专利名称：具有抗肝癌活性的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有抗肝癌活性的药物组合物及其制备方法和用 途，其活性成分来自人参、黄芪、蟾酥和去曱斑蝥素。
背景技术：
癌症是严重危害人民生命健康和生命的常见多发病。近年来我国
每年约160万人死于癌症，而在国内癌症死亡人群中又以肝癌的死亡 率位居第一。由于我国目前有1.2亿HBV携带者，因此，对肝癌病 的治疗，特别是緩解中晚期癌症病人的痛苦，延长其生存期并提高生 存质量等都是本领域非常迫切解决的研究课题。目前西医治疗肝癌除 手术外，主要采用化疗，化疗往往一方面进4于大量的杀死癌细胞和正 常细胞，另一方面又进行快速的补充高营养，使患者机体细胞始终处 于极度疲劳之中，瘤体虽在短时间内可明显缩小，但很快就又会复 发。而传统中医药对肿瘤的治疗方式及药物也存在有用药不全面，疗 效不稳定和治愈率低等问题。
CN 1059800C公开过含有人参和黄芪成分的注射液，其用于提高 人体免疫功能，抑制肿瘤发生有一定的效果，但它至少存在三方面的 问题 一是药物构成中毒性药材的用量比较大；所以副作用也比较 大，影响治疗效果；二A剂型过于单一，对患者来讲，仅仅只有注射 制剂显然难于满足医患双方的需求，给药不方便；三是生产工艺比较 落后，尤其是提取精制工艺不合格，严重影响注射剂的质量，同时， 注射剂工艺复杂，成本高'。
CN l"9107〔公开过用于治疗肝禪的中成药，其在CN lOWSOOC 的基础上加以改进，克服了上述缺点。不过，其在中药原料中仍然使 用斑蝥，毒副作用仍然比较大，尤其对血管壁与尿路均有刺激，引起疼痛。
发明内容
本发明的目的在于提供具有抗肝癌活性的药物组合物及其制备 方法和用途。
本发明的药物组合物按重量组分计算，由人参800 - 4000份、 黄芪2000 - 8000份、蟾酥4 - 12份、去甲斑蝥素l - 8份制成； 具体地，其由人参IOOO份、黄芪3000份、蟾酥4份、去甲斑蝥素2
份制成。其中，去甲斑螯素是i甲斑螯酸钠、去甲斑蝥酸铵等。
本发明药物组合物的制备方法是将人参、黄芪、蟾酥分别提取有 效成分，再与去曱斑蝥素混合。具体地，其是如下制备的将人参用 乙醇提取，提取液过滤，滤液回收乙醇，浓缩成清膏l备用，药渣用 水提取，提取液过滤，浓缩成清膏，加入乙醇使沉淀，千燥，得干粉 l备用；将黄芪用水提取，提取液过滤，浓缩，加入乙醇使沉淀，过 滤，滤液回收乙醇，浓缩成清膏？备用，沉淀千燥，得干粉2备用； 将蟾酥用乙醇提取，提取液过滤，滤液回收乙醇，得药膏3备用；混 合上述清膏1至3和千粉1至2以及去曱斑蝥素，即可。
本发明的药物组合物可以进一步制成口服液、胶嚢、注射剂等， 用于治疗肝癌。
本发明的有益效果得到如下证明。 一、本发明对小鼠实体型肝癌的作用
1. 按对照研究原则，试验设立试验组与对照组，对照组包括空白 对照和阳性对照，试验组给予本发明注射，空白对照组给予生理盐
水，阳性对照药选用CN 1059800C的产品。
2. 剂量设置试验組设高，、中、低三个剂量组，对照组设低剂量组。
2.1试验组给药剂量以本药注射液小鼠尾静脉给药LDs。为参数， 按LDso的1/15 、 1/50剂量为蜂药剂量，依次分别为1493mg/kg 、
896mg/kg 、 448mg/kg 。对照组按丄05()的1/25剂量设置剂量组，即 452mg/kg;空白对照组静脉注射生理盐水，每次按0.5ml/只给予。
2.2给药容积各组小白鼠每次给药容积为0.5ml/只，采用等容 积不等浓度给药。
3. 给药方法
