用于药物释放的过载脂质体的制作方法

专利名称：用于药物释放的过载脂质体的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种脂质体，该脂质体包含促红细胞生成素或另一种属于糖蛋白或具有在其糖基化位点末端带有唾液酸基团的糖蛋白部分的药用活性化合物。本发明还涉及制备所述脂质体的方法、含有所述脂质体的组合物以及使用所述脂质体的方法。
背景技术：
促红细胞生成素(EPO)是公知的涉及红细胞合成的糖蛋白。在现有技术中，同时包含EPO和作为载体的人血清白蛋白(HSA)的药用组合物是已知的。但是，由于使用天然来源获得的HAS总是具有传播传染性疾病尤其是病毒传染病的潜在危险，因此为替代作为载体用于肠胃外EPO制剂的HAS而进行了尝试。
EP 0 937 456 A1公开了一种基于脂质体的肠胃外组合物，该组合物包含在水性分散液中的促红细胞生成素和脂质体，其中糖蛋白基本上不混合在脂质体内，而是基本上存在于该脂质体外的水相中。所述脂质体采用用于制备直径小于1μm的脂质体的高速均化法，通过将乙醇脂质相注射至水性缓冲液中而制得。
日本专利JP8231417公开了另一种制备脂质体EPO组合物的方法，其中通过逆相蒸发法使EPO包含在脂质体内而制得脂质体。

发明内容
尽管本领域已知的方法可能具有某些优点，但是本发明的目的是通过提供如下脂质体来改善已知的组合物，该脂质体包含所需的药物，该药物不仅被包封在内部，例如被包封在所述脂质体的水相内，而且还结合或附着于所述脂质体膜的内侧和/或外侧，使得如通过基于所述药物和脂质的量以及该脂质体的平均尺寸和/或内部总体积(“捕获体积”)的数字计算所预测的那样，该脂质体以超过通过被动药物包涵一般或甚至是理论上所能获得的负载量的程度负载所需药物。因此，本发明涉及包含至少一种所需药物分子的脂质体，其中，所述药物分子以超过仅仅通过将所述药物被动包涵在水性内部(即该药物没有附着于所述膜上)所得到的药物负载量的量存在。
所需药物是药用活性化合物，在一个优选的实施方式中，所述药用活性化合物是糖蛋白或其它至少具有寡糖部分或多糖部分的生物活性化合物，其中，所述糖蛋白或寡糖部分或多糖部分例如在其糖基化位点的末端包含可自由接近因而具有反应性的唾液酸基团。
因此，本发明的一个目的是提供一种密集负载的脂质体，其中所需药物被包封在所述脂质体内，并且其中一部分所述药物还从外部结合或附着于所述脂质体膜上，通常还从内部结合或附着于所述脂质体膜上。在一个优选的实施方式中，所述药物是促红细胞生成素。
本发明的另一个目的是提供一种制备密集负载脂质体的方法。
本发明的又一目的是提供一种含有所述密集负载脂质体的药用组合物。
本发明的原理进一步在独立权利要求中描述，而本发明的各实施方式是从属权利要求的主题。
具体实施例方式
更具体的说，在第一实施方式中，本发明涉及用于药物释放的脂质体，其中所述脂质体包含分布在该脂质体内部水相中的至少一种所需药物分子，并且其中所述脂质体进一步包含附着于所述脂质体膜的任意一侧或两侧上的所述药物分子或其它药物分子。所述附着可以是共价性质的或非共价性质的附着，即在药物和脂质之间可以是化学键合，或者所述附着可以通过化学键合以外的附着力产生，该附着力包括但不限于药物和脂质分子之间的范德华力、氢桥、静电力、亲水性-疏水性相互作用、亲合力和/或极性相互作用等。
在另一个实施方式中，本发明涉及这样的脂质体，其中所述附着于膜上的至少一部分药物分子共价连接于膜脂质上。
在一个优选的实施方式中，所述共价连接是脂质的反应性官能团和所述药物的与所述脂质的官能团反应的官能团之间的化学键合。还优选所述化学键合的性质使得它不会妨碍所述药物在施用于人或动物体后所期望的生理作用。在另一个优选的实施方式中，所述化学键合的性质使得它可以在施用后在人或动物体的生理状态下被剪切。
