专利名称：含藤黄酸的可注射胶束制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及天然药物和药物制剂领域，具体涉及藤黄酸的水溶性或可注射型制剂，公开了以N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖作为助溶剂或与N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖形成胶束的藤黄酸的注射用制剂。
背景技术：
藤黄(gamboge)是由藤黄科植物藤黄树(Garcinia hanbaryi)树脂中得到的提取物，含有藤黄酸(gambogic acid)、新藤黄酸(neogambogic acid)、别藤黄酸(allogambogic acid)等成分。藤黄酸是藤黄的主要活性成分，对多种肿瘤均有明显的抑制作用。
由于藤黄酸难溶于水，目前报道的藤黄酸注射剂主要是使用硼酸溶液配制的。CN1452960A公开了一种通过添加L-精氨酸、葡甲胺、赖氨酸等助溶剂制备注射用藤黄酸制剂的方法；CN1391892A也是通过添加L-精氨酸助溶制备藤黄酸的冻干制剂；CN1513448A通过添加聚氧乙烯蓖麻油、吐温等增溶剂制备藤黄酸的注射制剂，CN1718183A使用L-精氨酸、葡甲胺、赖氨酸等作为助溶剂以制备藤黄酸冻干制剂。长期使用这些增溶剂或助溶剂，可引起了一系列的不良反应如过敏、肾毒性、神经毒性、心血管毒性等，或者需要较大用量才能取得稳定的和有效剂量的增溶效果。
发明人在前期的研究中，将藤黄酸制备成聚乙二醇前药，有效提高了藤黄酸的水溶性。药物达到体内后，藤黄酸与聚乙二醇分离，发挥药效。
发明人在对壳聚糖衍生物的研究中发现，壳聚糖衍生物特别是N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖具有一定的增溶作用，对于某些难溶性药物如紫杉醇、环孢素等增溶效果良好。CN1439655A公开了这些技术。
发明内容
本发明公开了一种以N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖作为增溶剂的藤黄酸可注射制剂。
发明人惊异地发现N-辛基O-磺酸基-壳聚糖对藤黄酸也具有增溶作用，并且对藤黄酸的增溶效果优于紫杉醇、环孢素等难溶药物，其增溶后藤黄酸的溶解度最高可达到4.36mg/ml。
N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖在水中可自发形成胶束，胶束内部是疏水基团，可将藤黄酸包裹，胶束外部是亲水基团，可使胶束溶于水中。这一发明有效解决了藤黄酸溶解性的问题。
研究还发现，藤黄酸与N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖用量不同，增溶效果也不同，当藤黄酸重量份数为1，N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖重量份数小于0.2时增溶效果不明显，此时藤黄酸在水中的溶解度小于1mg/ml。发明人又惊讶地发现，当藤黄酸重量份数为1，N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖重量份数大于10时藤黄酸在水中的溶解度也不高，溶解度也小于1mg/ml。因此，发明人对N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖不同用量对藤黄酸溶解度的影响又进行了深入的研究，下面是部分试验数据表1不同用量的N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖对藤黄酸溶解度的影响
因此，本发明优选藤黄酸和N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖的重量比为1∶0.2～1∶10。进一步优选藤黄酸和N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖的重量比为1∶1～1∶8。
本发明的藤黄酸组合物制备方法简单，可以用直接加入法制备，即将藤黄酸，加入含有壳聚糖衍生物的水溶液或有机溶剂中，室温搅拌后离心取上清液，无菌过滤，即得。
