专利名称：一种用于治疗肿瘤的中药冻干粉针剂制备方法
技术领域：
本发明属于中药制药领域，具体涉及一种注射用艾迪冻干粉针剂的制备方法。
背景技术：
恶性肿瘤(癌症)是一类严重威胁人类生命和健康的疾病。据最新的统计资料报道，我国每年新发现的肿瘤病人约100万左右，在全球癌症每年夺去大约600万人生命，并把1000万人置于死亡边缘，随着人类生存环境的日益恶化，肿瘤的发生率呈逐年上升趋势。世界卫生组织预测21世纪癌症将成为人类的“第一杀手”。目前现代医学对肿瘤的治疗，主要是手术治疗配合方、化疗。手术虽能虽能去除原发病灶，但不能从根本上杜绝肿瘤细胞的再生与繁殖，而这正是日后肿瘤复发和转移的根源，放、化疗虽能杀灭癌细胞，但同时也使大量的正常组织细胞受到损害，诱发胃肠反应、骨髓抑制和肝肾、心脏功能损害，使病人的身体更加虚弱，难以接受进一步治疗。祖国传统医学—中医是一个伟大的宝库，早在几千年前的《内经》、《三因方》等医学古籍中就有肿瘤的记载，如瘿瘤、噎膈等，而中医中药治疗肿瘤更有悠久的历史，经过历代医家反复实践、潜心摸索，已形成了自身独特的理论体系。并在数千年的临床发展中形成了自己独特的一些治疗法则，如扶正祛邪、清热解毒、活血化瘀等法则，特别是近年来经过众多中医、中西医结合工作者的不断努力、大胆实践，也已证实中医药治疗肿瘤具有抗癌抑瘤，提高机体免疫功能，降低放化疗毒副反应，调节机体阴阳平衡，对肿瘤的治疗起到了药到病减或药到病除的效果。提高带癌生存率及生存质量的突出作用，特别是中医药对恶性肿瘤手术后的康复，以及对放化疗的增效减毒方面发挥了重要的作用，深受患者的欢迎。有些病人采用中医药治疗后奇迹般的康复是不足为奇的，人们对中药多糖的研究始于50年代末，对真菌多糖抗癌作用的发现，经过近年来对多糖不断的深入研究，对其作用又有了新的认识，它参与细胞的各种生命现象的调节，如免疫细胞间信息的传递和感受，与细胞表面的多糖体的介导密切相关。大量的药理和临床研究表明，多糖类化合物是一种免疫调节剂，它能激活免疫细胞，提高机体的免疫功能，而对正常细胞没有毒副作用，还具有抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗炎、抗凝血、抗辐射、抗病毒等多方面的活性。1.多糖的免疫调节多糖对抗体的免疫调节作用，主要通过以下几种方式和途径，(1)激活巨噬细胞；(2)激活网状内皮系统(RES)；(3)激活T和B淋巴细胞；(4)激活补体 许多植物多糖有激活补体的作用，补体蛋白上存在的识别点可识别多糖的结构。2抗癌活性，抗癌活性是多糖类化合物所显示的重要生物活性。(1)增强机体免疫功能而发挥抗肿瘤作用；(2)诱生肿瘤坏死因子(TNF)；(3)改变细胞膜的生化特性；(4)抗自由基作用。(河北职工医学院学报第15卷第3期《植物多糖的药理研究概况》李建恒郑富稳)。大量的文献和专利报道人参多糖、黄芪多糖、刺五加多糖都具有很好的抗癌活性，作为中药的有效部位不应舍弃，专利申请号为03117114.1《治疗肿瘤的中药注射制剂及其制作方法》公开了艾迪注射液的提取工艺，该专利采用水提醇沉的工艺进行制备，使大量的具有抗肿瘤作用的多糖被舍弃，诚为可惜。
发明内容
基于以上情况，本发明不仅采用了现代工艺手段大孔吸附树脂法对人参总皂苷、黄芪总皂苷、刺五加总苷进行富集，而且采用超滤法纯化人参多糖、黄芪多糖、刺五加多糖，从而为得到药理活性更强的制剂提供了物质基础。
