具有降脂性能的化合物的制作方法

专利名称：：具有降脂性能的化合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种用改性电子转移剂降低LDL胆固醇、甘油三酯和总胆固醇等一种或多种血液脂质水平的治疗方法。
背景技术：
：本说明书在提及或讨论某篇科技文献、某种科学理论或某个知识点时，并不代表承认该科技文献、科学理论或知识点或其任意组合在优先权日已公开、为公众所知、属于公知常识，或者与试图解决本说明书所涉及技术问题的过程相关。虽然以下内容涉及心血管疾病，但应当理解，这些内容仅作说明之用，本发明除涉及心血管疾病外，还同样涉及与脂质水平升高有关的任何病症。心血管疾病(CVD)包括心脏病和中风，它是导致西方国家人口死亡的大敌。一般认为存在很多致病因素，包括血管平滑肌细胞(SMC)过度增殖、总胆固醇增加和低密度脂蛋白(LDL)胆固醇减少。虽然干预治疗时，一般会最先建议患者改变生活方式，如调整饮食、加强锻炼，但大多时候药物治疗仍然必不可少，而且也有一定保障。人们常认为心脏病和心血管疾病是同一种疾病，其实不然，它们涉及身体不同部位。心脏病仅指心脏和心脏内血管系统疾病，心血管疾病则指心脏和人全身(如脑、腿和肺)血管系统(动脉、毛细管、静脉)疾病。这里"心"是指心脏，"血管"是指血管系统。心脏比拳头稍大一点，是一个强力肌肉泵。它向外持续泵血，通过循环系统的弹性管网络，使血液流经全身。循环系统包括两个主要器官心脏和肺以及血管(动脉、毛细管和静脉)。动脉和毛细管将富含氧和营养物质的血液，从心肺运送到身体各部位，静脉又将氧和营养物质耗尽的血液送回到心脏和肺。心脏和血管问题不是短时间内产生的，而是随时间推移，细胞、脂肪和胆固醇(斑块)不断增加，逐渐将负责向心脏和大脑运送血液的动脉阻塞。由于动脉阻塞，流向心脏的血流越来越少，最后导致心脏病发作。而中风则由于血栓引起大脑缺血或者血管破裂引起脑出血所致。心脏病和心血管疾病有很多种，以下儿种最普遍冠状心脏疾病(冠状动脉疾病)；心绞痛；中风；高血压；心力衰竭。很多因素易导致人患心脏病和心血管疾病，往往危险因素(或增加危险的因素)越多，患心脏病和心血管疾病的机率就越大。危险因素包括年龄；吸烟(主动或被动吸烟)；高血压；高血脂；超重；糖尿病。有些因素不能人为控制，如年龄、家族病史和种族，但吸烟、高血压和高血脂这三大危险因素是有可能控制的。培养良好的生活习惯，如摄取低饱和脂肪和低胆固醇食物，定期体育锻炼，会降低血压，使血糖和血脂保持正常水平。胆固醇是脂类物质，由肝产生，遍布全身各个部位，用来形成细胞膜、激素、维生素D和帮助脂肪消化的胆汁酸。血液中只需少量胆固醇即可满足身体需要，而且身体所需的所有胆固醇均由肝提供。血液中也会积累胆固醇。从肉类、全脂奶制品、蛋黄、家禽和鱼肉等动物食品中摄取过多胆固醇能升高胆固醇水平，而膳食中饱和脂肪是导致胆固醇水平升高的主要元凶。胆固醇包在脂蛋白中，随血液流动。脂蛋白包含两类低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)，由于LDL会不断积聚，阻塞动脉，所以常被称为"坏"胆固醇，而HDL会帮助清除血液中胆固醇，防止胆固醇堆积、阻塞动脉，所以被称为"好"胆固醇。通常在改变生活方式时，会根据需要同时服用降胆固醇药物。降胆固醇治疗主要是降低LDL水平，减小心脏病或心力衰竭的发病率。降胆固醇药物包括他汀类、胆酸螯合剂、烟酸和苯氧酸等药，它们各有优点、副作用和注意事项。药物种类通用名和商标名功效副作用和注意事项<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>*所有降胆固醇类药物(胆固醇吸收抑制剂可能除外)都可能导致肝功能异常。虽然这些降胆固醇药物在降低心脏病危险中发挥重要作用，但都有其局限性，因为胆固醇达到所需水平后，仍要不定期服药以维持该水平。所以就需要有一种降脂药物，不仅副作用要小于现有药物，而且不会产生药物依赖性。