因此，在一个具体的实施方式中，本发明涉及这样的脂质体，其中所述脂质的所述官能团是羟基，该羟基可以是多元醇残基的一部分。适合的多元醇残基是糖醇残基，特别是那些在脂质中天然存在的糖醇残基，例如甘油残基和肌醇残基。但是，使所需药物附着于所述脂质体膜上的所述脂质的官能团也可以是胆碱残基，例如，在磷脂酰胆碱(卵磷脂)中的胆碱残基。
当所述脂质的所述官能团是羟基时，优选所述药物的所述反应性官能团是酸性基团，特别是选自由磷酸残基、硫酸残基、碳酸残基和唾液酸残基组成的组中的酸性基团。在这种情况下，具有酸性基团的所述药物分子或至少一部分该药物分子将通过酯键共价连接到至少一部分具有羟基的所述脂质分子上。
在另一个实施方式中，本发明涉及一种如上所述的脂质体，其中所述药物是糖蛋白或具有寡糖部分或多糖部分，所述糖蛋白或寡糖部分或多糖部分包含至少一个可用于与含有羟基的脂质进行酯化作用的自由的反应性唾液酸基团。
所述脂质体的囊膜上的脂质组合物典型性地包含天然来源的或非天然来源的至少一种脂质，该脂质为选自由磷脂、糖脂、神经酰胺及这些脂质的任意一种的衍生物组成的组。
因此，在另一具体的实施方式中，本发明涉及上述脂质体，其中，所述脂质体包含磷脂，特别是选自由鞘磷脂(sphingophospholipid)和甘油磷酯组成的组，所述鞘磷脂包括神经鞘磷脂，而所述甘油磷酯包括卵磷脂、脑磷脂、心磷脂、磷脂酰肌醇和磷脂酰肌醇磷酸酯。
当所述脂质体包含糖脂而不是磷脂或者除了磷脂之外还包含糖脂时，所述糖脂优选选自由鞘糖脂和糖基甘油脂(glykoglycerolipid)组成的组，所述鞘糖脂包括脑苷脂、神经节苷脂、硫脑苷脂，而所述糖基甘油脂包括糖基甘油一脂和糖基甘油二脂。
在一个非常具体的实施方式中，根据本发明的脂质体含有脂质组合物，其中所述膜包含以二-棕榈酰基-磷脂酰基胆碱(di-palmitoyl-phosphatidylcholine，DPPC)∶胆固醇∶卵磷脂酰甘油(eggphosphatidylglycerol，EPG)的摩尔比＝7∶2∶1的DPPC、胆固醇和EPG，应该理解的是，该比例当然可以视具体情况而定性和/或定量地进行改变。
在另一个具体的实施方式中，包封和附着于所述脂质体的释放用药物是促红细胞生成素。
在另一个的实施方式中，本发明涉及包含如上所定义的载药脂质体和药学上可接受的载体的药用组合物。该药用组合物以任意适合的液体形式、半液体形式或固体形式施用，尤其是用于肠胃外施用，例如以注射液、喷鼻剂、吸入液(inhalation liquid)、乳膏、凝胶、软膏、栓剂或洗剂的形式以进行局部施用或全身肠胃外施用。
本发明进一步涉及负载药物的脂质体的制备方法，所述脂质体包含分布在该脂质体内部水相中的至少一种所需药物分子，并且该脂质体进一步包含附着于所述脂质体膜的任意一侧或两侧上的所述药物分子或其它药物分子，所述方法包括—提供在有机溶剂中的脂相，其中所述脂相包含至少一种脂质组分，其中每一个脂质分子具有至少一个反应性官能团；—提供一种水相，该水相含有缓冲液和溶解于其中的至少一种所需药物，其中至少一种药物具有能够与所述脂质的官能团反应的反应性官能团；—在允许形成脂质体的条件下，将所述脂相加入到所述水相中；—选择性地使所述水相进行环状循环并重复步骤c)，以提高所述脂质体吸收药物的效率；和—收获负载药物的脂质体，
其中，至少一部分所述药物分子混合在所述脂质体内，而另一部分所述药物分子则附着于所述脂质体膜的任意一侧或两侧上。