本发明的目的是提供一种治疗肿瘤的冻干粉针剂及其制备方法，具体而言是运用现代科技手段对人参、黄芪、刺五加中抗癌活性很好的人参总皂苷、黄芪总皂苷、刺五加总苷、人参多糖、黄芪多糖、刺五加多糖进行提取纯化，运用冷冻干燥法制成一种用于治疗肿瘤的中药冻干粉针剂，使该注射制剂的抗癌药理作用更强。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的。
一.本发明的冻干粉针剂可通过下述方法制备原料组成为人参40～60份，黄芪80～120份，刺五加120～180份，斑蝥1～3份；取人参、黄芪、刺五加饮片，放入中药多功能提取罐中，用50％-80％乙醇提取1-3小时，提取2-4次，提取液回收乙醇至尽，提取后的残渣干燥后备用；取提取液干燥粉碎后，与树脂混合后上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱，洗脱用蒸馏水为柱体积的10-15倍，洗脱液弃去，再用50％-80％洗脱，洗脱用乙醇为柱体积的6-10倍，洗脱液回收乙醇至尽备用；取上述干燥的残渣，放入中药多功能提取罐中，用蒸馏水提取1-3小时，提取2-4次，合并提取液，提取液用中空纤维超滤柱，进行超滤，透过液弃去，循环液浓缩至原体积的1/3～1/2时，加蒸馏水至原药液体积，重复操作3-5次，最后一次浓缩至糖度为1％～4％，备用；取斑蝥，用蒸馏水提取2-4次，每次提取1-3小时，提取液浓缩备用；取上述备用原料混合后，按冻干粉针制剂的要求制成注射用冻干粉针剂。
本发明中，原料的用量配比优选人参50份、黄芪100份、刺五加150份、斑蝥1.25份。
原料的用量配比还优选人参60份、黄芪120份、刺五加180份、斑蝥2份。
原料的用量配比还优选人参45份、黄芪80份、刺五加150份、斑蝥2份。
二.检测分析本发明的冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)市售艾迪注射液(北京白塔寺医药批发公司购买，贵州益佰制药股份有限公司生产)1.苷类的检测分析(1)人参总皂苷的检测分析按照WS3-B-3809-98中检测分析人参总皂苷的方法检测分析，经过计算得到人参总皂苷(以人参皂苷Re计)的含量，见表1(2)黄芪总皂苷的检测分析按照《中华人民共和国药典》2000年版一部249页黄芪的含量测定进行检测分析，经过计算得到黄芪总皂苷(以黄芪甲苷计)的含量，见表1(3)刺五加总苷的检测分析采用薄层扫描法测定了刺五加叶中总苷的含量。
材料和方法仪器与试剂CS-930薄层扫描仪(日本岛津公司)；微量进样器；予制硅胶高效薄层板(军事医学科学院)；齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所)；其它试剂均为分析纯。
扫描测定参数双波长反射法线性扫描，测定波长λS＝525nm，参比波长λR＝700nm，线性系数SX＝3，狭缝0.25mm×0.25mm。
样品测定标准溶液的制备精密称取齐墩果酸5mg置5ml容量瓶中，加甲醇溶解定容，摇匀备用。配制的标准液浓度为1g/L。
样品溶液的制备精密称定样品，乙醚萃取，脱脂后加5％H2SO4乙醇水(1∶1)溶液，水浴回流10h，反应产物加水稀释后，氯仿萃取，萃取物定容于5ml容量瓶中。
点样展开显色吸取样品液8μl，标准液8μl分别点于同一薄层板上，以苯—丙酮(加2滴冰醋酸)(36∶13)为展开剂，展开。10％H2SO4水溶液喷雾，在105℃烘烤15min呈现紫红色斑点，然后覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定。薄层扫描仪扫描，测定样品及标准品齐墩果酸斑点的吸光度积分值。按公式计算含量、收率。M＝V总×M样V样＝V总×S样S标×C标×V标V样＝5×S样S标(V总＝5ml，C标＝1mg/ml，V标＝V样＝8μl)，经过计算得到刺五加叶中总苷(以齐墩果酸计)的含量，见表1表1两种制剂的各组分含量比较
