苯胺基哌嗪衍生物及其使用方法

专利名称：苯胺基哌嗪衍生物及其使用方法
专利说明苯胺基哌嗪衍生物及其使用方法 发明领域 本发明涉及新的苯胺基哌嗪衍生物、包含苯胺基哌嗪衍生物的组合物和使用苯胺基哌嗪衍生物治疗或预防以下疾病的方法增殖性疾病、抗增殖性疾病、炎症、关节炎、中枢神经系统疾病、心血管疾病、脱发、神经元疾病、缺血性损伤、病毒性疾病、真菌感染或与蛋白激酶活性有关的疾病。

背景技术：
蛋白激酶是催化蛋白质磷酸化、特别是催化蛋白质中特定酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基的羟基进行磷酸化的酶家族。蛋白激酶在对包括代谢、细胞增殖、细胞分化和细胞存活在内的多种细胞过程的调节中十分关键。不受控制的增殖是癌细胞的标志，可以表现在按以下两种方式之一使细胞分裂周期失调——使刺激性基因过度活化或者使抑制性基因失活。蛋白激酶抑制剂(inhibitor)、调节剂(regulator)或调制剂(modulator)改变例如细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK/ERK)、糖原合酶激酶3(GSK3β)、限制点(Checkpoint，Chk)(例如CHK-1、CHK-2等)激酶、AKT激酶、JNK等激酶的功能。蛋白激酶抑制剂的实例参见WO02/22610 A1和Y.Mettey等，J.Med.Chem.，46222-236(2003)。
细胞周期蛋白依赖性激酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，它们是细胞周期和细胞增殖的驱动力。在许多严重实体瘤中CDK功能错误调节的频率非常高。各种CDK，例如CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6和CDK7以及CDK8等，在细胞周期进程中发挥截然不同的作用，可被分成G1S期或G2M期的酶。CDK2和CDK4特别引人关注，因为在多种人类癌症中，其活性常常被错误调节。CDK2活性是细胞周期G1期到S期进程中所必需的，并且CDK2是G1限制点(checkpoint)的关键组分之一。限制点用来维持细胞周期事件的固有顺序，允许细胞对损伤或增殖信号作出反应，而癌细胞中固有限制点控制的丧失是肿瘤发生的原因之一。CDK2途径在肿瘤抑制物功能水平(例如p52、RB和p27)和癌基因活化水平(细胞周期蛋白E)上影响肿瘤发生。许多报道证实CDK2的辅激活蛋白即细胞周期蛋白E以及抑制蛋白即p27，分别在下列癌症中过度表达或者表达不足乳腺癌、结肠癌、非小细胞肺癌、胃癌、前列腺癌、膀胱癌、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’slymphoma)、卵巢癌和其它癌症。有报道指出其表达的改变与CDK2活性水平升高和总存活率低下有关。这一发现使CDK2及其调节途径成为癌症治疗研发中引人注目的靶标。
有文献曾报道指出，许多腺苷5’-三磷酸(ATP)的竞争性有机小分子及肽都是CDK抑制剂，因此它们可潜在用于癌症治疗。U.S.6,413,974第1栏第23行至第15栏第10行对各种CDK及其与不同类型癌症的关系进行了充分地描述。黄酮吡多(Flavopiridol)(见下式)是一种非选择性CDK抑制剂，目前正在进行人体临床实验，A.M.Sanderowicz等，J.Clin.Oncol.16，2986-2999(1998)。

其它已知的CDK抑制剂包括例如奥罗莫星(olomoucine)(J.Vesely等，Eur.J.Biochem.，224，771-786(1994))和洛斯可维汀(roscovitine)(I.Meijer等，Eur.J.Biochem.，243，527-536(1997))。U.S.6,107,305披露了用作CDK抑制剂的某些吡唑并[3，4-b]吡啶化合物。‘305专利中的一个示例性化合物是
K.S.Kim等，J.Med.Chem.453905-3927(2002)和WO 02/10162公开了用作CDK抑制剂的某些氨基噻唑化合物。
另一系列的蛋白激酶是在细胞周期进程中作为限制点而起重要作用的激酶。限制点防止不当时间(例如响应DNA损伤)的细胞周期进程，在细胞受抑制时维持细胞的代谢平衡，但是在某些情况下，当限制点要求未得到满足时，可诱导细胞凋亡(程序性细胞死亡)。限制点控制可发生在G1期(DNA合成之前)和G2期(进入有丝分裂前)。
一系列的限制点监控着基因组的完整性，在发现DNA损伤时，这些“DNA损伤限制点”阻断G1期和G2期的细胞周期进程，减缓S期的进程。这一作用使DNA修复过程能够在基因组进行复制以及随后该遗传物质分离进入新的子代细胞前，完成其修复任务。有报道指出，CHK1的钝化转导来自DNA损伤感觉复合物(DNA-damage sensorycomplex)的信号，从而抑制细胞周期蛋白B/Cdc2激酶被激活，这有利于进入有丝分裂，消除由抗癌药或内源性DNA损伤造成的DNA损伤诱导的G.sub.2停滞，并导致优先杀死由此所产生的限制点缺陷细胞。参见例如Peng等，Science，277，1501-1505(1997)；Sanchez等，Science，277，1497-1501(1997)，Nurse，Cell，91，865-867(1997)；Weinert，Science，277，1450-1451(1997)；Walworth等，Nature，363，368-371(1993)；以及AI-Khodairy等，Molec.Bio l.Cell.，5，147-160(1994)。
选择性地操纵癌细胞的限制点控制，可以为癌症化学疗法和放射疗法方案提供广泛用途，另外，还可提供人类癌症“基因组不稳定性”的通用标志，该标志被用来作为破坏癌细胞的选择性基础。许多因素将CHK1定位于DNA损伤限制点控制中的关键靶标。阐明CHK1和功能上相关的激酶的抑制剂，可能为癌症治疗提供新的有价值的实质性治疗方法，所述功能上相关的激酶例如CDS1/CHK2，是最近发现的一种在调节S期进程中与CHK1协同作用的激酶(参见Zeng等，Nature，395，507-510(1998)；Matsuoka，Science，282，1893-1897(1998))。
