专利名称：一种用于治疗糖尿病的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于治疗糖尿病的药物组合物，特别是一种以中草药提取物为原料的药物组合物。
背景技术：
糖尿病是一种常见的慢性内分泌代谢紊乱性疾病，其发病率(主要是II型糖尿病)正在逐年上升，死亡率已居肿瘤和心血管疾病之后的第三位。II型糖尿病的治疗多采用口服降糖药物疗法，目前临床上用于治疗II型糖尿病的口服降糖药物有磺脲类降糖药物，双胍类降糖药物，以及α-糖苷酶抑制剂类药物，但由于磺脲类和双胍类药物的较强副作用(如磺脲类损害胰脏β细胞、低血糖等；双胍类易发生乳酸中毒等)，其使用受到了一定限制。
发明内容
本发明的目的就在于提供一种具有显著生理效应的治疗糖尿病的药用组合物。
目前，治疗糖尿病的方法在于采用α-糖苷酶抑制剂，α-糖苷酶抑制剂的作用是通过调控存在于人体小肠黏膜微绒毛膜表面的麦芽糖酶和蔗糖酶等水解酶活性，阻滞了糖类化合物分解成葡萄糖等单糖的过程，延缓了碳水化合物的消化吸收，从而可避免饭后血糖迅速上升，抑制饭后高血糖和胰岛素过度分泌，减小患者血糖波动幅度，达到对血糖的良好控制。传统药物和植物如虎杖、桑叶、仙鹤草的提取物均具有强烈的α-葡萄糖苷酶抑制活性，部分提取物还具有显著的醛糖还原酶抑制活性。经临床试验证实，醛糖还原酶活性增高是导致糖尿病慢性并发症的主要原因之一，抑制醛糖还原酶的活性，能有效地改善糖尿病患者的多元醇代谢紊乱，从而预防和延迟糖尿病并发症的发生。经对这些提取物的体内降血糖活性进行研究，发现这些提取物均能不同程度地降低四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的血糖，且不同的提取物有着明显不同的作用方式。
虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb，et Zucc)系蓼科蓼属植物，又名斑根紫金龙、活血龙、阴阳莲等。药用部分为根茎，有活血定痛、清热利湿、解毒、抑菌等作用。在临床上主要用于治疗多种感染性疾病、烧伤、微循环功能障碍、肿瘤等，没有发现毒副作用。主要化学成分有大黄素、大黄酚、白藜芦醇(resveratrol)、白藜芦醇甙(polydatin，或称虎杖晶Ⅳ)、槲皮素(quercetin)、原儿茶酸(protocatechuicacid)、糖苷类、氨基酸等，并富含缩合鞣质和多聚糖。虎杖鞣酸可通过调控人体小肠黏膜微绒毛膜表面的糖苷酶活性达到对餐后血糖的良好控制；大黄素可防治STZ(链脲菌素)诱导的糖尿病大鼠的早期肾脏损害，其机制可能抑制ET-1(内皮素)等的合成与释放；虎杖白藜芦醇通过清除体内自由基、抑制脂质过氧化反应，达到降血脂、抗氧化、降血糖及改善糖尿病并发症的作用。
桑叶异名铁扇子，为桑科桑属Morus alba L.(药材Folium Mori)的树叶。主要化学成分有黄酮类、甾类、多糖和氨基酸等。桑叶的药用首载于《神农本草经》，桑叶性味苦甘、寒，是中医清热解毒之要药。主治热感冒、肺热燥咳、头晕头疼、目赤晕等症，临床应用十分广泛，常用桑叶入药，组成复方中药，疗效良好。桑属植物具有降血糖、降血压、抗菌和抗病毒等多种生物活性。现代药理研究证明，桑叶黄酮对降低四氧嘧啶糖尿病小鼠高血糖、提高其糖耐量的显著作用，可能通过抑制双糖酶、减缓小肠葡萄糖的吸收，抗氧化、减少糖尿病大鼠氧化损伤，以及保护脾抗氧化酶、改善脾功能等机制实现的。
仙鹤草即龙牙草，蔷薇科。多年生草本，被毛。分布于北半球，我国各地皆产。以全草入药，性微温、味苦涩，功能止血，主治吐血、便血、尿血、崩漏等症。全草含有仙鹤草素、鞣质、甾醇、有机酸、酚性成分及仙鹤草内酯等成分。仙鹤草黄酮具有调控体内糖苷酶活性、抑制高糖环境下蛋白质非酶糖基化的作用。
将这三种提取物根据药理原理，经科学配比和组合，以达到功能互补，其作用效果将会更明显。