2.多糖的检测分析运用高效液相色谱法进行检测分析。
各种单糖标准品均为生化试剂，其它为分析试剂。
仪器Beckman-332型高效液相色谱仪，岛津RID-6A示差折光检测器，色谱柱MICROSORB-MVTM86-700-C5NH25μm。
方法取样品加乙醇沉淀，用高速离心仪进行离心，离心沉淀物用蒸馏水溶解后，进样20ul。
经过检测分析计算，得到两种制剂多糖含量的比较，见表2表2两种制剂多糖含量
通过以上实验数据，我们可以得知本发明的提取纯化工艺制备得到制剂中有效部位比市售艾迪注射液的有效部位的含量要高很多，因此，本发明的提取纯化工艺具有一定的实际意义。
二.药理实施例实施例一对大鼠肝肿瘤抑制的比较实验动物大鼠30只，150g～180g，雌雄不分，分成3组，每组10只，分别用于空白组、两种制剂实验组。
实验药物生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)市售艾迪注射液(北京白塔寺医药批发公司购买，贵州益佰制药股份有限公司生产)本发明的冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)实验方法取大鼠作W256的肝内接种，接种7天后，用戊巴比妥钠按35mg/kg的剂量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，测量肝上肿瘤表面最大径(a)和最小径(b)，按(a*b2)/2＝V(肿瘤体积)。分离胃、十二指肠动脉、肝总动脉和肝固有动脉，结扎胃、十二指肠动脉远端，以银夹阻断肝总动脉，于手术放大镜下在胃十二指肠动脉上切口并插入外径0.3mm导管后再送入肝固有动脉，然后按实验分组分别注入受试药物，术后拔管结扎胃十二指肠动脉，放开肝总动脉银夹，再缝合切口，将大鼠置于动物室待苏醒，继续饲养观察，手术后8天，按上法检测肿瘤体积，见表1表1两种制剂对肿瘤的抑制
注**P＜0.01，*P＜0.01，**与*比较P＜0.05按上述方法，在进行实验，观察大鼠存活天数，见表2表2，大鼠存活天数比较
注**P＜0.01，*P＜0.01，**与*比较P＜0.05实施例2物理、化学和生物因素均能诱发癌症，但人癌发病原因的80％-90％认为是环境化学物质引起的。
两种制剂对二乙基亚硝胺(DENA)诱发大鼠肝癌的抑制实验动物大鼠30只，120g左右，雌雄不分，分成3组，每组10只，分别用于空白组、两种制剂实验组。
实验药物生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)市售艾迪注射液(北京白塔寺医药批发公司购买，贵州益佰制药股份有限公司生产)本发明的冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)实验方法用含二乙基亚硝胺(DENA)的饮水喂养大鼠，36周得原发性肝癌，分表3两种制剂对肿瘤的抑制
注**P＜0.01，*P＜0.01，**与*比较P＜0.05表4，大鼠存活天数比较
注**P＜0.01，*P＜0.01，**与*比较P＜0.05结论通过以上药理实验表明，本发明的冻干粉针剂比市售艾迪注射液的药理作用更好，有利于癌症的治疗。