应该理解，本文使用的与药物和脂质有关的术语“反应性官能团”或“与官能团反应”并不一定是指在脂质和药物之间的反应类型或反应活性在性质上只能引起共价化学连接，有可能取而代之的是，所述反应类型或反应活性在性质上引起如前文所述的多少有些强的粘着作用或附着作用，而不是引起化学连接。
如上所述，所述脂质的所述官能团可以是羟基，特别是作为多元醇残基的一部分的羟基，例如糖醇残基，优选来自天然存在的诸如甘油和肌醇等糖醇的糖醇残基，或例如卵磷脂中的胆碱残基。
此外，如上所述，所述药物的反应性官能团可以是酸性基团，优选选自由磷酸残基、硫酸残基、碳酸残基和唾液酸残基组成的组中的酸性基团。
在一个实施方式中，所述制备方法包括在允许至少一部分含有反应性官能团的所述脂质与至少一部分含有反应性官能团的所述药物分子之间的相互作用(例如化学反应)的条件下将所述脂相加入到所述水相中。
当所述脂质的所述官能团是羟基和所述药物的所述官能团是酸性残基时，允许相互作用和选择性地为化学反应的所述条件包括在约25℃至约65℃的反应温度和约6～约8的所述水相的pH值的条件下，将所述脂相加入到所述水相中，于是至少一部分具有反应性官能团的所述药物分子附着于至少一部分具有官能团的所述脂质上，所述附着选择性地为通过酯化作用的共价连接。
在更具体的一个实施方式中，所述药物是糖蛋白或具有寡糖部分或多糖部分，所述糖蛋白或寡糖部分或多糖部分包含至少一个具有反应性的唾液酸基团。
在所述制备方法的另一个具体实施方式
中，所述脂相包含至少一种天然来源的或非天然来源的脂质，该脂质选自由磷脂、糖脂、神经酰胺和这些脂质的衍生物组成的组，而在一个最具体的实施方式中，将所述脂相的脂质组合物调节成以摩尔比为7∶2∶1包含DPPC、胆同醇和EPG，应该理解，所述比例当然会视具体情况而在大范围内作定性或定量改变。
优选使用公开在WO 02/36257中的交叉流注射(cross-flow injection)技术在加压和基本上没有剪切力的条件下将所述脂相加入到所述水相中，所述交叉流注射技术允许在极度温和的条件下立即(immediate)而自发地形成脂质体，即没有使用产生剪切力的高速均化器或用于产生高紊流的类似装置来形成泡囊。
在另一个实施方式中，本发明涉及一种制备方法，其中，在泡囊形成的步骤之前，使含有每个脂质分子具有至少一个反应性官能团的脂质的所述脂质组分的至少一部分或全部与至少一部分具有反应性官能团的那些药物分子反应，以使药物分子附着或者甚至是共价连接至膜脂上。所述预反应是在泡囊形成之前进行。于是，在一个实施方式中，本发明涉及一种制备方法，其中，在将所述脂相加入到所述水相之前，至少一部分所述脂相的脂质附着(选择性地为共价连接)至至少一部分所需药物分子上。
在另一个实施方式中，本发明涉及负载药物的脂质体的制备方法，所述脂质体包含分布在所述脂质体内部水相中的至少一种所需药物分子，并且进一步包含附着于所述脂质体膜的任意一侧或两侧上的所述药物分子或其它药物分子，所述方法包括—提供在有机溶剂中或作为干燥膜的脂相，其中所述脂相包含至少一种脂质组分，其中每一个脂质分子具有至少一个反应性官能团；—提供包含缓冲液的第一水相；—提供包含缓冲液和溶解于其中的至少一种所需药物的第二水相，其中至少一种药物具有能够附着于所述脂质的官能团上或能够与所述脂质的官能团发生化学反应的反应性官能团；—在允许形成脂质体的条件下，合并所述脂相和所述第一水相；—在允许将至少一部分所述药物分子被吸收到所形成的脂质体中且允许至少一部分具有反应性官能团的所述脂质与至少一部分具有反应性官能团的所述药物分子相互作用(选择性地为化学反应)的条件下，合并所述的脂质体和所述第二水相；和
—收获负载药物的脂质体，其中至少一部分所述药物分子混合在所述脂质体中，而另一部分所述药物分子则附着于所述脂质体膜的任意一侧或两侧上。
