专利名称：阿加曲班单一立体异构体的分离方法及多晶型物的制作方法
阿加曲班单一立体异构体的分离方法及多晶型物
本发明涉及阿加曲班单一立体异构体-化合物II的具有固定组成的多晶型物A和多晶型物B 及其在制备抗凝血和抗血栓药物中的应用。
本发明还涉及从阿加曲班中分离提纯出化合物II的新方法，以及多晶型物A和多晶型物B的 制备方法。
阿加曲班是一种化学合成的小分子直接凝血酶抑制剂，具有比肝素更好的抗凝血和抗血栓作 用。阿加曲班在日本被批准治疗外周血栓病和急性脑卒中，并被美国FDA批准用于肝素诱导 的血小板减少症的预防和治疗。
阿加曲班的化学名称是(2R,4R)-4-甲基-HN-[(3-甲基-l,2,3,4-四氢-8-喹啉基)磺酰]-L-精氨
酰]-2-哌啶甲酸
其结构式是
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阿加曲班分子中具有4个手性中心，其中，精氨酸片段和哌啶甲酸片段上的手性中心具有确 定的构型，而在四氢喹啉基上的手性中心没有确定的构型。
通常采用的合成阿加曲班的最后一步反应是<formula>formula see original document page 4</formula>
阿加曲班
在这一步反应中，化合物2中的甲基喹啉被还原成甲基四氢喹啉，并且由此产生了一个手性 中心。这样得到的阿加曲班是一个非对映异构体的混合物。该混合物含有大约63%-67%的(11) -异构体I和大约33%-37%的(S)-异构体II，目前在临床上使用的阿加曲班就是异构体I和 异构体II约为65: 35的混合物。
使用抗凝血药物的主要副作用是严重出血，例如胃肠道和腹膜后出血，而严重出血在临床上 往往是致命的。因此，抗凝血药物的使用剂量及其抗凝血作用需要严格地控制。现在已经知 道化合物II的抗凝血作用是比化合物I的抗凝血作用高4倍多，因此，如果异构体I和异构 体II的比例不能得到严格的控制，将大大增加产生副作用的几率。
使用单一的阿加曲班异构体将克服异构体比例难以控制的问题，便于控制剂量减少严重出血 副作用的发生。<formula>formula see original document page 5</formula>
本发明提供了阿加曲班单一立体异构体-化合物II的具有固定组成的多晶型物A和多晶型物
B，并提供了多晶型物A和多晶型物B的制备方法。 本发明还提供了从阿加曲班中分离提纯出化合物II的新方法。 本发明还提供了多晶型物A和多晶型物B在制备抗凝血和抗血栓药物中的应用。
图1是化合物II的多晶型物A的X-射线粉末衍射图 图2是化合物II的多晶型物B的X-射线粉末衍射图
中国专利申请200610129330.6披露了一种从阿加曲班中分离出化合物II的方法，该方法是将 阿加曲班在醇与水的混合物中加热回流5-10小时溶解，然后冷却析晶。该方法所使用的溶剂 和原料的比例是15-30: 1,而且为了得到纯度大于98%的化合物11，上述溶解和结晶的过程 需要重复很多次。因此，上述方法需要耗费大量的溶剂和能源。
现在己经发现一种方便的从阿加曲班中分离出化合物II的方法。将阿加曲班在甲醇中溶解， 然后向该溶液中加入阿加曲班不溶或微溶的溶剂再放置结晶，得到富集了化合物II的化合物 I和化合物II的混合物，重复上述步骤，可以得到纯度大于99%的化合物11。
该方法的具体步骤如下
将阿加曲班或者化合物I和化合物II的其他比例混合物溶解在甲醇中，所使用甲醇的重量通 常在阿加曲班或者化合物I和化合物II的混合物的重量的15倍以下， 一般优选3-10倍。溶 解温度在室温和甲醇的沸点之间，通常在60度左右。
向步骤1)中得到的溶液加入适量不溶或微溶阿加曲班的溶剂，可以选用的溶剂包括水，C2-C4 的醇，C3-C5的酮，C2-C6的醚，C2-C6的酯，二氯甲烷，四氢呋喃和乙腈。优选的溶剂包 括水，乙醇，异丙醇，丙酮，乙酸乙酯和乙醚，最优选的溶剂是水和乙醇。溶剂加入的量一 般不超过甲醇的50% (体积比)，通常在甲醇的10%-30% (体积比)之间。加入溶剂后混合 均匀，放置析晶，过滤后可以得到富集的化合物II富集的化合物I和化合物II的混合物。 用HPLC测定混合物中化合物II的含量，然后重复步骤1和2，直到化合物II的含量达到预 期值为止。