另一组激酶是酪氨酸激酶。酪氨酸激酶可以是受体型的(具有胞外域、跨膜域和胞内域)或是非受体型的(完全为胞内)。受体型酪氨酸激酶包括许多具有不同生物活性的跨膜受体。实际上，已经鉴定出大约20个不同的受体型酪氨酸激酶亚家族。一个称为HER亚家族的酪氨酸激酶亚家族，包括EGFR(HER1)、HER2、HER3和HER4。迄今为止，已鉴定出的该受体亚家族的配体包括上皮(epithelial)生长因子、TGF-α、双调蛋白、HB-EGF、β细胞调节素(betacellulin)和调蛋白。这些受体型酪氨酸激酶的另一个亚家族是胰岛素亚家族，它包括INS-R、IGF-IR、IR和IR-R。PDGF亚家族包括PDGF-α受体和PDGF-β受体、CSFIR、c-kit和FLK-II。FLK家族包括激酶插入域受体(KDR)、胎肝激酶-1(FLK-1)、胎肝激酶-4(FLK-4)和fms样酪氨酸激酶-1(fit-1)。有关受体型酪氨酸激酶的详细论述，可参见Plowman等，DN&P 7(6)334-339，1994。
一般认为至少一种非受体蛋白酪氨酸激酶(即LCK)，介导T-细胞中来自细胞表面蛋白(Cd4)与交联的抗Cd4抗体相互作用的信号转导。非受体酪氨酸激酶的更多详述可参见Bolen，Oncogene，82025-2031(1993)。酪氨酸激酶非受体型还包括许多亚家族，包括Src、Frk、Btk、Csk、Abl、Zap70、Fes/Fps、Fak、Jak、Ack和LIMK。这些亚家族的每一个再细分为不同的受体。例如，Src亚家族是最大的亚家族之一，包括Src、Yes、Fyn、Lyn、Lck、Blk、Hck、Fgr和Yrk。酶的Src亚家族一直与肿瘤形成联系在一起。有关非受体型酪氨酸激酶的更多详述可参见Bolen，Oncogene，82025-2031(1993)。
蛋白激酶除了在细胞周期控制中的作用以外，还在血管生成中起着至关重要的作用，正是通过该机制由现有血管形成新的毛细血管。必要时，血管系统具有产生新毛细血管网的潜力，从而维持组织和器官的适当功能。然而在成人中，血管生成相当有限，仅发生在伤口愈合和月经期间子宫内膜新血管形成的过程中。另一方面，不希望有的血管生成是例如视网膜病、牛皮癣、类风湿性关节炎、年龄相关性黄斑变性和癌症(实体瘤)等数种疾病的标志。被证明参与血管生成过程的蛋白激酶包括生长因子受体酪氨酸激酶家族的三个成员VEGF-R2(血管内皮生长因子受体2，亦称KDR(激酶插入域受体)，亦称FLK 1)、FGF-R(成纤维细胞生长因子受体)和TEK(亦称Tie-2)。
VEGF-R2，它只在内皮细胞中表达，能与有效的血管生成生长因子VEGF结合，并通过激活其胞内激酶活性，介导随后的信号转导。因此，预期直接抑制VEGF-R2的激酶活性，即使在外源VEGF存在下也将导致血管生成减少(参见Strawn等，Cancer Res.，563540-3545(1996))，正如用无法介导信号转导的VEGF-R2突变型所表明的一样(Millauer等，Cancer Res.，561615-1620(1996))。此外，VEGF-R2除介导VEGF的血管生成活性外，似乎在成人中没有其它功能。因此，可以预期VEGF-R2激酶活性的选择性抑制剂几乎没有毒性。
同样地，FGFR结合血管生成生长因子aFGF和bFGF并介导随后的胞内信号转导。最近有报道指出，生长因子(例如bFGF)可以在诱导已达到一定大小的实体瘤的血管生成方面发挥关键作用(Yoshiji等，Cancer Research，573924-3928(1997))。然而，与VEGF-R2不同，FGF-R在遍及体内许多不同的细胞类型中表达，在成人的其它正常生理过程中可发挥或不发挥重要作用。但是，据报道在小鼠中，全身性给予FGF-R激酶活性的小分子抑制剂阻断了bFGF诱导的血管生成而无明显毒性(Mohammad等，EMBO Journal，175996-5904(1998))。
TEK(亦称Tie-2)是另一种只在内皮细胞中表达的受体酪氨酸激酶，它已被证实在血管生成中起作用。与促血管生成素-1因子的结合导致TEK激酶域的自身磷酸化，并导致似乎是介导内皮细胞与外周内皮支持细胞相互作用的信号转导过程，从而促进新形成血管的成熟。另一方面，促血管生成素-2因子似乎拮抗促血管生成素-1对TEK的作用，并且使血管生成中断(Maisonpierre等，Science，27755-60(1997))。
JNK激酶属于促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)超家族。JNK在炎症反应、应激反应、细胞增殖、细胞凋亡和肿瘤发生中起至关重要的作用。JNK激酶活性可被多种刺激物激活，包括促炎细胞因子(TNF-α和白介素-1)、淋巴细胞共刺激受体(CD28和CD40)、损伤DNA的化学药品、辐射和Fas信号转导。得自JNK敲除小鼠的结果表明，JNK参与细胞凋亡诱导和T辅助细胞分化。
Pim-1是一种小的丝氨酸/苏氨酸激酶。在淋巴和骨髓恶性肿瘤中检测出Pim-1的表达水平升高，最近Pim-1被确定为前列腺癌的预后标志(K.Peltola，“Signaling in CancerPim-1Kinase and its Partners(癌信号转导Pim-1激酶及其配偶体)”，Annales Universitatis Turkuensis，Sarja-Ser.D Osa-Tom.616，(2005年8月30日)，http://kirjasto.utu.fi/julkaisupalvelut/annaalit/2004/D616.html)。Pim-1起着细胞存活因子的作用，可防止恶性肿瘤细胞的凋亡(K.Petersen Shay等，Molecular Cancer Research 3170-181(2005))。
Aurora激酶(Aurora-A、Aurora-B、Aurora-C)是涉及人类癌症(例如结肠癌、乳腺癌和其它实体瘤)的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。一般认为Aurora-A(有时亦称AIK)参与调节细胞周期的蛋白质磷酸化事件。准确地讲，Aurora-A可在有丝分裂期间发挥控制染色体正确分离的作用。细胞周期的错误调节可导致细胞增殖和其它异常现象。在人结肠癌组织中，观察到Aurora-A、Aurora-B、Aurora-C过量表达(参见Bischoff等，EMBO J.，173052-3065(1998)；Schumacher等，J.Cell Biol.1431635-1646(1998)；Kimura等，J.Biol.Chem.27213766-13771(1997))。
