专利名称：含活性维生素d化合物的药物组合物的制作方法
背景技术：
发明领域本发明涉及包含活性维生素D化合物的新的药物组合物，其中该药物组合物是乳液前浓缩物(乳液前浓缩物)。本发明还涉及通过用水性溶液稀释乳液前浓缩物产生的乳液和亚微米液滴乳液。
背景技术：
维生素D是一种必需的作为钙平衡正调节物的脂溶性维生素(见Harrison′sPrinciples of Internal MedicinePart Eleven，″Disorders of Bone and MineralMetabolism，″Chapter 335，pp.1860-1865，E.Braunwald等编，McGraw-Hill，纽约(1987))。维生素D的活性形式是1α，25-二羟基维生素D3(也称为钙三醇或骨化三醇)。已从不参与钙平衡的各种器官的细胞中发现了活性维生素D化合物的特异性核受体(Miller等，Cancer Res.52515-520(1992))。除了影响钙平衡外，活性维生素D化合物还已涉及骨形成、免疫反应的调节、胰腺B细胞分泌胰岛素过程的调节、肌细胞的机能以及表皮和造血组织的分化和生长。
另外，已有许多报道证实了活性维生素D化合物在治疗癌症中的用途。例如，现已表明某些维生素D化合物和类似物通过诱导恶性细胞(具体是白血病细胞)分化成非恶性巨噬细胞(单核细胞)而有很强的抗白血病活性，从而可用于治疗白血病(Suda等人，美国专利No.4,391,802；Partridge等，美国专利No.4,594,340)。还报道了钙三醇和其它维生素D3类似物在治疗前列腺癌方面有抗增殖和分化作用(Bishop等人，美国专利No.5,795,882)。活性维生素D化合物也涉及了皮肤癌的治疗(Chida等，Cancer Research 455426-5430(1985))、结肠癌的治疗(Disman等，Cancer Research 4721-25(1987))以及肺癌的治疗(Sato等人，Tohoku J.Exp.Med.138445-446(1982))。提示活性维生素D化合物具有重要治疗用途的其它报道归纳总结在Rodriguez等的美国专利No.6,034,079中。
尽管活性维生素D化合物的给药会导致显著的治疗效果，但是用该化合物治疗癌症和其它疾病受到了这些化合物对钙代谢的影响的限制。在有效用作抗增殖剂的体内所需水平下，活性维生素D化合物会通过其内在固有的调钙血(calcemic)活性来诱导显著升高的和具有潜在危险性的血钙水平。即，由于高钙血症风险，钙三醇和其它活性维生素D化合物在临床上用作抗增殖剂的用途受到排斥或严格的限制。
现已表明，全身性高钙血症的问题可通过以“脉冲给药(pulse-dose)”方式给予足量活性维生素D化合物来克服，这样可在观察到有抗增殖效应的同时避免严重高钙血症的发展(美国专利No.6,521,608)。根据6,521,608，活性维生素D化合物可每隔三天以上给药，例如一周一次，剂量为每天至少0.12微克/千克(对于70千克体重的人而言为8.4微克)。用于6,521,608的脉冲给药方案中的药物组合物含有5-100微克活性维生素D化合物，其可以口服、静脉内、肌内、局部、透皮、舌下、鼻内、瘤内或其它制剂形式给予。
ROCALTROL是由Roche Laboratories出售的钙三醇制剂的商品名。ROCALTROL可以含0.25微克和0.5微克钙三醇的胶囊形式以及含1微克/毫升钙三醇的口服溶液形式获得。所有剂型都含有丁基羟基茴香醚(BHA)和丁基羟基甲苯(BHT)作为抗氧化剂。胶囊还含有椰子油的分级甘油三酯，而口服溶液含有棕榈子油的分级甘油三酯(Physician′s Desk Reference，第54版，2649-2651页，Medical Economics Company，Inc.，Montvale，NJ(2000))。
已知钙三醇对光敏感，且尤其容易氧化。而且，钙三醇和其它活性维生素D化合物是亲脂性的，意味着它们可溶于脂类和某些有机溶剂，但是在水中几乎不溶或很难溶解。由于活性维生素D化合物的亲脂性，该化合物在水溶液(如胃部的胃液)中的分散受到显著限制。因此，现有技术中描述的活性维生素D化合物制剂的药物动力学参数对于高剂量脉冲给药方案而言是不佳的。另外，目前可获得的活性维生素D化合物制剂在小肠中的吸收表现出显著差异。另外，对于口服给药而言，大多数活性维生素D化合物制剂所观察到的剂量和血液浓度之间的关系并不是线性的。即，血流中所吸收的化合物量与以给定剂量给予的化合物的量不相关，尤其是在较高的剂量水平下时是这样。
因此，需要有一种改进的含活性维生素D化合物的药物组合物，尤其是在设计成提供抗增殖效果(如抗癌效果)且同时避免高钙血症后果的脉冲给药治疗方案中。具体而言，本领域中需要有一种含活性维生素D化合物的药物组合物，它能在长时间内维持稳定(即便在升高的温度下)，同时在给予患者时表现出改善的活性维生素D化合物的药物动力学参数，并具有减少的吸收差异。
发明概述本发明通过提供一种在乳液前浓缩物制剂中含活性维生素D化合物的药物组合物，克服了本领域迄今所遇到的缺点。本发明的药物组合物是对现有技术的一个进步，因为它们提供了一种活性维生素D化合物(如钙三醇)的剂型，其具有足以方便使用的高浓度、在溶液中稳定和迅速分散、而且还满足了药物动力学参数方面(尤其是脉冲给药方案中)所需的标准。更具体而言，在较佳实施方案中，本发明的药物组合物表现出的Cmax比ROCALTROL所观察到的Cmax高至少1.5到两倍，Tmax比ROCALTROL所观察到的短。
本发明的乳液前浓缩物是活性维生素D化合物的非水性制剂，它在与水或其它水性溶液接触时提供药学上可接受的乳液。
本发明一个方面提供了一种药物组合物，它包含(a)亲脂相组分；(b)一种或多种表面活性剂；和(c)活性维生素D化合物；其中所述组合物是乳液前浓缩物，它在用水以水∶组合物为1∶1或水更多的比例稀释后形成的、在400nm处吸光度大于0.3的乳液。根据本发明的该方面，该药物组合物还可包含亲水相组分。
本发明另一方面提供了一种药物乳液组合物，它包含水和乳液前浓缩物，所述乳液前浓缩物包含(a)亲脂相组分；(b)一种或多种表面活性剂；和(c)活性维生素D化合物，以及任选的疏水相组分。
从本发明的乳液前浓缩物产生的乳液(通过用水稀释)包括本领域普通技术人员常规理解的乳液(即有机相在水中的分散液)，以及“亚微米液滴乳液”(即，有机相在水中的分散液，其中分散液颗粒的平均粒径小于1000纳米)。
本发明另一方面提供了一种制备包含活性维生素D化合物的乳液前浓缩物的方法。本发明的该方面所包含的方法包括，使活性维生素D化合物(例如钙三醇)与亲脂相组分、一种或多种表面活性剂、以及任选的亲水相组分紧密混合。
本发明另一方面还提供了一种治疗和预防过度增殖疾病(如癌症和牛皮癣)的方法，所述方法包括将乳液前浓缩物制剂中的活性维生素D化合物给予需要该治疗的患者。或者，该活性维生素D化合物以乳液制剂形式给予，所述乳液制剂通过用适量水稀释本发明的乳液前浓缩物来制得。在该方面的较佳实施方案中，将活性维生素D化合物给予患者可通过诸如使用脉冲给药方案这样的方式来实现。例如，根据本发明的该方面，将在乳液前浓缩物制剂中的活性维生素D化合物给予患者，每三天不超过一次，剂量为每天至少0.12微克/千克。
图1是以1微克/千克的剂量给予狗三种不同钙三醇制剂后的钙三醇平均血浆浓度相对于时间的图示。
图2A和2B是雄狗(图2A)和雌狗(图2B)中逐步提高半固体#3剂量后钙三醇的平均血浆浓度-时间曲线。
图3A和3B是给予雄狗(图3A)和雌狗(图3B)半固体#3后的钙三醇血浆浓度-时间曲线。
图4A和4B是雄狗(图4A)和雌狗(图4B)中提高半固体#3的剂量后在的平均血清钙的图示。
图5A-5C显示了雄狗中给予半固体#3后的血浆钙三醇和血清钙的数据。
图6是在给予人半固体#3各剂量组后的钙三醇平均血浆浓度图示。
发明详述本发明涉及在乳液前浓缩物中含活性维生素D化合物的药物组合物。本发明的组合物克服或基本上减少了现有技术中活性维生素D化合物治疗所遇到的困难，具体包括在给予患者时化合物的不合所需的药物动力学参数。
现已发现，本发明的组合物可制成含足以允许例如方便地进行口服给药的高浓度的活性维生素D化合物的半固体和液体组合物，同时也获得了改善的活性维生素D化合物的药物动力学参数。例如，与ROCALTROL相比，本发明的组合物表现出的Cmax比ROCALTROL所观察到的Cmax高至少1.5到两倍，且Tmax比ROCALTROL所观察到的短。较佳的是，本发明的药物组合物提供的Cmax至少约为900皮克/毫升血浆，更佳的为约900-约3000皮克/毫升血浆，还要佳的为约1500-约3000皮克/毫升血浆。另外，本发明的组合物较佳地提供了小于约6.0小时、更佳的为约1.0-约3.0小时、还要佳的为约1.5-约2.0小时的Tmax。另外，本发明的组合物较佳地提供小于约25小时、更佳的约2-约10小时、还要佳的约5-约9小时的T1/2。
术语Cmax定义为在给予药物后血清中活性维生素D化合物所达到的最大浓度。术语Tmax定义为达到Cmax时的时间。术语T1/2定义为血清中活性维生素D化合物浓度减少一半所需的时间。公开的药物动力学数据数值适用于作为一个整体的接受含活性维生素D化合物组合物接受者群体，而不是个别的接受者。因此，任何接受本发明组合物的个体不必一定达到优选的药物动力学参数。然而，当本发明组合物给予足够大的对象群体时，其药物动力学参数与本文所公开的数值大致匹配。
本发明一方面提供了一种药物组合物，它包含(a)亲脂相组分；(b)一种或多种表面活性剂；(c)活性维生素D化合物；其中所述组合物是乳液前浓缩物，它在以水∶组合物为1∶1或所述水更多的比例用水稀释后形成在400nm下的吸光度大于0.3的乳液。本发明的药物组合物还可包含亲水相组分。
本发明另一方面提供了一种药物乳液组合物，它包含水(或其它水性溶液)和乳液前浓缩物。
本文所用的术语“乳液前浓缩物”表示在与例如水接触后能提供乳液的体系。本文所用的术语“乳液”指包含水和有机组分(包括疏水性(亲脂性)有机组分)的胶态分散液。术语“乳液”指包括本领域熟练技术人员能理解的常规的乳液，以及下文即将定义的“亚微米液滴乳液”。
本文所用的术语“亚微米液滴乳液”表示包含水和有机组分(包括疏水性(亲脂性)有机组分)的胶态分散液，其中有机组分形成的液滴或颗粒具有小于约1000nm的最大平均尺寸。
亚微米液滴乳液可鉴定为具有以下一个或多个特征。当使其各组分接触且基本上不提供能量(例如没有加热或使用高速剪切装置或其它显著搅动)时，它们是自发或基本上自发形成的。
亚微米液滴乳液颗粒可以是球形的，但也可以是其它结构，例如具有片层、六角形或各向同性对称性的液晶。通常，亚微米液滴乳液包括最大尺寸(例如平均直径)在约50-约1000nm、更佳在约200-约300nm之间的液滴或颗粒。
本文所用的术语“药物组合物”理解为组合物的个别组分或成分本身是药学上可接受的，例如当预计用于口服给药时，其为口服可接受的，而当预计用于局部给药时，其为局部给药可接受的。
本发明的药物组合物通常在用水稀释后形成乳液。根据本发明，在以水∶组合物为约1∶1或所述水更高的比例下用水稀释乳液前浓缩物后将形成乳液。根据本发明，水与组合物的比例可为，例如在1∶1-5000∶1之间。例如水和组合物的比例可为约1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、10∶1、200∶1、300∶1、500∶1、1000∶1或5000∶1。本领域熟练技术人员将可很容易地确定适合任何给定情况或场合的水与组合物的具体比例。
根据本发明，在用水稀释所述乳液前浓缩物时，将形成在400nm处吸光度大于0.3的乳液。在以1∶100稀释本发明的乳液前浓缩物时所形成的乳液在400nm下的吸光度可为，例如在0.3-4.0之间。例如，在400nm下的吸光度可为例如，约0.4、0.5、0.6、1.0、1.2、1.6、2.0、2.2、2.4、2.5、3.0、或4.0。测定液体溶液吸光度的方法是本领域所熟知的。本领域熟练技术人员将可确定和调节本发明的乳液前浓缩物的组分的相对比例，以便在用水稀释时获得具有本发明范围内任何具体吸光度的乳液。
本发明的药物组合物可为例如，半固体制剂或液体制剂。本发明的半固体制剂可以是本领域普通技术人员所知的任何半固体制剂，包括例如，凝胶、糊剂、乳膏和油膏。
本发明的药物组合物包含亲脂相组分。适合用作亲脂相组分的组分包括任何药学上可接受的、与水不互溶的溶剂。这些溶剂宜没有或基本上无表面活性剂功能。
亲脂相组分可包括单酸、二酸或三酸甘油酯。可用于本发明范围内的单酸、二酸或三酸甘油酯包括从C6、C8、C10、C12、C14、C16、C18、C20和C22脂肪酸衍生获得的那些。典型的甘油二酯包括，具体为二油精、二棕榈精以及混合的三辛酸甘油酯-三癸酸甘油酯二酯。较佳的三酸甘油酯包括植物油、鱼油、动物脂肪、氢化的植物油、部分氢化的植物油、合成的甘油三酯、改性的甘油三酯、分级的甘油三酯、中等和长链甘油三酯、结构性甘油三酯及其混合物。
在上述列出的甘油三酯中，较佳的甘油三酯包括杏仁油、巴巴苏油、琉璃苣油、黑醋栗油、菜籽油、蓖麻油、椰子油、玉米油、棉籽油、月见草油、葡萄籽油、落花生油、芥菜籽油、橄榄油、棕榈油、棕榈籽油、花生油、油菜籽油、红花油、芝麻油、鲨鱼肝油、豆油、向日葵油、氢化的蓖麻油、氢化的椰子油、氢化的棕榈油、氢化的豆油、氢化的植物油、氢化的棉籽油和蓖麻油、部分氢化的豆油、部分酱油和棉籽油、三己酸甘油酯、三辛酸甘油酯、三癸酸甘油酯、三(十一烷酸)甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油酯、三亚油酸甘油酯、三亚麻酸甘油酯、辛酸/癸酸甘油三酯、辛酸/癸酸/月桂酸甘油三酯、辛酸/癸酸/亚油酸甘油三酯和辛酸/癸酸/硬脂酸甘油三酯。