生育酚a-生育酚(维生素E)水平偏低与冠状心脏病发病率增加有关。相反，增加(x-生育酚摄入量能预防心脏病。一般认为，维生素E是一种抗氧化剂，它能阻止LDL氧化，防止动脉粥样硬化形成。研究还发现，维生素E之所以能预防动脉粥样硬化斑块，可能还存在非抗氧化机理，包括抑制平滑肌细胞增殖、抑制单核细胞一内皮黏附、抑制单核细胞释放活性氧和细胞因子，以及抑制血小板粘附和聚集。但使用维生素E治疗动脉粥样硬化的临床试验结果尚不明朗。所以，目前动脉粥样硬化临床治疗中并未使用维生素E添加剂。国际专利申请W003/026673中记载，增加体内生育酚磷酸酯等维生素含量，有可能缓解或治疗冠状动脉疾病、动脉粥样硬化和糖尿病等炎症，但文中没有提到降低血液中胆固醇等脂质水平。发炎过程包括一整套复杂反应，但并不包括脂肪代谢、胆固醇摄入等反应过程。国际专利申请W02004/064831中也记载了生育酚磷酸酯，文中提到生育酚磷酸酯能抑制单核细胞/巨噬细胞增殖、平滑肌细胞增殖、CD36受体表达和氧化型LDL摄入，但没有提到降低血液中胆固醇等脂质水平。大量研究显示，CD36在阿尔茨海默氏病中会促使积聚蛋白应答反应改变，并促使动脉粥样硬化形成。这些过程均与脂代谢无关，例如，疟疾和阿尔茨海默氏病治疗药物均针对CD36表达起作用，但并不改变脂质状况。
发明内容目前的研究意外发现，电子转移剂磷酸酯衍生物降低下述一种或多种血脂水平的效果优于非磷酸化电子转移剂LDL胆固醇甘油三酯，以及总胆固醇。本发明的一个方面是提供一种降低血液脂质水平的治疗方法，所述脂肪选自LDL胆固醇、甘油三酯、总胆固醇及其混合物，该治疗方法包括投用有效量的一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物。本领域的技术人员能够理解，本发明的治疗方法将应用于一种或多种血液脂质(LDL胆固醇、甘油三酯和总胆固醇)水平升高相关性疾病的治疗。这类疾病例如包括但不限于心血管疾病、动脉粥样硬化、糖尿病、慢性肾病、原发性和继发性高脂血症和血脂异常、视网膜病、肝脾肿大和黄色瘤。所以，本发明包括一种缓解疾病症状、治疗或预防疾病的方法，所述疾病选自心血管疾病、动脉粥样硬化、糖尿病、慢性肾病、原发性和继发性高脂血症和血脂异常、视网膜病、肝脾肿大、黄色瘤和其组合，该方法包括向上述疾病患者或有患上述疾病危险的对象投用有效量的一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物。另一方面，本发明提供一种药物组合物，用于降低血液脂质水平，所述脂质选自LDL胆固醇、甘油三酯、总胆固醇及其混合物，该组合物包括有效量的一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物。再一方面，本发明提供有效量的一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物和适合的载体或稀释剂在制造降低血液脂质水平药物中的应用，所述脂质选自LDL胆固醇、甘油三酯、总胆固醇及其混合物。又一方面，本发明提供一种降低血液脂质水平的治疗方法，所述脂质选自LDL胆固醇、甘油三酯、总胆固醇及其混合物，该方法包括使有效量的一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物释放的步骤。这方面的一个实施例中，所述有效量的一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物以前药形式释放。所述对象是动物较佳，所述动物是人尤佳。本文中"有效量"是指所使用的量足以降低一种或多种血液脂质(LDL胆固醇、甘油三酯和总胆固醇)水平。本领域的技术人员能够理解，该使用量依不同患者而定，通常根据具体患者的临床用药经验确定。本文中"电子转移剂"是指一类可被磷酸化，非磷酸化形式下能接受一个电子形成较稳定分子基团，或者接受两个电子以参与可逆氧化还原系统的化学物质。