三.制备实施例实施例一取人参400克、黄芪800克、刺五加1200克，放入中药多功能提取罐中，用50％乙醇提取1小时，提取2次，提取液回收乙醇至尽，提取后的残渣干燥后备用；取提取液干燥粉碎后，与一定量的树脂(D101)混合后上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱，洗脱用蒸馏水为柱体积的10倍，洗脱液弃去，再用50％洗脱，洗脱用乙醇为柱体积的6倍，洗脱液回收乙醇至尽备用；取上述干燥的残渣，放入中药多功能提取罐中，用蒸馏水提取1小时，提取2次，合并提取液，提取液用3K中空纤维超滤柱，进行超滤，透过液弃去，循环液浓缩至原体积的1/3时，加蒸馏水至原药液体积，重复操作3次，最后一次浓缩至糖度为1％，备用；取斑蝥10克，用蒸馏水提取，提取1小时，提取2次，提取液浓缩备用；取上述备用原料混合后，按冻干粉针制剂的要求制成注射用冻干粉针剂。
实施例二取人参600克、黄芪1200克、刺五加1800克，放入中药多功能提取罐中，用80％乙醇提取3小时，提取4次，提取液回收乙醇至尽，提取后的残渣干燥后备用；取提取液干燥粉碎后，与一定量的树脂(AB-8)混合后上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱，洗脱用蒸馏水为柱体积的15倍，洗脱液弃去，再用80％洗脱，洗脱用乙醇为柱体积的10倍，洗脱液回收乙醇至尽备用；取上述干燥的残渣，放入中药多功能提取罐中，用蒸馏水提取3小时，提取4次，合并提取液，提取液用10K中空纤维超滤柱，进行超滤，透过液弃去，循环液浓缩至原体积的1/2时，加蒸馏水至原药液体积，重复操作5次，最后一次浓缩至糖度为4％，备用；取斑蝥30克，用蒸馏水提取，提取3小时，提取4次，提取液浓缩备用；取上述备用原料混合后，按冻干粉针制剂的要求制成注射用冻干粉针剂。
实施例三取人参500克、黄芪1000克、刺五加1500克，放入中药多功能提取罐中，用60％乙醇提取2小时，提取3次，提取液回收乙醇至尽，提取后的残渣干燥后备用；取提取液干燥粉碎后，与一定量的树脂(D101)混合后上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱，洗脱用蒸馏水为柱体积的13倍，洗脱液弃去，再用70％洗脱，洗脱用乙醇为柱体积的8倍，洗脱液回收乙醇至尽备用；取上述干燥的残渣，放入中药多功能提取罐中，用蒸馏水提取2小时，提取3次，合并提取液，提取液用5K中空纤维超滤柱，进行超滤，透过液弃去，循环液浓缩至原体积的1/2时，加蒸馏水至原药液体积，重复操作4次，最后一次浓缩至糖度为2％，备用；取斑蝥15克，用蒸馏水提取，提取2小时，提取3次，提取液浓缩备用；取上述备用原料混合后，按冻干粉针制剂的要求制成注射用冻干粉针剂。
实施例四取人参5公斤、黄芪11公斤、刺五加13公斤，放入中药多功能提取罐中，用80％乙醇提取3小时，提取4次，提取液回收乙醇至尽，提取后的残渣干燥后备用；取提取液干燥粉碎后，与一定量的树脂(D101)混合后上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱，洗脱用蒸馏水为柱体积的15倍，洗脱液弃去，再用80％洗脱，洗脱用乙醇为柱体积的10倍，洗脱液回收乙醇至尽备用；取上述干燥的残渣，放入中药多功能提取罐中，用蒸馏水提取3小时，提取4次，合并提取液，提取液用10K中空纤维超滤柱，进行超滤，透过液弃去，循环液浓缩至原体积的1/3时，加蒸馏水至原药液体积，重复操作5次，最后一次浓缩至糖度为1％，备用；取斑蝥100克，用蒸馏水提取，提取3小时，提取4次，提取液浓缩备用；取上述备用原料混合后，按冻干粉针制剂的要求制成注射用冻干粉针剂。