较佳的甘油三酯是以LABRAFAC CC商品名购买的中链甘油三酯。其它较佳的甘油三酯包括中性油，例如中性植物油，具体是分级的椰子油如以已知并以商品名MIGLYOL市售的产品，包括产品MIGLYOL 810、MIGLYOL 812、MIGLYOL 818和CAPTEX 355。
其它合适的是辛酸-癸酸甘油三酯，例如已知并以MYRITOL商品名市售的产品(包括产品MYRITOL 813)。其它合适的此类产品是CAPMUL MCT、CAPTEX 200、CAPTEX 300、CAPTEX 800、NEOBEE M5和MAZOL 1400。
作为亲脂相组分，尤其佳的是产品MIGLYOL 812(见美国专利No.5,342,625)。
本发明的药物组合物可进一步包含亲水相组分。亲水相组分可包括，例如，药学上可接受的低分子量单氧基烷二醇或多氧基烷二醇的C1-5烷基或四氢糠基二醚或偏醚。合适的亲水相组分包括，例如单氧烷二醇或多氧烷二醇(尤其是含2-12个碳原子(尤其是4个碳原子)的单或二氧烷二醇)的二醚或偏醚(尤其是偏醚)。较佳的是，单或多氧烷二醇部分为直链。用于本发明的典型亲水相组分是已知以TRANSCUTOL和COLYCOFUROL为商品名出售的产品(见美国专利No.5,342,625)。
在一个尤其佳的实施方式中，亲水相组分包含1，2-丙二醇。
本发明的亲水相组分当然还可包括一种或多种额外的组分。然而，较好的是任何额外添加的组分宜包含足以溶解活性维生素D化合物的材料，从而使得作为活性维生素D化合物载体介质的亲水相的效力没有显著受损。可用的额外亲水相组分的例子包括低级(例如C1-5)烷醇，具体为乙醇。
本发明的药物组合物还包含一种或多种表面活性剂。可与本发明联用的表面活性剂包括亲水性或亲脂性表面活性剂，或其混合物。尤其佳的是非离子亲水性和非离子亲脂性表面活性剂。
合适的亲水性表面活性剂包括天然或氢化植物油与乙二醇的反应产物，即聚乙二醇化的天然或氢化的植物油，例如聚氧乙二醇化的天然或氢化的蓖麻油。这些产物可用已知方式获得，例如通过将天然或氢化的蓖麻油或其馏分(fraction)与环氧乙烷以如约1∶35-约1∶60的摩尔比反应获得，并从产物中任选地除去游离的聚乙二醇组分，例如按照德国Auslegeschriften 1,182,388和1,518,819中公开的方法进行。
适用于本发明药物化合物的亲水性表面活性剂还包括聚氧乙烯-山梨糖醇酐-脂肪酸酯，例如，单和三月桂酰基、棕榈酰基、硬脂酰基和油酰基酯，例如已知以TWEEN为商品名购得的产品，包括产品TWEEN 20(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单月桂酸酯)、TWEEN 40(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单棕榈酸酯)、
TWEEN 60(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单硬脂酸酯)、TWEEN 80(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单油酸酯)、TWEEN 65(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐三硬脂酸酯)、TWEEN 85(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐三油酸酯)、TWEEN 21(聚氧乙烯(4)山梨糖醇酐单月桂酸酯)、TWEEN 61(聚氧乙烯(4)山梨糖醇酐单硬脂酸酯)、和TWEEN 81(聚氧乙烯(5)山梨糖醇酐单油酸酯)。
用于本发明组合物的此类产品中尤其佳的是上述产品中的TWEEN 40和TWEEN 80(见Hauer等，美国专利No.5,342,625)。
同样适合用于本发明药物化合物的亲水性表面活性剂是聚氧乙烯烷基醚；聚氧乙二醇脂肪酸酯，例如聚氧乙烯硬脂酸酯；聚甘油脂肪酸酯；聚氧乙烯甘油酯；聚氧乙烯植物油；聚氧乙烯氢化植物油；多元醇和诸如脂肪酸、甘油酯、植物油、氢化植物油以及固醇类的反应产物；聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物；聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；丁二酸二辛酯(dioctylsuccinate)、磺基琥珀酸二辛酯钠(diocytlsodiumsulfosuccinate)、二-[2-乙基己基]-琥珀酸酯或十二烷基硫酸钠；磷脂类，尤其是卵磷脂如大豆卵磷脂；丙二醇单-和二-脂肪酸酯，例如丙二醇二辛酸酯、丙二醇二月桂酸酯、丙二醇羟基硬脂酸酯、丙二醇异硬脂酸酯、丙二醇月桂酸酯、丙二醇蓖麻油酸酯、丙二醇硬脂酸酯，且尤其佳的是丙二醇辛酸-癸酸二酯；以及胆汁盐，如碱金属盐，如牛磺胆酸钠。
合适的亲脂性表面活性剂包括醇类；聚氧乙烯烷基醚；脂肪酸；胆汁酸；甘油脂肪酸酯；乙酰化甘油脂肪酸酯；低级醇脂肪酸酯；聚乙二醇脂肪酸酯；聚乙二醇甘油脂肪酸酯；聚丙二醇脂肪酸酯；聚氧乙烯甘油酯；单/二甘油酯的乳酸酯；丙二醇二甘油酯；山梨糖醇酐脂肪酸酯；聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯；聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；酯交换的植物油；固醇类；糖酯类；糖醚类；蔗糖甘油酯类(sucroglycerides)；聚氧乙烯植物油；聚氧乙烯氢化植物油；多元醇和至少一种选自下组物质的反应混合物脂肪酸、甘油酯、植物油、氢化植物油和固醇类；及它们的混合物。
适合用于本发明药物化合物的亲脂性表面活性剂还包括天然植物油三酸甘油酯和聚亚烷基多元醇的酯交换产物。这些酯交换产物是本领域中已知的，可根据例如，美国专利No.3,288,824中所述的通用步骤获得。它们包括各种天然(例如非氢化的)植物油(例如玉米油、核仁油、杏仁油、落花生油、橄榄油和棕榈油及其混合物)与聚乙二醇(尤其是平均分子量为200-800的聚乙二醇)的酯交换产物。较佳的是通过2摩尔份天然植物油三酸甘油酯与一摩尔份聚乙二醇(如平均分子量为200-800)酯交换而获得的产物。各种形式的酯交换产物是已知的，以商品名LABRAFIL购得。
适用于本发明药物组合物的其它亲脂性表面活性剂包括油溶性维生素衍生物，例如生育酚PEG-1000琥珀酸酯(“维生素E TPGS”)。
其它适合用作本发明药物化合物中的亲脂性表面活性剂是单-、二-和单/二-甘油酯，尤其是辛酸或癸酸与甘油的酯交换产物；山梨糖醇酐脂肪酸酯；季戊四醇脂肪酸酯和聚亚烷基二醇醚，例如季戊四醇--二油酸酯、-二硬脂酸酯、-单月桂酸酯、-聚乙二醇醚和-单硬脂酸酯，以及季戊四醇-脂肪酸酯；单甘油酯，例如甘油单油酸酯、甘油单棕榈酸酯和甘油单硬脂酸酯；甘油三乙酸酯或(1，2，3)-三醋精；以及固醇类及其衍生物，例如胆固醇及其衍生物，尤其是植物甾醇(如包含谷甾醇、菜油甾醇或豆甾醇的产物)，及其环氧乙烷加合物，例如大豆固醇及其衍生物。
本领域普通技术人员可以理解，几种市售的表面活性剂组合物含有少量至适量三酸甘油酯，通常是诸如酯交换反应中三酸甘油酯起始物的不完全反应的结果。因此，适用于本发明药物组合物的表面活性剂包括那些含有三酸甘油酯的表面活性剂。含有三酸甘油酯的市售表面活性剂组合物的例子包括，表面活性剂家族GELUCIRES、MAISINES、和IMWITORS中的一些成员。这些化合物的具体例子是GELUCIRE 44/14(饱和聚乙二醇化甘油三酯)；GELUCIRE50/13(饱和聚乙二醇化甘油三酯)；GELUCIRE 53/10(饱和聚乙二醇化甘油三酯)；GELUCIRE 33/01(半合成的C8-C18的饱和脂肪酸的甘油三酯)；GELUCIRE 39/01(半合成的甘油三酯)；其它GELUCIRE，例如37/06、43/01、35/10、37/02、46/07、48/09、50/02、62/05等；MAISINE 35-I(亚油酸甘油三酯)；和IMWITOR 742(辛酸/癸酸甘油三酯)(见美国专利No.6,267,985)。
本领域技术人员还知道其它具有显著含量的甘油三酯的市售表面活性剂组合物。应当理解这些含甘油三酯和表面活性剂的组合物也适合来提供本发明全部或部分的亲脂相组分以及全部或部分的表面活性剂。
本发明的药物组合物还包含活性维生素D化合物。本文所用的术语“活性维生素D化合物”指至少在A环的碳1位羟基化的维生素D，例如1α-羟基维生素D3。与本发明组合物相关的较佳的活性维生素D化合物是1α，25-羟基维生素D3(也称为钙三醇)。还已知其它许多活性维生素D化合物，它们都可用于实施本发明。例子包括侧链长度比胆固醇或麦角固醇的侧链长的17侧链1α-羟基衍生物(见美国专利No.4,717,721)；环戊醇(cyclopentano)-维生素D类似物(见美国专利No.4,851,401)；具有炔基、链烯基和烷基侧链的维生素D3类似物(见美国专利No.4,866,048和No.5,145,846)；三羟基钙化醇(见美国专利No.5,120,722)；氟代-胆钙化醇化合物(见美国专利No.5,547,947)；甲基取代的维生素D(见美国专利No.5,446,035)；23-氧杂-衍生物(见美国专利No.5,411,949)；19-降(nor)-维生素D化合物(见美国专利No.5,237,110)；和羟基化的24-高(homo)-维生素D衍生物(见美国专利No.4,857,518)。具体例子包括ROCALTROL(Roche Laboratories)；CALCIJEX可注射的钙三醇；来自Leo Pharmaceuticals的调查性药物，包括EB1089(24a，26a，27a-三高(trihomo)-22，24-二烯-1αa，25-(OH)2-D3、KH 1060(20-表-22-氧杂-24a，26a，27a-三高-1α，25-(OH)2-D3)、Seocalcitol、MC 1288(1，25-(OH)2-20-表-D3)和MC 903(钙泊三醇(calcipotriol)，1α24s-(OH)2-22-烯-26，27-脱氢-D3)；Roche Pharmaceutical的药物，包括1，25-(OH)2-16-烯-D3、1，25-(OH)2-16-烯-23-炔-D3、和25-(OH)2-16-烯-23-炔-D3；Chugai Pharmaceuticals的22-氧杂钙三醇(22-氧杂-1α，25-(OH)2-D3；来自依利诺斯大学的1α-(OH)-D5；来自Schering AG药物化学研究所(Institute of Medical Chemistry-Schering AG)的药物，其包括ZK161422(20-甲基-1，25-(OH)2-D3)和ZK 157202(20-甲基-23-烯-1，25-(OH)2-D3)；1α-(OH)-D2；1α-(OH)-D3和1α-(OH)-D4。额外的例子包括1α，25-(OH)2-26，27-d6-D3；1α，25-(OH)2-22-烯-D3；1α，25-(OH)2-D3；1α，25-(OH)2-D2；1α，25-(OH)2-D4；1α，24，25-(OH)3-D3；1α，24，25-(OH)3-D2；1α，24，25-(OH)3-D4；1α-(OH)-25-FD3；1α-(OH)-25-FD4；1α-(OH)-25-FD2；1α，24-(OH)2-D4；1α，24-(OH)2-D3；1α，24-(OH)2-D2；1α，24-(OH)2-25-FD4；1α，24-(OH)2-25-FD3；1α，24-(OH)2-25-FD2；1α，25-(OH)2-26，27-F6-22-烯-D3；1α，25-(OH)2-26，27-F6-D3；1α，25S-(OH)2-26-F3-D3；1α，25-(OH)2-24-F2-D3；1α，25S，26-(OH)2-22-烯-D3；1α，25R，26-(OH)2-22-烯-D3；1α，25-(OH)2-D3；1α，25-(OH)2-24-表-D3；1α，25-(OH)2-23-炔-D3；1α，25-(OH)2-24R-F-D3；1α，25S，26-(OH)2-D3；1α，24R-(OH)2-25F-D3；1α，25-(OH)2-26，27-F6-23-炔-D3；1α，25R-(OH)2-26-F3-D3；1α，25，28-(OH)3-D2；1α，25-(OH)2-16-烯-23-炔-D3；1α，24R，25-(OH)3-D3；1α，25-(OH)2-26，27-F6-23-烯-D3；1α，25R-(OH)2-22-烯-26-F3-D3；1α，25S-(OH)2-22-烯-26-F3-D3；1α，25R-(OH)2-D3-26，26，26-d3；1α，25S-(OH)2-D3-26，26，26-d3；和1α，25R-(OH)2-22-烯-D3-26，26，26-d3。其它的例子可在美国专利No.6,521,608中找到。