c-Met是一种原癌基因(proto-oncogene)，编码肝细胞生长因子/分散因子(HGF/SF)的酪氨酸激酶受体。c-Met蛋白主要在上皮细胞中表达，由于其功能的原因亦被称为肝细胞生长因子受体或HGFR。当HGF/SF激活c-Met时，后者继而可激活多个激酶途径，包括自Ras到Raf到Mek到促分裂原活化蛋白激酶ERK1再到转录因子ETS1的途径。Met信号转导涉及人类癌症的病因和恶性进程(参见Birchmeier等，Nature Reviews Molecular Cell Biology，4915-925(2003)；Zhang等，Journal of Cellular Biochemistry，88408-417(2003)；以及Paumelle等，Oncogene，212309-2319(2002))。
促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶2(MAPKAP K2或MK2)介导多种p38MAPK依赖性细胞反应。MK2是产生细胞因子的重要胞内调节剂，细胞因子例如参与许多急性和慢性炎症性疾病(例如类风湿性关节炎和炎性肠病)的肿瘤坏死因子α(TNFa)、白介素6(IL-6)和干扰素γ(IFNg)等。MK2存在于未受刺激的细胞的细胞核中，受刺激时，转移到胞质中，在此进行磷酸化并激活马铃薯球蛋白和HSP27。MK2还涉及心力衰竭、脑缺血性损伤、应激抗性的调节和TNF-α的产生(参见Deak等，EMBO.174426-4441(1998)；Shi等，Biol.Chem.3831519-1536(2002)；Staklatvala.，Curr.Opin.Pharmacol.4372-377(2004)；以及Shiroto等，J.Mol.Cell Cardiol.3893-97(2005))。
为了治疗或预防与细胞增殖异常有关的疾病，需要有效的蛋白激酶抑制剂。此外，需要对靶激酶具有高亲和力并且对其它蛋白激酶具有高选择性的激酶抑制剂。易于合成且是有效的细胞增殖抑制剂的小分子化合物是一种或多种蛋白激酶的抑制剂，例如诸如以下蛋白激酶的抑制剂CHK1、CHK2、VEGF(VEGF-R2)、Pim-1、CDK或CDK/细胞周期蛋白复合物以及受体和非受体酪氨酸激酶。
发明概述 一方面，本发明提供下式(I)化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药和立体异构体
其中虚线表示任选的额外键，且其中 R1为H、烷基、烯基、炔基、卤素、-(亚烷基)m-芳基、-亚烯基-芳基、-亚炔基(alkynylene)-芳基、-(亚烷基)m环烷基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂环烯基，其中任何芳基、环烷基、杂芳基、杂环基或杂环烯基可任选被最多5个可以相同或不同并独立选自以下的取代基取代卤素、烷基、环烷基、-(亚烷基)m-N(R9)2、-(亚烷基)m-O-烷基、-O-芳基、-C(O)R8、-S-烷基、-O-芳基、-(亚烷基)m-CN、炔基、烯基、羟基烷基、卤代烷基、-O-卤代烷基、-C(O)OR7、-NHC(O)R7、-C(O)N(R7)2、-S(O)2N(R8)2、-NHS(O)2R8、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-杂环基和-(亚烷基)m-芳基；其中烷基、烯基或炔基可被一个或多个可以相同或不同且独立选自以下的取代基取代卤素、烷基、-N(R7)2、-C(O)OH、芳基和-O-烷基；其中任何环状R1基团可任选与环烷基、芳基、杂芳基或杂环基稠合；使得当R1为杂芳基、杂环基或杂环烯基时，这些基团通过环碳原子与式(I)化合物的其余部分连接； R2为H、烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、-(亚烷基)m-NHC(O)-R9或-(亚烷基)m-N(R9)2，或者R2和与其所连接的环碳原子一起形成羰基； R3为H、-烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、-(亚烷基)m-NHC(O)-R9或-(亚烷基)m-N(R9)2，或者R3和R3a与其各自所连接的共用碳原子一起连接形成羰基、环烷基或杂环基； R3a为H、-烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、-(亚烷基)m-NHC(O)-R9或-(亚烷基)m-N(R9)2； R4每次出现时都独立地为H、-烷基、-(亚烷基)m-芳基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-N(R8)2、-(亚烷基)m-OH、-(亚烷基)m-NHC(O)R8、羟基烷基、卤代烷基、-CH2NH2、-C(O)R5、-C(O)OR8、-C(O)-(亚烷基)m-N(R8)2、-C(O)NH-烷基、-C(O)N(烷基)2、-(亚烷基)m-NHC(O)R6、-NHC(O)OR8、-CR2C(O)NH2、-CR2C(O)NH(烷基)、-CR2C(O)NH(烷基)2或-NHS(O)2R6； R5为H、烷基、芳基、-杂芳基或-NHOH； R6每次出现时都独立地为H、烷基、芳基或卤代烷基； R7每次出现时都为H、-OH、烷基、-O-烷基、环烷基或卤代烷基； R8每次出现时都独立地为H、烷基、-(亚烷基)m-芳基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂芳基或-(亚烷基)m-环烷基； R9每次出现时都为H、烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-芳基