可被磷酸化的电子转移剂类化合物例如包括羟基苯并二氢吡喃，其包含a、(3、y、5-母育酚对映体和外消旋体；对苯二酚(维生素Kl和辅酶Q的还原形式)；羟基类胡萝卜素，其包含维生素A;维生素D2和维生素C。电子转移剂选自生育酚和其他母育酚、维生素A、维生素K1及其混合物较为理想。电子转移剂选自母育酚及其混合物更佳。母育酚包括6-羟基-2-甲基苯并二氢吡喃衍生物的所有异构体(见下式)，其中K、R2和R3可以是h或甲基，即a-5，7，8-三甲基、卩-5,8-二甲基、y-7，8-二甲基和5-8-甲基衍生物。生育酚中R4被4-8-12-三甲基十三烷基取代，包括各种立体异构体和光学异构体(手性中心用*标出)。在生育三烯酚中，&被4-8-12-三甲基十三烷基-3-7-ll三烯取代，第2位可以具有R或S立体异构体的立体活性。电子转移剂选自a-生育酚、S-生育酚、y-生育酚、a-生育三烯酚、5-生育三烯酚、Y-生育三烯酚及其混合物最为理想。本文使用的术语"磷酸酯衍生物"是指其中氧原子与磷酸基团中磷原子共价结合形成c-o-p键的化合物，这里的氧原子通常来自电子转移剂中的羟基氧原子。该术语包括酸式磷酸化电子转移剂、磷酸酯盐(包含钠、镁、钾和钙等金属盐)，以及磷酸质子被乙基、甲基或磷脂酰等其他基团所取代的任何磷酸酯衍生物。该术语包括磷酸酯衍生物混合物，尤其是指通过磷酸化反应得到的磷酸酯衍生物混合物，以及各磷酸酯衍生物本身。例如，该术语既可以包括单生育酚磷酸酯(TP)和二生育酚磷酸酯(T2P)混合物，也可以只包括TP或T2P。国际专利申请PCT/AU01/01475中记载了可适用的混合物。比较理想的是，一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物选自单生育酚磷酸酯、二生育酚磷酸酯、单生育三烯酚磷酸酯、二生育三烯酚磷酸酯及其混合物。一优选实施例中，一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物是一种或多种单生育酚磷酸酯、二生育酚磷酸酯、单生育三烯酚磷酸酯和二生育三烯酚磷酸酯的混合物。如果要侧重考虑提高水溶性等其他特性时，可能就要使用磷脂等磷酸酯衍生物。磷脂酰衍生物是有机的氨基烷基磷酸酯衍生物。用分子式为R^N(CH^0H的胺可制得这些衍生物，其中n是整数1-6，R^PR2可以是H或不多于3个碳原子的短链垸基。K和R2可以相同或不同。磷脂酰衍生物按以下方法制备用磷酸本体取代电子转移剂的羟基质子，然后与乙醇胺或N，N'-二甲基乙醇胺等反应生成电子转移剂磷脂酰衍生物。磷脂酰衍生物的一种治疗制剂的制备方法是使用吡啶或三乙胺等碱性溶剂与三氯氧磷反应得到中间产物，中间产物再与胺的羟基反应，得到相应的磷脂酰衍生物，例如磷脂酰胆碱(PcholylP)生育酚磷酸二氢酯。如果要侧重考虑改善稳定性或释放性等其他特性时，还可以使用电子转移剂磷酸酯衍生物配合物。所谓"磷酸酯衍生物配合物"是指电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物与一种或多种选自两性表面活性剂、阳离子表面活性剂、具有氮官能团的氨基酸和富含这些氨基酸的蛋白质(国际专利申请PCT/AU01/01476中有记载，全文通过引用并入本文)的配合剂的反应产物。所述蛋白质中精氨酸、组氨酸或赖氨酸数量例如分别占整个蛋白质的至少1/62、1/83或1/65，各类酪蛋白就属于这类蛋白质。其他蛋白质例如包括胰岛素、甲状旁腺激素(PTH)、胰高血糖素、降钙素、促肾上腺皮质激素(ACTH)、催乳素、干扰素-oc、干扰素-p、干扰素i、促黄体生成激素(LH)(又称促性腺激素释放激素)、卵泡刺激素(FSH)和集落刺激因子(CSF)。下表中列出了上述大部分蛋白质中氨基酸的位置。