另见，美国专利6,503,893、6,482,812、6,441,207、6,410,523、6,399,797、6,392,071、6,376,480、6,372,926、6,372,731、6,359,152、6,329,357、6,326,503、6,310,226、6,288,249、6,281,249、6,277,837、6,218,430、6,207,656、6,197,982、6,127,559、6,103,709、6,080,878、6,075,015、6,072,062、6,043,385、6,017,908、6,017,907、6,013,814、5,994,332、5,976,784、5,972,917、5,945,410、5,939,406、5,936,105、5,932,565、5,929,056、5,919,986、5,905,074、5,883,271、5,880,113、5,877,168、5,872,140、5,847,173、5,843,927、5,840,938、5,830,885、5,824,811、5,811,562、5,786,347、5,767,111、5,756,733、5,716,945、5,710,142、5,700,791、5,665,716、5,663,157、5,637,742、5,612,325、5,589,471、5,585,368、5,583,125、5,565,589、5,565,442、5,554,599、5,545,633、5,532,228、5,508,392、5,508,274、5,478,955、5,457,217、5,447,924、5,446,034、5,414,098、5,403,940、5,384,313、5,374,629、5,373,004、5,371,249、5,430,196、5,260,290、5,393,749、5,395,830、5,250,523、5,247,104、5,397,775、5,194,431、5,281,731、5,254,538、5,232,836、5,185,150、5,321,018、5,086,191、5,036,061、5,030,772、5,246,925、4,973,584、5,354,744、4,927,815、4,804,502、4,857,518、4,851,401、4,851,400、4,847,012、4,755,329、4,940,700、4,619,920、4,594,192、4,588,716、4,564,474、4,552,698、4,588,528、4,719,204、4,719,205、4,689,180、4,505,906、4,769,181、4,502,991、4,481,198、4,448,726、4,448,721、4,428,946、4,411,833、4,367,177、4,336,193、4,360,472、4,360,471、4,307,231、4,307,025、4,358,406、4,305,880、4,279,826和4,248,791。
在本发明的优选实施方式中，活性维生素D化合物与维生素D相比较，具有减轻的高钙血症效应，以使得可给予动物以提高剂量的该化合物而不造成高钙血症。减轻的高钙血症效应定义为小于给予等量1α，25-羟化维生素D3(钙三醇)所导致的高钙血症效应的一种效应。作为例子，EB 1089所具的高钙血症效应为钙三醇所致的高钙血症效应的50％。具有减轻的高钙血症效应的其它活性维生素D化合物包括购自Hoffman LaRoche的Ro23-7553和Ro24-5531。具有减轻的高钙血症效应的其它活性维生素D化合物的例子可在美国专利No.4,717,721中找到。活性维生素D化合物高钙血症效应的确定在本领域中是常规的，并可按Hansen等，Curr.Pharm.Des.6803-828(2000)中所揭示的进行。
本发明的药物组合物还可包含一种或多种添加剂。本领域熟知的添加剂包括，例如防粘剂、防沫剂、缓冲剂、抗氧化剂(例如抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸钠、丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)、没食子酸丙酯、苹果酸、富马酸、焦亚硫酸钾、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、和生育酚，例如α-生育酚(维生素E))、防腐剂、螯合剂、粘度调节剂、张力调节剂(tonicifier)、调味剂、着色剂、香料、遮光剂、悬浮剂、粘合剂、填充剂、增塑剂、润滑剂及其混合物。这些添加剂的用量可很容易地由本领域熟练技术人员根据所需具体性质来确定。例如，抗氧化剂可以基于组合物总重量的约0.01％-约0.5％的量存在，较佳为约0.05％-约0.35％。
添加剂还可包括增稠剂。合适的增稠剂可以是那些本领域中已知和使用的，包括例如，药学上可接受的聚合物材料和无机增稠剂。用于本发明药物组合物的示范性增稠剂包括聚丙烯酸酯和聚丙烯酸酯共聚物树脂，例如聚丙烯酸和聚丙烯酸/甲基丙烯酸树脂；纤维素和纤维素衍生物，包括烷基纤维素如甲基-、乙基-、和丙基-纤维素；羟烷基纤维素如羟丙基纤维素和羟丙基烷基纤维素如羟丙基甲基纤维素；乙酰化纤维素如醋酸纤维素、乙酸苯二甲酸纤维素、乙酸琥珀酸纤维素和苯二甲酸羟丙基甲基纤维素；及其盐，例如羧甲基纤维素钠；聚乙烯吡咯烷酮，包括例如聚-N-乙烯吡咯烷酮，和乙烯吡咯烷酮共聚物如乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯共聚物；聚乙烯树脂，例如包括聚乙酸乙烯酯和醇，以及其它聚合材料，包括胺黄树胶、阿拉伯胶、海藻酸盐如海藻酸及其盐如海藻酸钠；和无机增稠剂，如atapulgite、膨润土和硅土，包括亲水性二氧化硅产物如烷基化(如甲基化)硅胶，具体是胶态二氧化硅产品。
可加入上述这些增稠剂，例如来提供缓释效果。然而，当希望口服给药时，通常不需要使用前述增稠剂，它们通常不是优选的。另一方面，当预计用于局部施用时，要施用增稠剂。
本发明的组合物可以任何合适的方式来给药，例如以口服形式、例如以单位剂型形式，如在溶液中、在硬的或软的胶囊形式(包括明胶胶囊形式)。明胶胶囊可用封带(banding)或液体微喷雾(liquid microspray)封口。组合物还可以诸如软膏、糊浆、洗液、凝胶、油膏、泥罨、糊剂、膏药、皮肤贴剂等方式进行胃肠外或局部给药(例如施加到皮肤上)、或以例如滴眼、洗液或凝胶制剂形式用于眼用。还可采用易流动的形式如溶液和乳液，例如用于病灶内注射或例如作为灌肠剂进行直肠给药。化合物可另外含有促进活性维生素D化合物传递的药剂，例如，脂质体、聚合物或共聚物(如，支链聚合物)。
当本发明的组合物配制成单位剂型时，活性维生素D化合物的量宜为每单位剂量1-400微克。更佳地，活性维生素D化合物的量宜为每单位剂量约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300305、310、315、320、325、330、335、340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、或400微克或其中的任一量。在一个实施方式中，活性维生素D化合物的量宜为每单位剂量约5-约180微克，更佳地为约10-约135微克，还要更佳地为45微克。在一个实施方式中，单位剂型含有45、90、135或180微克的钙三醇。
当组合物的单位剂型是胶囊时，胶囊中组分的总量宜为约10-1000微升。更佳的是，胶囊中组分的总量约为100-300微升。在另一实施方式中，胶囊中所存在的成分的总量较佳为约10-1500毫克，较佳为约100-1000毫克。在一个实施方式中，总量为约225、450、675或900毫克。在一个实施方式中，单位剂型为含有45、90、135或180毫克钙三醇的胶囊。
当然，本发明组合物中组分的相对比例将根据组合物的具体类型的不同而显著不同。该相对比例也将根据组合物中组分的具体功能而异。相对比例还将根据采用的具体组分以及产品组合物所需的物理性质而异，例如在组合物用于局部用时，它是自由流动的液体还是糊浆。在任何具体情况下确定可行的比例是本领域普通技术人员力所能及的。因此，下述所有的比例和相对重量应理解为仅仅是表示较佳的或个别的发明教导，而不是对本发明最宽范围的限制。
本发明的亲脂相组分的合适含量为组合物总重量的约10-约90％重量。较佳的是，亲脂相组分的含量为组合物总重量的约15-约65％重量。
本发明的一种表面活性剂或多种表面活性剂的合适含量为组合物总重量的约1-约90％重量。较佳的是，表面活性剂的含量为组合物总重量的约5-约85％重量。
本发明组合物中活性维生素D化合物的含量显然取决于，例如预定的给药途径以及其它组分存在的程度。然而，通常本发明的活性维生素D化合物的合适含量约为组合物总重量的0.005-20％重量。较佳的是，活性维生素D化合物的含量为组合物总重量的0.01-15％重量。
本发明的亲水相组分的合适含量为组合物总重量的约2-约20％重量。较佳的是，亲水相组分的含量约为组合物总重量的约5-15％重量。
本发明的药物组合物可以是半固体制剂。本发明范围内的半固体制剂可包括，例如含量为组合物总重量约50-约80％重量的亲脂相组分、含量为组合物总重量的约5-约50％重量的表面活性剂、以及含量为组合物总重量的约0.01-约15％重量的活性维生素D化合物。
本发明的药物组合物可以是液体制剂。本发明范围内的液体制剂可包含，例如，含量为组合物总重量约50-约60％重量的亲脂相组分、含量为组合物总重量约4-约25％重量的表面活性剂、含量为组合物总重量约0.01-约15％重量的活性维生素D化合物、以及含量为组合物总重量的约5-约10％重量的亲水相组分。
可采用的附加组合物包括以下组合物，其中各组分占该组合物总重量的百分比而不包括活性维生素D化合物a.Gelucire 44/14约50％MIGLYOL 812 约50％；b.Gelucire 44/14约50％维生素E TPGS 约10％MIGLYOL 812 约40％；c.Gelucire 44/14约50％维生素E TPGS 约20％MIGLYOL 812 约30％；d.Gelucire 44/14约40％维生素E TPGS 约30％MIGLYOL 812 约30％；e.Gelucire 44/14约40％维生素E TPGS 约20％MIGLYOL 812 约40％；f.Gelucire 44/14约30％维生素E TPGS 约30％MIGLYOL 812 约40％；g.Gelucire 44/14约20％维生素E TPGS 约30％MIGLYOL 812 约50％；
h.维生素E TPGS约50％MIGLYOL 812 约50％；i.Gelucire 44/14 约60％维生素E TPGS约25％MIGLYOL 812 约15％；j.Gelucire 50/13 约30％维生素E TPGS约5％MIGLYOL 812 约65％；k.Gelucire 50/13 约50％MIGLYOL 812 约50％；l.Gelucire 50/13 约50％维生素E TPGS约10％MIGLYOL 812 约40％；m.Gelucire 50/13 约50％维生素E TPGS约20％MIGLYOL 812 约30％；n.Gelucire 50/13 约40％维生素E TPGS约30％MIGLYOL 812 约30％；o.Gelucire 50/13 约40％维生素E TPGS约20％MIGLYOL 812 约40％；p.Gelucire 50/13 约30％维生素E TPGS约30％MIGLYOL 812 约40％；q.Gelucire 50/13 约20％维生素E TPGS约30％MIGLYOL 812 约50％；r.Gelucire 50/13 约60％维生素E TPGS约25％MIGLYOL 812 约15％；
s.Gelucire 44/14约50％PEG 4000 约50％；t.Gelucire 50/13约50％PEG 4000 约50％；u.维生素E TPGS 约50％PEG 4000 约40％；v.Gelucire 44/14约33.3％维生素E TPGS 约33.3％PEG 4000 约33.3％；w.Gelucire 50/13约33.3％维生素E TPGS 约33.3％PEG 4000 约33.3％；x.Gelucire 44/14约50％维生素E TPGS 约50％；y.Gelucire 50/13约50％维生素E TPGS 约50％；z.维生素E TPGS 约5％MIGLYOL 812 约95％；aa. 维生素E TPGS 约5％MIGLYOL 812 约65％PEG 4000 约30％；ab. 维生素E TPGS 约10％MIGLYOL 812 约90％；ac. 维生素E TPGS 约5％MIGLYOL 812 约85％PEG 4000 约10％；和ad. 维生素E TPGS 约10％MIGLYOL 812 约80％PEG 4000 约10％。