优选的制备方法是将藤黄酸溶于有机溶剂中，将N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖溶于水或乙醇中，两种溶液混合后超声，蒸馏水透析，离心，取上清液即得。所述有机溶剂优选甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、二甲亚砜、N，N-二甲基甲酰胺等中的一种或几种混合溶剂。有机溶剂进一步优选乙醇。用这种方法制备得到的胶束载药量高，包封率也较直接加入法高，包封率大于98％。
如果需要制备成冻干制剂，则加入赋形剂，也称冻干保护剂，无菌过滤，冻干。赋形剂优选右旋糖酐、甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖中的一种或几种。赋形剂的量按胶束溶液体积计算，1份胶束溶液优选加入0.01-0.1份赋形剂，过滤后冷冻干燥。
上述方法制备的藤黄酸冻干制剂，不含任何有机溶剂，临床使用时可以用注射用水、葡萄糖注射液或生理盐水重新溶解，本发明的冻干制剂再溶解时溶解迅速，并且溶液澄清。
藤黄酸与N-辛基-O-磺酸基-壳聚糖形成的胶束，载药量高，最高可高达94％，包封率可达98-100％。本发明的胶束粒径小，达纳米级，约为50-250nm。
本发明藤黄酸胶束的单位体积中的药物含量高，具有稳定的载药量和包封率，胶束中的药物持续释放，能延长药物在血液中循环时间。本发明临床适用的藤黄酸胶束注射用冻干粉针，既能显著提高贮存稳定性，又能使藤黄酸胶束冻干粉在加入葡萄糖注射液复溶和稀释后不产生沉淀，减少了临床用药的不安全因素。药理试验表明，本发明藤黄酸胶束注射用冻干粉针剂的利用率(AUC)显著高于藤黄酸精氨酸盐注射液，血浆半衰期明显延长，是后者的1.7倍(p＜0.05)。藤黄酸胶束制剂的小鼠静脉注射LD50为39.17mg/kg，优于藤黄酸精氨酸盐(15.96mg/kg)。
图1是本发明的藤黄酸胶束与藤黄酸精氨酸盐大鼠尾静脉注射的经时曲线(n＝6)具体实施方式
实施例1称取20.0mgN-辛基-O-磺酸基-壳聚糖溶解在2ml蒸馏水中，直接倒入装有10.0mg藤黄酸的西林瓶中，室温搅拌24小时，形成黄色混悬液，离心30min(3000rpm)，取上清液，无菌过滤后(滤膜孔径0.22μm)，滤液分装西林瓶中，然后冷冻干燥。用HPLC法测定载药量为15.8％，包封率为98％，粒径178nm。
实施例2称取20.0mgN-辛基-O-磺酸基-壳聚糖溶解在2ml蒸馏水中，加入到含有10.0mg藤黄酸的0.2ml二氯甲烷溶液中，室温下敞口搅拌24小时，离心30min(3000rpm)，取上清液，无菌过滤后，分装西林瓶中冷冻干燥。用HPLC法测定载药量为15.7％，包封率为99％，粒径198.1nm。
实施例3称取20.0mgN-辛基-O-磺酸基-壳聚糖溶解在2ml蒸馏水和0.2ml乙醇的混合溶剂中，同时将10.0mg藤黄酸溶解在0.2ml乙醇中，两者混合超声30min，混浊液用蒸馏水透析12小时，离心30min(3000rpm)，取上清液，无菌过滤后，分装西林瓶中冷冻干燥。用HPLC法测定载药量为32.6％，包封率为99％，粒径169.3nm。
实施例4称取20.0mgN-辛基-O-磺酸基-壳聚糖溶解在2ml蒸馏水中，加入到含有10.0mg藤黄酸的0.2ml乙醇溶液中，两者混合超声30min，混浊液用蒸馏水透析12小时，离心30min(3000rpm)，取上清液，无菌过滤后，分装西林瓶中冷冻干燥。用HPLC法测定载药量为41.0％，包封率＞99％，粒径155.6nm。
实施例5称取3.0mgN-辛基-O-磺酸基-壳聚糖溶解在1ml蒸馏水中，加入到含有6.0mg藤黄酸的0.2ml乙醇溶液中，两者混合超声30min，混浊液用蒸馏水透析12小时，离心30min(3000rpm)，取上清液，无菌过滤后，分装西林瓶中冷冻干燥。用HPLC法测定载药量为93.9％，包封率＞99％，粒径162.5nm。
实施例6称取10.0mgN-辛基-O-磺酸基-壳聚糖溶解在2ml蒸馏水中，加入到含有10.0mg藤黄酸的0.2ml乙醇溶液中，两者混合超声30min，混浊液用蒸馏水透析12小时，离心30min(3000rpm)，取上清液，无菌过滤后，分装西林瓶中冷冻干燥。用HPLC法测定载药量为62.7％，包封率＞99％，粒径168.8nm。
实施例7称取27.0mgN-辛基-O-磺酸基-壳聚糖溶解在2ml蒸馏水中，加入到含有9.0mg藤黄酸的0.2ml乙醇溶液中，两者混合超声30min，混浊液用蒸馏水透析12小时，离心30min(3000rpm)，取上清液，无菌过滤后，分装西林瓶中冷冻干燥。用HPLC法测定载药量为31.3％，包封率＞99％，粒径153.5nm。
