专利名称：包含胃泌素化合物的组合物及其在糖尿病中的应用的制作方法
技术领域：
本发明广泛地涉及包含胃泌素化合物的组合物和方法，及其用途。
背景技术：
胃泌素和其它生长因子与胎儿胰腺的发育有关(Brand andFuller，J.Biol.Chem.2635341-5347)。胃泌素短暂地表达在胎儿的胰岛中且该表达限于原始分化胰岛前体形成分化胰岛的时期。在还不知道胰岛中胰腺胃泌素表达的重要性时，已经注意到伴随着胰岛母细胞增生症胰腺胃泌素升高。尤其是，已经证明在婴儿胰岛母细胞增生症中胰腺胃泌素异常持久(Hollande等人，Gastroenterology，71251-262，1976)且胃泌素过多症由胃泌素表达胰岛细胞瘤所引起。萎缩性胃炎与分化胎儿胰岛中看到的相似也与胰岛母细胞增生症有关(Sacchi等人，Virchows Archiv B，48261-276，1985)。然而，在两种观察结果中没有一种偶然的联系建立在胰岛母细胞增生症和胃泌素刺激之间。
本文所引用的任何参考资料不允许作为当前发明现有技术的参考文献来提供。
发明概述本发明提供了一种组合物，尤其是一种药物组合物，包含一种或多种可以在糖尿病和其并发症治疗中提供有益效果的胃泌素化合物。
一个方面本发明提供了一种药物组合物，包含一种或多种治疗后提供有益效果，尤其是持久有益效果的胃泌素化合物。本发明的一种组合物提供的有益效果可以包括胃泌素化合物的吸收、分布、代谢和/或消除的增加。一种组合物可以具备增加的生物利用率(吸收更快并且更高)或提供增强的治疗的效果，尤其是持久的有益效果。
本发明也提供了一种用于向病人给药以提供有益效果的药物组合物，尤其是持久的有益效果，包含一种胃泌素化合物和任选的可药用的载体、辅料或赋形剂。
本发明也提供了一种用于治疗疾病或病症的药物组合物，包含存在于可药用的载体、辅料或赋形剂中提供持久有益效果的治疗有效量的胃泌素化合物。
在一个实施方案中，提供了一种包含胃泌素化合物的药物组合物，该药物组合物适于给予个体以提供持久的有益效果以治疗病症或疾病。在一个优选的实施方案中，该组合物是一种给予个体后产生大约正常血糖水平的剂型，这种大约正常的血糖水平在治疗停止之后持续一段时间。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种包含胃泌素化合物或其可药用盐的液体药物剂型，且涉及可以重组以制备稳定且适合于肠胃外投药的混悬液的冻干药物制剂。
在一个具体的实施方案中，本发明涉及一种包含适于供给持久的有益效果的胃泌素化合物的含水组合物。本发明也提供了一种包含提供持久有益效果的胃泌素化合物或其可药用盐和至少一种增溶剂的含水制剂药物。
本发明涉及包含在治疗病症或疾病尤其是糖尿病中提供有益效果，尤其是持久有益效果的胃泌素化合物的组合物。
在另一方面，本发明涉及一种组合物，包含有效剂量的胃泌素化合物用于诱导胰岛前体细胞增殖为增加量的成熟胰岛素分泌细胞，尤其是在给予胃泌素化合物后一段持续时期内。胰岛前体细胞的增殖可以在体外或体内诱导。该组合物可以是剂量有效地用于诱导胰岛前体细胞诱导分化为成熟胰岛素分泌细胞。该组合物可以存在于可药用的载体、辅料或赋形剂。
本发明又提供了一种制备稳定要务组合物的方法，该组合物包含一种或多种治疗后适于提供有益效果的胃泌素化合物，尤其是持久的有益效果。一种包含混合一种或多种胃泌素化合物和一种可药用的载体、辅料、或赋形剂的方法，尤其是有效物理稳定胃泌素化合物的一种可药用的载体、辅料、或赋形剂。组合物制备以后，可以将他们置于适当的容器中并贴上标签标明治疗的病症。为了本发明组合物的给药，这样的标记包括给药量、频率、和方法。
本发明也预期包含至少一种胃泌素化合物的组合物在制备用于预防和/或治疗病症和/或疾病药物中的应用。本发明另外提供了本发明药物组合物在预防和/或治疗病症和/或疾病药物制备中的应用。治疗后该药物提供有益的效果，尤其是持久的有益效果。
本发明提供了一种用于治疗和/或预防个体病症和/或疾病的方法，包括给予该个体治疗有效量的一种或一种以上胃泌素化合物以提供有益效果。在一方面本发明提供了一种治疗方案，治疗后该治疗方案产生持久的有益效果。
本发明在预防和/或治疗糖尿病中有独特的应用。因而，本发明涉及一种治疗方法，包括给予治疗有效量的一种或一种以上胃泌素化合物，该化合物给予带有糖尿病症状的个体产生有益效果，尤其是持久的有益效果。在一个实施方案中，持久的有益效果通过一个或多个下述得到证实(a)C-肽生成增多；(b)胰腺胰岛素生成增多；和/或(c)大约正常的血糖水平。
在一个实施方案中，本发明提供了一种用于预防和/或治疗I型或II型糖尿病的方法，包括给予治疗有效量的本发明的一种组合物。
在另外的一个实施方案中，本发明提供一种用于在遭受I型或II型糖尿病个体中改善病症和/或疾病进展或获得病症和/或疾病较轻阶段的方法，包括给予治疗有效量的本发明的一种组合物。
本发明涉及一种延迟葡萄糖耐量降低的进展或非胰岛素需求II型糖尿病向胰岛素需求II型糖尿病转变的方法，包括给予治疗有效量的本发明的一种组合物。
本发明也涉及一种增加个体合成胰岛素能力的方法，包括给予治疗有效量的本发明的一种组合物。
在本发明方法的实施方案中，个体不使用胰岛素治疗。
本发明提供了一种药盒，包含本发明的一种或多种胃泌素化合物或药物组合物。在一个方面，本发明提供了用于预防和/或治疗糖尿病的药盒，含有包含一种或多种胃泌素化合物的组合物、容器和使用说明书。该药盒的组合物可以进一步包含可药用的载体、辅料或赋形剂。
从下述附图和详细说明中，本发明的各个方面、特征和优越性对那些在本领域擅长的人来说是显而易见的。
参考这些附图可以更好地理解本发明图1是显示用E1(1μg/Kg/天I.P.14)或G1(3g/Kg/天I.P.14天)治疗最近糖尿病发病NOD小鼠治疗结果的条线图。显示了第0天和糖尿病发病35天后(FBG＞6.6mM)的空腹血糖水平(mM)。
图2和图1描述的一样是显示用E1或者G1治疗最近糖尿病发病NOD鼠的治疗结果条线图。胰腺胰岛素含量(μg/pancreas)是显示单独在糖尿病发病和第35天的媒介物。14天后停止治疗。
图3是显示监视最近发病糖尿病NOD鼠8周结果的线条图，包括使用胃泌素的最初18天疗程。显示了在第0周和其后各周的空腹血糖水平(mM)。
图4是显示用G1治疗方案降低慢性糖尿病胰岛素依赖NOD鼠空腹血糖水平和预防胰岛素疗法停止14天后死亡的图表。
实施方案的详细说明词汇本文终点叙述的数值范围包括了包含在该范围内所有的数值和分数(例如1到5包括1、1.5、2、2.75、3、3.90、4和5)。也可以理解为所有的数值和其分数可以通过术语″″约”意为加上或减去所参考数值的0.1-50％、5-50％、或10-40％，尤其是10-20％，更优选10％或15％。进一步，可以这样理解，除非本文另外明确指示，″″″而，例如提及一种组合物含有″合物的混合物。
本文描述的化合物可以包含一种或多种不对称中心和可以产生对映异构体、非对映异构体及其他立体异构化的形式，其可以按照立体化学定义为R或S型。因此，本发明包括所有这样可能的非对映异构体和对映异构体以及他们的外消旋体和旋光纯形式。光学活性(R)-和(S)-异构体可以使用手性的合成单体或手性试剂或使用传统方法分解制备。除非另外指定，当本文描述的化合物包含几何不对称性中心时，该化合物同时包括E和A两种几何异构体。所有的互变异构形式都包括在本发明范围内。