在本发明的一个实施方式中，药物组合物中含有活性维生素D化合物、亲脂性成分和表面活性剂。亲脂性成分可以从约1％-约100％中任一百分比存在。亲脂性成分可以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％存在。表面活性剂可以从约1％-约100％中任一百分比存在。表面活性剂可以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、或100％存在。在一个实施方式中，亲脂性成分为MIGLYOL 812且表面活性剂为维生素E TPGS。在优选的实施方式中，药物组合物含有约50％的MIGLYOL 812和约50％的维生素E TPGS、约90％的MIGLYOL 812和约10％的维生素E TPGS、或约95％的MIGLYOL 812和约5％的维生素E TPGS。
在本发明的另一实施方式中，药物组合物含有活性维生素D化合物和亲脂性成分，如约100％的MIGLYOL 812。
在一个优选的实施方式中，药物组合物含有约50％的MIGLYOL 812、约50％的维生素E TPGS、以及少量的BHA和BHT。此制剂在化学和物理上均已显示出出乎意料的稳定性(见实施例16)。在一个具体优选的实施方式中，药物组合物含有约50％的MIGLYOL 812、约50％的维生素E TPGS、和各约0.35％的BHA和BHT。增强了的稳定性赋予该组合物更长的储存期限。重要的是，该稳定性还使得组合物可在室温下保持，从而避免了冻存的复杂性和费用。此外，该组合物适于口服给药，并已显示出增溶高剂量活性维生素D化合物的能力，由此使得在过度增殖和其它紊乱的治疗中采用高剂量脉冲给药给予活性维生素D化合物成为可能。
除了上述以外，本发明还提供了一种生产前述药物组合物的方法，该方法包括使其单个组分紧密混合，当需要时，将所得组合物配合成单位剂型，例如将所述组合物填入明胶(如软的或硬的明胶)胶囊或非明胶胶囊中。
在更具体的实施方式中，本发明提供了一种制备药物组合物的方法，该方法包括使活性维生素D化合物(如钙三醇)与前述的亲脂相组分以及表面活性剂密切混合，相对于所用活性维生素D化合物的量选择亲脂相组分和表面活性剂的相对比例，以便获得乳液前浓缩物。
本发明还提供了一种治疗和预防过度增殖疾病(如癌症和牛皮癣)的方法，所述方法包括将在乳液前浓缩物制剂中的活性维生素D化合物给予需要此治疗的患者。或者，活性维生素D化合物可以乳液制剂给予，该乳液制剂是通过用适量水稀释本发明的乳液前浓缩物而制得的。或者，活性维生素D化合物可以本文所揭示的任一制剂给予。
本文所用的术语“癌症”是指任何已知的癌症，包括但不限于下列癌症白血病，例如急性白血病、急性淋巴性白血病、急性髓细胞性白血病(例如原始粒细胞性白血病、前髓细胞性白血病、粒-单细胞性白血病、单核细胞性白血病和红白血病(erythroleukemia leukemias))和髓细胞-浆细胞综合征；慢性白血病，例如慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性淋巴细胞性白血病和毛细胞性白血病；真性红细胞增多；淋巴瘤，例如何杰金氏病和非何杰金氏病；多发性骨髓瘤，例如郁结性多发性骨髓瘤(smoldering multiple myeloma)、非分泌性骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、浆细胞性白血病、孤立性浆细胞瘤和髓外浆细胞瘤；Waldenstrom巨球蛋白血征；未确定显著性(undetermined significance)的单克隆免疫球蛋白病；良性单克隆免疫球蛋白病；重链病；骨骼和结缔组织肉瘤，例如骨骼肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性巨细胞肿瘤、骨骼纤维肉瘤、脊索瘤、骨膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤(hemangiosarcoma)、纤维肉瘤、Kaposi肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肉瘤、淋巴管肉瘤、神经鞘瘤、横纹肌肉瘤和滑膜肉瘤；脑瘤，例如神经胶质瘤、星形细胞瘤、脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、少突神经胶质瘤、非神经胶质肿瘤、听神经鞘瘤、颅咽管瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、松果体瘤、成松果体细胞瘤和原发性脑淋巴瘤；乳腺癌，例如腺癌、小叶(小细胞)癌、导管内癌、髓样乳腺癌、粘液乳腺癌、管状乳腺癌、乳头状乳腺癌、乳腺Paget病和炎症性乳腺癌；肾上腺癌，例如嗜铬细胞瘤和肾上腺皮质癌；甲状腺癌，例如乳头状或滤泡甲状腺癌(papillary or follicular thyroid cancer)、髓样甲状腺癌和退行性甲状腺癌(anaplastic thyroid cancer)；胰腺癌，例如胰岛素瘤、胃泌素瘤、胰高血糖素瘤、舒血管肠肽瘤、生长激素抑制素分泌型肿瘤和类癌瘤或小岛细胞肿瘤(islet cell tumor)；脑垂体癌，例如催乳素分泌型肿瘤和肢端肥大征；眼癌，例如眼黑素瘤、虹膜黑素瘤、脉络膜黑素瘤和睫状体黑素瘤(cilliary body melanoma)和视网膜母细胞瘤；阴道癌，例如鳞状(上皮)细胞癌、腺癌和黑素瘤；外生殖器癌，例如鳞状上皮细胞癌、黑素瘤、腺癌，基底细胞癌、肉瘤和外生殖器佩吉特(氏)病；宫颈癌，例如鳞状上皮细胞癌和腺癌；子宫癌，例如子宫内膜癌和子宫肉瘤等；卵巢癌，例如卵巢上皮癌、卵巢上皮交界性肿瘤、生殖细胞瘤和间质瘤；食管癌，例如鳞状细胞癌、腺癌、腺样囊性癌(adenoidayctic carcinoma)、粘液表皮样癌、腺鳞状细胞癌、肉瘤、黑素瘤、浆细胞瘤、疣状癌和燕麦形细胞癌；胃癌，例如腺癌和蕈样(息肉状)、溃疡性、表面扩展性、广泛扩散性恶性淋巴瘤、脂肉瘤、纤维肉瘤和癌肉瘤；结肠癌；直肠癌；肝癌，例如肝细胞癌、肝鳞状细胞癌；胆囊癌，例如腺癌；胆管癌，例如乳头状、结状和弥散状癌；肺癌，例如非小细胞肺癌、鳞状上皮细胞癌(表皮样癌)、腺癌、大细胞癌和小细胞肺癌；睾丸癌，例如生殖细胞瘤、精原细胞瘤、退行发育型、古典型(典型的)、精母细胞的、非精原细胞瘤、胚胎性癌、畸胎瘤和绒毛膜癌(卵黄囊瘤)；前列腺癌，例如腺癌、平滑肌肉瘤和横纹肌肉瘤；阴茎癌；口腔癌，例如鳞状上皮细胞癌；基底癌(basal cancers)；唾液腺癌，例如腺癌、粘液表皮样腺癌和腺样囊性癌；咽癌，例如鳞状上皮细胞癌和疣；皮肤癌，例如基底细胞癌、鳞状上皮细胞癌和黑素瘤、浅表扩展性黑素瘤、结节性黑色素瘤、斑痣恶性黑素瘤、肢端黑色素瘤；头与颈癌；肾癌，例如肾细胞癌、腺癌、肾上腺样瘤、纤维肉瘤、移行细胞癌(肾盂和/或输尿管)；维尔姆斯(氏)肿瘤；以及膀胱癌，例如移行细胞癌、鳞状上皮细胞癌、腺癌和癌肉瘤等。此外，能使用本发明的方法和组合物治疗的癌征包括粘液肉瘤、成骨肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、间皮瘤、滑膜瘤、成血管细胞瘤、上皮癌、囊腺癌、支气管癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌和乳头状腺癌。见Fishman等，1985，Medicine，第二版，J.B.Lippincott Co.，费城；PA和Murphy等，1997，InformedDecisionsThe Complete Book of Cancer Diagnosis，Treatment，and Recovery，Viking Penguin，纽约，NY，中关于这些疾病的综述。
活性维生素D化合物较佳地是以约1微克-约400微克的剂量给药，更佳的是约15-约300微克。在一个实施方式中，活性维生素D化合物的有效量为3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、1a120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300305、310、315、320、325、330、335、340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、或400微克或更高。在某些实施方式中，活性维生素D化合物的有效剂量为约1-约270微克，更佳为约15-约225微克，更为更佳的为约15-约180微克，再更佳的为约15-约135微克，更为再更佳的为约20-90微克，更佳为约30-约60微克，以及再更佳为约45微克。在某些实施方式中，本发明的方法包括以约0.12-3微克/千克体重的剂量给予活性维生素D化合物。该化合物可用任一途径给药，包括口服、肌内、静脉内、胃肠道外、直肠、鼻腔、局部或透皮给药。
若该化合物要每天给药，则可保持低剂量(例如约0.5-约5微克)以防止或减轻所导致的高钙血症。若活性维生素D化合物具有减轻的高钙血症效应，则可给予较高的日剂量而不会导致高钙血症，例如约10-约20微克或更高(达到约50-约100微克)。
在本发明的一个优选实施方式中，活性维生素D化合物是以脉冲方式给药的，从而使得在给予高剂量的活性维生素D时不会导致高钙血症。脉冲给药指的是以连续性间歇给药方案或非连续性间歇给药方案，间歇性地给予活性维生素D化合物。活性维生素D化合物的高剂量包括在上述段落讨论过的大于约3微克的剂量。因此，在本发明的某些实施方式中，治疗或改善癌症的方法包括间歇性地给予高剂量的活性维生素D化合物。脉冲给药的频度受到许多因素的限制，包括但不限于化合物或制剂的药物动力学参数，和活性维生素D化合物对动物的药效学效果。例如，肾功能损伤的癌症动物鉴于其对钙排泄能力的降低，而需以较低频度给予活性维生素D化合物。
以下仅为示范且仅用于说明术语“脉冲给药”可包含由本领域熟练技术人员所制定的任何不连续的给药方案。
在一个实施例中，活性维生素D化合物可不超过每3天、每4天、每5天、每6天、每7天、每8天、每9天、每10天、每2周、每3周、每4周、每5周、每6周、每7周、每8周、或更长时间给予一次。给药可持续1、2、3或4周、或1、2或3个月、或更长时间。任选地，在一段时间的休息后，活性维生素D化合物可以相同或不同的给药方案给予。休息的时间可为1、2、3或4周、或更长，这取决于活性维生素D化合物在动物中的药效学效果。
在另一实施例中，可每周给予活性维生素D化合物一次，给药3个月。
在一个优选的实施方式中，可在四周的循环中，每周给予活性维生素D化合物一次，给药3周。在1周的休息时间之后，可以相同或不同的给药方案给予活性维生素D化合物。
在另一优选实施例中，可每三周给予维生素D化合物一次。
美国专利6,521,608中提供了可用于本发明方法中的剂量方案的其它例子，此专利的内容纳入本文作参考。
提供上述给药方案目的只是说明，而不应认为是限制。本领域技术人员不难理解所有的维生素D化合物都在本发明的范围内；给予维生素D化合物的确切剂量和方案可因许多因素而不同。
在疾病或病症的急性或慢性处理时，药剂的治疗有效剂量可能有所不同，这取决于许多因素，包括但不限于所治疗的疾病或病症、具体的药剂和给药途径。根据本发明的方法，活性维生素D化合物的有效剂量是能有效治疗或减轻癌症或其它过度增殖疾病的任何剂量。高剂量的活性维生素D化合物可为约3-约400微克剂量，或如上述在此范围内的任何剂量。剂量、给药频度、持续时间或其任何组合也可因动物的年龄、体重、反应和既往医疗史以及给药途径、药物动力学和药效学效果而不同。这些因素为本领域技术人员常规考虑。
维生素D化合物的吸收和清除速度受到本领域技术人员熟知的各种因素影响。如上所述，活性维生素D化合物的药物动力学特性可限制维生素D化合物在血液中可达到的峰值浓度而不引发高钙血症。活性维生素D化合物在组织中的吸收、分布、结合或定位速度和程度、生物转化和排泄的速度和程度都会影响给予药剂的频度。在某些实施方式中，活性维生素D化合物是按上述剂量方案以脉冲给药形式高剂量给药的，以作为治疗癌症或减轻其症状的方法。
在本发明的一个实施方式中，活性维生素D化合物是以足以达到约0.1-约20纳摩尔/升的活性维生素D化合物血浆峰浓度的剂量给药的。在某些实施方式中，本发明的方法包含以达到0.1、0.2.0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12.5、15、17.5、或20nM的血浆峰浓度的剂量给予活性维生素D化合物，或其中的任一浓度范围。在另一实施方式中，活性维生素D化合物是以达到超过0.5nM的活性维生素D化合物血浆峰浓度的剂量给药的，较佳为约0.5-约20nM，更佳为约1-约7nM，还要更佳为约3-约5nM。
在另一优选的实施方式中，活性维生素D化合物是以至少约0.12微克/千克体重的剂量给药的，较佳为约0.5微克/千克体重的剂量。
本领域的技术人员可认识到这些标准剂量是以体重为约70千克的平均体型的成人为准的，可按上述常规考虑的因素作出调整。
在某些实施方式中，本发明的方法还包含给予一剂活性维生素D化合物以迅速
(例如，在4小时内)获得血浆峰浓度。在其它的实施方式中，本发明的方法包括给予一剂可迅速(例如，在小于12小时的消除半衰期中)消除的活性维生素D化合物。虽然获得高浓度的活性维生素D化合物是有利的，但还是必须使之与治疗安全性相平衡，例如高钙血症。因此，在本发明的一个方面中，本发明的方法包括间歇性地给予患有癌症或其它过度增殖的对象高剂量的活性维生素D化合物，并监控所述对象与高钙血症相关的症状。这些症状包括软组织(例如心脏组织)的钙化、骨密度的增大以及高钙血肾病(hypercalcemic nephropathy)。在其它的实施方式中，本发明的方法包括间歇性地给予患有癌症或其它过度增殖的对象高剂量的活性维生素D化合物，并监控所述对象的血浆钙浓度以确保血浆钙浓度低于约10.2mg/dL。