采用所述方法，优选所述脂质的所述官能团是羟基，而所述药物的所述官能团是酸性残基，允许相互作用(例如化学反应)的所述条件包括在约25℃至约65℃的反应温度和约6～约8的所述第二水相的pH值的条件下合并所述脂质体和所述第二水相，并对所得脂质体悬浮液进行温育，直至至少一部分具有反应性官能团的所述药物分子附着(选择性地通过酯化作用而共价连接)于至少一部分具有官能团的所述脂质上。
在另一个实施方式中，所述方法包括另外的程序性步骤，其中，在温育期间或温育之后，对所述脂质体悬浮液进行进一步的处理以促进药物被吸收到所述脂质体中，所述处理优选选自由超声处理、电穿孔法、涡旋法和梯度驱动跨膜扩散法组成的组。
所述共价键可以是酯键。适合于以释放用药物“过载”脂质体的药物是促红细胞生成素。
本发明的密集负载脂质体可以明显降低诸如注射液或喷鼻剂等肠胃外应用剂型或诸如乳膏、凝胶、软膏或洗剂等局部应用剂型的剂量。依据用于释放的所需药物的性质，本发明的脂质体组合物允许以降低或基本上避免人或动物接受对象中不希望的副作用的方式对药物施用方案进行调整。而且，根据本发明的脂质体制剂显著地增加或延长了在人类或动物体内的生理条件下容易遭受降解或破坏的药用活性化合物的生物利用度。
除了含有所需药物的“过载”脂质体外，本发明的另一个显著优点是提供了制备以合理量含有两种以上不同药物的脂质体的可能性，其中，至少一种药物共价或非共价地附着于脂质体膜上，而至少另一种药物存在于该脂质体内的水相中。因此，应用本发明的概念，可以让本领域的普通技术人员能够对用于同时释放两种以上不同药物或药物成分的脂质体进行具体设计，其中所述释放是需要的或有益的，例如在联合治疗中。
本发明的脂质体优选采用WO 02/36257公开的交叉流注射技术制备，在此引入WO 02/36257的内容作为参考。简而言之，所述方法基于将有机脂质相(典型地为乙醇脂质相)通过脂质相管道壁上的微小开孔和与所述脂质相管道相连并带有水相的第二管道的壁上的邻近开孔注射至水相中。所述方法的特征在于，在注射位置，即在交叉流注射舱或混合室，运送所述脂相的管道被稳固地连接到所述水相的管道上，如此使得所述管道通过允许有机液体进入的共同孔道相互液体连接，在加压并采用喷雾的形式，该水相流通过所述共同孔道。在液体交界区域，即有机脂质流以近似直角冲入水性流的地方，不存在产生剪切力的因素，而脂质体以优异的品质和泡囊尺寸分布自发形成。这一极度温和的方法允许使用氧化或温度敏感性脂质，同时允许包封敏感性药物，否则所述敏感性药物会由于剪切力所致的空泡现象或局部过热而造成破坏或失去活性，例如在均化器中可能就是这种情况。
除了将药物被动地混合到脂质体中的方法外，本发明还继续将所需药物主动地附着到脂质体膜上，所述脂质体膜通常为单室双层(unilamellar bilayer)。为达到这一目的，即，将药用活性化合物主动地附着或结合至脂质体膜上，优选根据用于释放的所需药物，具体选择所述膜的脂质组合物，即，使所述脂质组合物包含能够与所需药物分子相互作用的脂质，例如具有甘油或肌醇型首基的天然或非天然来源的磷脂，以及包含其他脂质，尤其是天然来源的脂质，该脂质组合物只含有少量的具有所述首基的脂质。
适合的脂质包括鞘氨醇及其衍生物、脑苷脂及其衍生物以及神经酰胺及其衍生物。
为使所需药物主动地结合或附着到脂质体膜上，优选在所需药物例如促红细胞生成素存在的情况下，在约25℃至约65℃的温度和近似中性的pH，即，在微碱性或微酸性的pH，优选在约6～8的pH制备所述脂质体。所述附着(选择性地包括在唾液酸基团和磷脂之间通过酯化反应的化学连接)似乎在所述温度和pH值范围内效果最好。