试验各组的给药途径均采用与临床一致的静脉给药途径，从小白 鼠尾静脉给药。试验组每日给药一次，连续给药七日。空白对照组每 曰给生理盐水一次，连续七日。阳性对照组每日给药一次，连续七曰。
4. 试验步骤
在无菌条件下，从接种7 - 8天生长良好的种鼠体内抽取瘤液， 取瘤液0.2ml ( 100万/0.1ml )接种于小白鼠右前肢腋部皮下，24小 时后随机分组，各组按照相应给药方法、剂量分别给药，给药后观察 动物反应，于给药后第九天处死动物，记录体重，解剖后记录瘤重， 计算瘤重抑制率。结果如下
本发明小鼠实体型肝癌的作用
组别 N
模型对照组 30
阳性对照组 30
大剂量组 30
中剂量组 30
小剂量组 30
抑制率％
17.5 61.2 43.4 22.1
平均瘤重
2.55±0,36
2.13±0.44*
1.01±0.39*A
1.50±0.33*A
2.02±0.42*
注与模型对照组比较fp〈O.Ql 与阳性对照组比^^A P<0.01
由此可见，本发明小剂量组与CN 1059800C小剂量组对小鼠实体 型肝癌的作用相比较P0.05 ,无统计学差异，说明两组的疗效相当。
二、急性毒性试验
CN 1059800C从静脉和腹腔两种给药途径对小白鼠给药后，测定 出静脉注射LDso为11.27g/kg，腹腔注射LD5o为15.60g/kg;本发明
从静脉和腹腔两种给药途径对小白鼠给药后，测定出静脉注射LD50 为22.9g/kg ，腹腔注射LD50为29.1g/kg 。由此可见，本发明的LDso 大约为CN 1059800C的两'倍。
与现有技术相比，本发明的疗效性和安全性更高，使一些具有抗 癌活性的中药成分被充分利用，毒性成分的含量得到严格控制，具有 益气扶正、消痴散结的功能，用于中晚期原发性肝癌气虚淤滞证右胁 腹积块、疼痛不移、腹胀食少、倦怠乏力等症疗效显著。
原发性肝癌属于中医"徵积"的范畴，既以正虚瘀结为主要证候的 痹积证，症见右胁腹积块，疼痛不移，腹胀食少，倦怠乏力等。瘀积 之正虚瘀结证候是在正虚基础上，邪毒与气血相搏结而成。正气不 足，邪毒留着，气血瘀滞，脉络瘀阻，故胁腹积块，痛处不移；肝气 郁结，木不疏土，脾胃译化失常，，故见纳减，腹胀；日久气血生化乏 源，则倦怠乏力，逐渐消瘦；肝失疏泄，胆液受阻，不循常道，外溢 肌表，又可见黄疸。面色多萎黄或黧黑，舌质瘀黯，脉象弦细是正虚 邪实之证。根据正虚痹结证候之正虛邪实的基本病机，扶正祛邪乃为 其治疗原则。因其正气虚弱,、气血瘀滞，瘀毒蕴结的病机特点，益气 固本，消徵散结、解毒止痛为其治法。
在本发明的药物组合物中，，人参味甘微苦、性平，大补元气为君， 人参为中药疗虛祛邪之首，《本经》谓其"补五脏，安精神，定魂魄， 止惊悸，除邪气"，《本草纲目》说"治男妇一切虚证"，《本草纲 目》述"人参能回阳气于垂绝，却虚邪于俄倾"，故本方以其为君。
黄芪益气扶正为臣，，《别录》称其"补丈夫虚损，五劳贏瘦"，《医 学衷中参西录》说黄芪"为补气之功最优"，黄芪甘温，与人参配伍， 则补气扶正功增，此君臣共效，，俟气旺精血生，则可望正扶本培。真 气得充，则气壮血行，.方能"健行而磨物"，正如《本草纲目》所谓"邪 气之所以久留补去者，无他，真气虚则不能敌，故留连而不解也。兹 得补而真元充实，则邪不能自容......通脉者，血不自行，气壮则行，
故通血脉，破坚积者，真气不足则不能健行而磨物"。
蟾酥辛温有毒，解毒消肿止痛；去甲斑蝥素是斑蝥的活性成分，
斑蝥辛热有大毒，攻毒破血散结，《本草纲目》记载蟾酥"能化解一 切瘀郁雍毒诸疾，，，而李,士材在《本草图介》中谓斑螯"攻血积，利水