在某些实施方式中，可安全获得维生素D化合物的血液高水平并伴随降低的钙转移入血液。在一实施方案中，当给药并伴随减少钙的饮食时，安全地获得了较高的活性维生素D浓度而不发生高钙血症。在一实施例中，可通过吸附剂、吸收剂、配体、螯合剂或其它不能通过小肠被转运进入血液的结合分子将钙捕获。在另一实施例中，可通过联合使用活性维生素D化合物和例如，双膦酸盐(bisphosphonate)如唑来瞵酸盐(zoledronate)、氨羟二膦酸二钠或阿伦膦酸盐，或给予糖皮质激素，例如强的松或地塞米松，以抑制破骨细胞的活化率。
在某些实施方式中，可安全获得维生素D化合物的血液高水平并最大程度提高钙的清除速率。在一实施方式中，可通过保证充足的饮水和盐摄取来提高钙的排泄。在另一实施例中，可利用利尿疗法来提高钙的排泄。
在本发明的某些实施方式中，治疗和防止过度增殖疾病(例如癌症和牛皮藓)的方法还包括与活性维生素D化合物一起给予化疗剂或放疗剂。
本文中所用的术语“化疗剂”是指本领域技术人员所知的任何可有效治疗癌症或改善癌症症状的化疗剂。化疗剂包括但不限于小分子；合成药物；肽；多肽；蛋白质；核酸(如，DNA和RNA多核苷酸，包括但不限于反义核酸序列、三螺旋和编码生物活性蛋白质、多肽或肽的核酸序列)；抗体；合成的或天然的无机分子；拟似剂；以及合成的或天然的有机分子。任何已知有用的药剂或已被使用的药剂或现用于治疗癌症或改善癌症症状的药剂可根据本发明所述，与活性维生素D化合物联合使用。见如Hardman等编，1996，Goodman&Gilman’s The Pharmacological Basis OfTherapeutics第9版，Mc-Graw-Hill，纽约，NY中关于已被使用或目前正被用于治疗癌症或改善癌症症状的治疗剂的信息可用于本发明的方法和组合物的化疗剂包括烷化剂、抗代谢物、抗有丝分裂剂、表鬼臼乙脂素、抗生素、激素和激素拮抗剂、酶、铂配位复合物、蒽二酮(anthracenediones)、取代的尿素、甲肼衍生物、咪唑四嗪衍生物、细胞保护剂、DNA拓扑异构酶抑制剂、生物反应调节物(biological response modifiers)、类视黄醇、治疗性抗体、分化剂(differentiating agents)、免疫调节剂和血管发生抑制剂。
其它可使用的化疗剂包括阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌醇、六甲密胺、阿米福汀(amifostine)、阿纳托唑、三氧化砷、天冬酰胺酶、BCG活菌(BCGlive)、贝伐单抗、贝沙罗汀、博来霉素、波替单抗(bortezomib)、白消安、二甲睾酮、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、塞来考昔、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、拟钙剂(cinacalcet)、顺铂、克拉屈滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、氮烯咪胺、放线菌素D、达贝泊汀α(darbepoetinalfa)、柔红霉素、白喉毒素-白介素2融合蛋白(denileukin diftitox)、右丙亚胺、紫杉萜、阿霉素、屈他雄酮、埃利奥特氏B溶液(Elliott’s B solution)、表柔比星、红细胞生成素α、磷雌氮芥、鬼臼乙叉甙、依西美坦、非格司亭、5-氟脱氧尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟维司群、2、2-二氟脱氧胞嘧啶核苷、卡奇霉素吉妥组单抗(gemtuzumabozogamicin)、吉非替尼(gefitinib)、戈舍瑞林、羟基脲、替伊莫单抗、去甲氧基柔红霉素、异磷酰胺、伊马替尼(imatinib)、干扰素α-2a、干扰素α-2b、依立替康、来曲唑、亚叶酸、左旋咪唑、罗莫司丁、meclorethamine、罗莫司丁、美法仓、巯嘌吟、美司钠、甲氨喋呤、甲氧沙林、甲基氢化泼尼松、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、诺龙、若莫单抗、安眠酮、奥普瑞白介素、奥沙利铂、紫杉醇、帕米膦酸二钠、甲氧聚乙二醇琥珀酰胺腺甙脱氨、天门冬酰胺酶、聚乙二醇化非格司亭(pegfilgrastim)、培美曲塞、喷司他丁、溴丙哌嗪、光辉霉素、聚苯丙生、卟菲尔钠、甲基苄肼、喹吖因、拉布立酶、利妥昔单抗、沙莫司亭、链唑霉素、滑石粉、它莫西芬、它赛瓦(tarceva)、替莫唑胺、鬼臼噻吩甙、睾内酯、硫鸟嘌呤、塞替派、托泊替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥单抗、维甲酸、尿嘧啶氮芥、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、和唑来瞵酸盐。
化疗剂可以本领域技术人员认为可有效治疗胰腺癌的剂量给药。在某些实施方式中，由于活性维生素D化合物的加入和协同效果，化疗剂可以低于那些本领域所使用的剂量给药。
本文所用的术语“放疗剂”是指本领域技术人员所知的可有效治疗癌症或改善癌症症状的任何放疗剂，并无限制。例如，放疗剂可为例如，那些在短距离放射疗法(brachytherapy)或放射性核素治疗中所给予的药物。
短距离放射疗法中可按本领域技术人员所知的任何方案、剂量或方法给药以有效治疗癌症或改善癌症症状，并无限制。通常，近距离放射疗法包含将放射源插入要接受癌症治疗的对象体内，较佳的为插入肿瘤本身，从而使得肿瘤在最大程度上暴露于辐射活性源下，同时较佳的使得暴露于辐射下的健康组织最少。可用于短距离放射疗法的代表性放射性同位素包括，但不限于磷32、钴60、钯103、钌106、碘125、铯137、铱192、氙133、镭226、锎252或金198。用于短距离放射疗法的给药方法、设备和组合物在Mazeron等，Sem.Rad.Onc.1295-108(2002)和美国专利No.6,319,189、6,179,766、6,168,777、6,149,889和5,611,767中有所阐述。
放射性核素治疗可按本领域技术人员所知的任何方案、剂量或方法给药以有效治疗癌症或改善癌症症状，并无限制。通常，放射性核素治疗包含系统化地给予放射性同位素，较佳地为积聚或结合在肿瘤细胞的表面。优选的放射性同位素积聚可由许多机制介导，包括但不限于将放射性核素掺入快速增殖的细胞中、不经过特异性靶向而使肿瘤组织特异性地积聚放射性核素、或将放射性核素与对肿瘤特异性的分子结合。
可用于放射性核素治疗的典型放射性同位素包括但不限于磷32、钇90、镝165、铟111、锶89、钐153、铼186、碘131、碘125、镥177、和铋213。虽然所有这些放射性同位素都可与提供靶向特异性的生物分子连接，但是碘131、铟111、磷32、钐153、和铼186可不经这种连接而进行系统化给药。本领域技术人员可选择具体的活质分子用于在放射性核素治疗中靶向具体的肿瘤，该选择取决于在肿瘤中所存在的细胞表面分子。在具体细胞中提供特异性的生物分子在Thomas，Cancer Biother.Radiopharm.1771-82(2002)中有所综述，其全文引入本文作为参考文献。此外，用于放射性核素治疗中的给药方法和组合物可在美国专利No.6,426,400、6,358,194、5,766,571中找到。
本文所用的术语“放疗”是指可被本领域技术人员有效用于治疗癌症或改善癌症症状的任何放射性治疗，并无限制。例如，放疗可为外束(external-beam)放疗、热疗、放射外科、带电粒子放疗、中子放疗、或光动力治疗。
外束放疗可按本领域技术人员所知的任何方案、剂量或方法施用以有效治疗癌症或改善癌症症状，并无限制。通常，外束放疗包括用高能量束辐射对象体内确定的体积，从而导致该体积内的细胞死亡。该辐射体积较佳为包含整个要被治疗的肿瘤，并较佳地含有尽可能少的健康组织。外束放疗中所用的给药方法、设备和组合物可在美国专利No.6,449,336、6,398,710、6,393,096、6,335,961、6,307,914、6,256,591、6,245,005、6,038,283、6,001,054、5,802,136、5,596,619和5,528,652中找到。
热疗可按本领域技术人员所知的任何方案、剂量或方法给药以有效治疗癌症或改善癌症症状，并无限制。在某些实施方式中，热疗可为冷冻消融术。在另一实施方式中，热疗可为高热治疗。在另一实施方式中，热疗可为将肿瘤温度升高至高于高热治疗温度的治疗。
冷冻消融术包含将肿瘤块冷冻，以导致细胞内外的冰晶沉积；细胞膜、蛋白质和细胞器的破坏；并导致高渗环境的产生，从而致使细胞死亡。冷冻消融术中有用的方法和设备在Murphy等，Sem.Urol.Oncol.19133-140(2001)和美国专利No.6,383,181、6,383,180、5,993,444、5,654,279、5,437,673和5,147,355中有所描述。
高热治疗通常包含将肿瘤块的温度提高到约42-约44℃。肿瘤的温度还可进一步升高到高于此范围的温度；然而，这一温度会提高对周围健康组织的损伤，却不能导致要处理的肿瘤中的细胞死亡的增加。在高热治疗中，可用本领域技术人员所知的任何方法将肿瘤升温，并无限制。例如，(但不是用于进行限制)肿瘤的升温可通过微波、高强度聚焦的超声波、铁磁热种(ferromagnetic thermoseed)、局部电场(localized current field)、红外线、湿或干射频消融、激光光凝固法、激光间隙热疗(laser interstitial thermic therapy)、和电烙术。微波和无线电波可由波导施加器(waveguide applicator)、角形、螺旋形、电流片和紧密施加器(compact applicator)产生。
其它提高肿瘤温度的方法和设备在Wust等，Lancet Oncol.3487-97(2002)中有所综述，并在美国专利No.6,470,217、6,379,347、6,165,440、6,163,726、6,099,554、6,009,351、5,776,175、5,707,401、5,658,234、5,620,479、5,549,639和5,523,058中有所描述。
放射外科疗法可按本领域技术人员所知的任何方案、剂量或方法给药以有效治疗癌症或改善癌症症状，并无限制。通常，放射外科疗法包括将对象中的确定体积暴露于手工导向的放射源下，从而造成该体积内的细胞死亡。该辐射体积较佳为包含整个要被治疗的肿瘤，并较佳地含有尽可能少的健康组织。通常，将要治疗的组织首先用传统外科技术处理，然后再由外科医师手工将放射源导向到该区域。或者，该放射源可通过例如，腹腔镜放置于要进行辐射治疗的组织的附近。放射外科疗法中有用的方法和设备在Valentini等，Eur.J.Surg.Oncol.28180-185(2002)中和美国专利No.6,421,416、6,248,056和5,547,454有进一步的描述。
带电粒子放疗可按本领域技术人员所知的任何方案、剂量或方法给药以有效治疗癌症或改善癌症症状，并无限制。在某些实施方式中，带电粒子放疗可为质子束放疗。在其它实施方式中，带电粒子放疗可为氦离子放疗。通常，带电粒子放疗包括用带电粒子束来辐照对象中的确定体积，从而造成该体积内的细胞死亡。该辐射体积较佳为包含整个要被治疗的肿瘤，并较佳地含有尽可能少的健康组织。带电粒子放疗给药的方法在美国专利No.5,668,371中有所描述。
中子放疗可按本领域技术人员所知的任何方案、剂量或方法给药以有效治疗癌症或改善癌症症状，并无限制。在某些实施方式中，中子放疗可为中子捕获治疗。在这些实施方式中，将用中子轰击后可发射辐射且优先聚积在肿瘤块中的化合物给予对象。然后，用低能量的中子束辐射该肿瘤，活化该化合物并导致其发射出衰变产物以杀死癌细胞。可采用任何在放射性核素靶向定位上有效的方法使要被激活的化合物优先积聚在靶组织中，这些方法如上所述或在Laramore，Semin.Oncol.24672-685(1997)和美国专利No.6,400,796、5,877,165、5,872,107和5,653,957的方法中有所描述。
在其它实施方式中，中子放疗可为快中子放疗。通常，快中子放疗包括将对象中的确定体积辐照于中子束下，从而造成该体积内的细胞死亡。
光动力治疗可按本领域技术人员所知的任何方案、剂量或方法给药以有效治疗癌症或改善癌症症状，并无限制。通常，光动力治疗包括给予优先聚积在肿瘤块中的光敏剂，并用光敏化该肿瘤，然后将肿瘤暴露于适合波长的光下。在此暴露下，光敏剂催化了细胞毒性剂的产生，例如，单线态氧，其可杀死癌细胞。在光动力治疗中有用的给药方法、设备和组合物在Hopper，Lancet Oncol.1212-219(2000)和美国专利No.6,283,957、6,071,908、6,011,563、5,855,595、5,716,595和5,707,401中有所描述。