根据本发明的脂质体典型地包含作为主要脂质组分的选自由二-棕榈酰-磷脂酰胆碱(DPPC)、卵磷脂酰胆碱(EPC)、大豆磷脂酰胆碱(SPC)、神经酰胺和鞘氨醇组成的组中的一种脂质组分和选自由胆固醇和具有带电荷首基的脂质组成的组中的至少另外一种脂质组分。
采用前述通过交叉流注射将所述脂质相被动地包封在所述水相中的方法，获得如下结果a)通过被动包封可以获得高达受包封药物的20重量％～50重量％的包封率，该结果主要取决于—将含有所述药物的水相进行再循环的循环数—所形成的脂质体的预选泡囊尺寸，和—所述膜的脂质组合物和脂质浓度所述包封率与以前的研究，例如某些酶(如rhSOD)的脂质体包涵研究的结果非常吻合；然而b)通过结合根据本发明的脂质体的被动负载和主动负载如脂质体负载后的滤液分析所证实，获得了提供用于负载的药物的最高100重量％的负载率，即，脂质体膜内部和外部附着量加起来的包封作用。通常，滤液中发现的游离药物的浓度相对于初始提供的浓度为10重量％以下。
促成本发明的大部分实验使用促红细胞生成素作为所需药物而进行，从而示例性地说明了本发明的负载药物的概念。但是，如前文所述，本发明适用于可以包封在脂质体内和附着于脂质体膜上(优选可以附着于脂质体膜的任意一侧或两侧上)的任意物质。所述附着可以是共价性质或非共价性质的附着，例如本领域已知的，通过亲合力、静电相互作用、范德华力、以及亲水和/或疏水相互作用等的附着。但是，优选所述药物共价连接于包含在所述脂质体膜内的脂质的官能团上。当所述官能团是多羟基化合物类型，特别是糖醇类型，典型地是肌醇或甘油的官能团时，如果所需药物包含诸如磷酸、硫酸、碳酸或唾液酸的残基等酸性的反应性官能团，则该所需药物将最有效地附着于所述膜上。所述酸性的反应性官能团可以在与所述脂质的羟基接触后通过酯化作用在所述脂质和药物之间形成共价键。
为了更充分地理解本文所描述的本发明，提供了以下实施例。
实施例实施例1(比较例)将药物被动地对脂质体进行负载a)脂质组合物DPPC∶胆固醇∶硬脂胺＝7∶2∶1b)药物浓度每2ml水性缓冲液(PBS)含2868μg促红细胞生成素(EPO)根据WO 02/36257中公开的交叉流注射方法制备脂质体。获得泡囊平均直径为约170nm的单室双层脂质体，随后用超滤/渗滤单元对所述单室双层脂质体进行过滤步骤。
分析滤液的游离(即未包封)药物，结果如下脂质体渗余物(2ml)711μg EPO＝25重量％包封；总滤出物 2175μgEPO＝75重量％未包封；分成各组分 滤出物F1＝843μg；滤出物F2＝596μg滤出物F3＝345μg；滤出物F4＝391μg；在该实施例中，使用现有技术的方法将促红细胞生成素包封在脂质体内，获得25重量％的包涵药物，例如每1ml脂质体渗余物含356μg药物。更为常见的是，相对于初始提供的药物量，使用被动包封药物的方法通常得到约25重量％～约50重量％的包涵率。
该负载效率与先前使用例如重组的人类超氧化物歧化酶(rhSOD)等肽或蛋白作为用于脂质体包封的所需药物的研究非常吻合。
实施例2a)脂质组合物DPPC∶胆固醇∶EPG＝7∶2∶1b)药物浓度每2ml水性缓冲液(PBS)中含3375μg的EPO根据WO 02/36257中公开的交叉流注射方法制备脂质体。获得具有泡囊平均直径约170nm的单室双层脂质体，随后用超滤/渗滤单元对所述单室双层脂质体进行过滤步骤。
分析滤液的游离(未包封)药物，结果如下脂质体渗余物(2ml) 3043μg EPO＝90重量％；总滤出物 328μgEPO＝10重量％；分成各组分滤出物F1＝24μg；滤出物F2＝128μg滤出物F3＝0-1μg；滤出物F4＝176μg；在该实施例中，使用交叉流注射方法将EPO包封在脂质体内，所述包封是在pH 7.5和50℃温度下进行的，获得90重量％的包涵药物，相当于每1ml脂质体渗余物含1522μg药物。