实施例五取人参55克、黄芪90克、刺五加150克，放入中药多功能提取罐中，用70％乙醇提取3小时，提取4次，提取液回收乙醇至尽，提取后的残渣干燥后备用；取提取液干燥粉碎后，与一定量的树脂(AB-8)混合后上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱，洗脱用蒸馏水为柱体积的13倍，洗脱液弃去，再用70％洗脱，洗脱用乙醇为柱体积的9倍，洗脱液回收乙醇至尽备用；取上述干燥的残渣，放入中药多功能提取罐中，用蒸馏水提取3小时，提取3次，合并提取液，提取液用8K中空纤维超滤柱，进行超滤，透过液弃去，循环液浓缩至原体积的1/2时，加蒸馏水至原药液体积，重复操作5次，最后一次浓缩至糖度为3％，备用；取斑蝥，用蒸馏水提取，提取3小时，提取3次，提取液浓缩备用；取上述备用原料混合后，按冻干粉针制剂的要求制成注射用冻干粉针剂。
实施例六取人参60克、黄芪120克、刺五加180克，放入中药多功能提取罐中，用50％乙醇提取2小时，提取2次，提取液回收乙醇至尽，提取后的残渣干燥后备用；取提取液干燥粉碎后，与一定量的树脂(AB-8)混合后上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱，洗脱用蒸馏水为柱体积的11倍，洗脱液弃去，再用60％洗脱，洗脱用乙醇为柱体积的8倍，洗脱液回收乙醇至尽备用；取上述干燥的残渣，放入中药多功能提取罐中，用蒸馏水提取3小时，提取4次，合并提取液，提取液用10K中空纤维超滤柱，进行超滤，透过液弃去，循环液浓缩至原体积的1/2时，加蒸馏水至原药液体积，重复操作5次，最后一次浓缩至糖度为4％，备用；取斑蝥2克，用蒸馏水提取，提取3小时，提取3次，提取液浓缩备用；取上述备用原料混合后，按冻干粉针制剂的要求制成注射用冻干粉针剂。
实施例七取人参450克、黄芪800克、刺五加1500克，放入中药多功能提取罐中，用65％乙醇提取3小时，提取3次，提取液回收乙醇至尽，提取后的残渣干燥后备用；取提取液干燥粉碎后，与一定量的树脂(AB-8)混合后上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱，洗脱用蒸馏水为柱体积的12倍，洗脱液弃去，再用75％洗脱，洗脱用乙醇为柱体积的9倍，洗脱液回收乙醇至尽备用；取上述干燥的残渣，放入中药多功能提取罐中，用蒸馏水提取2小时，提取3次，合并提取液，提取液用6K中空纤维超滤柱，进行超滤，透过液弃去，循环液浓缩至原体积的1/2时，加蒸馏水至原药液体积，重复操作3-5次，最后一次浓缩至糖度为1％～4％，备用；取斑蝥20克，用蒸馏水提取，提取2小时，提取3次，提取液浓缩备用；取上述备用原料混合后，按冻干粉针制剂的要求制成注射用冻干粉针剂。
实施例八取人参50克、黄芪90克、刺五加140克，放入中药多功能提取罐中，用80％乙醇提取3小时，提取4次，提取液回收乙醇至尽，提取后的残渣干燥后备用；取提取液干燥粉碎后，与一定量的树脂(D101)混合后上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱，洗脱用蒸馏水为柱体积的15倍，洗脱液弃去，再用80％洗脱，洗脱用乙醇为柱体积的7倍，洗脱液回收乙醇至尽备用；取上述干燥的残渣，放入中药多功能提取罐中，用蒸馏水提取3小时，提取3次，合并提取液，提取液用8K中空纤维超滤柱，进行超滤，透过液弃去，循环液浓缩至原体积的1/2时，加蒸馏水至原药液体积，重复操作5次，最后一次浓缩至糖度为3％，备用；取斑蝥2克，用蒸馏水提取，提取3小时，提取3次，提取液浓缩备用；取上述备用原料混合后，按冻干粉针制剂的要求制成注射用冻干粉针剂。