蛋白质中氨基酸氨基酸占总氨基酸比例胰岛素110arg51:22his21:55lys21:55PTH84arg51:17his00lys51:17胰高血糖素180arg161:11his41:45lys101:18降转素93arg61:16his31:31lys51:19ACTH41arg31:14his11:41lys1:10催乳素arghislys22012911181311干扰素-a、干扰素-phislys133727198319干扰素，axghislys166822121838arghislys92527184613FSHEirghislys129529266514CSFEirghislys144636244824GH域AOD960416arg21:8优选配合剂选自精氨酸、赖氨酸和三取代胺，分子式例如为她Y其中，R1选自直链或支链C6-C22混合垸基及其羰基衍生物，R2和W各选自H、CH2C00X、CH2CH0HCH2S03X、CH2CH0HCH20P03X、CH2CH2C00X、CH2C00X、CH2CH2CHOHCH2S03X或CH2CH2CH0HCH20P03X，如果R2和W不是H，则X是H、Na、K或链烷醇胺；以及W是RC0时，则W可以是CH3，R3可以是(CH2CH2)N(C孔0H)-H2CH0P03，或者R2和R3都可以是N(CH2)2N(C2H40H)CH2C00—。优选配合剂包括精氨酸、赖氨酸或亚氨基二丙酸月桂酯，其中碱性氮中心和磷酸酯配合形成稳定的配合物。给人或动物投用的电子转移剂磷酸酯衍生物可以是各种剂型，如补充剂、肠道喂养、非经肠道剂、栓剂、口服剂、肺鼻内释药剂、贴剂和乳膏等皮肤释药剂。例如，电子转移剂磷酸酯衍生物可以是口腔、非经肠道给药剂型，这些剂型包括片剂、粉剂、咀嚼片、胶囊剂、口服混悬剂、混悬剂、乳化剂或液体剂、儿童制剂、肠内喂养、保健品和功能性食PI该剂型可进一步包括制剂中常用的任何添加剂，如淀粉或高分子粘结剂、甜味剂、着色剂、乳化剂、包衣剂等。本领域技术人员熟悉的其他合适添加剂亦可。在一实施例中，所述剂型包有一层如国际专利申请PCT/AU02/01003(全文通过引用并入本文)所述的肠衣。在另一实施例中，所述剂型是一种如国际专利申请PCT/AU02/01003(全文通过引用并入本文)所述的局部制剂。所述剂型可以含有其他药物化合物，只要该化合物不抑制本发明电子转移剂磷酸酯衍生物活性即可。所述其他药物化合物可以在本发明的一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物之前、同时或之后投用，其他药物化合物最好是治疗心脏疾病和心血管疾病的药物，以及治疗高脂血症或血脂异常化合物。若选自胆固醇吸收抑制剂，如依泽替米贝；胆固醇酯转移蛋白抑制剂，如torcetrapib;其他增加HDL类药物、他汀类药物、他汀类磷酸酯衍生物及其混合物则更佳。比较适合的他汀类药物包括普伐他汀、洛伐他汀和阿托伐他汀及其磷酸酯。投用对象最好是动物，若是哺乳动物更佳，是人则最佳。现根据以下附图对本发明各实施例/方面进行说明。图l:本发明实施例1在2周后的结果；图2:本发明实施例l在4周后的结果；图3:本发明实施例2的结果。具体实施方式现根据以下非限制性实施例对本发明各实施例/方面进行说明。实施例l本实施例用来评价现有CVD载脂蛋白E(AP0E)小鼠模型中生育酚磷酸酯混合物的抗CVD作用。本例中通过是否将升高的血浆胆固醇、甘油三酯和LDL水平降低来确定抗CVD作用。心血管研究中广泛使用APOE敲除小鼠模型，该模型能模拟人部分疾病的许多临床特性。AP0E敲除小鼠在大约6个月鼠龄时循环血脂水平开始升高。给小鼠喂高脂肪、高胆固醇食物(即21%脂肪、0.15%胆固醇)，使CVD急剧升高，以便尽快观察相关症状。方法动物从澳大利亚佩思动物资源中心获得雄性APOE敲除小鼠(15-20g)，提供不含维生素E，含脂肪21%和胆固醇0.15%的粒状鼠禾良(GlenForrestStockfeeders，W.A.,Australia生产)，关在标准实验室笼中，自然光线，实验前先让它们适应至少7天。本研究中，按高脂肪、高胆固醇饮食给AP0E小鼠连续喂养8周，之后每天经口灌服载体(1%CMC)、生育酚乙酸酯(TA)100mg/kg，或者TP混合物(TPm)33.25、66,5或133mg/kg，持续治疗4周。