更为常见的是，通过适当选择易于附着(选择性地涉及使所述药物共价键合到所述脂质膜上(除了将所述药物被动地包涵在脂质体水性内部之外))的脂质，使用以所需药物对脂质体进行被动负载和主动负载相结合的所述方法或相当方法，通常可以获得相对于初始提供的药物量约80重量％～约100重量％的负载率。
实施例3不同药物的结合除了所述水相进一步含有3500μg的rhSOD外，重复实施例2。过滤后，脂质体渗余物包含约25％(大约每2ml渗余物含820μg)的rhSOD和约70％(大约每2ml渗余物含2200μg)的EPO，同时在滤液中检测到所述药物的余量。
该实施例表明，即使同时使用两种不同药物，也可以“过载”脂质体。在脂质体内部水性空间能够如所期望的那样吸收约25重量％的所提供的总rhSOD的同时，该脂质体还能够吸收大量(约70重量％)的第二药物，即EPO。这可能是由于所述第二药物和所述脂质膜中的EPG脂质组分之间的相互作用导致所述药物附着于所述脂质体膜的所述脂质组分上，加之在所述脂质体泡囊的水性内部的一定程度的被动包涵(此处没有分开定量)的缘故。
此处描述的实验以及进一步的试验(数据未示出)确证了根据本发明的这种主动负载相对于传统的含药物水相的被动包涵的优越性。事实上，本发明的主动负载方法特别是本发明的主动负载和被动负载相结合的方法所获得的脂质体，其负载药物量高达根据水相捕获体积理论上可能预期的量的200％。
从根据本发明的水相收获的高度浓缩的脂质体悬浮液，每毫升通常包含约0.5mg～2mg药物。所述脂质悬浮液随后可以重新稀释和/或配制成常规的固体、液体或半液体盖伦制剂和药用组合物，以用于口服或肠胃外应用，尤其是用于肌肉内、静脉内、皮下、经皮、粘膜内、鼻内或肺内施用。适宜的组合物可以为注射液、喷鼻剂、吸入液、乳膏、凝胶、软膏、栓剂和洗剂等形式，以用于局部或全身施用。
权利要求
1.一种用于药物释放的脂质体，所述脂质体包含分布在该脂质体内部水相中的至少一种所需药物分子，其特征在于，所述脂质体进一步包含附着于所述脂质体膜的任意一侧或两侧上的所述药物分子或其它药物分子。
2.根据权利要求1所述的脂质体，其中所述药物分子的存在量超过通过将该药物被动地包涵在水性内部但没有将该药物分子附着在所述膜上而获得的最大药物负载量。
3.根据权利要求1或2所述的脂质体，其中至少一部分所述药物分子通过药物和脂质分子之间的化学键共价连接到所述膜上，或者不是通过药物和脂质分子之间的化学键而是通过药物和脂质分子之间的附着力非共价地附着于所述膜上，所述附着力典型地包括药物和脂质分子之间的选自由范德华力、氢桥、静电力、亲水-疏水相互作用、亲合力以及极性相互作用组成的组中的至少一种附着力。
3.根据权利要求1或2所述的脂质体，其中所述附着是在脂质的反应性官能团和所述药物的官能团之间的附着。
4.根据权利要求3所述的脂质体，其中所述脂质的所述官能团是羟基或胆碱基团。
5.根据权利要求4所述的脂质体，其中所述羟基是多元醇残基的一部分。
6.根据权利要求5所述的脂质体，其中所述多元醇残基是选自由甘油残基和肌醇残基组成的组中的糖醇残基。
7.根据权利要求3～6任一项所述的脂质体，其中所述药物的所述反应性官能团是选自由磷酸残基、硫酸残基、碳酸残基和唾液酸残基组成的组中的酸性基团，而且，至少一部分所述药物附着于膜脂上，可选择的是，至少一部分所述药物通过酯键共价连接到所述脂质上。
8.根据权利要求7所述的脂质体，其中所述药物是糖蛋白或具有寡糖部分或多糖部分，所述糖蛋白或寡糖部分或多糖部分包含至少一个反应性唾液酸基团。
9.根据权利要求1～8任一项所述的脂质体，其中所述膜包含至少一种天然来源或非天然来源的脂质，该脂质选自由磷脂、糖脂、神经酰胺及这些脂质的衍生物组成的组。