一个优选的具体方法是
1) 将阿加曲班或者化合物I和化合物II的其他比例混合物于60摄氏度左右溶解在约3-10倍 重量的甲醇中
2) 向该溶液中加入三分之一到八分之一体积的水
3) 放置结晶后收集晶体，测定化合物II的含量，重复步骤l)， 2)，直到化合物II的含量大 于99%为止。
上述方法每个循环可以将化合物II提高约15%，整体收率以阿加曲班计约为20%。 本发明提供的方法，在整个过程中使用的溶剂量大大少于文献报道的方法，并且不需要长时
间的加热回流，大大节省了能源的消耗。
通过对用甲醇-水体系提纯得到的化合物II的晶体进行的检测发现，从甲醇-水体系中析出的 晶体在经过充分的干燥后还含有一定量的水份，而其含水量又不是一个固定值，通常在0-1
之间，具体的含水量和甲醇-水体系中甲醇-水的比例有关。因此，从甲醇-水体系中析出的晶 体不具有确定的组成，不适宜于用作制药原料。
为了获得有固定组成的化合物n的晶体，可以将化合物n溶解在无水的醇类中然后结晶，得 到的晶体为化合物n的多晶型物a，多晶型物a具有确定的组成，不含有结晶水，也不含有 结晶醇。
多晶型物a的特征为在x-射线粉末衍射图中的26角为
7.0,7.6,8.2，9.3，9.9,10.4,11.1，12.0,16.7,18.7，21.5,26.0°的位置有特征峰。
可选用的无水的醇类包括甲醇，乙醇和异丙醇。制备多晶型物a的方法通常是将化合物II在 加热的情况下溶解于无水的醇中，然后冷却，放置后析出晶体。
将化合物II在水中结晶，可以得到具有固定组成的多晶型物B,多晶型物B经过真空干燥恒 重后，用卡尔-费休尔法测定含水量发现多晶型物B是化合物II的一水合物。多晶型物B的 特征为在X-射线粉末f行射图中的2 e角为7.0，8.2,10.0，11.9,16.7，19.0,21.5,23.3,25.6°的位置 有特征峰。
制备多晶型物B的方法通常是将化合物n在加热回流的情况下溶解于纯水中，然后冷却，放 置后析出晶体。
化合物n在水中溶解比较困难，为了便于化合物ii在水中溶解，也可以将化合物ii先溶解在
少量的无水乙醇中，然后将该溶液滴加到水中。无水乙醇的用量通常在水量的5% (体积比) 以下，在此条件下，少量的乙醇不影响最后得到的多晶型物B的组成和晶型。
多晶型物a和多晶型物B都有良好的稳定性，并且多晶型物a和多晶型物B在无水乙醇中 的溶解性也比较好，能够非常方便地制备成含有山梨醇的乙醇溶液。因此，多晶型物a和多 晶型物B都可以被用于制备
化合物II的药用制剂。体内和体外实验显示，化合物II (含量大于99%)的抗凝血效果是阿 加曲班(化合物11含量35%)的两倍以上。
实施例 实施例l
将10克阿加曲班(化合物11含量35%)于60C。溶解在80毫升甲醇中，向该溶液中加入纯 水16毫升，混合均匀后缓慢冷却至室温，放置过夜后析出晶体，过滤收集后在真空下干燥至 恒重，得到7.5克固体，HPLC分析显示化合物II含量为45%。 实施例2
将1克阿加曲班(化合物II含量35%)于60C°溶解在10毫升甲醇中，向该溶液中加入无 水乙醇2毫升，混合均匀后缓慢冷却至室温，放置l小时后析出晶体，过滤收集后在真空下 干燥至恒重，得到0.7克固体，HPLC分析显示化合物II含量为4"/。。 实施例3
将1克阿加曲班(化合物II含量35%)于60C°溶解在10毫升甲醇中，向该溶液中加入无 水乙醚2毫升，混合均匀后缓慢冷却至室温，放置l小时后析出晶体，过滤收集后在真空下 干燥至恒重，得到0.78克固体，HPLC分析显示化合物II含量为39W。
实施例4
将5克化合物I和化合物II的混合物(化合物11含量80%)溶解在30毫升60C。的甲醇中， 向该溶液中加入5毫升的纯水，混合均匀后放置过夜冷却结晶，过滤收集晶体，真空下干燥 至恒重，得到4.1克固体，HPLC分析显示化合物n含量为9P/。。