实施例8称取4mgN-辛基-O-磺酸基-壳聚糖溶解在1ml蒸馏水中，加入到含有20.0mg藤黄酸的0.5ml乙醇溶液中，两者混合超声30min，混浊液用蒸馏水透析12小时，离心30min(3000rpm)，取上清液，无菌过滤后，分装西林瓶中冷冻干燥。用HPLC法测定载药量为39.4％，包封率＞99％，粒径158.2nm。
实施例9称取40mgN-辛基-O-磺酸基-壳聚糖溶解在2ml蒸馏水中，加入到含有10.0mg藤黄酸的0.2ml乙醇溶液中，两者混合超声30min，混浊液用蒸馏水透析12小时，离心30min(3000rpm)，取上清液，无菌过滤后，分装西林瓶中冷冻干燥。用HPLC法测定载药量为21.5％，包封率＞99％，粒径163.2nm。
实施例10称取60mgN-辛基-O-磺酸基-壳聚糖溶解在2.0ml蒸馏水中，加入到含有10.0mg藤黄酸的0.2ml乙醇溶液中，两者混合超声30min，混浊液用蒸馏水透析12小时，离心30min(3000rpm)，取上清液，无菌过滤后，分装西林瓶中冷冻干燥。用HPLC法测定载药量为15.4％，包封率＞99％，粒径167.3nm。
实施例11称取50mgN-辛基-O-磺酸基-壳聚糖溶解在2.0ml蒸馏水中，加入到含有10.0mg藤黄酸的0.2ml乙醇溶液中，两者混合超声30min，混浊液用蒸馏水透析12小时，离心30min(3000rpm)，取上清液，无菌过滤后，分装西林瓶中冷冻干燥。用HPLC法测定载药量为17.6％，包封率＞99％，粒径164.1nm。
实施例12本发明藤黄酸胶束大鼠体内药代动力学性质的考察a.给药与取血方案大鼠6只，雌雄各半，体重(200±20g)，由尾静脉注射藤黄酸的精氨酸盐溶液，注射完毕开始计时，给药后分别于2、5、10、15、20、30、40、50、60min从眼眶取血，每次0.5ml，肝素抗凝，并立即分离血浆。另取大鼠6只，等剂量(4mg/kg)注射本发明的藤黄酸胶束溶液(实施例4制备，冻干粉针用5％葡萄糖溶液复溶)，给药后在2、5、10、15、20、30、40、50、60min眼眶取血0.5ml，肝素抗凝，分离血浆，置于样品管中。
b.经时曲线，见图1。
c.血药数据经3p97软件处理后得到有关药动参数如下表2。各组数据进行t检验，在95％的可信区间内，每组数据均有显著差异。
表2大鼠静脉注射藤黄酸胶束制剂及其对照的药动学参数(n＝6)
权利要求
1.一种含藤黄酸的药物组合物，其特征是含有藤黄酸和N-辛基-N-磺酸基-壳聚糖。
2.权利要求1的药物组合物，其特征是N-辛基-N-磺酸基-壳聚糖以胶束形式包裹藤黄酸。
3.权利要求1或2的药物组合物，其中藤黄酸和N-辛基-N-磺酸基-壳聚糖的重量比为1∶0.2～1∶10。
4.权利要求3的药物组合物，其中藤黄酸和N-辛基-N-磺酸基-壳聚糖的重量比为1∶1～1∶8。
5.权利要求1的药物组合物，还含有赋形剂。
6.权利要求5的药物组合物，其中赋形剂选自右旋糖酐、甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖中的一种或几种。
7.权利要求1至6中任一项的药物组合物的制备方法，包括将藤黄酸溶于有机溶剂中，将N-辛基-N-磺酸基-壳聚糖溶于水或乙醇中，两种溶液混合后超声，蒸馏水透析，离心，取上清液即得。
8.权利要求7的制备方法，其中有机溶剂选自甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、二甲亚砜、N，N-二甲基甲酰胺中的一种或几种。
9.权利要求8的制备方法，其中有机溶剂是乙醇。
10.权利要求7的制备方法，还包括将上清液无菌过滤，加赋形剂，冻干。
全文摘要
本发明涉及天然药物和药物制剂领域，具体涉及藤黄酸的水溶性或可注射型制剂，其特征是以N－辛基－O－磺酸基－壳聚糖作为助溶剂或与N－辛基－O－磺酸基－壳聚糖形成胶束的藤黄酸的注射用制剂。本发明的藤黄酸胶束注射用冻干粉针，既能显著提高贮存稳定性，又能使藤黄酸胶束冻干粉在加入葡萄糖注射液复溶和稀释后不产生沉淀，减少了临床用药的不安全因素。
文档编号A61K9/00GK101019857SQ20071002056
公开日2007年8月22日 申请日期2007年3月12日 优先权日2007年3月12日
发明者平其能, 张灿, 朱贤, 汤晓燕 申请人:中国药科大学