根据上述机理，本发明采用如下技术方案一种用于治疗糖尿病的药物组合物，其特征是该组合物的组成成分及其重量百分配比如下虎杖提取物48-57％桑叶提取物18-25％仙鹤草提取物 22-33％；其中所述的虎杖提取物是主要活性成份为虎杖鞣酸的虎杖提取物、主要活性成份为虎杖白藜芦醇的虎杖提取物及主要活性成份为虎杖大黄素的虎杖提取物以20-25∶60-65∶14-16的重量比的混合物；所述的桑叶提取物的主要活性成份为桑叶黄酮；所述的仙鹤草提取物的主要活性成份为仙鹤草黄酮。
上述的一种用于治疗糖尿病的药物组合物在制备降血糖药物中应用。
上述的一种用于治疗糖尿病的药物组合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。
同现有技术相比，采用本发明的用于治疗糖尿病的药物组合物具有显著降低小鼠餐后血糖和四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的作用，可应用于预防和治疗糖尿病及其并发症。
图1是组合物量和抑制剂关系2药物组合物对小鼠餐后血糖影响的效果图具体实施方式
本发明采用的虎杖、桑叶、仙鹤草提取物的制备方法如下主要活性成分为虎杖鞣酸的虎杖提取物1虎杖根茎粗粉，95％乙醇冷浸，冷浸液过滤、减压浓缩得浸膏，加水后用氯仿回流萃取，后水液用乙酸乙酯萃取，滤除萃取过程中乙酸乙酯层产生的沉淀，乙酸乙酯层用NaOH水溶液萃取，NaOH水溶液用稀HCl调节pH至4，加5％明胶水溶液得沉淀，沉淀加50％丙酮溶解，离心得丙酮溶液，减压蒸馏回收丙酮，水液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层减压蒸馏回收乙酸乙酯，加适量水溶解，滤去沉淀，浓缩干燥得抑制剂粗品(橙黄色粉末)，将抑制剂粗品配成10mg/ml上HZ802大孔吸附树脂，用70％乙醇水溶液洗脱。收集活性组分，浓缩，干燥得橙黄色抑制剂粉末。主要活性成分为虎杖鞣酸。
主要活性成分为虎杖白藜芦醇的虎杖提取物2虎杖根茎粉碎，95％乙醇冷浸48小时，浸出液旋转蒸干，得浸膏，将浸膏溶于水得悬浊液，后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，将乙酸乙酯相上硅胶柱进行正相层析，流动相为乙酸乙酯石油醚(4∶6)，点板跟踪活性物质，将有活性物质部分合并第二次过硅胶柱，流动相不变，收集活性组分，经干燥得白色粉末，活性部位为虎杖白藜芦醇。
主要活性成分为虎杖大黄素的虎杖提取物3虎杖根茎粉碎，95％乙醇冷浸48小时，浸出液旋转蒸干，得浸膏，将浸膏溶于水得悬浊液，后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，将乙酸乙酯相上硅胶柱进行正相层析，流动相为乙酸乙酯∶石油醚(3∶7)，点板跟踪活性物质，将有活性物质部分合并再过硅胶柱，流动相改为氯仿，收集活性组分，经干燥得淡黄色粉末，活性部位为虎杖大黄素。
2、桑叶提取物桑叶干品，粉碎，乙醇回流4小时，4000rpm取上清液，浓缩后加蒸馏水，离心取上清液，石油醚萃取，得水醇液。上D101吸附树脂，水洗至无色，后用无水乙醇洗脱至无色，浓缩干燥即得桑叶提取物，活性部位为桑叶黄酮。
3、仙鹤草提取物仙鹤草粗粉，40％乙醇浸提3次，过滤得滤液，浓缩，水醇法除去叶绿素，离心娶上清夜，石油醚萃取，取水醇层，浓缩后上D101大孔吸附树脂，无水乙醇洗脱得仙鹤草提取物，活性部位为仙鹤草黄酮实施例一糖苷酶活性试验药物组合物的重量百分配比为虎杖提取物51份、桑叶提取物24份、仙鹤草提取物25份。按上述比例分别称取虎杖提取物51mg(其中虎杖提取物1∶11.73mg、虎杖提取物2∶31.62mg、虎杖提取物3∶7.65mg)、桑叶提取物24mg、仙鹤草提取物25mg，溶解于100mL水(加入少量二甲亚砜助溶)中，配成1mg/mL浓度的溶液。测定方法根据Tremblay等(Pierre C，Roland R Tremblay.The Journal of C1inicai Chemistry，1978，24208～211)的方法，即以PNPG(4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷)为底物，0.1mol/L Na2CO3为终止液，于400nm处比色测定。该组合物对α-糖苷酶的抑制率和加入抑制剂量之间关系的抑制实验，加入量5，10，15，20，25，30(μL)，测得对α-糖苷酶抑制率和抑制剂量之间的关系如图1。