本文描述的术语″″″″指包括温血动物在内的一种动物，例如哺乳动物，其患有或被怀疑将要或正偏向于一种疾病或病症。哺乳动物包括非限制性的哺乳纲的任何成员。通常，该术语是指人。该术语也包括繁殖用于食物或当做宠物的家畜，包括马、奶牛、羊、家禽、鱼、猪、猫、和动物园动物、山羊、猿(例如大猩猩或黑猩猩)、和啮齿动物例如老鼠和小鼠。本文使用在主体/个体/个体上的方法预期预防和治疗用途。本文描述的用于治疗方案典型的主体包括易感、遭受或已经遭受病症或疾病的人。本发明实施方案中一种主体是糖尿病个体。
术语″不影响活性成分的效力或活性且对主体没有毒性。载体、辅料、或赋形剂包括稀释剂、粘合剂、胶粘剂、润滑剂、崩解剂、填充剂、湿润剂或乳化剂、pH缓冲剂和为了制备一种独特组合物所必须的诸如吸收剂的其他材料。载体等的实例包括但不限于盐水、缓冲盐水、葡萄糖、水、甘油、乙醇和其混合物。用于活性物质的这些媒介和试剂的用途在本领域是公知的。
″合使用的化合物中。可药用盐的实例包括钠、钙、铵、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙胺、2-乙胺基、乙醇、组氨酸、procarine和羧基钾盐和氨基盐酸盐。氨基其他可药用的盐是氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、醋酸盐、草酸盐、磷酸氢盐、二氢的磷酸盐、醋酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐(甲磺酸盐)和对甲苯磺酸盐(甲苯磺酸盐)。
术语″/或治疗”是指在病症或者疾病发病前后给予主体一种本发明的组合物。治疗方案可能实行一种急性或者慢性途径。″的药理学和/或治疗学效果，和改善的药物代谢动力学性质和生物活性。在本发明的实施方案中，有益效果包括但不限于下列胰岛炎症的减轻或消失、疾病进展的减缓或预防、存活率增加、或疾病或病症的治疗或恢复。
在一个实施方案中，有益效果可以通过一个或多个下述得以证明(a)空腹血糖水平降低，尤其是当血糖水平大于7-10mM时；(b)血红蛋白糖基化降低；(c)血清胰岛素浓度升高；(d)胰腺胰岛素产物或含量增多；和/或(e)疾病进展的预防。在一个具体的实施方案中，该有益效果包括(a)、(b)和(c)或(a)、(c)和(d)。
在一个优选的实施方案中，该有益效果是一个″果”，该有益效果在治疗终止后持续一个延长时段。治疗之后有益效果可以持续至少约2至4周、2至5周、3至5周、2至6周、2至8周、2至10周、2至12周、2至14周、2至16周、2至20周、2至24周、2周至12月或2周至18月的延长期。有益效果持续的时段可能与治疗的持续时间和测定时间有关。个体可能周期性或连续性地连续治疗约或至少约2至4周、2至6周、2至8周、2至10周、2至12周、2至14周、2至16周、2周至6个月、2周to 12个月、2周至18个月。一段持久的有益效果可以显示为治疗后一个延长时段内一个或多个C-肽产物的增加、胰腺胰岛素产物或含量的增加、和大约正常或低的血糖水平。
与不使用该化合物的效果比较，按照对胃泌素化合物效果的统计分析该有益效果是一个统计上显著的效果。″″常不同的”效果或水平可以表现为高或低于标准水平。在本发明的实施方案中，和没有胃泌素化合物的效果相比，该区别可能高出或低出1.5、2、3、4、5或6倍。
″(例如胃泌素化合物)或能够产生一种或多种期望的有益效果，尤其是一种或多种持久的有益效果的本发明组合物的用量或剂量。物质的治疗有效量可以根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重和该物质在个体中引起期望的反应的能力等因素变化。可以调节剂量以提供最佳的治疗学的效应(例如持续的有益效果)。例如可以每天给予几个分剂量或根据治疗情况的急迫性相应地减少剂量。
″或″具有相同氨基酸顺序的多肽。这样的自然序列多肽可以从自然中分离或可以通过重组或合成方式制得。该术语明确地包括由一个多肽自然地发生截断或分泌，包括自然地发生变体形成得多肽变体(例如可选择地剪接形成或剪接变体)，和自然产生的等位变体。
术语″70-80％、尤其是至少大约85％、更优选至少约90％、最优选至少大约95％氨基酸序列同一性的多肽，尤其是与任何SEQ ID Nos.1到5中的序列识别具有至少70-80％、85％、95％、98％、或99％氨基酸序列同一性。这样的变体包括，例如多肽全长的N-或C-末端增加或删掉一个或多个氨基酸残基或包括从其他种类得到的变体SEQ ID NOs1到5的成熟序列，但不包括自然序列多肽。
两个氨基酸序列或两个核酸序列的同一性百分率定义为该候选序列中氨基酸残基或核苷酸相当于多肽或核酸序列中氨基酸残基的百分比。排列序列和引入缺口染色体后，必要时为了得到最大百分比的序列同一性，且不考虑任何保守置换作为该序列同一性的一部分。用于测定氨基酸或核酸序列同一性百分率的基准线可以在多种传统的方法中获得例如使用公开的可获得的计算机软件包括GCG程序包(Devereux J.等人，Nucleic Acids Research 12(1)387，1984)；BLASTP，BLASTN，and FASTA(Atschul，S.F.等人J.Molec.Biol.215403-410，1990)。BLAST程序可从NCBI及其他来源公开地获得(BLAST Manual，Altschul，S.等人NCBI NLM NIH Bethesda，Md.20894；Altschul，S.等人J.Mol.Biol.215403-410，1990)。熟练的技术人员可以决定用于测量基准线的适当的参数，包括要获得该被相比的序列全长最大基准线的任何算法。用于测定同一性和相似性的方法都编纂在公众可获得的计算机程序中。
″基酸残基所取代、母体多肽的一个或多个氨基酸残基已经转化、母体多肽的一个或多个氨基酸残基已经被除去、和/或一个或多个氨基酸残基被加成到该母体肽上的多肽。这样的加成、取代、消去、和/或转换可以在N-末端或C-末端或在该母体多肽内，或它们的组合。
可以通过标准方法将突变引入一个多肽中，例如定位诱变和PCR介导的诱变。保守置换可以发生在一个或多个预测的非必需氨基酸残基上。″相似侧链的氨基酸残基所替换。带有相似侧链的氨基酸在本领域是公知的包括带有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电的极性侧链(例如甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和半胱氨酸)、非极性的侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、Iso、脯氨酸、色氨酸)、β-侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、Iso)，和芳香侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。突变还可以随机地引入自然序列的一部分或全部当中，例如通过饱和诱变。伴随着诱变变体多肽可以通过重组表达。
″基已经经过化学修饰。化学修饰包括添加化学部分、产生新的键和消除化学部分。一个多肽可以被化学修饰，例如烷化、酰基化、糖基化、pegylation、酯的形成、脱酰胺、或氨化物的形成。
″(优选生物学活性的)的与异源多肽可操纵地连接的精选多肽(例如除了该精选的多肽之外的一个多肽)。在融合蛋白之内，术语″该精选多肽和该异源的多肽是彼此结构内融合的。该异源多肽可以融合到一个精选多肽的N-末端或C-末端。可以通过标准的重组DNA的方法产生嵌合和融合蛋白质。