虽然并不打算以任何操作性的具体理论束缚本发明，应当相信的是活性维生素D化合物可增强癌细胞对放疗的敏感性，而这一敏感性的增强是由于改变了细胞中调节凋亡和/或细胞周期的机制。给予活性维生素D化合物不仅可增强还可扩展化疗在对目前的化疗不响应的癌症治疗和症状改善中的应用。此外，敏化要处理的细胞可使得在化疗中能使用更低剂量药物，低剂量可降低与化疗相关的副作用。
放疗可在手术之前或之后、化疗之前或之后及有时在化疗中施予以破坏肿瘤细胞。放疗还可用于姑息原因以缓解癌症症状(例如减轻疼痛)。可用放疗治疗的肿瘤种类有不能被完全切除的局部肿瘤、转移灶、以及完全切除后会造成不可接受的功能或容貌缺陷或伴随着不可接受的手术风险的肿瘤。
可理解在癌症治疗中具体要使用的辐射剂量和施加方法将取决于许多因素。因此，本发明方法中可用的辐射剂量取决于各种情况的具体需要。该剂量将取决于肿瘤的大小、肿瘤的位置、病人的年龄和性别、剂量的频度、所存在的其它肿瘤、转移的可能等因素。放疗领域的熟练技术人员可很容易地根据以下的参考文献确定对任何具体肿瘤给予的剂量和方法Hall，E.J.，Radiobiology for theRadiobiologist，第5版，Lippincott Williams & Wilkins Publishers，费城，PA，2000；Gunderson，L.L.和Tepper J.E.编，Clinical Radiation Oncology，Churchill Livingstone，伦敦，英国，2000；以及Grosch，D.S.，Biological Effectsof Radiation，第2版，Academic Press，旧金山，CA，1980。在某些实施方式中，由于活性维生素D化合物的加入或协同作用，可以低于那些本领域已知的剂量施用放疗剂和放疗。
本文中所提供的附加治疗剂的给药剂量和频度包含于术语“治疗有效”中。这些药剂的剂量和频度通常取决于具体给予的治疗剂、胰腺癌的严重程度和类型、给药途径、以及病人的年龄、体重、反应和既往用药历史，对于各个病人的具体因素将有所不同。本领域的熟练技术人员可通过对这些因素的考虑并按如下的文献选择合适的方案，例如在Physician’s Desk Reference(第56版，2002)中的文献中所报道的或推荐的方案。
对于长有可切除肿瘤的动物，可在手术前和/或手术后给予活性维生素D化合物。类似地，也可在手术前和/或手术后给予化疗剂和放疗剂或治疗。
在给予化疗剂或放疗剂或治疗之前、期间或之后的任何阶段中联合活性维生素D化合物治疗均可用于本发明。联合活性维生素D化合物治疗的确切阶段因所使用的活性维生素D化合物、胰腺癌的种类、病人和其它相关因素的不同而有所变化。活性维生素D化合物可在给予化疗剂或放疗剂或治疗之前或之后短至12小时到长至3个月的阶段内给予。活性维生素D可在给予化疗剂或放疗剂或治疗之前或之后至少1天内给予，并在给予化疗剂或放疗剂或治疗之前或之后给药长达3个月时间。在某些实施方式中，本发明的方法包括在给予化疗剂或放疗剂或治疗之前或之后3-60天之内，每3、4、5、6、7、8、9或10天给予1次活性维生素D化合物。
活性维生素D化合物的给药可与化疗剂或放疗剂或治疗连续同时地进行。此外，活性维生素D化合物的给药的持续可超过给予化疗剂或放疗剂或治疗。
在本发明的某些实施方式中，单独或联合化疗剂或放疗剂或治疗给予活性维生素D化合物的方法可至少重复一次。该方法可按获得或保持治疗反应所需的次数重复，例如，从1-约10次。在每次方法的重复中，活性维生素D化合物以及化疗剂或放疗剂或治疗与之前的重复中所用的可以是相同的或不同的。此外，给予活性维生素D化合物的时间阶段以及其给予的方式可在各重复中有所不同在一个优选的实施方式中，肿瘤的治疗是通过联合美国专利No.6,087,350和6,559,139中所述的化疗剂进行的。在这一实施方式中，活性维生素D化合物与其它药剂联合给药，具体为用于治疗过度增殖疾病的细胞毒性剂。较佳地，用活性维生素D化合物对过度增殖的细胞进行预处理，然后再用细胞毒性剂处理，以增强该细胞毒性剂的效力。例如，可在给予化疗剂的前一天给予活性维生素D化合物。
可用本发明治疗的动物包括所有能受益于本发明制剂给药的动物。这些动物包括人、宠物如狗和猫，以及畜养动物如奶牛、猪、绵羊、山羊等。
下列实施例是本发明方法和组合物的描述而非限制性的例子。本领域技术人员显然能根据临床治疗中通常遇到的条件和参数的差异作其它合适的变化和改进，这些均在本发明的精神和范围内。
实施例1钙三醇与所选组分的相对化学相容性在本实施例中，通过测定40℃和60℃下储藏后完整钙三醇的回收百分数来评价钙三醇与所选的亲脂性、亲水性和表面活性剂组分的相对化学相容性。钙三醇的回收根据高压液相色谱(HPLC)的分析来确定。结果列于表1中。
表1 配制在所选组分中的钙三醇的回收的百分数
回收数据表明亲脂性组分组中最相容的组分是Miglyol 812(含或不含BHT和BHA)、Labrafac CC和Captex 200；亲水性组中最相容的组分是丙二醇；表面活性剂组中最相容的组分是维生素E TPGS和GELOCIRE 44/14。
实施例2液体和半固体钙三醇制剂的稳定性I.引言在本实施例中，在九个不同的制剂(四个液体制剂和五个半固体制剂)中测定活性维生素D化合物钙三醇的稳定性。
II.钙三醇制剂的制备A.液体制剂制备了四种含有表2所示组分的液体钙三醇制剂(L1-L4)。最终制剂含有0.208毫克钙三醇/克液体制剂。
表2液体钙三醇制剂的组成
所示量为以克表示。
B.半固体制剂制备了含有表3所示组分的5种半固体钙三醇制剂(SS1-SS5)。最终制剂含有0.208毫克钙三醇/克半固体制剂。
表3半固体钙三醇制剂的组成
所示量为以克表示。
C.制备液体和半固体钙三醇制剂的方法1.赋形剂的制备如下所述，分别制得100克量的表2和表3所示的四种液体钙三醇制剂(L1-L4)和五种半固体钙三醇制剂(SS1-SS5)。
将除钙三醇以外的所列组分，在合适的玻璃容器中合并，并将之混合直至均匀化。将维生素E TPGS和GELUCIRE 44/14在60℃下加热和均化，然后在称重并加入制剂中。
2.活性制剂的制备将半固体赋形剂在#60℃下加热并均化。在柔和光下，称取出12±1毫克钙三醇于各带拧盖的玻璃瓶中，每制剂放一个瓶子。(钙三醇对光敏感，在用钙三醇/钙三醇制剂时应使用柔和的光/红光)。记录确切重量至0.1毫克。钙三醇放入瓶中后立即将盖子盖到瓶上。然后，用下式计算使浓度为0.208毫克/克所需的各赋形剂的量Cw/0.208＝所需的赋形剂重量其中Cw＝钙三醇的重量(毫克)，0.208＝钙三醇的最终浓度(毫克/克)。
最后，将适量的各赋形剂加入各个相应的含钙三醇的瓶中。将制剂在加热(#60℃)的同时混合，以使钙三醇溶解。
III.钙三醇制剂的稳定性分析9种钙三醇制剂(L1-L4和SS1-SS4)中钙三醇组分在三个不同温度下的稳定性。将9种制剂样品分别置于25℃、40℃和60℃下。在1、2和3周后用HPLC分析在所有三个温度下的所有9种制剂样品。另外，9周后用HPLC分析60℃试验中的样品。测定每份样品在每个时间点的余留的初始钙三醇浓度的百分比，并报道在表4(液态制剂)和表5(半固体制剂)中。
表4液体制剂的稳定性
*占时间为0时的浓度的百分数表5半固体制剂的稳定性
*占时间为0时的浓度的百分数如表4和5所示，钙三醇保持相对稳定，在所有分析的制剂(液体和半固体)中只有很少降解。
实施例3钙三醇制剂的外观和UV/可见光吸收研究在本研究前制备了钙三醇制剂L1和SS3，并在室温下保藏于暗处。下表6显示了用来制备该制剂的组分的量。
表6用于吸光度分析的钙三醇制剂的组成
所示量以克表示。
使用前将制剂温热至55℃。两个制剂(液体#1和半固体#3)均用漩涡振荡混合器充分混合，两者均呈澄清液体。将各钙三醇制剂(.250微升)加入25毫升容量瓶中。液体#1的确切加入量为249.8毫克，半固体#3的确切加入量为252.6毫克。在接触玻璃后，半固体#3制剂固化。然后加入去离子水至25毫升标线处，用涡流混合器混合溶液至均一。此时观察外观，并用UV/可见光分光光度计测定所得混合物在400nm下的吸光度。以去离子水为空白在400纳米下进行测定。每个样品在10分钟内测定10次。结果归纳在表7中。两个制剂均是白色不透明的。
表7制剂在400纳米下的吸光度读数
实施例4从液体和半固体制剂赋形剂(无钙三醇)形成的乳液液滴的直径在本实施例中，在用模拟的无酶胃液(SGF)稀释液体(L1-L4)和半固体(SS1-SS5)乳液前浓缩物赋形剂(不含钙三醇)后，测定乳液液滴的平均直径。液滴的平均直径根据光散射测定来确定。另记录下通过肉眼观察确定的前浓缩物和所得乳液的外观。结果归纳在表8中。
表8由不含钙三醇的乳液前浓缩物赋形剂形成的乳液液滴的直径
*(Z平均以纳米表示)从上述结果可以得出结论，尽管有不透明的外观，从乳液前浓缩物形成的液滴(颗粒)具有亚微米的液滴尺寸。
实施例5从液体和半固体钙三醇制剂形成的乳液液滴的直径在本实施例中，在用模拟的无酶胃液(SGF)稀释液体#1(L1)和半固体#3(SS3)乳液前浓缩物后，测定乳液液滴的平均直径。本实施例所用的制剂含有的钙三醇浓度为0.2毫克钙三醇/克制剂。根据光散射测定方法确定液滴的直径。另记录下通过肉眼观察确定的所得乳液的外观。结果归纳在表9中。
表9由含钙三醇的乳液前浓缩物制剂形成的乳液液滴的直径
*(Z平均以纳米表示)实施例6来自乳液前浓缩物的钙三醇的体外分散在本实施例中，测定了明胶胶囊中各种制剂中的钙三醇的分散程度。将2号明胶胶囊中的含250毫克钙三醇制剂的单个胶囊(每个胶囊含0.2毫克钙三醇/克制剂)加入200毫升37℃的无酶模拟胃液(SGF)中，用搅拌桨以200转/分钟的转速混合。然后用5微米滤膜过滤样品，在30、60、90和120分钟时用HPLC分析钙三醇浓度。结果如表10所示。
表10分散于SGF中后、经5微米滤膜过滤所得滤液中的钙三醇百分数
#比较制剂含有溶于含0.05％BHA和0.05％BHT的Miglyol 812中的0.2毫克/克的钙三醇。该制剂与从Roche Laboratories购得的ROCALTROL制剂相似。
如本实施例所述，从含L1或SS3制剂的胶囊中分散到模拟胃液中的钙三醇分散程度比含有对比制剂(与从Roche Laboratories购得的ROCALTROL制剂相似)胶囊所观察到的分散程度更广泛。
实施例7狗中的钙三醇血浆浓度和药物动力学在狗中的药物动力学研究比较了在给予1.0微克/千克3种不同制剂(ROCALTROL、液体制剂(液体#1)和半固体制剂(半固体#3))后的钙三醇血浆水平。让4只狗口服接受1.0微克/千克ROCALTROL、半固体制剂或液体制剂。当对狗使用一种以上制剂时，在给予每个制剂之间间隔最少7天的冲洗期。
在给药前以及给药后0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、36和48小时采集血样以分析钙三醇水平。对于ROCALTROL组，在给药前、给药后24和48小时采集用于临床化学检查的血样。对于半固体和液体制剂，在给药前、给药后4、24、48、72、96和120小时采集血样。用放射性免疫试验分析样品的钙三醇，并进行药物动力学分析。
图1显示了三种制剂的钙三醇随时间的血浆浓度变化。
三种不同制剂之一在1.0微克/千克的共同剂量下的钙三醇药物动力学归纳在表11-14中。
表11狗中钙三醇参数总结
a表示中值和范围b表示调和平均数，和基于折叠方差(jackknife variance)的假SD
表12在给予单剂1微克/千克ROCALTROL后狗中的钙三醇血浆浓度(pg/ml)和药物动力学参数
a表示中值和范围b表示调和平均数，和基于折叠方差的假SD黑体-用于计算λ
表13在给予单剂1微克/千克半固体#3制剂后狗中钙三醇的血浆浓度(pg/ml)和药物动力学参数
a表示中值和范围b表示调和平均数，和基于折叠方差的假SD黑体-用于计算λ
表14在给予单剂1微克/千克液体#1制剂后狗中钙三醇的血浆浓度(pg/ml)和药物动力学参数
a表示中值和范围b表示调和平均数，和基于折叠方差的假SD黑体-用于计算λ本研究的结果表明，本发明的具体制剂和ROCALTROL之间在药物动力学方面有以下一些差异和相似之处●液体和半固体制剂的Cmax比ROCALTROL制剂高约3倍。
●液体和半固体制剂达到Cmax的时间(1-2小时)比ROCALTROL制剂(2-4小时)早。
●三种制剂的整体系统性(systemic)暴露(AUC0-4)是相当的，但是液体和半固体制剂在前24-48小时内的系统性暴露比ROCALTROL高。
上述结果表明，液体#1制剂产生了最高的Cmax和最大的AUC钙三醇数值，其次是半固体#3制剂。ROCALTROL制剂有最低的Cmax和AUC值。看起来液体#1和半固体#3制剂的吸收更快，在前12小时内产生了更高的血浆浓度，且清除的速率更快。
实施例8逐步提高半固体#3制剂剂量后的药物动力学在本研究中，对于逐步提高口服半固体制剂剂量后狗中的药物动力学进行了研究。给3只雄性和3只雌性猎兔犬口服单剂0.5微克/千克(所有6只狗)、0.1微克/千克(1只雄性和1只雌性)、5.0微克/千克(2只雄性和2只雌性)和10.0微克/千克(所有狗)。在给予10.0微克/千克后，处死每6只狗中的2只。其余的雄性和雌性狗继续进行研究，并接受30.0微克/千克和100.0微克/千克剂量。每次给药后，动物经过6天的恢复期。