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂芳基或-(亚烷基)m-环烷基； R10为H、-烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、-(亚烷基)m-NHC(O)-R9或-(亚烷基)m-N(R9)2，或者R10和R10a与其各自所连接的共用碳原子一起连接形成羰基、环烷基或杂环基； R10a为H、-烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、-(亚烷基)m-NHC(O)-R9或-(亚烷基)m-N(R9)2； R11每次出现时都独立地为H、烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、-(亚烷基)m-NHC(O)-R9或-(亚烷基)m-N(R9)2，或者任何R11和与其所连接的环碳原子一起形成羰基； R12每次出现时都独立地为H、烷基、-(亚烷基)m-芳基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-杂环基、-S(O)2-烷基、-S(O)2-芳基、-S(O)2-杂芳基、羟基烷基、-C(O)R8或-C(O)OR8； Ar为亚芳基或亚杂芳基，其中亚芳基或亚杂芳基通过其相邻环碳原子中的任意两个连接，且其中亚芳基或亚杂芳基可任选被最多4个可以相同或不同且独立选自以下的取代基取代卤素、烷基、-OH、-OR9、-(亚烷基)m-N(R6)2-N(烷基)2、-SR9、-S(O)R8、-S(O)2R8、-S(O)2NHR9、-C(O)R8、-C(O)OR9、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、-NHC(O)R9、卤代烷基、羟基烷基、-CN和NO2，使得当Ar为四氢亚萘基时，R2和R3各自都不为氢； W为-N(R12)-、-S-、-O-或-C(R4)2-，其中两个R4基团与它们所连接的共用碳原子一起连接形成各自可被进一步取代的环烷基或杂环基； Y为H、卤素、烷基或-CN； Z为-C(R7)-或-N-，使得当任选的额外键存在时，Z为-C(R7)-； m每次出现时都独立地为0或1； n为0-2的整数；和 p为0或1。
一方面，式(I)化合物(“苯胺基哌嗪衍生物”)可以用作蛋白激酶抑制剂。
另一方面，苯胺基哌嗪衍生物可用于治疗或预防增殖性疾病、抗增殖性疾病、炎症、关节炎、中枢神经系统疾病、心血管疾病、脱发、神经元疾病、缺血性损伤、病毒性疾病、真菌感染或与蛋白激酶活性有关的疾病(各为一种“病症”)。
另一方面，本发明提供包含有效量的至少一种苯胺基哌嗪衍生物和药学上可接受的载体的药物组合物。该组合物可用于治疗或预防患者的疾病。
又一方面，本发明提供用于治疗或预防患者的疾病的方法，该方法包括给予患者有效量的至少一种苯胺基哌嗪衍生物。
另一方面，本发明提供用于治疗患者的癌症的方法，该方法包括给予患者有效量的至少一种苯胺基哌嗪衍生物。
另一方面，本发明提供用于治疗患者的癌症的方法，该方法包括给予患者至少一种苯胺基哌嗪衍生物和至少一种不是苯胺基哌嗪衍生物的另外的抗癌药物，其中给药量合起来有效地治疗癌症。
发明详述 在一个实施方案中，本发明提供式(I)苯胺基哌嗪衍生物和/或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯和前药。苯胺基哌嗪衍生物可用于治疗或预防患者的病症。
定义与缩写 除非另有说明，否则如上所用以及贯穿本公开内容的下列术语应理解为具有以下含义 “酰基”是指H-C(O)-、烷基-C(O)-或环烷基-C(O)-，其中各基团如以前所定义。通过羰基与母体部分连接。在一个实施方案中，酰基含有低级烷基。合适的酰基的非限制性实例包括甲酰基、乙酰基和丙酰基。
“烷氧基”是指烷基-O-，其中烷基如以前所定义。合适的烷氧基的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基和正丁氧基。通过醚氧与母体部分连接。
“烷氧基羰基”是指烷基-O-CO-。合适的烷氧基羰基的非限制性实例包括甲氧基羰基和乙氧基羰基。通过羰基与母体部分连接。
“烷基”是指在链中包含约1个至约20个碳原子的直链或支链的脂族烃基。在一个实施方案中，烷基在链中含有约1个至约12个碳原子。在另一个实施方案中，烷基在链中含有约1个至约6个碳原子。支链是指一个或多个低级烷基(例如甲基、乙基或丙基)与线性烷基链连接。低级烷基是指链中具有约1个至约6个碳原子的直链或支链烷基。烷基可以是未取代的，或者任选被一个或多个可以相同或不同的取代基取代，各取代基独立选自卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基、羟基、烷氧基、-S-烷基、氨基、-NH(烷基)、-NH(环烷基)、-N(烷基)2、-O-C(O)-烷基、-O-C(O)-芳基、-O-C(O)-环烷基、羧基和-C(O)O-烷基。合适的烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、正庚基和正辛基。在一个实施方案中，烷基为具有1-6个碳原子的“C1-C6烷基”。
“烷基芳基”是指烷基-亚芳基-，其中烷基和亚芳基如以前所定义。在一个实施方案中，烷基芳基包含低级烷基。合适的烷基芳基的非限制性实例为甲苯基。通过亚芳基与母体部分连接。
“烷基磺酰基”是指烷基-S(O2)-。在一个实施方案中，基团为其中烷基是低级烷基的基团。通过磺酰基与母体部分连接。
“烷硫基”是指烷基-S-，其中烷基如以前所定义。合适的烷硫基的非限制性实例包括甲硫基和乙硫基。烷硫基通过其硫原子与母体部分连接。
“烯基”是指在链中包含至少一个碳碳双键并且包含约2个至约15个碳原子的直链或支链脂族烃基。在一个实施方案中，烯基在链中具有约2个至约12个碳原子；在另一个实施方案中，烯基在链中具有约2个至约6个碳原子。支链是指一个或多个低级烷基(例如甲基、乙基或丙基)与线性烯基链连接。低级烯基是指在链中具有约2个至约6个碳原子的直链或支链烯基。烯基可以是未取代的，或者任选被一个或多个可以相同或不同的取代基取代，各取代基独立选自卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基、烷氧基和-S(烷基)。合适的烯基的非限制性实例包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基、辛烯基和癸烯基。