″物，其完全地或部分地、直接地或间接地、增强、诱导、模仿、或在其他方面提高胃泌素或胃泌素/CCK受体的活性。尤其是，可以使用一个胃泌素化合物完全地或部分地关联和/或激活胃泌素/CCK受体。胃泌素/CCK受体包括与胃泌素相关的受体。
在本发明的一些应用中，胃泌素化合物可以是与胃泌素/CGK受体相关的、连接在一起的，有影响的或有刺激作用的配位体。胃泌素化合物可以精选的，是一种具有合适的IC50的肽或非肽小分子，例如大约0.7nM的IC50，通过本领域所公知的方法测得(参看Singh等人(1995)J.)Biol.Chem.2708429-8438，和Kopin等人(1995)J.Biol.Chem.2705019-5023描述了体外细胞生长测定，受体结合测定描述于Singh等人(1995)J.Biol.Chem.2708429-8438，和Kopin等人(1995)J.Biol.Chem.2705019-5023)。
″片、类似物(例如突变蛋白质)、衍生物、亚型、变体、嵌合多肽、具有序列同一性的多肽、肽模拟物、和其可药用的盐、和活性的代谢产物和前体药物。特别地该术语包括胃泌素的多种形式，前胃泌素原、前胃液素、例如胃泌素-34(大胃泌素)、胃泌素17(小胃泌素)、胃泌素8(微型胃泌素)、五肽促胃酸激素、四肽胃泌素和片断、类似物、和其衍生物。
胃泌素的序列包括大胃泌素-34(Bonato等人，1986，Life Science39959)和小胃泌素-17(Bentley等人(1966)Nature 209583)都显示在SEQ ID NOs.1到5当中。大胃泌素-34本质上是小胃泌素-17在N-末端的一个氨基酸序列的扩展。大胃泌素在体内裂解释放胃泌素-17。Glp在N-末端是焦谷氨酸，其是一种谷氨酸的自然环化形式。在多种实施方案中，当半胱氨酸或赖氨酸加成到具有焦谷氨酸的胃泌素的末端时，该焦谷氨酸被替换为谷氨酸，或该焦谷氨酸被消去。进一步，正如本文SEQ ID NOs1到4所示，胃泌素-34和胃泌素-17可以在15位具有甲硫氨酸或亮氨酸。胃泌素化合物可以是硫酸化的或非硫酸化的。[参看J.H.Walsh，″Gastrin″in Gut PeptidesBiochemistry and Physiology，ed.J.H.Walsh and G.J.Dockray，Raven Press Ltd.，New York，1994关于胃泌素的综述]胃泌素化合物也包括活性类似物、片断及其他变体，例如与内源哺乳动物胃泌素或自然序列胃泌素共享氨基酸序列同一性，例如共享60％、70％、80％、90％、95％、98％、或99％序列同一性。
可用于本发明的胃泌素化合物的实例包括揭示在美国专利6,288,301中的化合物。在本发明的一些应用中，胃泌素化合物可以选自胃泌素受体的肽或非肽激动剂或部分激动剂例如A71378(Lin等人，Am.J.Physiol.258(4Pt1)G648，1990)。在本发明的其他应用中，胃泌素化合物可以是胃泌素/CCK受体配位体，包括但不限于本文描述的胃泌素化合物、或诸如CCK 58、CCK 33、CCK 22、CCK 12和CCK 8的缩胆囊肽(CCK)；等等。
胃泌素化合物也包括能增加内源性胃泌素分泌的物质、缩胆囊肽或来自于组织储藏的相似的活性肽。实例是胃释放肽、抑制胃酸分泌和增加血浆胃泌素水平的奥美拉唑、增加CCK刺激的大豆胰蛋白酶抑制剂、和刺激胃泌素分泌而不与胃泌素受体结合的胃泌素释放肽。
可以用常规方法制备胃泌素化合物。例如诸如胃泌素17的小的胃泌素形式可以通过肽合成而经济地的制备，且合成肽是市场上买得到的。尤其是，可以使用在蛋白质化学所公知的方法通过化学合成来合成胃泌素化合物，例如固相合成(Merrifield，1964，J.m.Chem.Assoc.852149-2154)或在同质溶液中合成(Houbenweyl，1987，Methods of Organic Chemistry，ed.E.Wansch，Vol.15I andII，Thieme，Stuttgart)。可以使用人工操作程序或自动化完成该合成。可以进行自动合成，例如使用AppliedBiosystems431A肽合成器(Perkin Elmer)。
胃泌素化合物可以通过本领域技术人员所公知的重组体方法制备。因此，本发明预期编码胃泌素化合物和任选的调控元件的核苷酸序列，和一种包含用于胃泌素化合物制备的核苷酸序列的宿主细胞。
胃泌素化合物也可以从商业的来源获得。例如从Bachem AGBubendorf(瑞士)和Research Plus Inc(新泽西，美国可以获得在15位具有甲硫氨酸或亮氨酸合成人胃泌素17。
包含胃泌素化合物核苷酸序列的″真核宿主细胞。例如该多肽可以表达在细菌细胞例如E.大肠菌、芽胞杆菌、或Streptonzyces、昆虫细胞(采用杆状病毒)、酵母细胞、或哺乳动物细胞中。其他适合的宿主细胞可以在Goeddel，GeneExpression TechnologyMethods inEnzymology 185，AcademicPress，San Diego，CA(1991)中发现。也可以选择一种宿主细胞，其调整一个插入核苷酸序列的表达，以一种需要的方式修饰(例如糖基化或磷酸化作用)和加工(例如裂解)该多肽。宿主系统或细胞系可以选自具有特殊的和特有的结构用于蛋白质的翻译后加工和修饰。为了蛋白质长期高产率稳定的表达，可以设计稳定地表达该基因产物的细胞系和宿主系统。
″因表达中具有调节作用的因子，例如启动子或增强子，用于产生重组结构编码胃泌素化合物的大量合适的媒介和启动子是本领域技术人员公知的且是市场上买得到的。下面举例说明载体。细菌性的pBs、phagescript、PsiX174、pBluescript SK、pBs KS、pNH8a、pNH16a、pNH18a、pNH46a(stratagene)；pTrc99A、pKK223-3、pKK233-3、pDR540、pRIT5(pharmacia)。真核生物的pWLneo、pSV2cat、pOG44、PXTL pSG(stratagene)pSVK3、pBPV、pMSG、pSVL(pharmacia)。正如本文所定义的″”是指在载体或细胞之内的一个游离多核苷酸和一种调节因子以通过已经转染成具有该连接的多核苷酸/调节因子序列的宿主细胞的方式表达该多肽。调控元可以是基本的或诱发转录的调节部位，例如通过增加胞内的葡萄糖浓度诱导胰岛素因子转录的调节的部位。
″/或疾病”、″″症。本文所用的术语″明显的症状，包括实验动物模型、和包括人类I型和II型糖尿病、糖尿病初始阶段、和以胰岛素降低或血糖水平轻度地升高为特征的前驱糖尿病的症状。″糖水平表现的个体，和/或显示出易于患糖尿病或与家族史遗传倾向性相关的症状，或就II型糖尿病来说的肥胖，和包括以前曾患有糖尿病或相关症状的个体和再患病的风险。
″分泌的能力，以产生或增加细胞对葡萄糖的吸收量，降低血清葡萄糖或血糖水平。本领域所公知的方法可用于测定促胰岛素的活性。例如可以用体外和体内方法测量胃泌素受体键合活性，受体活化作用(参看授予Gelfand等人的EP 619,322专利和美国专利5,120,712中描述的方法)、和胰岛素或C-肽水平。如果胰岛细胞在该化合物或组合物存在的情况下分泌胰岛素超过基本水平或缺乏胃泌素化合物或组合物的水平，本文描述的化合物或组合物具有促胰岛素活性。
″胞、胰岛前体细胞、或β-细胞，其可能具有或不具有拥有以无限方式复制的能力的干细胞的特性。