道，治徵痂......"，佐使此二味以祛邪，则全方扶正祛邪功全。处方
扶正固本不遗邪，解毒消不忘正。方中蟾酥、斑蝥辛温有毒，用于本 方亦有"以毒攻毒"之意，然其毒性未敢稍许轻视，此两味与人参、黄 芪为伍，可使其毒性得到抑制，，在制剂时通过严格控制蟾酥的剂量和 工艺处理而尽力避抑其毒性，并以去曱斑蝥素代替斑蝥，故以此两味 为本方佐使。本发明所述药物的全药味不多，君臣佐使相配得当，紧 守病机，遵法而伍，组方严谨，可共奏扶正祛邪、消徵散结之效能， 尤适用于以瘀结为主要证候的瘀积证。
三、疗效观察(以注射液为例)
1 、 i貪断标准
1.1中医诊断、证候标准
原发性肝癌属中医"徵积"的范畴，根据《新药(中药)治疗原发 性肝癌临床指导原则》辩证分型标准，并结合本药的主治功效，主治 气虚淤滞型的症积(原发性肝癌)及其兼证。
气虚淤滞证神疲乏力、少气懒言、纳谷少馨、胸闷胁痛、腹胀、 腹部胂块、舌质淡胖有齿痕，暗或有紫斑、脉虚弱或弦。兼阴虚证； 兼血虚证；兼湿证。
1.2.1病理诊断
肝内病灶检查证实为原发性肝癌。肝外转移灶检查证实为肝细胞 性肝癌。
1.2.2细胞学诊断
a)有典型的症状及肝癌影像学；b)腹水中查到肝癌细胞；具有以 上两项，符合细胞学诊断。 1.2.3临床诊断
a)AFP对流以流法阳性或放射免疫法〉-400ng/ml并持续1月以上 或AFP>=200ng/ml并持续2月以上，并能排除妊娠，活动性肝病，生
殖腺胚胎源性肿瘤及转移性肝癌者；b)影像学检查有肝内实质性占 位病变；具备以上两项者符合临床诊断。
2 、纳入标准
2丄1所有测试病例必须符合上述诊断或辩证标准； 2丄2估计生存期能超过2月； 2.1.3 Karnofsky氏评'分在40分以上； 2丄4年龄自〉=18岁至=<75岁。
3 、试验方法 3.1分组情况
458例原发性肝癌患者，随机分为治疗组和对照组，其中治疗组 315例，化疗对照组143例。两组患者在性别、年龄、生存质量、癌 灶大小、癌灶数、门静脉癌拴、临床分期、曱胎蛋白水平、免疫指标、 中医证型及兼证情况等方面组间伍显著性差异，具有可比性。
3.2用药方法
3.2.1治疗组
本发明注射液40 ',60cc ;1
5%GS 500cc 静滴，每分4中30 60滴，每日1次，x45d 。 3.2.2对照组(FAM).
5 - FU 300mg/m2静滴第1 、 2 、 4 、 5周 ADM 20 - 30mg/m2静注第1 、 4周 MMC 3 - 4mg/m2静注第1 、 2、 4、 5周 每l周用药一次，3周为1周期，共两周期。 3.3观察项目 3.3.1临床症状
一般症候、消化系统症候、心血管系统症候、泌尿道症候、神经 系统症4夷。
3.3.2生存期 3.3.3生存质量 3.3.4实-验室4全查
3.3.5心电图
3.3.6原发灶影像学检查 3.3.7其它部位影像学检查 4 、疗效评定标准 4.1肿瘤大小
4.1.1完全緩解(CR):可见肺瘤消失并持续一个月以上；
4.1.2部分緩解(PR):肿瘤两个最大的相互垂直的直径乘积缩小 50%,并持续一个月以上；
4.1.3稳定(SD):胂瘤两个最大的相互垂直的直径的直径税种缩小 不足50%,增大不超过25%,并持续一个月以上；
4.1.4恶化(PD):肿瘤两个最大的相互垂直的直径乘积增大超过 25%，或者出现新病变；
总缓解率为CR + PR。
4.2临床证4芙疗效标准
4.2.1单项指标评定标准
显效该病例治疗后与治疗前比较下降二个级差者； 有效该病例治疗后与治疗前比较下降一个级差者； 无效未达到上迷桥准者,。， 4.2.2综合评定标准.