治疗期间，定期采血，测定小鼠CDV改善状况，以测定脂质水平，并通过主动脉弓切片检测疗程结束时是否形成斑块。试剂生育酚乙酸酯(M)(Sigma目录号T-3001)生育酚磷酸酯混合物(77^)，含单生育酚磷酸酯和二生育酚磷酸酯，比例为2:1(自己生产，批号SGNaTPm/21-10-04)羧甲基纤维素(Sigma目录号C-5678)Milli-Q水(自己提供)制备用1%羧甲基纤维素(CMC)按以下浓度制备TPm和TA溶液TA，15mg/ml;TPm，4.99、9.98和19.95mg/ml，TA按100mg/kg，TPm按33.25、66.5和133mg/kg的剂量给小鼠投用。制备这些溶液时，取适量各化合物加到P/。CMC中，然后放到装有温水(约5(TC)的水浴型超声波破碎仪中运行15分钟。133mg/kgTPm与100mg/kgTA的剂量大致相当，所以66.5和33.25mg/kg分别相当于TA100mg/kg剂量的50%和25%。用药小鼠每周称重，各化合物剂量根据投用当周的小鼠重量计算，每天早上7:30am-11:00am用无菌口饲钢针灌服。采血将小鼠固定住，从尾部采集大约50pl血，装在C即ijectTM管中，然后8，000xg离心，收集血浆，进行脂质分析(交由GribblesPathology公司测定总胆固醇、甘油三酯、HDL和LDL)。实验开始前，先分别在单独饮食第4周结束时(化合物治疗开始前)、治疗期第2周结束时给小鼠抽血(先期抽血)。治疗期结束后，用C02将小鼠窒息而死，然后直接从心脏取血。经高脂肪和高胆固醇饮食喂养的APOE小鼠在饮食期间，其血浆胆固醇、LDL和甘油三酯水平升高2-3倍，这一水平应该非常高，因为在没有给这些小鼠喂致动脉粥样硬化食物时，其空腹脂质就已达到很高水平。这个水平应该算是一个好起点，有助于评价TPm对高脂质水平的降低效果。血浆甘油三酯分析使用甘油三酯测定试剂盒(TriglycerideDeterminationKit)(Sigma，目录号TR0100)检测血浆甘油三酯。测定过程包括用甘油三酯脂酶水解得到甘油和游离脂肪酸，然后利用以下酶联反应测定水解产生的甘油。脂蛋白脂酶甘油三酯------------------〉甘油+脂肪酸甘油激酶甘油+ATP---------------->甘油-1-磷酸酯+ADP甘油磷酸酯氧化甘油-卜磷酸酯--------_>磷酸二羟基丙酮+H202酶过氧化物酶H202+4-氨基安替比林+SodiumN-乙基-N-(3-磺丙基)间位氨基苯甲醚--------------->醌亚胺染料+h20试剂盒中的试剂根据产品使用说明配制。将游离甘油对照试剂和样品置于室温。准备一套试管，分别装空白、对照和样品。向各管中加入O.8ml游离甘油试剂，然后分别加10(il水、甘油对照或血浆。上下倒转，使样品混匀，在37。C放5分钟。测定540nm吸光度，作为起始值(IA)。之后向各管内加入0.2ml甘油试剂，再上下倒转混匀，然后再37。C、5分钟。最后测定540nm吸光度终值(FA)。血浆中总甘油三酯浓度计算如下tt廿油一而匕一^a样品.fa空白^对照浓度总甘油二酉日一(fa对照-fa空白)血浆胆固醇分析使用工nfinityTM胆固醇试剂盒(ThermoElectronCorp.生产，目录号TR13521)测定血浆胆固醇。反应过程如下胆固醇酯酶胆固醇酯---------------------->胆固醇+脂肪酸胆固醇氧化酶胆固醇+o2------------------------〉4一胆甾烯酮+H202过氧化物酶2H202+羟基苯甲酸+4-氨基安替比林-----------〉醌亚胺染料+4H20(1)胆固醇酯在胆固醇酯酶作用下水解为胆固醇和游离脂肪酸。(2)游离胆固醇(包括原先存在的胆固醇)在胆固醇氧化酶作用下氧化为4-胆甾烯酮和过氧化氢。(3)过氧化氢与HBA和4-氨基安替比林结合形成发色团(醌亚胺染料)，可在500-550nm下测定。