组合物和方法本发明涉及利用一个或多个胃泌素化合物提供有益效果，尤其是增强的有益效果，更优选持久的有益效果的组合物和方法。
在一个实施方案中，其中的疾病或症状是糖尿病，组合物的持久有益效果或本发明的治疗方案可以显示为一个或多个选自下列a)带有糖尿病症状的个体给予胃泌素化合物后，胰腺胰岛素水平相对于没有胃泌素化合物的水平升高。优选地，该化合物在一个个体胰腺胰岛素水平上诱发至少大约0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、5％、10％、15％、20％、30％、33％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、或99％的升高。
b)带有糖尿病症状的个体给药后胰岛炎症症状的降低或消失。
c)相对于在没有使用胃泌素化合物的带有糖尿病症状的个体中测量的血糖水平降低。优选地，该化合物诱发至少大约2％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％的血糖水平降低。最优选地，该化合物产生大约或接近于一个正常个体的普通水平的血糖水平。
d)葡萄糖耐量提高，尤其是，在葡萄糖耐量上提高至少大约5-95％、10-90％、10-80％、10-70％、10-60％。
e)相对于在没有使用胃泌素化合物的带有糖尿病症状的个体中测量的C-肽水平升高。优选地，该化合物引起至少大约0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、5％、10％、15％、20％、30％、33％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或99％的C-肽水平升高。
f)血糖水平大约正常维持一段持续很久的时段、尤其是至少1周、3周、4周、5周、6周、8周、10周、12周、14周、16周、20周、24周、30周、40周、52周，或78周、更优选2到4周、2到5周、3到5周、2到6周、2到8周、2到10周、2到12周、2到16周、2到20周、2到24周、2周到了12月，或2周到18月。
g)降低、预防、或减缓糖尿病个体中的疾病进展的速度。
h)降低或预防糖尿病症状的严重的高血糖和酮酸中毒的进展。
i)带有糖尿病症状个体的存活率升高。
j)降低通至少10-90％、10-80％、10-70％、1060％、10-50％、10-40％、10-30％、或10-20％的胰岛素注射/摄入需求量。
一个或多个这样的有益效果可以在糖尿病个体或疾病模型，例如一个带有糖尿病症状的不肥胖的(NOD)小鼠中显示出来。
在根据一个或多个下列特性可以选择胃泌素化合物用于本发明中特殊的应用与胃泌素受体的结合能力；引发转导遗传途径信号产生增殖和/或分化β-细胞或促胰岛素的活性的能力；降低葡萄糖水平的能力；促胰岛素的活性；β-细胞繁殖/分化的刺激；和/或在人们使用的常规方法中，至少5分钟到24小时的体内半衰期，优选2到10小时或2到8小时。
可以选择本发明的药物组合物和方法，其具有持久的有益效果，优选统计上显著的持久的有益效果。在一个实施方案中，提供了一种具有统计上显著的持久有益效果的药物组合物包括选自下列的一种胃泌素化合物胃泌素17和其类似物和衍生物、优选的具有17位氨基酸残基在氨基酸15位连着一个亮氨酸残基的合成人胃泌素I。在一种具体的实施方案中，提供了包含胃泌素-17(亮氨酸)的具有统计上显著的有益效果的药物组合物。
本发明预期了本发明的组合物用于预防、和/或改善疾病严重性、病征、和/或病症和/或疾病再发生周期性的用途。本发明也预期了使用本发明组合物或治疗方案预防和/或治疗哺乳动物的症状和/或疾病。尤其是，本发明提供使用胃泌素化合物用于糖尿病持续的治疗方案的改善方法和组合物。在一个实施方案中本发明提供了一种包含胃泌素化合物的组合物，该组合物获得了更大的效能、效力和效用。该更大效能可以通过改善治疗中的严重的糖尿病个体的葡萄糖耐量显示出来，该治疗方案在停止治疗后以及最新发病的糖尿病个体中产生血糖水平的持续改善。本文描述组合物产生的葡萄糖耐量改善可以通过使用低的胃泌素剂量观察到，例如低于1-50μg/kg体重的剂量，尤其是1-30μg/kg体重。
本发明胃泌素治疗方案的更大的效能和效力改善了治疗方案的治疗比率，减少了不利的副作用和毒性。即使治疗方案是在β细胞破坏完成很久以后才开始，本发明的方法也提高长期的糖尿病改善的效用。
虽然不希望通过特殊的机理而结合，使用胃泌素医冶之后在葡萄糖耐量方面的改善可以引起β细胞再生和伴随的β细胞团块增加。根据形态测量，组织学分析可以显示使用胃泌素治疗方案激发了β细胞再生伴随β细胞团块的增加。这些可以通过生物化学上胰腺胰岛素含量的增加得以证实。增加的β细胞团块还可以引起胰岛素分泌到血流中量的增加，其可以通过血浆中循环C-肽的增加显示出来。
长久有效的胰岛细胞再生可以根据本发明给予本发明的胃泌素化合物或组合物后而获得。胃泌素化合物组合物给予个体体内以达到胰岛细胞的增殖和/或分化或给予体外细胞用于移植。可以使用包括重组方法在内的本领域技术人员所公知的方法将胃泌素化合物引入细胞。例如一个嵌合胰岛素启动子-胃泌素融合基因可以在体内或体外引入到胰腺细胞以表达一个或多个胃泌素化合物。
本发明涉及一种用于干细胞或祖细胞向胰岛素分泌细胞发展和分化的方法，包括用本发明的一种治疗有效量的胃泌素化合物或组合物接触干细胞或祖细胞或用以繁殖和分化干细胞或祖细胞的足够量的胃泌素化合物或组合物。干细胞可以获自于胰岛、脐带、胚胎、或干细胞管。与不使用胃泌素化合物组合物相比，繁殖和分化的用量和持续时间非常不同。在一个实施方案中，干细胞或祖细胞在培养基中与胃泌素化合物或组合物接触。在另一实施方案中，干细胞或祖细胞在个体体内与胃泌素化合物或组合物接触。胃泌素化合物或组合物可以在干细胞移植到个体之前、期间和之后给药，以在长时间的一段时期内繁殖和分化个体体内的干细胞。该方法可以另外包括给予一种免疫抑制剂。
在一方面，本发明提供了一种用于治疗糖尿病的方法，通过提供一种包含给药以后在长时间的一段时期内足够有效地分化胰岛前体细胞到成熟胰岛素分泌细胞量的胃泌素化合物。该组合物的胃泌素化合物可以在生理可接受的载体中系统给药，尤其是注射、优选静脉内注射。可选择地，胃泌素化合物可以在原位表达，在提供细胞内化合物表达的表达结构载体中具有一个或多个编码胃泌素化合物的核酸体外或体内转化胰岛前体细胞。编码胃泌素化合物的核酸可以包含在包含前胃泌素原肽前体编码序列的表达结构中，接着表达加工成胃泌素。该表达结构可以包括调控元件。
本发明也涉及诱导个体胰岛再生，包含使胰岛前体细胞与足以增加和延长个体胰岛前体细胞的增殖从而诱导胰岛再生的量的本发明的胃泌素化合物或组合物。一方面，本发明提供了一种用于激发个体持续的β-细胞增殖的方法，包括给予治疗有效量的本发明的一种胃泌素化合物或组合物。在一个实施方案中，本发明提供了一种用于持续一段时间内增加个体β-细胞数量和/或大小的方法，包括给予治疗有效量的本发明的一种胃泌素化合物或组合物。
多能胰腺前体细胞的再生性分化，例如可以使用胃泌素化合物获得一个延长时期的胰腺导管细胞分化为成熟胰岛素-分泌细胞，本文所述的组合物和方法用于糖尿病的治疗，尤其是刚起病的糖尿病，且通过治疗学给予胃泌素化合物或组合物，该化合物或组合物是系统给药，或在胰腺内原位表达。