“亚烷基”是指如上定义的烷基中烷基的一个氢原子被化学键置换。亚烷基的非限制性实例包括-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH(CH3)-和-CH2CH(CH3)CH2-。在一个实施方案中，亚烷基具有约1个至约6个碳原子。在另一个实施方案中，亚烷基为支链。在另一个实施方案中，亚烷基为直链。
“亚烯基”是指从上述定义的烯基中去掉一个氢所得到的双官能团。亚烯基的非限制性实例包括-CH＝CH-、-C(CH3)＝CH-和-CH＝CHCH2-。
“炔基”是指在链中含有至少一个碳碳三键并且包含约2个至约15个碳原子的直链或支链脂族烃基。在一个实施方案中，炔基在链中具有约2个至约12个碳原子；在另一个实施方案中，炔基在链中具有约2个至约4个碳原子。支链是指一个或多个低级烷基(例如甲基、乙基或丙基)与线性炔基链连接。低级炔基是指在链中具有约2个至约6个碳原子的直链或支链炔基。合适的炔基的非限制性实例包括乙炔基、丙炔基、2-丁炔基和3-甲基丁炔基。炔基可以是未取代的，或者任选被一个或多个可以相同或不同的取代基取代，各取代基独立选自烷基、芳基和环烷基。
“炔基烷基”是指炔基-烷基-，其中炔基和烷基如上定义。在一个实施方案中，炔基烷基含有低级炔基和低级烷基。通过烷基与母体部分连接。合适的炔基烷基的非限制性实例包括炔丙基甲基。
“芳烷氧基”是指芳烷基-O-，其中芳烷基如以前所定义。合适的芳烷氧基的非限制性实例包括苄氧基和1-萘甲氧基或2-萘甲氧基。通过醚氧与母体部分连接。
“芳烷氧基羰基”是指芳烷基-O-C(O)-。合适的芳烷氧基羰基的非限制性实例为苄氧基羰基。通过羰基与母体部分连接。
“芳烷基”或“芳基烷基”是指芳基-亚烷基-，其中芳基和亚烷基如以前所定义。在一个实施方案中，芳烷基包含低级亚烷基。合适的芳烷基的非限制性实例包括苄基、2-苯乙基和萘甲基。通过亚烷基与母体部分连接。
“芳烷基硫基”是指芳烷基-S-，其中芳烷基如以前所定义。合适的芳烷基硫基的非限制性实例为苄硫基。通过硫与母体部分连接。
“芳基”是指包含约6个至约14个碳原子、优选约6个至约10个碳原子的芳族单环或多环系统。芳基可任选被一个或多个可以相同或不同的如本文中定义的“环系统取代基”取代。合适的芳基的非限制性实例包括苯基和萘基。
“亚芳基”是指其中与芳基环碳原子之一连接的氢原子被单键置换的芳基。
“芳氧基”是指芳基-O-，其中芳基如以前所定义。合适的芳氧基的非限制性实例包括苯氧基和萘氧基。通过醚氧与母体部分连接。
“芳氧基羰基”指芳基-O-C(O)-。合适的芳氧基羰基的非限制性实例包括苯氧基羰基和萘氧基羰基。通过羰基与母体部分连接。
“芳基磺酰基”是指芳基-S(O2)-。通过磺酰基与母体部分连接。
“芳硫基”是指芳基-S-，其中芳基如以前所定义。合适的芳硫基的非限制性实例包括苯硫基和萘硫基。通过硫与母体部分连接。
“苯稠合环烷基”是指如上定义的环烷基部分与苯环稠合。苯稠合环烷基的非限制性实例为茚满基和四氢萘基。
“苯稠合环烯基”是指如上定义的环烯基部分与苯环稠合。苯稠合环烷基的非限制性实例包括茚基。
“苯稠合杂环基”是指如上定义的杂环基部分与苯环稠合。苯稠合杂环基的非限制性实例包括二氢吲哚基和2，3-二氢苯并呋喃基。
“苯稠合杂芳基”是指如上定义的杂芳基部分与苯环稠合。苯稠合杂芳基的非限制性实例为吲哚基、吲唑基、苯并呋喃基、喹啉基、异喹啉基、苯并噻唑基、吲哚基、苯并咪唑基和苯并噻吩基。
“组合物”是指包括含规定剂量的规定成分的产品以及由规定剂量的规定成分直接或间接地组合而获得的任何产品。
“环烷基”是指包含约3个至约10个碳原子、优选约5个至约10个碳原子的非芳族单环或多环系统。在一个实施方案中，环烷基环含有约5个至约7个环原子。环烷基可任选被一个或多个可以相同或不同的如上定义的“环系统取代基”取代。合适的单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环戊基、环己基、环庚基等。合适的多环环烷基的非限制性实例包括1-十氢萘基、降冰片烷基、金刚烷基等。
“环烷基烷基”是指如上定义的环烷基部分通过烷基部分(如上定义)与母核连接。合适的环烷基烷基的非限制性实例包括环己基甲基、金刚烷基甲基等。
“环烯基”是指包含3个至约10个碳原子并且具有至少一个环内碳碳双键的非芳族单环或多环系统。在一个实施方案中，环烯基具有约5至约10个环碳原子。在另一个实施方案中，环烯基具有约5个至约7个环碳原子。环烯基可任选被一个或多个可以相同或不同的如上定义的“环系统取代基”取代。合适的单环环烯基的非限制性实例包括环戊烯基、环己烯基、环庚-1，3-二烯等。合适的多环环烯基的非限制性实例为降冰片烯基。
“环烯基烷基”是指如上定义的环烯基部分通过烷基部分(如上定义)与母核连接。合适的环烯基烷基的非限制性实例包括环戊烯基甲基、环己烯基甲基等。
“有效量”或“治疗有效量”是指当给予患有疾病的患者时，有效地产生所需要的治疗、改善、抑制或预防效果的苯胺基哌嗪衍生物和/或另外的治疗药或其组合物的量。在本发明的联合疗法中，有效量可指每种单独的药物或联合药物作为整体的量，其中所给予的所有药物的量合起来是有效的，但是联合药物中的各药物组分可能并不是以各自的有效量存在。
“卤素”是指-F、-Cl、-Br或-I。在一个实施方案中，卤素是指-Cl或-Br。在另一个实施方案中，卤素是指-F。
“卤代烷基”是指如上定义的烷基中一个或多个烷基的氢原子被卤素置换。在一个实施方案中，卤代烷基具有1-6个碳原子。在另一个实施方案中，卤代烷基被1-3个氟原子取代。卤代烷基的非限制性实例包括-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2Cl和-CCl3。