用CholesterolReagentTM试剂处理血浆(1:100)。例如，将3|^1样品和300plCholesterolReagentTM试剂加到微孔板中，37°C、5分钟。用试剂盒中的标定试剂(calibrator)操作。总胆固醇计算公式如下举例说明校验仪吸光度二0.35未知吸光度二0.25校验仪数值二7.0mmol/L胆固醇=0.25/0.35X7.0=5.0讓ol/L血浆HDL分析使用InfinityTMHDL胆固醇试剂盒(ThermoElectronCorp.生产，目录号TR39601)测定HDL。将血浆(4^1)加到微孔板中，与300^il试剂l在37。C温育5分钟，然后加入100(al试剂2，再温育3分钟。之后在600nm下测定吸光度，最后仍使用胆固醇试剂盒中提供的标定仪进行计算。血浆LDL分析使用InfinityTMLDL胆固醇附加试剂盒(CholesterolPlusReagentKit)(ThermoElectronCorp.生目录号3365-030)测定LDL。将血浆(4^1)加到微孔板中，与300nl试剂l在37i:温育5分钟，然后加入100pl试剂2，再温育5分钟。之后在600nm下测定吸光度，最后仍使用胆固醇试剂盒中提供的标定仪进行计算。统计分析结果用平均值±SD表示。采用Studentt-检验法确定经TA或TPm治疗的小鼠与未治疗或载体对照组之间是否存在显著性差异。本试验中，P<0.05(*)视为有显著性。结果与讨论图1:治疗2周后结果。图2:治疗4周后结果。按33。25mg/kg剂量给小鼠投用TPm2周，该治疗小鼠血浆中总胆固醇和LDL浓度与未治疗或单使用载体治疗的小鼠相比，显著减小。治疗4周后，治疗小鼠血浆中甘油三酯水平与未治疗或单使用载体治疗的小鼠相比仍显著降低。这些结果暗示，TPm(33.25胆固醇=标定试剂浓度mg/kg)有可能将血液中升高的胆固醇、甘油三酯和LDL降低。实施例2本实施例用来评价生育酚磷酸酯混合物(TPm)(单生育酚磷酸酯和双生育酚磷酸酯)对雄性AP0E缺陷小鼠中动脉粥样硬化病灶进展的影响方法将28只小鼠分成4组2个对照组、1个生育酚乙酸酯(TA)组(按150mgTA/kg喂养)和1个TPm组(按200mgTPm/kg喂养，含7%脂肪)饮食"诱导期"——诱导期包括治疗期的前16周。这一期间，给小鼠喂低维生素E粒状鼠粮(每克食物中维生素E少于20mg，含总脂肪7%)、加以改进的标准A頂93G啮齿动物食物(SF05-040，Specialtyfeeds,GlenForrest,WAAustralia)。对照组动物仅喂上述食物，而TA组另外再按150mg/kg剂量喂给TA，TPm组按200mg/kg剂量喂给TPm。TA和TPm分别按平均21mg/kg'体重和26mg/kg'体重的剂量释放。26mg/kgTPm相当于TA中的生育酚剂量。"激发期"——这一时期包括治疗期的后8周。该期间给小鼠喂低维生素E、高脂肪(21%)、高胆固醇(0.15%)的啮齿动物专用粒状食物(HFHC;SF04-055鼠粮在标准SF00-219鼠粮基础上作了改动，每克食物中维生素E少于20mg;Specialtyfeeds,GlenForrest,WA:Australia)。4组动物的饮食方案治疗组0-16周饮食16-24周饮食对照(C24)SF05-040SF05-040对照(C16/8)SF05-040SF04-055TASF05-040+TA(150mgTA/kg)SF04-055+TA(150mgTA/kg)TPmSF05-040+TPm(200mgTPm/kg)SF04-055+TPm(200mgTPm/kg)两个对照动物组在为期24周的整个治疗期间，只有1组提供SF04-055、HfflC饮食，而另1组仍提供SF05-040粒状鼠茅良(仅7%脂肪)，目的是确定HFHC饮食对所测定的各种动脉粥样硬化参数的作用，以及评估各种化合物治疗是否对正常饮食动物有益处。TA治疗动物按150mg/kg剂量喂给TA，给TPm治疗动物按200mg/kg剂量喂给TPm。