本发明提供了用于在需要治疗的个体中治疗糖尿病的方法，通过给予一种包含有足够使个体的胰岛前体细胞持久分化成成熟胰岛-分泌细胞和/或刺激现有胰岛细胞合成胰岛素的量的胃泌素化合物的组合物。该组合物可以系统给药或原位表达，通过宿主细胞包含一种核酸构造在一种表达载体，其中该核酸构造在胰岛前体细胞中包含一种用于胃泌素化合物的编码序列，转录和翻译调控元件功能。
在一方面，本发明提供一种用于在需要治疗的个体中治疗糖尿病的方法，该方法包括给予该个体一种组合物，该组合物提供足以产生胰岛前体细胞持久分化为成熟胰岛素-分泌细胞的量的胃泌素化合物。在另一方面，本发明提供了一种用于治疗胰岛素依赖糖尿病，尤其是I型或糖尿病初期的方法，包括优选系统地给予糖尿病哺乳动物一种分化再生量的胃泌素化合物以刺激胰岛再生引起给药后持续一段时期内胰腺内功能性葡萄糖响应的岛素分泌细胞数量地增加。
本发明预期了一种在一个持久的时期内扩展移植到糖尿病个体体内的胰岛功能性β细胞量的方法，该方法包括给予个体一种本发明的治疗有效量的胃泌素化合物或组合物。
本发明的一个实施方案提供了一种用于预防和/或治疗糖尿病的方法，该方法包括给予需要治疗的哺乳动物一种组合物，该组合物包含给药后足以在哺乳动物体内一段持久的时期内增加胰岛素分泌细胞的胃泌素化合物，以此预防和/或治疗糖尿病。该组合物是系统给药。该哺乳动物是糖尿病哺乳动物，例如该哺乳动物已经得了其寿命的1％时间的糖尿病，该胃泌素化合物以足以在持久的一段时期内诱导胰岛前体细胞分化为葡萄糖响应的胰岛素分泌细胞的量提供。
本发明的另一个实施方案提供了一种用于预防和/或治疗糖尿病的方法，该方法包括给予需要治疗的哺乳动物一种组合物，该组合物包含给药后足以在一段持久的时期内增加胰岛组织内胰岛前体细胞分化的量和过程的量的胃泌素化合物，以此预防和/或治疗糖尿病。
在另一方面，本发明提供了一种预防和/或治疗糖尿病的方法，该方法包括给予需要治疗的哺乳动物一种组合物，该组合物包含给药后足以在一段持久的时期内增加哺乳动物体内胰岛素分泌β细胞数量的量的胃泌素化合物，确定胰岛再生的数量，以此预防和/或治疗糖尿病。胰岛再生的数量可以通过下列一个或多个参数测定血糖水平，血清葡萄糖，血液糖基化血色素，胰岛细胞数量，血清胰岛素和胰岛素含量。给予该组合物降低了相对于给予组合物前化验的血糖水平。相对于给予组合物前化验的哺乳动物体内的糖基化血色素浓度在一个持久的时间期间降低了。相对于给予组合物前化验的哺乳动物体内的血清胰岛素浓度在一个持久的时间期间升高了。相对于给予组合物前化验的哺乳动物体内的胰腺胰岛素浓度在一个持久的时间期间升高了。
进一方面，本发明提供了一种在哺乳动物体内用于诱导胰岛再生的方法，该方法包括给予哺乳动物一种组合物，该组合物含有给药后在持久的一段时间期间内足以增加胰岛组织内胰岛前体细胞分化的量和时间的量的胃泌素化合物，以此诱导胰岛再生。这些细胞可以为多细胞的。这些细胞以系统的方式递送到哺乳动物。
进一方面，本发明提供了一种持久时期内用于动物细胞内诱导胰岛再生治疗的方法，包括使细胞与可操作地连接到调控元件上的编码胃泌素化合物的核酸序列接触，例如胰岛素启动子受体试剂，例如，金属硫因启动子，例如，细胞为生殖细胞，或细胞为体外培养的同源细胞。
本发明预期了以细胞为基础的治疗方法，使用本发明的胃泌素化合物或本发明的组合物。因此，本发明预期了包括使用本发明的胃泌素化合物或组合物治疗细胞，或治疗哺乳动物外植体胰岛组织和诱导哺乳动物的细胞或胰岛组织以提供有益效果的方法，尤其是持久的有益效果。参看PCT/CA03/33595关于普通培养和以细胞为基础的治疗方法的描述。
一种用于治疗主体此处描述的疾病或症状的方法，包括一些体外细胞与本发明的胃泌素化合物或组合物接触，任选地培养这些细胞，将这些细胞给予需要治疗的个体以提供有益的效果，尤其是持久的有益效果。
在以细胞为基础的治疗方法的实施方案中，细胞为胰岛导管细胞，用于该方法的化合物或组合物的量是在一个持久的时期内有效增加个体体内胰岛素分泌细胞量的。该细胞是同源的(例如来自于相同的个体)，或来自于相同种类的其他个体，或来自于不同种类。
本发明也预期一种治疗个体糖尿病的方法，包括移植到个体体内一种胰岛制品和给予治疗有效量的本发明的胃泌素化合物或组合物以提供有益效果，尤其是持久的有益效果。
本发明也涉及一种支持胰岛细胞或前体细胞培养的方法，包括有足以持续这些细胞培养的量的本发明的胃泌素化合物或组合物存在下培养该细胞。相对于没有该化合物或组合物存在的细胞培养，这些细胞可以在非常长的时间期间持续培养。在本发明的胃泌素化合物或组合物存在下的培养细胞在用于移植的细胞的制备和维持中非常有用。
也提供了通过植入糖尿病个体体内胰岛细胞用于在需要治疗的个体中治疗糖尿病的方法和组合物，该胰岛细胞暴露培养到足够量的胃泌素化合物以在持久的时期内增加胰岛内胰岛β细胞的数量。任选地，胰岛β细胞地数量可以在一段时间内培养增长，足以扩展移植前P-细胞地数量。
本发明的另一个实施方案提供了一种用于治疗糖尿病的方法，该方法包括在体外使细胞与包含足以增加胰岛前体细胞增殖和胰岛素分泌细胞数量的胃泌素化合物的组合物接触，给予接触后的细胞到需要此的哺乳动物以产生有益效果，尤其是持久的有益效果。细胞可以是同源的。该组合物以足以影响干细胞分化的量提供，例如影响胰岛内胰岛前体细胞分化为成熟胰岛素分泌胰岛细胞。该组合物以足以增加胰岛干细胞增殖的量提供，例如胰岛前体细胞在长时期内。干细胞可以获自于胰岛组织或非-胰岛组织，例如肝脏或骨髓。
本发明提供了一种治疗疾病或病症的方法，包括将胃泌素化合物或任何前述权利要求的组合物连同大量细胞对需要治疗的个体给药，从而提供有益效果、优选持久的有益效果。一方面，本发明提供了一种在糖尿病个体细胞内用于扩展和分化干细胞为胰岛素分泌细胞的方法，该方法包括将细胞植入个体且给予一种组合物，该组合物含有有效剂量的胃泌素化合物以产生有益效果，尤其是持久的有益效果。例如植入的细胞获自于人类，例如获自于人的胰岛，人的肝脏，人的骨髓，人的脐带，或人的晶胚。可以通过诸如直接注射入器官，例如注射到胰岛，肾脏，或者肝脏的途径将该细胞植入个体。可选择地，植入细胞可以通过静脉注射，例如注射到门静脉或肝静脉。在特定的实施方案中，植入细胞前先使用含有胃泌素化合物的组合物体外治疗。
本发明也包括本发明的组合物与一种或多种另外的治疗剂联合使用的用途，包括但不限于免疫抑制剂(例如雷怕霉素、环孢霉素A、ISAtx247和FK506)减肥药、抗糖尿病药、食欲调节药、抗高血压药、治疗和/或预防由病症或疾病引起或与病症或疾病相关的并发症的药剂，尤其是糖尿病和肥胖症、抗-恶心药、抗头痛药、和治疗或预防副作用的普通药剂。
本发明也预期包含至少一种胃泌素化合物的组合物在制备用于在治疗病症或疾病中提供有益效果，尤其是持久的有益效果的药物中的应用。
在一个实施方案中，本发明涉及治疗有效量的至少一种胃泌素化合物在制备用于在治疗病症或疾病中提供有益效果的药物中中的应用，尤其是持久的有益效果。
在一个实施方案中，本发明提供了胃泌素化合物在制备用于增加(优选持续增加)治疗后个体体内β细胞数量和/或大小的药物中的应用。
在另一实施方案中，本发明提供了胃泌素化合物在制备用于刺激(优选延长的刺激)治疗后β细胞增殖的药物中的应用。
在另一实施方案中，本发明提供了胃泌素化合物在制备用于延长或持久治疗I型或II型糖尿病的药物中的应用。
本发明还提供了本发明的胃泌素化合物或药物组合物在制备用于在治疗疾病或病症中提供有益效果，优选持久有益效果的药物中的应用。
本发明组合物和方法的治疗有效性和毒性可以通过细胞培养或实验动物中的标准药学过程测定，例如通过计算统计学参数例如ED50(半数治疗有效的剂量)或LD50(半数致死的剂量)。治疗指数是有效和毒性作用的剂量比率，其可以通过ED50/D50来表达。药物组合物显示大的治疗指数是优选的。