“杂芳基”是指包含约5个至约14个环原子的芳族单环或多环系统，其中1-4个环原子独立地为O、N或S，其余的环原子为碳原子。在一个实施方案中，杂芳基具有5-10个环原子。在另一个实施方案中，杂芳基为单环，并具有5或6个环原子。杂芳基可任选被一个或多个可以相同或不同的如下定义的“环系统取代基”取代。杂芳基通过环碳原子连接，且杂芳基的任何氮原子可任选被氧化成相应的N-氧化物。术语“杂芳基”还包括与苯环稠合的如上定义的杂芳基。杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、吡啶酮(包括N-取代的吡啶酮)、异噁唑基、异噻唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、呋咱基、吡咯基、三唑基、1，2，4-噻二唑基、吡嗪基、哒嗪基、喹喔啉基、酞嗪基、羟吲哚基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[2，1-b]噻唑基、苯并呋咱基、吲哚基、氮杂吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹啉基、咪唑基、噻吩并吡啶基、喹唑啉基、噻吩并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、异喹啉基、苯并氮杂吲哚基、1，2，4-三嗪基、苯并噻唑基等。术语“杂芳基”还指部分饱和的杂芳基部分，例如四氢异喹啉基、四氢喹啉基等。在一个实施方案中，杂芳基是未取代的。在另一个实施方案中，杂芳基为5元杂芳基。在另一个实施方案中，杂芳基为6元杂芳基。
本文所用术语“亚杂芳基”是指这样的杂芳基，其中与杂芳基环原子之一连接的氢原子被单键置换。
“杂芳基烷基”是指如上定义的杂芳基部分通过烷基部分(如上定义)与母核连接。合适的杂芳基的非限制性实例包括2-吡啶基甲基、喹啉基甲基等。
“杂环基”是指包含3个至约10个环原子的非芳族饱和单环或多环系统，其中1-4个环原子独立地为O、S或N，其余的环原子为碳原子。在一个实施方案中，杂环基具有约5个至约10个环原子。在另一个实施方案中，杂环基具有5个或6个环原子。环系中不存在相邻的氧和/或硫原子。杂环基环中的任何-NH基团可以被保护的形式存在，例如为-N(BOC)、-N(Cbz)、-N(Tos)等；这类被保护的杂环基被视为本发明的组成部分。术语“杂环基”还包括如上定义的杂环基与芳基(例如苯)或杂芳基环稠合。杂环基可任选被一个或多个可以相同或不同的如下定义的“环系统取代基”取代。杂环基的氮原子或硫原子可任选被氧化成相应的N-氧化物、S-氧化物或S，S-二氧化物。单环杂环基环的非限制性实例包括哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、噻唑烷基、1，4-二氧杂环己烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、内酰胺、内酯等。杂环基的环碳原子可被官能化为羰基。这类杂环基的一个说明性实例为吡咯烷酮基
在一个实施方案中，杂环基是未取代的。在另一个实施方案中，杂环基是5元杂环基。在另一个实施方案中，杂环基是6元杂环基。
“杂环基烷基”是指如上定义的杂环基部分通过烷基部分(如上定义)与母核连接。合适的杂环基烷基的非限制性实例包括哌啶基甲基、哌嗪基甲基等。
“杂环烯基”是指如上定义的杂环基中含有3-10个环原子及至少一个环内碳碳双键或碳氮双键。在一个实施方案中，杂环烯基具有5-10个环原子。在另一个实施方案中，杂环烯基为单环，并具有5个或6个环原子。杂环烯基可任选被一个或多个环系统取代基取代，其中“环系统取代基”如上定义。杂环烯基的氮原子或硫原子可任选被氧化成相应的N-氧化物、S-氧化物或S，S-二氧化物。杂环烯基的非限制性实例包括1，2，3，4-四氢吡啶基、1，2-二氢吡啶基、1，4-二氢吡啶基、1，2，3，6-四氢吡啶基、1，4，5，6-四氢嘧啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、2-咪唑啉基、2-吡唑啉基、二氢咪唑基、二氢噁唑基、二氢噁二唑基、二氢噻唑基、3，4-二氢-2H-吡喃基、二氢呋喃基、氟取代的二氢呋喃基、7-氧杂二环[2.2.1]庚烯基、二氢噻吩基、二氢噻喃基等。杂环烯基的环碳原子可被功能化为羰基。这类杂环烯基的一个说明性实例为
在一个实施方案中，杂环烯基是未取代的。在另一个实施方案中，杂环烯基为5元杂环烯基。
“杂环烯基烷基”是指如上定义的杂环烯基部分通过烷基部分(如上定义)与母核连接。
应当注意的是，本发明在含有杂原子的环系统中，与N、O或S相邻的碳原子上无羟基，与另一个杂原子相邻的碳原子上无N或S基团。因此，例如在下环中
没有-OH与被标为2和5的碳直接连接。
还应当注意的是，互变异构体例如下列部分

与
在本发明的某些实施方案中被视为等同物。
“杂芳烷基”是指杂芳基-烷基-，其中杂芳基和烷基如上定义。在一个实施方案中，杂芳烷基含有低级烷基。合适的芳烷基的非限制性实例包括吡啶基甲基和喹啉-3-基甲基。通过烷基与母体部分连接。
“羟基烷基”是指如上定义的烷基中一个或多个烷基的氢原子被-OH基团置换。在一个实施方案中，羟基烷基具有1-6个碳原子。羟基烷基的非限制性实例包括-CH2OH、-CH2CH2OH、-CH2CH2CH2OH和-CH2CH(OH)CH3。
“患者”是人或非人类哺乳动物。在一个实施方案中，患者是人。在另一个实施方案中，患者是非人类哺乳动物，包括但不限于猴、狗、狒狒、恒河猴、小鼠、大鼠、马、猫或兔。在另一个实施方案中，患者是陪伴动物，包括但不限于狗、猫、兔、马或白鼬。在一个实施方案中，患者是狗。在另一个实施方案中，患者是猫。
有关化合物的术语“纯化(的)”、“纯化形式”或“分离纯化形式”是指所述化合物由合成过程(例如由反应混合物)或天然来源或其组合分离后的物理状态。因此，有关化合物的术语“纯化(的)”、“纯化形式”或“分离纯化形式”是指所述化合物通过纯化方法或本文所述的或本领域技术人员熟知的方法(例如色谱法、重结晶等)获得后的物理状态，其纯度足以通过本文所述的或本领域技术人员熟知的标准分析技术进行表征。