在给药前、给药后0、2(除0.5微克/千克剂量外的所有狗)、4、8、24、48和96小时收集每只狗的血样(约1毫升)。用放射性免疫试验分析样品中的钙三醇，并进行药物动力学分析。雄性和雌性狗的钙三醇血浆浓度显示在图2A和2B中。
在给予半固体#3后，最大血浆浓度通常出现在2小时的取样点。在大于0.1微克/千克的剂量下，血浆浓度看起来在前8小时的下降速度比24-96小时期间更快。
在最低的0.1微克/千克的剂量下，钙三醇的血浆浓度在24小时后低于定量测定的检测限。在0.5微克/千克和以上的剂量下，在96小时的取样点时仍维持了可测定的钙三醇浓度。雄狗和雌狗之间看来没有显著差别。
0.1-100.0微克/千克剂量范围内的半固体#3的药物动力学参数归纳在表15中。
表15逐步提高钙三醇剂量后的钙三醇药物动力学
这些药物动力学结果表明如下·钙三醇的系统性暴露看起来在0.1-100.0微克/千克的整个测试剂量范围是相当呈线性的。没有发现吸收饱和。
·钙三醇的半衰期看起来是剂量依赖性的。半衰期大于24小时的制剂较不适合高剂量脉冲给药。
·每周给予5.0微克/千克和以上剂量的半固体#3，导致血浆中有一些累积。在0.1和0.5微克/千克的最低剂量下始终没有观察到累积。
实施例9
用半固体#3在狗中进行28天的口服毒性研究在本研究中，在狗中进行半固体#3的28天重复给药毒性研究，以评价在每周口服胶囊后的钙三醇药物动力学。在研究日的第0、7、14、21和28日，给予半固体#3或对照制品胶囊。12只狗(6只雄性，6只雌性)接受赋形剂对照(组1)、8只狗(4只雄性，4只雌性)接受0.1微克/千克半固体#3(组2)、8只狗(4只雄性，4只雌性)接受1.0微克/千克半固体#3(组3)。12只狗(6只雄性，6只雌性)在第0天接受30.0微克/千克半固体#3(组4)。由于在第0天首次给予30微克/千克后观察到严重的临床反应，将该组的剂量水平降低至10微克/千克(雄狗，在第7、14、21和28天)或5微克/千克(雌狗，在7、14、21和28天)。每只狗在给药前、第0天(首次给药)和第21天(第四周给药)各日的1、2、4、6、8、24和48小时收集血样。所有动物在第29天处死。
组2-4的血浆钙三醇的药物动力学结果归纳在表16中。
表16每周给予半固体#3后狗中的钙三醇平均毒性动力学参数
aTmax的数值是该参数的中值数值。显示的所有其它参数是平均值。
b半固体#3的剂量在研究日第7日开始降低。
来自赋形剂对照狗(组1)的数据没有进行药物动力学分析。
图3A和3B显示了在研究第0天和21天给予雄性(图3A)和雌性(图3B)猎兔犬半固体3#口服胶囊后，经调整的钙三醇血浆浓度-时间曲线。从所有随后时间点的数值中减去第0天0时的钙三醇数值，以调整内源性血浆钙三醇(基线)。
研究结果表明如下●在口服给予半固体#3胶囊后，钙三醇血浆浓度的升高相当迅速，在2小时内达到血浆浓度峰值。
●在给药后前8小时内钙三醇血浆浓度降低的速度比以后的时间点(24-48)更为迅速，这可能暗示钙三醇重新分配到血管外的空间，随后钙三醇缓慢释放回到血管空间。这一观察结果在较高剂量水平下比在较低剂量水平下更为明显。
●在0.1微克/千克的低剂量下，给药后24小时，钙三醇的血浆浓度降低至接近基线值。然而，在较高的钙三醇剂量下，在最后一次取样时间点(48小时)时，与剂量相关的残余钙三醇浓度仍然明显，虽然所有数值在给药后一周返回至给药前(基线)的数值。
●在整个测试剂量范围(0.1-30.0微克/千克)内，Cmax和AUC的数值与剂量呈很好的线性。
●在没有观察到不利效果的低剂量水平(0.1微克/千克)下，AUC0-24的数值在1840.6-3283.0pg·hr/mL范围内。
●在中等剂量水平(1.0微克/千克)(最大忍受剂量)下，AUC0-24的数值在12,947.3-23,259.7pg·hr/mL。
●在与重量损失和中度毒性症状相关的剂量下，AUC0-24的数值在46,878.1pg·hr/mL(5.0微克/千克；雌性)至173,597.2pg·hr/mL(10.0微克/千克；雄性)范围内。
●在与致死性相关的剂量(30.0微克/千克)下，AUC0-24的数值在323,573.1-496,044.6pg·hr/mL范围内。
●药物动力学参数在性别上没有一致的差异。
总而言之，在首次给药和每周一次重复给药后，动物似乎以相似的方式对待钙三醇，只是有一些除外，例如在1.0微克/千克的雌狗实验中，第0天的Cmax和AUC的数值比第21天高(雄性中不明显)。
实施例10三种不同制剂的急性毒性研究在实施例7描述的研究中，监测了几个在体(in-life)参数(包括临床化学参数)，以评价钙三醇制剂的毒性。分析了血样的钙、磷、血尿氮(BUN)、葡萄糖、白蛋白、胆红素(总量)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AP)和肌酐。
三种制剂中的任一种在任何狗中均未见临床毒性。
以1.0微克/千克给予三种制剂后，均发现了高钙血症。表17中列出三种不同制剂每一种的组平均值和个体的血清钙水平范围。
表17组平均血清钙水平(毫克/dL)
a历史范围b历史平均值*历史范围外的平均值NA＝不可获得(未取血清样品)除了钙上升外，还观察到所有组中ALT、AST、BUN和肌酐的上升。
总之，本研究的结果表明●在给予任一制剂(ROCALTROL，液体或半固体)后，任一狗中均未见治疗相关的临床状况。
●所有三个制剂以1.0微克/千克口服后均在狗体内见到高钙血症。
●在达到48小时时，所有三种制剂的高钙血症时间历程是相当的；ROCALTROL组的取样没有超过48小时。
●三种制剂间的高钙血症严重程度是相当的；最高的血清钙(17.0毫克/dL)发生在接受液体制剂的狗的24小时时。
●所有治疗组在一个或多个时间点观察到的ALT、AST、BUN和肌酐的平均值均在历史范围外。
●液体或半固体组中的BUN和肌酐升高较多；在没有同时进行的对照组的情况下，本观察的显著意义不清楚。
实施例11急性最大耐受剂量研究在上述实施例8的研究中，还评价了半固体#3的急性毒性和高钙血症效应，以便估计最大耐受剂量，并为今后的剂量选择研究提供数据。
在雄性(图4A)和雌性(图4B)狗中，在所有剂量水平下钙水平均以剂量相关的方式提高。为完整起见，在实施例10所述的研究中从雄狗获得的0.001和1.0微克/千克剂量的血清钙数据，一并在此列入。
总之，本研究通过胶囊给雄性和雌性猎兔犬口服0.1、0.5、5.0、10.0、30.0、和100.0微克/千克的半固体#3，结果表明
●剂量依赖性高钙血症是最常见的实验室异常情况。
●在5.0微克/千克或更高剂量下，发现了肌酐、尿氮、胆固醇、红血球、血红蛋白、血细胞比容和嗜中性白细胞的升高和淋巴细胞的降低。
●在接受30.0和100.0微克/千克剂量后，体重和食物消耗显著降低；在接受100.0微克/千克剂量后，狗显著变瘦，且活动能力明显降低。
基于这些结果，半固体#3在狗内的最大耐受剂量看起来为5.0微克/千克。
实施例1228天重复给药的毒性研究上述实施例9的研究中，还评价了在通过口服途径(胶囊)以每7天给一次药共28天后半固体#3制剂对狗的潜在毒性。本研究包括对全部动物的临床状况、体重、食物消耗、毒性动力学、临床病理学包括生物化学、血液学、凝结作用和尿分析、眼科学、心脏病学、整体验尸(gross necropsy)、器官重量和全部组织病理学进行评价。研究设计归纳在表18中。
表18在狗中进行28天重复给药研究的研究设计
*测试品(钙三醇半固体#3)是每克含0.1毫克钙三醇的制剂。
**在第2周，雄狗剂量减少至10微克/千克，雌狗减少至5微克/千克；所有存活的动物在第29日处死。
4只组4的动物(1雄3雌)在研究的前3天死亡或是垂死。在第7天减少剂量水平后没有发生死亡；组1、2或3中没有死亡。
在组4的死亡动物中，死亡前最显著的临床异常情况包括红色呕吐物、少/无粪便、含有红色物的粪便、红色鼻涕、呼吸浅而急促、活动减少和侧卧。
在组3和组4的动物中观察到与剂量相关的体重减少、体重增加的减少以及食物消耗的减少；组3动物比对照低大约11-12％；组4动物比对照低17-24％。在组2动物中，体重增加或食物消耗没有受到明显的影响。
组4动物在第29天有几个RBC和WBC参数呈增加的趋势；而组2和组3动物没有毒理学上显著的血液学异常。
在组3和组4动物中注意到与剂量相关的高钙血症。钙水平在给药后6小时升高，在给药后24小时达到最高值，并在给药后48和96小时逐步减少。组3和组4动物中的其它临床化学异常包括血清蛋白、胆固醇和肾功能参数升高，以及电解质和尿比重降低。组2动物没有发现毒理学显著的临床化学参数异常或显著的血清钙升高。
在研究的第22/23日，在眼球组织中未观察到与治疗相关的变化。而且，在本研究中，没有发现所获得的ECG和血压数据有与治疗相关的变化。
最显著的整体尸体解剖异常发生在死亡的或垂死的第4组动物中，其包括消化系统和相关器官损伤；网膜呈暗红色，发红至暗红色的粘膜；小肠和胃中有红色液体；食道和大肠的粘膜发红至暗红色；胆囊有着色且增厚；心脏有血栓；肺上有暗红色的和斑点区域；胰腺发红至暗红色；暗红色的胸腺；增厚的膀胱和苍白的脾脏。组3动物的整体异常的严重程度较低；组2动物中未见显著的整体异常。
主要的组织病理学异常是剂量相关的慢性间质性肾炎组3动物为轻微至中度，组4动物为中度至显著。，在这些动物中其它镜检发现看起来是慢性间质性肾炎继发性的，并包括各种器官/组织的矿化。在组2动物中镜检中未发现损伤。
血清钙的最高值通常发生在给药后24小时内，在下一次给药前取样间隔前返回至基线水平。图5A-5C显示了血清钙和血浆钙三醇的所选数据(第21天的雄性动物)。这些数据表明钙三醇的最高血浆浓度通常远在达到钙的最高血清浓度之前发生。
总之，对雄性和雌性猎兔犬以0、1.0和5.0(雌性)或10.0(雄性)微克/千克(在初始剂量为30.0微克/千克后)每7天给予口服半固体#3一次的研究结果表明●未发现不利影响的水平为0.1微克/千克；最大耐受剂量为1.0微克/千克；在30微克/千克下发现致死。
●在组3和组4中发现消化系统和相关器官中与剂量相关的损伤、体重增加的减少以及食物消耗的减少。
●在组3和组4中发现与剂量相关的慢性间质性肾炎。
实施例13人的药物动力学研究在临床试验中评价了半固体#3在人体内的药物动力学。本研究中患者接受半固体#3的钙三醇剂量最高为90微克。以下就初步的药物动力学结果进行讨论。
在给药前以及初始给予半固体#3后0.5、1.0、1.5、2、3、4、6、8、12、24、48、72小时时采集血样。用市售的放射性免疫试剂分析钙三醇水平，对稀释完整性作有限的确认。
绘制每组的平均血浆浓度-时间曲线(图6)。计算每个对象的非室性(non-compartmental)药物动力学参数，然后取平均值(表19)。从给药后数值中减去基线钙三醇数值，以对内源性钙三醇进行调整。
表19给药组的半固体#3药物动力学参数
*调和平均值，基于折叠方差；**n＝1；***n＝2
根据这些数据，半固体#3的药物动力学看上去是线性的且是可预计的。没有吸收饱和的迹象。
实施例14半固体#3的安全性结果在临床试验中评价了半固体#3在人体内的安全性。在2002年5月8日，12名患者在本研究中接受半固体#3组1为3名(15微克)，组2为3名(30微克)，组3为6名(60微克)。以下就前9名患者的初步的药物动力学结果进行讨论。
没有死亡发生。9名患者中有8名发生了34个不良的事件；34个不良事件中有20个被认为可能与半固体#3相关。组3中发生了一个严重的不良事件，研究者认为其无关。该患者在第1天出现短暂的1级发烧，使其延长了住院。表20中列出了认为与研究药物有关的2级或3级不良事件。
表20被认为与研究药物有关的2级或3级不良事件
半固体#3的1期试验的初步结果表明了●半固体#3的最大耐受剂量未在1期试验中得到确定；对组3中的其它患者进行评价(60微克)。
●半固体#3的药物动力学在前3个给药组中表现出线性和可预计性。
实施例15附加组合物将半固体#3配制于硬明胶胶囊中以供口服给药时，观察到了化合物从胶囊中的渗出。测试了含有不同亲脂相组分和表面活性剂以及各组分不同百分比的新化合物，以鉴别出可解决这一问题的组合物。组合物如表21所列。
表21附加测试的组合物
还测试了含有多种表面活性剂而不含亲脂相组分的附加组合物。该组合物为维生素E TPGS与Gelucire 44/14或Gelucire 50/13的1∶1的组合。
鉴别出了抗渗出的组合物。
实施例16稳定的单剂量制剂制备了钙三醇的制剂以获得表22中的组合物。将维生素E TPGS加温到约50℃，并与适当比例的MIGLYOL 812混合。在各制剂中加入BHA和BHT，以在最终制剂中各自获得0.35％w/w的浓度。
表22钙三醇制剂
制剂配制后，将制剂2-4加热到约50℃，并与钙三醇混合，以得到0.1微克钙三醇/毫克总制剂。然后将该制剂所含钙三醇(～250微升)加入25毫升容量瓶中，并加入去离子水至25毫升标线处。然后将该溶液涡旋混匀，并在混合后立即(初始)至混合后10分钟内，于400nm处测定各制剂的吸光度。如表23所示，所有的三种制剂在与水混合后都产生了带乳光的溶液。10分钟后制剂4在400nm处的吸光度无可观测到的变化，看来形成了稳定的悬液。
表23悬浮于水中的制剂的吸光度
为进一步评估钙三醇制剂，进行了溶解性的研究以评估在各制剂中所溶解的钙三醇的量。制备了钙三醇浓度为0.1-0.6微克钙三醇/毫克制剂的制剂，制备方法为将制剂加热到50℃，然后加入适量的钙三醇。然后将制剂冷却到室温，并以带有或不带有偏振光的光学显微镜确定未溶解钙三醇的存在。在各制剂中，最高测试浓度(0.6微克钙三醇/毫克制剂)的钙三醇均可溶。