本发明的方法可进一步测定一个或多个下述标记物血糖、血清葡萄糖、血液糖基化血红蛋白、胰腺β细胞群、血清胰岛素、胰腺胰岛素水平、形态确定的β细胞群、胰岛素分泌性细胞的数量和胰岛素分泌性细胞的葡萄糖反应性。
给药本发明的胃泌素化合物和组合物可以通过任何引起活性剂与个体或病人体内作用部位接触以产生有益效果，尤其是持久有益效果的方式给药。该活性成分可以在不同时间点以任何顺序同时或顺序给药，以产生期望的有益效果，优选持久的有益效果。本发明的胃泌素化合物和组合物可以制成持续释放的形式，用于局部和系统给药。选择可以使得本发明组合物和治疗方法的效果最优化以提供有益效果、尤其是持久的有益效果的给药形式和给药途径，这在熟练医师或兽医的能力范围之内。
胃肠外给药的方法包括但并不限于透皮、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和口腔途径给药。化合物可以任何便利的途径给药，例如输注或单次快速注射，透过上皮或粘膜皮肤层(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收，可与其它生物活性成分一起给药。优选的给药途径是系统给药，例如皮下注射。对于胃肠外给药，本文描述的化合物和组合物可与具有适当pH值的生理盐水、PBS或其它合适的缓冲液一起给药。缓释制剂也可以用于一种或两种治疗剂。
组合物可以口服剂型给药，例如片剂、胶囊(各自包括缓释或控释剂型)、丸剂、散剂、颗粒剂、酏剂、酊剂、混悬剂、糖浆剂和乳剂。它们也可以静脉内(单次快速注射或输注)、腹膜内、皮下或肌内的形式给药，所利用的剂型都是药学领域的普通技术人员所熟知的。本发明组合物可经由局部使用适当的鼻内赋形剂，或经由透皮途径来通过鼻内途径给药，例如使用常规的透皮贴剂。使用透皮递药系统给药的剂量规则是在整个给药方案过程中持续给药优于间歇给药。
本发明的给药方案根据已知因素而会有所改变，例如药剂的药效学特征以及给药的方法和途径，个体的种族、年龄、性别、健康状况、医疗条件和体重、症状的性质和程度、同时治疗的疾病的类别、治疗的频率、给药途径、个体的肝肾功能，以及期望的效果。
本发明的治疗剂量(该剂量对于治疗特定的病况或病症以提供效果，尤其是持久的有益效果是有效的)将取决于病况或病症的性质，可以用标准临床技术来确定。制剂中采用的精确剂量也取决于给药途径以及病况或病症的严重程度，应该根据开业医生的判断和各个个体的情况来确定。用本领域的一种普通技术来进行胰岛素或C-肽的血浆水平以及葡萄糖或葡萄糖激发(glucose challenges)的空腹水平的常规测定。
给药的合适剂量范围是优选提供有益效果的，尤其是持久的有益效果。剂量范围通常是大约0.01μg到大约500μg胃泌素化合物每千克体重每天，例如大约0.01μg到大约1μg/kg、大约0.1μg/kg到大约10μg/kg、或大约1μg/kg到大约50μg/kg。
本发明的另一个方面提供了含0.1-30、0.1-40、0.1-50和0.1-60μg/kg/天胃泌素化合物的药物组合物。
本发明的特别实例提供了持久的有益效果，胃泌素化合物给药的剂量范围是1-30μg/kg体重，尤其是3-30μg/kg体重，更尤其是5-20μg/kg体重。
本发明的组合物或治疗可包括单位剂量的至少一种胃泌素化合物，以提供有益效果，尤其是持久的有益效果。″单位剂量”指的是单一的也就是单次剂量，它能够对个体施用，且可以很容易的处理和包装，它是物理和化学稳定的单位剂量，包含像这样的活性剂或者活性剂与一种或多种固体或液体药学辅料、载体或赋形剂的混合物。
一方面，提供了包含治疗有效的未最佳剂量的胃泌素化合物的药物组合物，它对于持续一段时间内降低或减少葡萄糖水平，或者治疗以后增加β细胞增殖或分化是有效的。
另一方面，提供了改进的药物组合物，它包含治疗有效的未最佳量的胃泌素化合物，且呈长期或快速治疗疾病或病况尤其是糖尿病的形式。
一方面，本发明提供了包含30-3000、100-3000、100-6000、1000-6000、2000-6000和3000-6000μg胃泌素化合物每单次剂量的药物组合物。
可对个体周期地或连续地施用本发明的组合物或制剂大约或至少大约2周到4周、2周到6周、2周到8周、2周到10周、2周到12周、2周到14周、2周到16周、2周到6个月、2周到12个月或2周到18个月。可施用本发明组合物一次或多次每日，尤其是1或2次每日。
本发明组合物或其部分通常包含基于预期的给药形式而作出选择的适当的可药用的载体、辅料和赋形剂，这和与常规的药学实践相一致。
适当的药学载体、辅料和赋形剂描述在Remington′sPharmaceutical Sciences(Mack出版公司)的标准正文中。对于胶囊或片剂形式的口服给药的例子来说，活性组分可与口服的、无毒的可药用的惰性载体结合，例如乳糖、淀粉、蔗糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、葡萄糖、硫酸钙、磷酸二钙、甘露醇和山梨醇等。对于液体形式的口服给药来说，药物组分可与任何口服的、无毒的可药用的惰性载体结合，例如乙醇、甘油和水等。适当的粘合剂(例如明胶、淀粉、玉米增甜剂、天然糖包括葡萄糖、天然和合成的树胶、以及蜡)、润滑剂(例如油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠和氯化钠)、崩解剂(例如淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土和黄原胶)、调味剂和着色剂也可与组合物或其组分结合。本文所述的组合物还可以包含润湿剂或乳化剂，或者pH缓冲剂。
组合物可以是液体溶液、混悬剂、乳剂、片剂、丸剂、胶囊、缓释制剂或散剂。可以用常规粘合剂和载体例如甘油三酯将组合物制成栓剂。口服制剂可以包括标准载体，例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。各种递药系统是已知的，可用于对本发明的组合物进行给药，例如包囊于脂质体、微粒和微囊等中。
本发明的一方面，组合物具有大约7到10的pH值。
本发明组合物的胃肠外给药制剂可包括水溶液、糖浆、水性或油性混悬剂、以及含食用油如棉子油、椰子油或花生油的乳剂。可以用于水性混悬剂的分散剂或助悬剂包括合成的或天然的树胶如西黄蓍胶、藻酸盐、阿拉伯胶、葡聚糖、羧甲基纤维素钠、明胶、甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。
胃肠外给药的组合物可包括无菌的水性或非水性溶剂，例如水、等渗盐水、等渗葡萄糖溶液、缓冲液、或便于用于治疗活性剂胃肠外给药的其它溶剂。预期用于胃肠外给药的组合物也可包含常规添加剂，例如稳定剂、缓冲剂、或防腐剂例如抗氧剂如羟苯甲酯或类似的添加剂。
在一个实例中，根据常规方法将此处的组合物制成适于皮下或静脉内对人类进行给药以提供有益效果，尤其是持久的有益效果的药物组合物。典型地，皮下或静脉内给药的组合物是无菌等渗的水性缓冲液溶液。必要的话，组合物也可包含增溶剂和局麻剂，以减轻注射部位的疼痛。一般地，所提供的成分被分别或混和包装成单位剂量形式，例如，作为干燥的冻干粉末或不含水的浓缩物包装在熔封容器例如安瓿或囊(sachette)中，还指示例如活性剂的量。当组合物要进行输注给药时，可提供无菌注射用水或注射用生理盐水的安瓿，以使成分可在给药前被混和。