TA和TPm分别按平均21mg/kg'体重和26mg/kg'体重的剂量释放。26mg/kgTPm相当于TA中的生育酚剂量。诱导期期间，对照组大鼠得轻微高胆固醇血症，出现动脉粥样硬化病灶。用TPm治疗16周后，与对照组相比，治疗组小鼠的总胆固醇降低34%(11.44+/-1.37:17.38+/-1.47咖ol/L)、甘油三酯降低51%(0.99+/-0.14:2.00+/-0.58腿ol/L)和LDL-C降低44%(4.67+/-0.70:8.38+/-0.76mmol/L)，与对照组动物存在显著性差异，远大于用TA治疗所得结果。激发期之后，对照组小鼠患有严重的高胆固醇血症和晚期动脉粥样硬化病灶。TA治疗小鼠的血浆脂质水平没有出现显著降低或病灶退化迹象，虽然病灶区平均縮小12%(没有显著性)。但是，TPm治疗组的总胆固醇降低15%(43.8+/-4.38:37.08+/-5.15咖ol/L)、甘油三酯降低28%(1.63+/-0.22:2.27+/-0.20咖ol/L)和LDL-C降低16%(15.02+/-2.61:17.95+/—1.51腿ol/L)，以及主动脉病灶形成区显著縮小(58%)。表l:诱导期和激发期期间小鼠总胆固醇水平比较(平均值±SD;mmol/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>#表示仍按HFHC饮食喂养(治疗期的后8周)的对照组小鼠中血浆胆固醇水平要显著高于正常饮食的对照组小鼠(P<0.05)。*表示与对照组动物相比有显著性(P<0.05)表2:本试验中小鼠在诱导期和激发期期间的甘油三酯水平比较(平均值±SD;腿ol/L)试验组(n)基准诱导期激发期周01624对照组SF05-040饮食(n=8-12)1.73±0.13(n=12)1.10±0.25(n=12)1.45±0.21(n=8)对照(n=8)1.18±0.282.00±0.582.27±0.20#TA(n=8)1.75±0.251.30±0.22*2.23±0.29TP(n=8)1.54±0.380.99±0.14*1.63±0.22*#表示仍按HFHC饮食喂养(治疗期的后8周)的对照组小鼠中血浆胆固醇水平要显著高于正常饮食的对照组小鼠(P〈0.05)。*表示与对照组动物相比有显著性(P〈0.Q5)表3:本试验中小鼠在诱导期和激发期期间的甘油三酯水平比较(平均值±SD;mmol/L)试验组(n)基准诱导期激发期周01624对照组SF05-040饮食(n=8-12)6.83±0.54(n=12)7.65士0.54(n二12)5.20±0.96(n=8)对照组(n=8)8.08±1.208,38±0.7617.95±1.51ttTA(n=8)8.85±1.666.51±0.7118.98±2.29TP(n=8)7.84±1.514.67±0.70*15.02±2.61#表示仍按HFHC饮食喂养(治疗期的后8周)的对照组小鼠中血浆胆固醇水平要显著高于正常饮食的对照组小鼠(P〈0.05)。*表示与对照组动物相比有显著性(P〈0.05)表4:治疗期结束时动脉粥样病灶区(平均值士SD，％病灶覆盖面)试验组(n)%病灶覆盖面对照组SF05-040饮食(n=8)8.9±1.7对照C16/8(n=8)10.7±1.3TA(n=8)9.4±1.1TPm(n=8)4.5±1.3**表示与对照组动物相比有显著性(P<0.05)图3显示用油红0染色(Oilred0staining)法确定的主动脉病灶形成情况。用油红0对主动脉根部、胸部和腹部主动脉染色(脂肪染成红色)，结果显示，血管动脉粥样硬化病灶中有大量脂肪沉积。表4显示了各治疗组在24周治疗期结束时的病灶大小。诱导期结束时(第16周)各小鼠的动脉粥样病灶覆盖面平均约占主动脉区的5%(未列出数据)。仍采用诱导饮食(仅有7%脂肪)的小鼠在第24周结束时，病灶区增加8.9%。在最后8周采用致动脉粥样饮食的小鼠的动脉粥样病灶覆盖面平均约占主动脉区的10.7%，而TA治疗组相应数据为9.4%，TPm治疗组为4.5%。