目前，正用45微克剂量的钙三醇进行人的2期临床试验。为开发一种含有这一剂量的胶囊，制备了含有0.2微克钙三醇/毫克制剂和各0.35％w/w的BHA和BHT的各制剂。将散装的制剂混合物以225毫克(45微克钙三醇)的质量填装入3号硬明胶明胶胶囊。然后将胶囊在5℃、25℃/60％相对湿度(RH)、30℃/65％RH和40℃/75％RH下进行稳定性分析。在适当的时间点，分析稳定性样品的整体钙三醇含量和胶囊的溶出度。胶囊中的钙三醇含量是通过将3个打开的胶囊溶于5毫升甲醇中，并在分析前置于5℃保存而进行的。然后将该经溶解的样品以反相HPLC分析。使用了30℃的Phemonex Hypersil BDS碳18柱，乙腈梯度为55％乙腈水溶液-95％乙腈，洗脱中的流速为1.0毫升/分钟。在265nm处测得峰，每次运行注入25微升的样品。将样品峰面积与标准对照品比较，以计算出如表24中所报告的钙三醇含量。溶出度测试是在6个低容量溶出容器(在该容器中装有50毫升含有0.5％月桂基磺酸钠的去离子水)中各放入一粒胶囊进行的。在37℃、75转/分钟条件下混合30、60和90分钟后取样。样品中的钙三醇含量的测定是通过将100微升样品注入Betasil碳18柱，并在30℃下，以1毫升/分钟流速的流动相(乙腈∶水∶四氢呋喃＝50∶40∶10)操作而进行的。报告了获自6粒胶囊的90分钟溶出试验的平均值(表25)。
表24硬明胶胶囊中钙三醇制剂的化学稳定性(每粒胶囊填充总质量为225毫克，钙三醇为45微克)
a.分析结果表示相对于基于45微克含量/胶囊期望值的钙三醇％。数值中包括前钙三醇(其为钙三醇的活性异构体)。
表25硬明胶胶囊中钙三醇制剂的物理稳定性(每粒胶囊填充总质量为225毫克，钙三醇为45微克)
a.胶囊的溶出按所述进行，钙三醇％是基于标准和45微克钙三醇/胶囊的期望含量而进行计算的。前钙三醇(活性异构体)未包括在溶解的钙三醇％计算中。所报告的数值来自90分钟的样品。
化学稳定性结果表明MIGLYOL 812含量的降低伴随维生素E TPGS含量的提高提供了如表24中所记录的整体钙三醇回收率的提高。制剂4(50∶50的MIGLYOL 812/维生素E TPGS)为化学稳定性最佳的制剂，在25℃/60％RH条件下，其整体钙三醇回收率仅有少量下降，使其能在室温下储存。
制剂的物理稳定性是通过胶囊在各稳定性条件下储存后的溶出行为来分析的。与化学稳定性相符，MIGLYOL 812含量的降低和维生素E TPGS含量的提高改善了制剂的溶出性质(表25)。制剂4(50∶50的MIGLYOL 812/维生素E TPGS)具有最佳的溶出性质，并具有适合室温储存的稳定性。
实施例17制剂4的药物动力学进行了试验以比较实施例16中的制剂4(#4)与半固体制剂#3(SS3)的药物动力学特性。将钙三醇配制在#4和SS3制剂中，并按配制成含有4.5微克/胶囊的胶囊。给20只雄性猎兔犬口服单种胶囊(剂量为约0.5微克/千克体重)。在第1天给予半数犬#4胶囊，并在第7天给予SS3胶囊。另10只犬则在第1天接受SS3胶囊，而在第7天接受#4胶囊。在各次给药前60、40和20分钟、以及各次给药后0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24、36、48和96小时采集血样。进行了血样中钙三醇水平的药物动力学分析，并将结果示于表26中。
表26SS3和#4制剂中钙三醇药物动力学的比较
由数据可见#4和SS3制剂显示出非常近似的药物动力学，并因此是生物等效的。
在充分描述了本发明后，本领域普通技术人员应当理解，在广泛和与所述条件、制剂和其它参数等价的范围内，能实施相同的发明而不影响本发明或其实施方式的范围。本文所引用的所有专利、专利申请和出版物全部完整地纳入本文作为参考。
权利要求
1.一种药物组合物，其含有(a)亲脂相组分，(b)一种或多种表面活性剂，以及(c)活性维生素D化合物；其中，所述组合物包含下述亲脂相成分组合中的一种和一种或多种表面活性剂，其中各组分的百分比是基于组合物总重的重量百分比，所述组合物总重中不包含活性维生素D化合物a.Gelucire 44/14 约50％MIGL YOL 812约50％；b.Gelucire 44/14 约50％维生素E TPGS约10％MIGL YOL 812约40％；c.Gelucire 44/14 约50％维生素E TPGS约20％MIGL YOL 812约30％；d.Gelucire 44/14 约40％维生素E TPGS约30％MIGL YOL 812约30％；e.Gelucire 44/14 约40％维生素E TPGS约20％MIGL YOL 812约40％；f.Gelucire 44/14 约30％维生素E TPGS约30％MIGL YOL 812约40％；g.Gelucire 44/14 约20％维生素E TPGS约30％MIGL YOL 812约50％；h.维生素E TPGS约50％MIGL YOL 812 约50％；i.Gelucire 44/14约60％维生素E TPGS 约25％MIGL YOL 812 约15％；j.Gelucire 50/13约30％维生素E TPGS 约5％MIGL YOL 812 约65％；k.Gelucire 50/13约50％MIGL YOL 812 约50％；l.Gelucire 50/13约50％维生素E TPGS 约10％MIGL YOL 812 约40％；m.Gelucire 50/13约50％维生素E TPGS 约20％MIGL YOL 812 约30％；n.Gelucire 50/13约40％维生素E TPGS 约30％MIGL YOL 812 约30％；o.Gelucire 50/13约40％维生素E TPGS 约20％MIGL YOL 812 约40％；p.Gelucire 50/13约30％维生素E TPGS 约30％MIGL YOL 812 约40％；q.Gelucire 50/13约20％维生素E TPGS 约30％MIGL YOL 812 约50％；r.Gelucire 50/13约60％维生素E TPGS 约25％MIGL YOL 812 约15％；s.Gelucire 44/14约50％PEG 4000 约50％；t.Gelucire 50/13 约50％PEG 4000 约50％；u.维生素E TPGS 约50％PEG 4000 约40％；v.Gelucire 44/14 约33.3％维生素E TPGS 约33.3％PEG 4000 约33.3％；w.Gelucire 50/13 约33.3％维生素E TPGS 约33.3％PEG 4000 约33.3％；x.Gelucire 44/14 约50％维生素E TPGS 约50％；y.Gelucire 50/13 约50％维生素E TPGS 约50％；z.维生素E TPGS 约5％MIGL YOL 812 约95％；aa. 维生素E TPGS 约5％MIGL YOL 812 约65％PEG 4000 约30％；ab. 维生素E TPGS 约10％MIGL YOL 812 约90％；ac. 维生素E TPGS 约5％MIGL YOL 812 约85％PEG 4000 约10％；和ad. 维生素E TPGS 约10％MIGL YOL 812 约80％PEG 4000 约10％。
2.一种药物组合物，其包含活性维生素D化合物、约50％的MIGL YOL 812、约50％的维生素E TPGS、约0.35％的丁基羟基茴香醚(BHA)和约0.35％的丁基羟基甲苯(BHT)。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，所述活性维生素D化合物是钙三醇。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包含至少一种选自下组的添加剂抗氧化剂、缓冲剂、防沫剂、防粘剂、防腐剂、螯合剂、粘度调节剂、张力调节剂、调味剂、着色剂、香料、遮光剂、悬浮剂、粘合剂、填充剂、增塑剂、增稠剂和润滑剂。
5.如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述添加剂中的一种是抗氧化剂。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述抗氧化剂选自下组抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、BHA、BHT、焦亚硫酸钾、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、和生育酚。
7.如权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物适于口服给药。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为单位剂型。
9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，每个所述的单位剂量中含有1-400微克的活性维生素D化合物。
10.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，每个所述的单位剂量中含有45微克的活性维生素D化合物。
11.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述活性维生素D化合物是钙三醇。
12.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述单位剂型是胶囊。
13.如权利要求12所述的药物组合物，其特征在于，所述胶囊是明胶胶囊。
14.如权利要求13所述的药物组合物，其特征在于，所述明胶胶囊中的成分总体积为10-1000微升。
15.如权利要求13所述的药物组合物，其特征在于，所述明胶胶囊中的成分总重量为10-1500微克的药物组合物。
16.一种治疗或预防过度增殖疾病的方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求1或2所述的药物组合物给予需要该药物组合物的患者。
17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述过度增殖疾病是癌症。
18.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述过度增殖疾病是牛皮癣。
19.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述药物组合物是通过脉冲给药方式给予的，其中所述脉冲给予包括不超过每3天1次地给予患者所述组合物。
20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述给药不超过每周1次。
21.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述给药不超过每3周1次。
22.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述方法还包括给予一种或多种化疗剂或放疗剂/治疗。
23.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物是在给予所述一种或多种化疗剂或放疗剂/治疗之前的至少12小时给予的。
24.如权利要求23所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物是在给予所述一种或多种化疗剂或放疗剂/治疗之前给药1天-约3个月。
25.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物是在给予所述一种或多种化疗剂或放疗剂/治疗时同时给予的。
26.如权利要求25所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物是在给予所述一种或多种化疗剂或放疗剂/治疗后继续给予的。
27.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物是在给予所述一种或多种化疗剂或放疗剂/治疗之后给予的。
28.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物是在给予所述一种或多种化疗剂或放疗剂/治疗之前的1天给予的。
29.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物和所述一种或多种化疗剂或放疗剂/治疗是不超过每3周1次给予的。
全文摘要
本发明公开了乳液前浓缩物制剂中含有活性维生素D化合物的药物组合物，以及由其产生的乳液和亚微米液滴乳液。该组合物包含亲脂相组分、一种或多种表面活性剂和活性维生素D化合物。该组合物还可任选地包含亲水相组分。
文档编号A61K31/59GK1856251SQ200480016371
公开日2006年11月1日 申请日期2004年6月10日 优先权日2003年6月11日
发明者B·F·莱德劳, J·斯沃布里克 申请人:诺瓦西股份有限公司