本发明的组合物可以被制成中性形式或盐的形式。可药用的盐包括与游离氨基形成的那些盐，例如衍生自盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的那些盐，以及与游离羧基形成的那些盐，例如衍生自钠、钾、铵、钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等的那些盐。
一个实例是，提供固体形式的药物组合物(例如片剂、胶囊、散剂或粉末状形式)，它包含结晶的或无定形的胃泌素化合物。
另一个实例是，提供固体形式的药物组合物(例如片剂、胶囊、散剂或粉末状形式)，它包含结晶的或无定形的胃泌素化合物。
另一个实例是，本发明涉及包含胃泌素化合物的可药用的盐的液体药物制剂，还涉及冻干药物制剂，它可以被重构以提供稳定的且适于胃肠外给药的混悬剂。
特别的实例是，本发明涉及包含胃泌素化合物的可药用的盐的水性组合物，以及产生增溶作用的溶剂系统。
本发明也提供包含胃泌素化合物的可药用的盐和至少一种增溶剂的水性制剂的药物。
本发明的组合物可通过下列方法灭菌，例如通过细菌截留过滤器过滤、向组合物中添加灭菌剂、照射组合物或加热组合物。或者，所提供的本发明的化合物或组合物可以是无菌的固体制剂，例如冻干粉末，在即将使用前它很容易溶于无菌溶剂中。
除了本文所描述的制剂以外，组合物也可以被制成贮库制剂。这种长效制剂可通过植入(例如皮下或肌内)或肌内注射给药。因此，例如，该部分可与适当的聚合材料或疏水材料(例如制成可接受的油的乳剂)，或者离子交换树脂一起进行制剂，或者制成略溶的衍生物，例如制成略溶的盐。
本发明的组合物及其组分可包含作为靶向药物载体的可溶性聚合物。
制备好药物制剂以后，可以将它们置于适当的容器中，并且标记所治疗的病症。对于本发明组合物的给药来说，这种标记将包括量、频率和给药方法。
本发明的一个实例是，提供包含一个或多个装有一种或多种提供有益效果，尤其是持久的有益效果的本发明药物组合物成分的容器的药物包装或药盒。该容器附带的可以是各种书写材料，例如使用说明书，或按政府机构规定形式用于规范药物制剂或生物制品的生产、使用或销售的注意事项，该注意事项反映了政府机构对于人用产品的生产、使用或销售的许可。
本发明的另一个实例是提供药盒。一方面，药盒包含胃泌素化合物或药物组合物。药盒是一种包装，它内装含有本发明组合物的容器，还内装将组合物对个体进行给药的说明书。
经由具体实施例将更详细地描述本发明。所提供的下列实施例是用于详细说明的目的，并不试图以任何方式限制本发明。本领域的技术人员将很容易地识别多种非关键性的参数，这些参数可以进行改变或修改以产生基本相同的结果。
实施例实施例1胃泌素或EGF对新近糖尿病发作的NOD小鼠的空腹血糖和胰腺胰岛素含量的影响该实验的目的是测定单独的胃泌素(G1)或EGF(E1)是否可以改善新近糖尿病发病的NOD小鼠的糖尿病状况。
从Taconic(Germanton，NY)购买患有慢性胰岛素依赖性糖尿病的非肥胖糖尿病(NOD)雌性小鼠。将小鼠进行圈养，并在无病原的环境下喂养，按照加拿大委员会有关动物管理指南的要求进行照顾。监测NOD小鼠的糖尿病进展(空腹血糖，FBG＞6.6mmol/l)。糖尿病发作后，小鼠按照下列方法进行处理(i)赋形剂(V)-盐水磷酸盐缓冲液(n＝4)，(ii)E1(E)1μg/kg/天，i.p.给药，每天一次(n＝5)，给药14天，(iii)G1(G)3μg/kg/天，i.p.给药，每天一次(n＝5)，给药14天。小鼠不接受胰岛素替代疗法。监测空腹血糖水平和胰腺胰岛素水平。E1是51个氨基酸的EGF类似物；G1是胃泌素类似物，它与天然胃泌素具有相同的长度，但在第15位有一个氨基酸的改变。
赋形剂处理的对照动物35天以后空腹血糖(FBG)水平加倍。E1或G1处理的动物FBG水平与糖尿病发作(第0天)时记录的值相近，尽管该动物模型的疾病恶化了(例如胰岛细胞的进行性破坏)。参见图1。EGF或胃泌素刺激的胰岛细胞的新生补偿了这些细胞的破坏。另外还测定了所有动物的胰腺胰岛素水平。由于β-细胞的破坏，赋形剂处理的对照组的胰腺胰岛素水平在第35天降低了，而E1或G1处理的动物则显示了相对于预处理值显著提高的胰腺胰岛素水平。参见图2。该研究的结果证明，NOD小鼠新近糖尿病发作后，短期(14天)用E1或G1处理可以预防糖尿病状况的恶化，并且在治疗停止后至少3周还能持续提高胰腺胰岛素含量。
实施例2胃泌素对新近糖尿病发作的NOD小鼠的空腹血糖的持续影响该实验的目的是确定胃泌素的治疗是否可以对新近糖尿病发病的NOD小鼠的糖尿病状况产生长期的改善。从Taconic(Germanton，NY)购买NOD小鼠。将小鼠进行圈养，并在无病原的环境下喂养，按照加拿大委员会有关动物管理指南的要求进行照顾。
用3μg/kg/天的胃泌素处理最初的18天后，从治疗一开始就监测非肥胖糖尿病(NOD)小鼠的空腹血糖(FBG)水平至少8周。也监测赋形剂处理的对照组小鼠。
赋形剂处理的对照动物的空腹血糖(FBG)水平随时间而增加。在停止治疗后，胃泌素处理的动物的FBG水平相对于对照动物降低了至少5周。参见图3。该研究的结果证明治疗停止后，胃泌素的处理降低了NOD小鼠的空腹血糖水平至少5周。
实施例3胃泌素对患有慢性胰岛素依赖性糖尿病的NOD小鼠的空腹血糖的剂量依赖性影响目的确定胃泌素(G1)是否可以预防严重高血糖症的发展和患有慢性胰岛素依赖性糖尿病的NOD小鼠的死亡。
方法患有慢性胰岛素依赖性糖尿病且持续进行胰岛素治疗的NOD小鼠被分成不同的治疗组，进行以下处理(i)赋形剂(n＝4)，(ii)G1 1μg/kg/天，i.p.给药，每天两次(n＝4)，给药28天，(iii)G1 5μg/kg/天，i.p.给药，每天两次(n＝4)，给药28天，(iv)G1 10μg/kg/天，i.p.给药，每天两次(n＝4)，给药28天。开始用G1治疗后14天停止胰岛素治疗。G1是17个氨基酸的胃泌素类似物，它和天然胃泌素分子具有相同长度，但在第15位有一个氨基酸的变化。
结果和结论从第0天到第14天，在持续进行胰岛素治疗的动物中，所有治疗组的空腹血糖(FBG)水平都与第0天记录的水平相近，除了用10μg/kg/天的G1治疗的组以外，这一组的FBG显示出降低。在第28天，胰岛素治疗停止后14天，赋形剂组的所有动物死于糖尿病酮症酸中毒(DKA)，因为这些小鼠完全依赖于胰岛素注射。然而，用G1治疗的所有小鼠在停止胰岛素治疗2周后都还存活。1μg/kg/天的G1治疗的小鼠的空腹血糖水平保持提高，但用增加剂量的G1(分别是5和10μg/kg/天)治疗取得了相应降低的空腹血糖水平。参见图4。这些数据表明，在不用胰岛素治疗的情况下，胃泌素的治疗能够显著提高对慢性胰岛素依赖性糖尿病NOD小鼠的葡萄糖的控制。
本文描述的具体实例没有限制本发明的范围，因为这些实例仅仅旨在阐明本发明的一个方面，任何功能等价的实例都在本发明的范围之内。的确，除了此处显示和描述的那些改变以外，从上面的说明书和附图看来，本发明的各种改变对本领域技术人员来说都将是显而易见的。这样的改变都意图落在附加的权利要求的范围之内。
本文涉及的所有出版物、专利和专利出版物都被同样程度的全文引入作为参考，就如同每一篇单独的出版物、专利或专利出版物被特别和单独地指出要全文引入作为参考一样。此处引用的任何参考文献都没有被承认是作为本发明的现有技术而提供的。
序列表序列表<110>WARATAH PHARMACEUTICALS，INC.