10.根据权利要求9所述的脂质体，其中所述磷脂选自由鞘磷脂和甘油磷酯组成的组，所述鞘磷脂包括神经鞘磷脂，所述甘油磷酯包括卵磷脂、脑磷脂、心磷脂、磷脂酰肌醇和磷脂酰肌醇磷酸酯。
11.根据权利要求9或10所述的脂质体，其中所述糖脂选自由鞘糖脂和糖基甘油脂组成的组，所述鞘糖脂包括脑苷脂、神经节苷脂和硫脑苷脂，所述糖基甘油脂包括糖基甘油一脂和糖基甘油二脂。
12.根据权利要求1～11任一项所述的脂质体，其中所述膜包含摩尔比为7∶2∶1的二-棕榈酰基-磷脂酰基胆碱、胆固醇和卵磷脂酰甘油。
13.根据权利要求1～12任一项所述的脂质体，其中所述药物是促红细胞生成素。
14.一种药用组合物，该药用组合物包含权利要求1～13任一项所定义的负载药物的脂质体和药学上可接受的载体，并用于口服或肠胃外施用。
15.根据权利要求14所述的药用组合物，该药用组合物为注射液、喷鼻剂、吸入液、乳膏、凝胶、软膏、栓剂或洗剂的形式。
16.根据权利要求14或15所述的药用组合物，该药用组合物用于局部施用或全身肠胃外施用。
17.一种负载药物的脂质体的制备方法，所述脂质体包含分布在所述脂质体内部水相中的至少一种所需药物分子，并进一步包含附着于所述脂质体膜的任意一侧或两侧上的所述药物分子或其它药物分子，所述方法包括—提供在有机溶剂中的脂相，其中所述脂相包含至少一种脂质组分，其中每一个脂质分子具有至少一个反应性官能团；—提供一种水相，该水相含有缓冲液和溶解于其中的至少一种所需药物，其中至少一种药物具有能够附着于所述脂质的官能团上或与所述脂质的官能团发生化学反应的反应性官能团；—在允许形成脂质体的条件下，将所述脂相加入到所述水相中；—选择性地使所述水相进行环状循环并重复所述加入步骤，以提高所述脂质体吸收药物的效率；和—收获负载药物的脂质体，其中，至少一部分所述药物分子混合在所述脂质体内，而另一部分所述药物分子则附着于所述脂质体膜的任意一侧或两侧上。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述脂质的所述官能团是羟基或胆碱基团。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述羟基是多元醇残基的一部分。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述多元醇残基是选自由甘油残基和肌醇残基组成的组中的糖醇残基。
21.根据权利要求17～20任一项所述的方法，其中所述药物的反应性官能团选自由磷酸残基、硫酸残基、碳酸残基和唾液酸残基组成的组中的酸性基团。
22.根据权利要求17～21任一项所述的方法，其中在允许至少一部分具有反应性官能团的所述脂质与至少一部分具有反应性官能团的所述药物分子相互作用的条件下，将所述脂相加入到所述水相中。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述脂质的所述官能团是羟基，而所述药物的所述官能团是酸性残基，并且其中允许相互作用的所述条件包括在25℃至65℃的反应温度和6～8的所述水相的pH值的条件下，将所述脂相加入到所述水相中，于是至少一部分具有反应性官能团的所述药物分子附着于至少一部分具有官能团的所述脂质上，所述附着选择性地为通过酯化作用的共价连接。
