专利名称：紫草素纳米颗粒及其制备方法
技术领域：
本发明属于纳米技术及中药制剂技术领域二.
背景技术：
紫草主要分布于我国新疆、辽宁、湖北、湖南等地区，春秋两季采挖除去茎叶，晒干。紫草作为中药应用已有悠久的历史。它们甘寒清热，专入心肝二经血分，长于凉血活血解毒兼以利尿滑肠。性寒质滑，有轻泄作用。现代研究表明具有显著的抗菌活性，对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和卵黄色八叠菌有抑制作用(田中康雄等药学杂志(日)，1972，92，525)，具有较强的抗炎作用。临床曾用粗制品治疗传染性肝炎和皮肤病，疗效较好(吉林医科大学中草药通讯，1972(5)42)，尤其在治疗糖尿病造成的足部大面积溃疡伤口的愈合上，效果很好。还有抗癌、抗生育、抗甲状腺、抗免疫低下、降血糖、保肝护肝等多种作用。
紫草在中药中多以复方，紫草油形式作为药用。紫草主要成份是紫草素即Shikonin及其衍生物，但是Shikonin很难溶于水，这限制了它的应用。
现代药物治疗学不但要求药物能够以一种预定的速率释放出来，而且要求药物尽可能的浓集到靶向(病灶)部位，从而提高药物的生物利用度和疗效，减少药物的毒副作用。如何使药物达到这个预想的效果，成为当今药物学和药物制剂学的热点和难点。人们期待着更好的、能够解决目前问题的药物问世。载药纳米微粒(Drug-loaded Nanoparticles)正是为解决这两个问题而发展起来的新型载药体系(J.Kreuter，Nanoparticles，inJ.Kreuter(Ed.)，Colloidal Drug Delivery Systems，Marcel Dekker，New York，1994，pp.219-342)。被公认为21世纪初关键技术-纳米科技的出现，也为广大药学研究人员提供了另一种改进药物剂型的手段，必将使得药物的应用越来越接近临床的需要，为临床治疗带来可喜的飞跃。
三.
发明内容
本发明需要解决的问题是采用高分子材料将紫草素包埋，形成紫草素纳米颗粒溶液，有利于紫草素的生物利用。
本发明中的材料紫草素(Shikonin及其衍生物)和聚酯(PCL-PEG2000-PCL)，均由本实验室分别提取、制备。
紫草素纳米颗粒具有纳米颗粒特有的特性，可以均匀地融解在水中，能通过静脉注射，在动物体内有一定的靶向作用。
技术方案1.紫草素纳米颗粒的制备将适量的聚酯(PCL-PEG2000-PCL)和紫草素按照比例8～15∶1，一起溶于一定体积的丙酮中，再将所得溶液缓慢滴加到高速搅拌的20～30ml水中，微微加热在50～60℃，形成紫草素纳米颗粒溶液，冷却后用孔径600nm的滤膜过滤。
2.纳米颗粒形态和粒径分布将纳米微粒的乳液滴到铜网上，干燥后，用1％的磷钨酸钠溶液染色10分钟。用投射电镜观察纳米颗粒的形态(纳米颗粒的照片见附图1)。用90Plus ParticleSizeAnalyzer测纳米微粒的溶液中纳米颗粒的粒径分布，粒径在100～200nm(粒径分布见附图2)。
3.载药纳米颗粒在体外药物释放的研究取紫草素纳米颗粒溶液，放入浸泡过的透析袋中。再将透析袋置于37℃的PBS(1M)400ml溶液中，定时取出4ml溶液，补回4ml PBS溶液，测量所取出溶液的紫外吸收(实验结果见附图3)。
4.载药纳米颗粒在小鼠体内代谢的初步研究。
将紫草素纳米颗粒溶液浓缩，取1ml该溶液尾静脉注射到小白鼠体内，分别在1小时、4小时后，处死小鼠，取小鼠组织血、肝、脾、肾、肺、心、脑，放入离心管内，匀浆，然后在55℃条件下用蛋白酶K处理8小时，再加入4ml乙酸乙酯，振荡，离心取上清，挥干乙酸乙酯后用0.6ml甲醇定容。用HPLC测每个组织内紫草素的含量(实验结果见附图4)。
发明效果实验制得透明澄清的紫草素纳米颗粒溶液，纳米颗粒的粒径在100～200nm，具有纳米微粒特有的特性，均匀地分散在水中，在体外可以缓慢释放，并通过实验证明了该纳米颗粒溶液静脉注射到小鼠体内后，纳米微粒在小鼠体内有一定的靶向分布。本发明制备的紫草素纳米颗粒可以缓释及靶向分布，使紫草素更好地发挥它的抗肿瘤、保肝护肝的药物作用，可作为制备抗肿瘤、保肝护肝的药物。
四.