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<308>P01350<309>2004-06-15<313>(1)..(101)
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权利要求
1.一种药物组合物，所述组合物包含治疗有效量的提供持久有益效果的胃泌素化合物和可药用载体、辅料或赋形剂。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，所述组合物是在糖尿病个体中提供给药后持续一段延长时间的正常血糖水平的形式。
3.根据前述任一权利要求所述的药物组合物，其中所述组合物包含治疗有效量的胃泌素化合物，并且是用于有此需要的个体的长期或快速治疗的形式。
4.根据前述任一权利要求所述的药物组合物，所述组合物包含约0.1到20或0.1到30μg/kg/天的胃泌素化合物，尤其是3-30μg/kg/天。
5.根据前述任一权利要求所述的药物组合物，其中所述有益效果是下述的一种或多种胰岛炎症的减轻或消失、减慢的疾病进展、生存率增加、或糖尿病症状或相关并发症的减少。
6.根据前述任一权利要求所述的组合物，其中的有益效果是持久的有益效果，其在治疗终止后持续一个延长的时间段。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述有益效果在治疗后持续大约或至少约2周到4周、2周到5周、3周到5周、2周到6周、2周到8周、2周到10周、2周到12周、2周到16周、2周到20周、2周到24周、2周到12个月或2周到18个月。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述持久有益效果可以表现为治疗后延长时间的C-肽生成增加、胰腺胰岛素生成增加和大约正常或低的血糖水平。
9.根据前述任一权利要求所述的药物组合物，其中对于胃泌素化合物的效果与缺乏胃泌素化合物存在的效果相比的统计学分析，持久的有益效果是统计学显著的。
10.根据前述任一权利要求所述的药物组合物，其中所述持久的有益效果将胰腺胰岛素水平增加至少约0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、5％、10％、15％、20％、30％、33％、35％、40％、45％或50％。
11.根据前述任一权利要求所述的药物组合物，其中所述持久有益效果将血糖水平降低至少约2％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。
12.根据前述任一权利要求所述的药物组合物，其中所述持久的有益效果是治疗后至少约2周到4周、2周到5周、3周到5周、2周到6周、2周到8周、2周到10周、2周到12周、2周到16周、2周到20周、2周到24周、2周到12个月或2周到18个月的时期内血糖水平降低。
13.一种用于治疗个体糖尿病的方法，包括给予该个体治疗有效量的至少一种胃泌素化合物以提供持久的有益效果。
14.一种治疗方法，包括给予个体治疗有效量的至少一种胃泌素化合物，其中对于具有糖尿病症状个体的给药产生了至少一种糖尿病症状的持久有益效果。
15.一种制备稳定的药物组合物的方法，该组合物包含胃泌素化合物，以及有效地物理稳定胃泌素化合物并适于提供治疗糖尿病的有益效果、优选持久有益效果的可药用载体、辅料或赋形剂。
16.一种治疗糖尿病的方法，包括将治疗有效量的胃泌素化合物或任何前述权利要求的组合物对需要治疗的个体给药，从而提供有益效果、优选持久的有益效果。
17.一种治疗糖尿病的方法，包括将胃泌素化合物或任何前述权利要求的组合物连同大量细胞对需要治疗的个体给药，从而提供有益效果、优选持久的有益效果。
18.一种治疗糖尿病个体的方法，包括在体外将大量细胞与胃泌素化合物或任何前述权利要求的组合物接触，任选地培养细胞，并将该细胞对需要治疗的个体给药。
19.一种诱导个体胰岛再生的方法，包括将胰岛前体细胞与足以提供个体胰岛前体细胞的延长增强增殖效果从而诱导胰岛再生的量的胃泌素化合物或任何前述权利要求的组合物接触。
20.一种长时间将干细胞扩展和分化成胰岛素分泌细胞的方法，包括将干细胞与有效量的胃泌素化合物或任何前述权利要求的组合物接触。
21.一种治疗糖尿病的方法，该方法包括给需要治疗的哺乳动物施用包含胃泌素化合物的组合物，以足以长时间增加哺乳动物的分泌胰腺胰岛素的β细胞的数量施用，从而治疗糖尿病。
22.一种治疗糖尿病的方法，该方法包括给需要治疗的哺乳动物施用包含胃泌素化合物的组合物，以在施用胃泌素化合物后足以提供胰腺组织的胰岛前体细胞增殖的延长增强的量施用，从而治疗糖尿病。
23.一种治疗糖尿病的方法，该方法包括给需要治疗的哺乳动物施用包含胃泌素化合物的组合物，以足以提供哺乳动物的分泌胰腺胰岛素的细胞数量延长增加的量，并测定胰岛再生的量，从而治疗糖尿病。
24.权利要求23的方法，其中胰岛再生的量是通过选自血糖、血清葡萄糖、血糖基化血红蛋白、胰腺β细胞群、血清胰岛素、胰腺胰岛素含量和形态确定的β细胞群的参数来测定的。
25.权利要求23的方法，其中与施用组合物之前所测定的血糖相比，施用组合物后在延长的时间内降低了血糖。
26.权利要求25的方法，其中与施用组合物之前所测定的血糖相比，施用组合物将血糖降低了50％。
27.权利要求23的方法，其中与没有施用组合物的对照哺乳动物的糖基化血红蛋白相比，糖基化血红蛋白浓度在延长的时间内降低。
28.权利要求23的方法，其中与施用组合物之前所测定的哺乳动物血清胰岛素浓度相比，血清C-肽胰岛素浓度在延长的时间内提高。
29.权利要求23的方法，其中与施用组合物之前所测定的哺乳动物胰腺胰岛素浓度相比，胰腺胰岛素浓度在延长的时间内提高。
30.权利要求23的方法，其中细胞是胰管细胞。
31.权利要求23的方法，其中胃泌素化合物以足以引起胰腺胰岛前体细胞延长分化成葡萄糖反应性胰岛素分泌性胰岛细胞的量提供。
32.权利要求23的方法，其中胃泌素化合物以足以引起胰腺胰岛前体细胞延长分化成葡萄糖反应性胰岛素分泌性胰岛细胞的量提供。
33.权利要求23的方法，其中组合物以足以影响胰腺组织中的胰腺胰岛前体细胞延长分化成成熟胰岛素分泌性胰岛细胞的量提供。
34.权利要求23的方法，其中组合物以足以提供胰腺胰岛前体细胞增殖的延长增强的量提供。
35.一种诱导哺乳动物胰腺胰岛再生的方法，该方法包括给哺乳动物施用包含胃泌素化合物的组合物，以足以提供胰腺组织的胰岛前体细胞增殖的延长增强的量施用，从而诱导胰腺胰岛再生。
36.一种用于在哺乳动物中诱导胰岛再生的方法，该方法包括施用包含胃泌素化合物的组合物，以足以在哺乳动物中产生持久的分泌胰岛胰岛素的β细胞数量上增加的量施用。
37.一种用于在动物细胞中诱导胰岛再生性治疗的方法，包括使该细胞与可操纵地连接到调控元件上的编码胃泌素化合物的核酸序列接触，从而引起该胃泌素化合物的持久有益效果。
38.一种包含能有效诱导胰岛前体细胞持久增殖变为增加量的成熟胰岛素分泌性细胞的剂量的胃泌素化合物的组合物。
39.其剂量足以诱导胰岛前体细胞分化成成熟胰岛素分泌性细胞的权利要求38的组合物。
40.包含至少一种胃泌素化合物的组合物在制备用于持久治疗糖尿病的药物中的应用。
41.前述任一权利要求所述组合物的药盒。
全文摘要
本发明一般涉及包含胃泌素化合物的新的组合物和方法。该组合物和方法在治疗糖尿病中提供了有益效果，尤其是持久的有益效果。
文档编号A61KGK1829528SQ200480022042
公开日2006年9月6日 申请日期2004年5月27日 优先权日2003年5月27日
发明者A·克鲁兹 申请人:瓦拉塔药品公司