可以看到，与仍采用同样饮食喂养的对照组相比，TA治疗可减小动脉粥样硬化病灶达12%(没有统计学显著性)，而TPm治疗可显著减小病灶形成达58%。结论试验结果显示，经TPm治疗的动物体内脂质水平(LDL、总胆固醇和甘油三酯)显著降低，这表明TPm治疗可治疗高血脂异常病及相关疾病。另外，结果还显示，经TPm治疗的APOE缺陷小鼠体内动脉粥样病灶尺寸显著减小，表明TPm可治疗或减慢这类鼠的动脉粥样硬化病灶的进展。本说明书和权利要求书所用的"包括"一词和其形式并不限制本发明以排除任何变更或补充。对本领域的技术人员来说，对本发明作出修改和改进是很显而易见的。所以这些修改和改进仍在本发明的范围内。权利要求1.一种降低血液脂质水平的治疗方法，所述脂质选自LDL胆固醇、甘油三酯、总胆固醇及其混合物，该治疗方法包括投用有效量的一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物；其中该电子转移剂磷酸酯衍生物不是抗坏血酸-生育酚磷酸酯。2.根据权利要求1所述的治疗方法，其中，所述电子转移剂选自母育酚、维生素A、维生素K1及其混合物。3.根据权利要求2所述的治疗方法，其中，所述电子转移剂选自母育酚和其混合物。4.根据权利要求3所述的治疗方法，其中，所述电子转移剂选自cx-生育酚、5-生育酚、y-生育酚、oc-生育三烯酚、S-生育三烯酚、Y-生育三烯酚及其混合物。5.根据权利要求4所述的治疗方法，其中，所述电子转移剂磷酸酯衍生物选自单生育酚磷酸酯、二生育酚磷酸酯、单生育三烯酚磷酸酯、二生育三烯酚磷酸酯及其混合物。6.根据权利要求5所述的治疗方法，其中，所述电子转移剂磷酸酯衍生物是单生育酚磷酸酯和二生育酚磷酸酯的混和物。7.根据权利要求6所述的治疗方法，其进一步包括投用一种或多种不会抑制本发明电子转移剂磷酸酯衍生物活性的其他药物化合物。8.根据权利要求7所述的治疗方法，其中，其他药物化合物选自胆固醇吸收抑制剂、胆固醇酯转移蛋白抑制剂、增加HDL药物化合物和他汀类药物及其磷酸酯衍生物和其混合物。9.一种降低血液脂质水平的治疗方法，所述脂质选自LDL胆固醇、甘油三酯、总胆固醇及其混合物，该治疗方法包括投用有效量的一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物前药；其中该电子转移剂磷酸酯衍生物不是抗坏血酸-生育酚磷酸酯。10.—种缓解疾病症状、治疗或预防疾病的方法，所述疾病选自心血管疾病、动脉粥样硬化、糖尿病、慢性肾病、原发性和继发性高脂血症和血脂异常、视网膜病、肝脾肿大、黄色瘤和其组合，该方法包括向上述疾病患者或有患上述疾病危险的对象投用有效量的一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物。11.有效量的一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物和适合的载体或稀释剂在制造降低血液脂质水平药物中的应用，所述脂质选自LDL胆固醇、甘油三酯、总胆固醇及其混合物，其中该电子转移剂磷酸酯衍生物不是抗坏血酸-生育酚磷酸酯。12.—种用于降低血液脂质水平的药物组合物，所述脂质选自LDL胆固醇、甘油三酯、总胆固醇及其混合物，该组合物包括有效量的一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物，其中该电子转移剂磷酸酯衍生物不是抗坏血酸-生育酚磷酸酯。全文摘要本发明提供一种降低血液脂质水平的治疗方法，所述脂质选自LDL胆固醇、甘油三酯、总胆固醇及其混合物，该治疗方法包括投用有效量的一种或多种电子转移剂的一种或多种磷酸酯衍生物。文档编号A61K31/07GK101132789SQ200680006932公开日2008年2月27日申请日期2006年3月3日优先权日2005年3月3日发明者E·奥古,R·利比来凯,S·M·韦斯特申请人:生命健康科学有限公司