权利要求
1.一种治疗肿瘤的中药冻干粉针剂，其特征在于它可由以下原料按下述制备方法制成(1)原料组成为人参40～60份、黄芪80～120份、刺五加120～180份、斑蝥1～3份；(2)取人参、黄芪、刺五加饮片，放入中药多功能提取罐中，用50％-80％乙醇提取1-3小时，提取2-4次，提取液回收乙醇至尽，提取后的残渣干燥后备用；(3)取(2)中提取液干燥粉碎后，与树脂混合后上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱，洗脱用蒸馏水为柱体积的10-15倍，洗脱液弃去，再用50％-80％洗脱，洗脱用乙醇为柱体积的6-10倍，洗脱液回收乙醇至尽备用；(4)取(2)中干燥的残渣，放入中药多功能提取罐中，用蒸馏水提取1-3小时，提取2-4次，合并提取液，提取液用中空纤维超滤柱，进行超滤，透过液弃去，循环液浓缩至原体积的1/3-1/2时，加蒸馏水至原药液体积，重复操作3-5次，最后一次浓缩至糖度为1％-4％，备用；(5)取斑蝥，用蒸馏水提取2-4次，每次提取1-3小时，提取液浓缩备用；(6)取上述备用原料混合后，按冻干粉针制剂的要求制成注射用冻干粉针剂。
2.根据权利要求1中所述的冻干粉针剂，其特征在于原料的用量配比为人参50份、黄芪100份、刺五加150份、斑蝥1.25份。
3.根据权利要求1中所述的冻干粉针剂，其特征在于原料的用量配比为人参60份、黄芪120份、刺五加180份、斑蝥2份。
4.根据权利要求1中所述的冻干粉针剂，其特征在于原料的用量配比为人参45份、黄芪80份、刺五加150份、斑蝥2份。
5.根据权利要求1中所述的冻干粉针剂，其特征在于其中的大孔吸附树脂为非极性或弱极性的大孔吸附树脂。
6.根据权利要求1中所述的冻干粉针剂，其特征在于其中的空纤维超滤柱的截留分子量为3000-10000。
7.权利要求1-6任一权利要求所述的冻干粉针剂的制备方法，其特征在于包括以下制备步骤取人参、黄芪、刺五加，放入中药多功能提取罐中，用50％乙醇提取1小时，提取2次，提取液回收乙醇至尽，提取后的残渣干燥后备用；取提取液干燥粉碎后，与D101树脂混合后上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱，洗脱用蒸馏水为柱体积的10倍，洗脱液弃去，再用50％洗脱，洗脱用乙醇为柱体积的6倍，洗脱液回收乙醇至尽备用；取上述干燥的残渣，放入中药多功能提取罐中，用蒸馏水提取1小时，提取2次，合并提取液，提取液用3K中空纤维超滤柱，进行超滤，透过液弃去，循环液浓缩至原体积的1/3时，加蒸馏水至原药液体积，重复操作3次，最后一次浓缩至糖度为1％，备用；取斑蝥，用蒸馏水提取，提取1小时，提取2次，提取液浓缩备用；取上述备用原料混合后，制成注射用冻干粉针剂。
全文摘要
本发明公开了一种用于治疗肿瘤的中药冻干粉针剂制备方法，该冻干粉针剂由中药人参、黄芪、刺五加、斑蝥提取的有效部位组成的，其中人参、黄芪、刺五加的有效部位是通过大孔树脂法和超滤法进行纯化的，运用此方法不仅保留原有的有效部位—人参总皂苷、黄芪总皂苷、刺五加总皂苷，还保留抗肿瘤的活性成分人参多糖、黄芪多糖、刺五加多糖；将有效部位混合后按冻干粉针剂的要求制成一种用于治疗肿瘤的中药冻干粉针剂，药理实验结果表明，本发明的治疗肿瘤的中药冻干粉针剂具有更强的药理活性。
文档编号A61P35/00GK1559454SQ20041000444
公开日2005年1月5日 申请日期2004年2月23日 优先权日2004年2月23日
发明者张正生 申请人:张正生