实施例5
将0.5克化合物I和化合物II的混合物(化合物II含量98.0%)溶解在5毫升55C°的甲醇 中，向该溶液中加入0.7毫升的纯水，混合均匀后放置过夜冷却结晶，过滤收集晶体，真空 下干燥至恒重，得到0.38克固体，HPLC分析显示化合物II含量为99.2%。
多晶型A的制备
实施例6
将2克化合物II(含量为99%)在78 C。下溶解在8毫升的无水乙醇中，缓慢冷却至室温,放置过 夜后收集晶体,真空干燥至恒重,得到1.8克多晶型A。
实施例7
将2克化合物II(含量为99%)在回流温度下溶解在15毫升的无水甲醇中，缓慢冷却至室温，放
置过夜后收集晶体，真空干燥至恒重,得到1.7克多晶型A。
多晶型B的制备 实施例8
将1克化合物II(含量为99%)在回流温度下溶解在250毫升的水中,缓慢冷却至室温,放置过夜 后收集晶体,真空干燥至恒重,得到0.87克多晶型B。
实施例9
将1克化合物II(含量为99%)在10毫升无水乙醇中的溶液缓慢滴加到250毫升的沸水中，缓 慢冷却至室温,放置过夜后收集晶体,真空干燥至恒重,得到0.77克多晶型B。
权利要求
1.一种式II所示的化合物的多晶型物A，其特征在于其X-射线粉末衍射图在7.0，7.6，8.2，9.3，9.9，10.4，11.1，12.0，16.7，18.7，21.5，26.0°2θ角的位置有特征峰。
2.如权利要求1所述的式II所示的化合物的多晶型物A，其特征在于式II所示的化合物的 纯度大于99%。
3. —种制备如式II所示的化合物的多晶型物A的方法，该方法包括将式II所示的化合物溶 解在无水的醇类中然后结晶。所说的无水的醇类包括甲醇，乙醇和异丙醇。
4. 一种式II所示的化合物的多晶型物B，其特征在于X-射线粉末衍射图在 7.0，8.2,10.0,11.9，16.7，19.0,21.5，23.3,25.6° 2 9角的^f立置有特征峰。
5.如权利要求4所述的式II所示的化合物的多晶型物B，其特征在于式II所示的化合物的纯 度大于99%。
6. —种制备如式II所示的化合物的多晶型物B的方法，该方法包括将式II所示的化合物在 水中结晶。
7.如权利要求l， 2， 4， 5所述的多晶型物A和多晶型物B在制备抗凝血和抗血栓药物中的 应用。
8. —种从阿加曲班中分离出化合物II的方法，该方法包括A.将阿加曲班或者化合物I和化合物II的其他比例混合物溶解在甲醇中，所使用甲醇的重 量通常在阿加曲班或者化合物I和化合物II的混合物的重量的15倍以下， 一般优选3-10倍。 溶解温度在室温和甲醇的沸点之间，通常在60度左右。 B. 向步骤A中得到的溶液加入适量不溶或微溶阿加曲班的溶剂，可以选用的溶剂包括水， C2-C4的醇，C3-C5的酮，C2-C6的醚，C2-C6的酯，二氯甲垸，四氢呋喃和乙腈。优选的 溶剂包括水，乙醇，异丙醇，丙酮，乙酸乙酯和乙醚，最优选的溶剂是水和乙醇。溶剂加入 的量一般不超过甲醇的50% (体积比)，通常在甲醇的10%-30% (体积比)之间。加入溶剂后混合均匀，放置析晶，过滤后可以得到富集的化合物n富集的化合物i和化合物n的混合物。C. 用HPLC测定混合物中化合物II的含量，然后重复步骤1和2，直到化合物II的含量达到 预期值为止。
9.如权利要求8所述的方法，其中所说的不溶或微溶阿加曲班的溶剂是水。
全文摘要
本发明提供了阿加曲班单一立体异构体——化合物II的具有固定组成的多晶型物A和多晶型物B，并提供了多晶型物A和多晶型物B的制备方法。本发明还提供了从阿加曲班中分离提纯出化合物II的新方法。本发明还提供了多晶型物A和多晶型物B在制备抗凝血和抗血栓药物中的应用。
文档编号A61P7/00GK101362746SQ20071002556
公开日2009年2月11日 申请日期2007年8月6日 优先权日2007年8月6日
发明者袁建栋 申请人:袁建栋