“环系统取代基”是指与芳族或非芳族环系统连接并例如置换环系统有效氢的取代基。环系统取代基可以相同或不同，各自独立选自烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、-烷基-芳基、-芳基-烷基、-亚烷基-杂芳基、-亚烯基-杂芳基、-亚炔基-杂芳基、羟基、羟基烷基、卤代烷基、-O-烷基、-O-卤代烷基、-亚烷基-O-烷基、-O-芳基、芳烷氧基、酰基、-C(O)-芳基、卤素、硝基、氰基、羧基、-C(O)O-烷基、-C(O)O-芳基、-C(O)O-亚烯基(alkelene)-芳基、-S(O)-烷基、-S(O)2-烷基、-S(O)-芳基、-S(O)2-芳基、-S(O)-杂芳基、-S(O)2-杂芳基、-S-烷基、-S-芳基、-S-杂芳基、-S-亚烷基-芳基、-S-亚烷基-杂芳基、环烷基、杂环基、-O-C(O)-烷基、-O-C(O)-芳基、-O-C(O)-环烷基、-C(＝N-CN)-NH2、-C(＝NH)-NH2、-C(＝NH)-NH(烷基)、Y1Y2N-、Y1Y2N-烷基-、Y1Y2NC(O)-和Y1Y2NSO2-，其中Y1和Y2可以相同或不同，并独立选自氢、烷基、芳基、环烷基和-亚烷基-芳基。“环系统取代基”还可指同时置换环系统两个相邻碳原子上两个可用氢(每个碳上一个H)的单一部分。该部分的实例为形成例如下列部分的亚甲二氧基、亚乙二氧基、-C(CH3)2-、-O-亚烷基-O-等
术语“取代(的)”是指在指定原子上的一个或多个氢被所选的指定基团置换，前提条件是不超过现有情况下指定原子的正常化合价，并且这种取代产生稳定化合物。取代基和/或变量的组合只有在这种组合产生稳定化合物的情况下才被允许。所谓“稳定化合物”或“稳定结构”是指化合物足够稳固，经得起从反应混合物中分离以达到适用的纯度，并可配制成有效的治疗药物。
术语“任选取代(的)”是指被指定基团、原子团或部分的任选取代。
还应当注意的是，在本说明书的正文、流程、实施例及表格中若出现未满足化合价的任何碳原子或杂原子时，则假定有足够数目的氢原子来满足化合价。
如果化合物中的官能团被称为“被保护(的)”，则这是指所述化合物在进行反应时，该官能团呈修饰形式从而免除受保护位置上的不当副反应。合适的保护基为本领域普通技术人员所了解，也可参考标准教科书予以识别，例如T.W.Greene等，Protective Groups in OrganicSynthesis(1991)，Wiley，New York。
在本文中，当任何变量(例如芳基、杂环、R2等)在任何组分或任何化学结构或化学式中出现不止一次时，其每次出现时的定义都独立于其它各次出现时的定义。
本发明还包括本发明化合物的前药和溶剂合物。有关前药的论述参见T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems(1987)，A.C.S.专题论文系列第14卷；以及Bioreversible Carriers inDrug Design(1987)，Edward B.Roche主编，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press。术语“前药”是指化合物(例如药物前体)在体内转化产生苯胺基哌嗪衍生物或该化合物的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。可通过不同的机制(例如代谢过程或化学过程)产生所述转化，例如通过血液中的水解。有关前药使用的论述参见T.Higuchi和W.Stella，“Pro-drugs as Novel Delivery Systems”，专题论文系列第14卷，以及Bioreversible Carriers in Drug Design(1987)，EdwardB.Roche主编，American Pharmaceutical Association and PergamonPress，1987。
例如，如果苯胺基哌嗪衍生物或该化合物的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物含有羧酸官能团，则前药可包含该酸基团中的氢原子被例如以下基团置换所形成的酯(C1-C8)烷基、(C2-C12)烷酰氧基甲基、具有4-9个碳原子的1-(烷酰氧基)乙基、具有5-10个碳原子的1-甲基-1-(烷酰氧基)-乙基、具有3-6个碳原子的烷氧基羰基氧基甲基、具有4-7个碳原子的1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有5-8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有3-9个碳原子的N-(烷氧基羰基)氨基甲基、具有4-10个碳原子的1-(N-(烷氧基羰基)氨基)乙基、3-酞基、4-巴豆酸内酯基、γ-丁内酯-4-基、二-N，N-(C1-C2)烷基氨基(C2-C3)烷基(例如β-二甲氨基乙基)、氨基甲酰基-(C1-C2)烷基、N，N-二(C1-C2)烷基氨基甲酰基-(C1-C2)烷基和哌啶-1-基-、吡咯烷-1-基-或吗啉代(C2-C3)烷基等。
同样地，如果苯胺基哌嗪衍生物含有醇官能团，则前药可通过醇基团中的氢原子被例如以下基团置换而形成(C1-C6)烷酰氧基甲基、1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、(C1-C6)烷氧基羰基氧基甲基、N-(C1-C6)烷氧基羰基氨基甲基、琥珀酰基、(C1-C6)烷酰基、α-氨基(C1-C4)烷基、芳基酰基和α-氨酰基或α-氨酰基-α-氨酰基，其中各α-氨酰基独立选自天然存在的L-氨基酸、-P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或糖基(由从半缩醛形式的糖中去掉一个羟基得到的基团)等。
如果苯胺基哌嗪衍生物含有胺官能团，则前药可通过胺基团中的氢原子被例如以下基团置换而形成R-羰基、RO-羰基、NRR-羰基，其中R和R’各自独立地为(C1-C10)烷基、(C3-C7)环烷基、苄基，或者R-羰基为天然的α-氨酰基或天然的α-氨酰基、-C(OH)C(O)OY1(其中Y1为H、(C1-C6)烷基或苄基)、-C(OY2)Y3(其中Y2为(C1-C4)烷基，Y3为(C1-C6)烷基、羧基(C1-C6)烷基、氨基(C1-C4)烷基、一-N-(C1-C6)烷基氨基烷基或二-N，N-(C1-C6)烷基氨基烷基)、-C(Y4)Y5(其中Y4为H或甲基，Y5为一-N-(C1-C6)烷基氨基吗啉代、二-N，N-(C1-C6)烷基氨基吗啉代、哌啶-1-基或吡咯烷-1-基)等。