实施例二检测实施例1中的组合物配比对醛糖还原酶的抑制实验在0.86mL磷酸缓冲液(pH6.5)中加入20μL硫酸锂(0.4mol/L)，20μL还原型辅酶II(10mmol/L)溶液，10μL抑制剂溶液(1mg/ml)和60μL醛糖还原酶提取液，37℃下保温4min，再加入30μL DL-甘油醛(10mmol/L)溶液，在340nm下扫描记录吸光度6min的变化。经实验得出该组合物对醛糖还原酶抑制率为65.9％。而单独采用三种提取物对醛糖还原酶抑制率分别为虎杖提取物58.2％、桑叶提取物24.1％、仙鹤草提取物2.5％。
实施例三餐后血糖实验取正常小鼠24只(实验前先禁食10小时)，分为3组，灌胃前先取血待测0时刻血糖值，再分别用生理盐水、拜糖平(Glucobay)(100mg/kg)、实施例1中配比组合物以及单独三种提取物灌胃(300mg/kg)，结束后灌淀粉液(5g/kg)，然后各鼠分别于灌淀粉液后0.5、1、2小时取血。测定不同时间所取血液的血糖值，结果见表1。图2为药物组合物对小鼠餐后血糖影响的效果图。
表1组合物对正常小鼠餐后血糖含量的影响
实施例四连续给药实验糖尿病小鼠模型的建立取65只正常小鼠喂养三天后，禁食16h(饮水不限)，腹腔注射四氧嘧啶(200mg/kg)后，喂养72h，禁食四小时后测血糖浓度，选取血糖值在11.0mmol/L以上者。将糖尿病小鼠分为4组，A、B、C、D组，其中A组灌格华止(Glucophage、盐酸二甲双胍)(100mg.kg-1.d-1)，B组灌拜糖平(100mg.kg-1.d-1)，C组灌组合物(200mg.kg-1.d-1)，D组灌生理盐水，连续灌药8天后，末次灌药后禁食4小时后测小鼠血糖值，取血方法为断尾取血，结果如表2。
表2组合物连续多次给药对糖尿病小鼠血糖含量的影响
2与1比较p＜0.00权利要求
1.一种用于治疗糖尿病的药物组合物，其特征是该组合物的组成成分及其重量百分配比如下虎杖提取物 48-57％桑叶提取物 18-25％仙鹤草提取物22-33％；其中所述的虎杖提取物是主要活性成份为虎杖鞣酸的虎杖提取物、主要活性成份为虎杖白藜芦醇的虎杖提取物及主要活性成份为虎杖大黄素的虎杖提取物以20-25∶60-65∶14-16的重量比的混合物；所述的桑叶提取物的主要活性成份为桑叶黄酮；所述的仙鹤提取物的主要活性成份为仙鹤草黄酮。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病的药物组合物在制备降血糖药物中的应用。
3.如根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病的药物组合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种用于治疗糖尿病的药物组合物，特别是一种以中草药提取物为原料的药物组合物。该组合物的组成成分及其重量百分配比如下虎杖提取物48－57％；桑叶提取物18－25％；仙鹤提取物22－33％。本发明的用于治疗糖尿病的药物组合物具有显著降低小鼠餐后血糖和四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的作用，可应用于预防和治疗糖尿病及其并发症。
文档编号A61P3/00GK1730046SQ20051002727
公开日2006年2月8日 申请日期2005年9月9日 优先权日2005年9月9日
发明者沈忠明, 王逸芸, 沈莉娟, 殷建伟, 徐正东 申请人:上海大学