剂 400-600
3.根据权利要求1或2所述的卡铂前体脂质体注射剂，其特征在于所述冻干保护剂为氨基乙酸、山梨糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖、葡萄糖或它们的混合物。
4.一种生产卡铂前体脂质体注射剂的方法，包括以下步骤1)备置下述重量及体积份数比的原料卡铂 4000-12000毫克磷脂 500-1000毫克胆固醇50-100毫克氯化钠9000毫克冻干保护剂100-1000毫克有机溶剂 500-700毫升蒸馏水1000毫升2)将卡铂溶解于蒸馏水中，加入氯化钠，得到与血浆等渗的卡铂溶液；3)将磷脂和胆固醇用有机溶剂溶解，并高速注入到上述卡铂水溶液中4)挥发除净有机溶剂；5)注入溶解于蒸馏水中的冻干保护剂，搅拌；6)真空冷冻干燥得到粉末状的固体卡铂前体脂质体注射剂。
5.根据权利要求4所述的一种生产卡铂前体脂质体注射剂的方法，其特征在于所述冻干保护剂为氨基乙酸、山梨糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖、葡萄糖或它们的混合物。
6.根据权利要求4所述的一种生产卡铂前体脂质体注射剂的方法，其特征在于所述有机溶剂为氯仿、乙醚、乙醇或任意两种的混合物。
7.根据权利要求4或5或6所述的一种生产卡铂前体脂质体注射剂的方法，其特征在于所述将卡铂溶解于蒸馏水中，加入氯化钠，及高速注入用有机溶剂溶解的磷脂和胆固醇的过程中，一直进行搅拌，并保持溶液温度维持在10℃-15℃。
8.根据权利要求4或5或6所述的一种生产卡铂前体脂质体注射剂的方法，其特征在于所述挥发除净有机溶剂采用搅拌过夜的方法。
9.根据权利要求4或5或6所述的一种生产卡铂前体脂质体注射剂的方法，其特征在于所述加入冻干保护剂后，搅拌30-50分钟后再进行真空冷冻干燥。
10.根据权利要求4或5或6所述的一种生产卡铂前体脂质体注射剂的方法，其特征在于所述真空冷冻干燥是在-50℃～-60℃，0.5～0.1mPa条件下进行的。
全文摘要
本发明的名称为卡铂前体脂质体注射剂及其制造方法。本发明的目的是提供一种毒副作用较低的固体型卡铂前体脂质体注射剂。本发明的卡铂前体脂质体注射剂，由下列重量份数比的成分组成卡铂，4000－12000；磷脂，500－1000；胆固醇，50－100；氯化钠，9000；冻干保护剂100－1000；有机溶剂500－700；蒸馏水1000。生产卡铂前体脂质体注射剂的方法，包括以下步骤1)备置上述重量及体积份数比的原料；2)将卡铂溶解于蒸馏水中，加入氯化钠，得到与血浆等渗的卡铂水溶液；3)将磷脂和胆固醇用有机溶剂溶解，并高速注入到上述卡铂水溶液中；4)挥发除净有机溶剂；5)加入冻干保护剂，搅拌；6)真空冷冻干燥得到粉末状的固体卡铂前体脂质体注射剂。
文档编号A61K9/127GK1435167SQ0210055
公开日2003年8月13日 申请日期2002年1月31日 优先权日2002年1月31日
发明者罗国安, 张奇, 王义明 申请人:清华大学