II期显效该病员单项症林中有2/3以上达到有效者； 有效该病员单项症状中有1/2以上达到有效者； 无效未达到上述标准者。
III期显效该病员单项症状中有1/2以上达到有效者；
有效该病员单项症状中有1/3以上达到有效者；
无效未达到上述标准者；
总有效率=显效十有效。
4.3生存质量评定标准，
按Karnofsky评分治疗前、治疗后比较
显效治疗后比治疗前增加20分者；
有效治疗后比治疗前增加IO分者；
无效未达到上述标准者；
总有效率=显效+有效。
4.4生存期(治后生存期)评定标准
,人治疗开始时至死亡或末次随i方为止。
试验结果本发明注射液和化疗组的中医证候改善率分别为 76.1%和48.0%;肿瘤部分缓解率为9.5%和12.2%; AFP下降为47.5% 和37.5%;中位生存期为7.0月和4.0月，其中生存超过12月的为7.1% 和3.5%; Karnofsky生净质量计分上升的分别为67.9%和37.2%;免 疫指标治疗后CD4/CD8分别为1.64和1.38。和化疗相比，本发明制 剂的不良反应较低，无化疗常见的骨髓抑制和消化道反应，尤其没有 观察到CN 1239107C的泌尿道刺激症状。
具体实施方式
实施例1
将人参800g切片用8倍量75%乙醇回流提取3次，合并提取液， 滤过，滤液回收乙醇，浓缩爲相对密度为1.0 - 1.2的清膏备用；药 渣用8倍量水煎煮3次，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩成1.10 — 1.25 的清膏，加乙醇达75%,静置，滤取沉淀，低温干燥备用。黄芪2000g 切片，加水煎煮3次,，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩后用乙醇沉淀， 滤液回收乙醇并浓缩成每lml相当于药材5 - 8g的清膏备用；滤取 的沉淀真空干燥备用。蟾酥4g成细粉用25倍乙醇浸泡过夜，然后回 流4小时，滤过，滤液回收乙醇后备用。混合上述清膏、药渣提取物 和去甲斑蝥酸钠lg以及45g甜蜜素、30ml橘子香精、6g山梨酸钟， 搅拌溶解，加水至5000ml,调节pH值至5,5 - 7.0，滤过，灌装， 105。C灭菌30分钟，即得。10ml/支，口服， 一日2 3次， 一次1 支。
实施例2
将人参4000g切片用8倍量75%乙醇回流提取3次，合并提取液，
滤过，滤液回收乙醇，艰縮成相对密度为1.0 - 1.2的清膏备用；药 渣用8倍量水煎煮3次，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩成1.10 - 1.25 的清膏，加乙醇达75%,静置，滤取沉淀，低温干燥备用。黄芪8000g 切片，加水煎煮3次，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩后用乙醇沉淀， 滤液回收乙醇并浓缩成每lml相当于药材5 - 8g的清膏备用；滤取 的沉淀真空干燥备用。蟾酥12g成细粉用25倍乙醇浸泡过夜，然后 回流4小时，滤过，滤液回收乙醇后备用。混合上述清膏、药渣提取 物和去甲斑蝥酸铵8g以及180g甜蜜素、120ml橘子香精、24g山梨 酸钾，搅拌溶解，加水至20000ml，调节pH值至5.5 - 7.0,滤过， 灌装，105。C灭菌30分钟，即得。10ml/支，口服， 一日2 3次， 一次1支。 实施例3
将人参1 OOOg切片用8倍量75%乙醇回流提取3次，合并提取液， 滤过，滤液回收乙醇，浓缩成相对密度为1.0 - 1.2的清膏备用；药 渣用8倍量水煎煮3次，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩成1.10 - 1.25 的清膏，加乙醇达75%,静置，滤取沉淀，低温干燥备用。黄芪3000g 切片，加水煎煮3次，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩后用乙醇沉淀， 滤液回收乙醇并浓缩成每lml相当于药材5 - 8g的清膏备用；滤取 的沉淀真空干燥备用。蟾酥4g成细粉用25倍乙醇浸泡过夜，然后回 流4小时，滤过，滤液回收乙醇后备用。混合上述清膏、药渣提取物 和去甲斑蝥酸钠2g以及,90g甜蜜素、60ml橘子香精、12g山梨酸 钾，搅拌溶解，加水至10000ml，调节pH值至5.5 - 7.0,滤过，灌 装，105。C灭菌30分钟，即得。10ml/支，口服， 一日2 3次，一 次1支。