图1紫草素纳米颗粒在透射电镜下的照片图2紫草素纳米颗粒的粒径分布图3紫草素纳米颗粒溶液在体外的释放曲线图4紫草素纳米溶液静脉注射小鼠后在小鼠体内的组织分布五.
具体实施例方式1.紫草素纳米微粒的制备将15mg聚酯(PCL-PEG2000-PCL)和1mg紫草素一起溶于2ml的丙酮中，再将所得溶液缓慢滴加到高速搅拌的20ml水中，微微加热至50℃，等溶液冷却后，用孔径600nm的滤膜过滤，滤液即为紫草素纳米颗粒溶液。
2.纳米颗粒形态和粒径分布将纳米微粒的乳液滴到铜网上，干燥后，用1％的磷钨酸钠溶液染色10分钟。用投射电镜观察纳米颗粒的形态(纳米微粒照片详见附图1)。用90Plus ParticleSizeAnalyzer测纳米微粒的溶液中纳米颗粒的粒径分布(粒径分布详见附图2)。
3.载药纳米颗粒在体外药物释放的研究将载药纳米颗粒溶液，放入浸泡过的透析袋中。再将透析袋置于37℃的PBS(1M)400ml溶液中，定时取出4ml溶液，补回4ml PBS溶液，测量所取出溶液的紫外吸收(体外释放曲线详见附图3)。
4.载药纳米颗粒在小鼠体内代谢的研究。
将载药纳米颗粒溶液，浓缩至5ml。取1ml该溶液尾静脉注射到小白鼠体内，分别在1小时，4小时后，处死小鼠，取小鼠组织血、肝、脾、肾、肺、心、脑，放入离心管内，匀浆，然后在55℃条件下用蛋白酶K处理8小时，再加入4ml乙酸乙酯，振荡，离心取上清，挥干乙酸乙酯后用0.6ml甲醇定容。用HPLC测每个组织内紫草素的含量(体内分布详见附图4)。
权利要求
1.一种紫草素纳米微粒，其特征是由聚酯及紫草素混合后制备而成。
2.权利要求1中所述的紫草素纳米微粒的制备方法，其特征是将适量的聚酯和紫草素按照比例8～15∶1，一起溶于一定体积的丙酮中，再将所得溶液缓慢滴加到高速搅拌的20～30ml水中，微微加热在50～60℃，形成紫草素纳米颗粒溶液，冷却后用孔径600nm的滤膜过滤。
3.权利要求1中所述紫草素纳米微粒在制备抗肿瘤、保肝护肝药物中的应用。
全文摘要
本发明属于纳米技术及中药制剂技术领域，主要方案是将适量的聚酯(PCL－PEG2000－PCL)和紫草素一起溶于一定体积的丙酮中，再将所得溶液缓慢滴加到高速搅拌的水中，微微加热，冷却后过滤即可形成紫草素纳米颗粒溶液。该紫草素纳米颗粒溶液在体外有缓慢释放的特性，在小鼠体内还有一定的靶向作用。可应用于制备抗肿瘤和保肝护肝的药物。
文档编号A61P5/00GK1634001SQ200410065589
公开日2005年7月6日 申请日期2004年11月25日 优先权日2004年11月25日
发明者杨永华, 蒋宝华, 庞延军, 蒋锡群, 张峻峰, 肖雄健, 薛白 申请人:南京大学