24.一种负载药物的脂质体的制备方法，所述脂质体包含分布在该脂质体内部水相中的至少一种所需药物分子，并进一步包含附着于所述脂质体膜的任意一侧或两侧上的所述药物分子或其它药物分子，所述方法包括—提供在有机溶剂中或作为干燥膜的脂相，其中所述脂相包含至少一种脂质组分，其中每一个脂质分子具有至少一个反应性官能团；—提供包含缓冲液的第一水相；—提供包含缓冲液和溶解于其中的至少一种所需药物的第二水相，其中至少一种药物具有能够附着于所述脂质的官能团上或能够与所述脂质的官能团发生化学反应的反应性官能团；—在允许形成脂质体的条件下，合并所述脂相和所述第一水相；—在允许将至少一部分所述药物分子被吸收到所形成的脂质体中且允许至少一部分具有反应性官能团的所述脂质与至少一部分具有反应性官能团的所述药物分子相互作用的条件下，合并所形成的脂质体和所述第二水相，所述相互作用选择性地为化学反应；和—收获负载药物的脂质体，其中至少一部分所述药物分子混合在所述脂质体的水性内部，而另一部分所述药物分子则附着于所述脂质体膜的任意一侧或两侧上。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述脂质的所述官能团是羟基，而所述药物的所述官能团是酸性残基，允许相互作用的所述条件包括在25℃至65℃的反应温度和6～8的所述第二水相的pH值的条件下，合并所述脂质体和所述第二水相，并对所得脂质体悬浮液进行温育，直至至少一部分具有反应性官能团的所述药物分子附着于至少一部分具有官能团的所述脂质上，所述相互作用选择性地为化学反应，所述附着选择性地为通过酯化作用的共价连接。
26.根据权利要求25所述的方法，其中在温育期间或温育之后，对所述脂质体悬浮液进行进一步的处理以促进药物被吸收到所述脂质体中，所述处理优选选自由超声处理、电穿孔法、涡旋法和梯度驱动跨膜扩散法组成的组。
27.根据权利要求17～26任一项所述的方法，其中所述药物是糖蛋白或具有寡糖部分或多糖部分，所述糖蛋白或寡糖部分或多糖部分包含至少一个反应性唾液酸基团。
28.根据权利要求17～27任一项所述的方法，其中所述脂相包含天然来源或非天然来源的至少一种脂质，该脂质选自由磷脂、糖脂、神经酰胺及这些脂质的衍生物组成的组。
29.根据权利要求17～28任一项所述的方法，其中所述脂相包含摩尔比为7∶2∶1的二-棕榈酰基-磷脂酰基胆碱、胆固醇和卵磷脂酰甘油。
30.根据权利要求17～29任一项所述的方法，其中在加压和基本上没有剪切力的条件下，使用允许立即而自发地形成脂质体的交叉流注射技术，将所述脂相加入到所述水相中。
31.根据权利要求17～30任一项所述的方法，其中在将所述脂相加入到所述水相之前，使至少一部分所述脂相的脂质附着于至少一部分所述所需药物分子上，所述附着选择性地为共价连接。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述共价连接是酯键键合。
33.根据权利要求17～32任一项所述的方法，其中所述所需药物是促红细胞生成素。
全文摘要
本发明涉及用于药物释放的过载脂质体，其中所述脂质体包含分布在该脂质体内部水相中的至少一种所需药物分子，而且其中所述脂质体进一步包含附着于所述脂质体膜的任意一侧或两侧上的所述药物分子或其它药物分子。更具体地说，本发明涉及这样的脂质体，其中至少一部分所需药物分子具有与存在于至少一种脂质组分中的官能团反应的官能团，而且其中所述药物通过化学键(例如通过脂质分子的羟基与所述药物的酸性残基的酯键)共价连接于所述膜脂上。在一个优选的实施方式中，所述的所需药物是诸如促红细胞生成素等糖蛋白。本发明进一步涉及所述脂质体的制备方法以及包含所述脂质体的药用组合物。
文档编号A61K38/18GK1960706SQ200580016677
公开日2007年5月9日 申请日期2005年5月24日 优先权日2004年5月24日
发明者赫尔曼·卡廷格尔, 安德拉希·瓦格纳, 卡罗拉·沃拉尔-乌尔, 雷娜塔·库纳特, 斯特凡尼·施特罗巴赫 申请人:波利门科学生物免疫研究有限公司