实施例4
蟾酥4g成细粉用25倍量乙醇浸泡，回流提取4小时，滤过，滤 液回收乙醇后备用；去甲斑蝥酸铵2g成细粉备用；人参1000g切片， 用8倍量75%乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过， 滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.0 - 1.2左右，乙醚萃取3次，挥 去乙醚，过滤，滤液用水饱和的等体积仲丁醇萃取4次，回收仲丁醇，
浓缩至相对密度1.0 ~ 1.15 ( 50 。C )后加乙醇至45%,冷藏过夜， 滤过，滤液浓缩成每lml约相当于药材4 - 5g的清膏，得人参皂苷 提取物备用；乙醇提取后的药渣用8倍量水煎煮3次，合并煎煮液， 滤过，滤液浓缩至相对密度1.10 ~ 1,25 ( 60 °C )，加乙醇至75%, 滤取沉淀，干燥得人参粗多糖，加水煮沸溶解，上清液浓缩，聚酰胺 层析，用水洗脱，洗脱液浓缩后加乙醇静置，滤取沉淀，真空千燥， 得人参粗多糖；加水煮沸溶解，上清液浓缩至相对密度1.10 - 1.20 左右(60°C )，聚酰胺层析，用水洗脱，洗脱液浓缩至相对密度1.20 -1.30左右(60°C )，后加乙醇达80%,滤取沉淀，真空干燥，得 人参多糖。黄芪3000g切片，加水煎煮3次，合并煎煮液，滤过，滤 液浓缩至每lml相当于药材1.5 - 2g ,用乙醇沉淀(75%)，上清 液同法沉淀l次，过滤，合并滤液，回收乙醇并浓缩至每lml相当于 药材8 - 10g,加乙醇达80%,过滤，滤液回收乙醇并浓缩至180 -200ml ,用水饱和的仲丁醇萃取4次，回收仲丁醇，浓缩至200ml , 过滤澄明得甲苷中间体备用；滤取的沉淀70 ~ 8(TC真空干燥，粉碎 后用蒸馏水煮沸溶解，上清液浓缩成1.10 - 1.20 ( 60 。C )的稠膏， 聚酰胺层析，用水洗脱，洗脱滤液过，滤液浓缩至1.20 - 1.30 ( 60 。C )，加乙醇达70 - 80%，滤取沉淀，真空干燥，得黄芪多糖备用。 取人参皂苷提取液和黄芪皂苷提取液，加水稀释，调节pH7.0左右， 活性炭吸附10分钟，过滤澄明备用；取人参多糖和黄芪多糖，加水 煮沸溶解，过滤澄明，加甘露醇煮沸溶解后，活性炭吸附15分钟， 过滤澄明备用；取去甲斑蝥酸铵加水，氢氧化钠液调节pH9.0左右， 加蟾酥提取物搅拌溶解，滤过，滤液与上述人参和黄芪皂苷提取物滤 液混匀，再将此混合液加至上述多糖和甘露醇混合液中，加注射用水 至3000ml ,调节pH7.5左右，精滤澄明，无菌分装，冷冻干燥，封 口即得。静脉滴注，成人按15mg/kg计量加入5%葡萄糖注射液或0.9% 氯化钠注射液500ml中。
权利要求
1、具有抗肝癌活性的药物组合物，按重量组分计算，由人参800-4000份、黄芪2000-8000份、蟾酥4-12份、去甲斑蝥素1-8份制成。
2 、根据权利要求1的药物组合物，按重量组分计算，由人参1000 份、黄芪3000份、蟾酥4份、去曱斑蝥素2份制成。
3、 根据权利要求1或2的药物组合物，其中去曱斑螯素是去甲 斑蝥酸钠或去曱斑蝥酸铵。
4、 制备权利要求1至3任意一项的药物组合物的方法，将人参、 黄芪、蟾酥分别提取有效成分，再与去甲斑蝥素混合。
5、 根据权利要求4的射备方法，将人参用乙醇提取，提取液过 滤，滤液回收乙醇，浓缩成清膏l备用，药渣用水提取，提取液过滤， 浓缩成清膏，加入乙醇使沉淀，千燥.，得干粉1备用；将黄芪用水提 取，提取液过滤，浓缩，.加八'乙醇使沉淀，过滤，滤液回收乙醇，浓 缩成清膏2备用，沉淀干燥，得干粉2备用；将蟾酥用乙醇提取，提 取液过滤，滤液回收乙醇，得药膏3备用；混合上述清膏1至3和干 粉1至2以及去曱斑蝥素，即可。
6 、权利要求1至3任意一项的药物组合物在药物制备中的用途， 该药物用于治疗肝癌。
全文摘要
本发明涉及具有抗肝癌活性的药物组合物及其制备方法和用途，其活性成分来自人参、黄芪、蟾酥和去甲斑蝥素。
文档编号A61K36/185GK101181342SQ20071019847
公开日2008年5月21日 申请日期2007年12月12日 优先权日2007年12月12日
发明者岩 谢 申请人:岩 谢