本发明的一种或多种化合物可以非溶剂化及与药学上可接受的溶剂(例如水、乙醇等)一起以溶剂化形式存在，本发明包括溶剂化和非溶剂化这两种形式。“溶剂合物”是指本发明化合物与一个或多个溶剂分子的物理缔合。这种物理缔合包括不同程度的离子键结合和共价键结合(包括氢键结合)。在某些情况下，例如当一个或多个溶剂分子掺到结晶固体的晶格中时，能够分离出溶剂合物。“溶剂合物”既包括溶液相又包括可分离的溶剂合物。合适的溶剂合物的非限制性实例包括乙醇化物、甲醇化物等。“水合物”是指其中溶剂分子是水的溶剂合物。
本发明的一种或多种化合物可任选转化为溶剂合物。溶剂合物的制备法广为人知。因此，例如M.Caira等，J.Pharmaceutical Sci.，93(3)，601-611(2004)描述了抗真菌药氟康唑(fluconazole)的乙酸乙酯溶剂合物以及氟康唑水合物的制备。溶剂合物、半溶剂合物、水合物等的类似制备法可参见E.C.van Tonder等，AAPS PharmSciTech.，5(1)，第12篇论文(2004)和A.L.Bingham等，Chem.Commun.，603-604(2001)。一个典型的非限制性方法包括在高于环境温度的温度下，将本发明的化合物溶于所需含量的所需溶剂(有机溶剂或水或其混合物)中，按足以形成晶体的速度使溶液冷却，然后用标准方法分离出晶体。分析技术(例如红外光谱法)显示，作为溶剂合物(或水合物)的晶体中存在溶剂(或水)。
苯胺基哌嗪衍生物可以形成盐，这些盐也属于本发明的范围。除非另有规定，否则本文提及苯胺基哌嗪衍生物时应理解为包括提及其盐。本文所使用的术语“盐”表示与无机酸和/或有机酸形成的酸加成盐，以及与无机碱和/或有机碱形成的碱加成盐。此外，当苯胺基哌嗪衍生物含有例如但不限于吡啶或咪唑等碱性部分以及例如但不限于羧酸等酸性部分时，可形成两性离子(“内盐”)，并且这类两性离子也包括在本文所使用的术语“盐”内。尽管其它盐也适用，但是优选药学上可接受的(即无毒的生理上可接受的)盐。例如式I化合物的盐可以如下形成使苯胺基哌嗪衍生物与适量(例如1当量)的酸或碱在介质(例如盐在其中析出的介质)中进行反应，或者在水性介质中进行反应后冻干。
示例性的酸加成盐包括乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、乙二酸盐、磷酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(toluenesulfonate/tosylate)等。此外，文献中论述了通常认为适于与碱性药物化合物形成药用盐的酸类，例如P.Stahl等，Camille G.(主编)Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use.(2002)ZurichWiley-VCH；S.Berge等，Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.of Pharmaceutics(1986)33201-217；Anderson等，The Practice of Medicinal Chemistry(1996)，Academic Press，New York；以及The Orange Book(见Food&DrugAdministration网站，Washington，D.C.)。这些文献的内容都通过引用结合到本文中。
示例性的碱式盐包括铵盐、碱金属盐(例如钠盐、锂盐和钾盐等)、碱土金属盐(例如钙盐和镁盐等)、与有机碱(例如二环己胺、叔丁胺等有机胺)的盐及与氨基酸(例如精氨酸、赖氨酸等)的盐。碱性含氮基团可以用例如以下的试剂季铵化低级烷基卤化物(例如甲基、乙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二丁酯)、长链卤化物(例如癸基、月桂基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如苄基溴和苯乙基溴)等。
所有这类酸式盐和碱式盐都包括在本发明药学上可接受的盐的范围内，而且对于本发明的目的，所有酸式盐和碱式盐都被视为等同于相应化合物的游离形式。
本发明化合物的药学上可接受的酯包括下列基团(1)由羟基酯化所获得的羧酸酯，其中成酯基团羧酸部分的非羰基部分选自直链或支链烷基(例如乙酰基、正丙基、叔丁基或正丁基)、烷氧基烷基(例如甲氧基甲基)、芳烷基(例如苄基)、芳氧基烷基(例如苯氧基甲基)、芳基(例如任选被例如卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基或氨基取代的苯基)；(2)磺酸酯，例如烷基磺酰基或芳烷基磺酰基(例如甲磺酰基)；(3)氨基酸酯(例如L-缬氨酰基或L-异亮氨酰基)；(4)膦酸酯；和(5)单磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯。磷酸酯可用例如C1-20醇或其反应衍生物或者用2，3-二(C6-24)酰基甘油进一步酯化。
苯胺基哌嗪衍生物及其盐、溶剂合物、酯和前药可以其互变异构体形式(例如为酰胺或亚氨基醚)存在。所有这些互变异构体形式都包括在本文中作为本发明的组成部分。
苯胺基哌嗪衍生物可含有不对称中心或手性中心，因此，存在不同的立体异构体形式。苯胺基哌嗪衍生物的所有立体异构体形式及其混合物，包括外消旋混合物都构成本发明的组成部分。另外，本发明包括所有的几何异构体和位置异构体。例如，如果苯胺基哌嗪衍生物含有双键或稠环，则顺式和反式以及混合物都包括在本发明范围内。
可以通过本领域技术人员熟知的方法(例如色谱法和/或分级结晶法)，根据非对映体的理化差异，将非对映体混合物分离成各个非对映体。可按以下方法分离对映体使对映体与合适的旋光化合物(例如手性醇或Mosher酰氯等手性助剂)反应，将对映体混合物转化成非对映体混合物后，分离非对映体，并将各个非对映体转化(例如水解)成相应的纯对映体。同样，一些苯胺基哌嗪衍生物可以是阻转异构体(例如取代二芳基类)，也被视为本发明的组成部分。还可使用手性HPLC柱分离对映体。
苯胺基哌嗪衍生物还可能以不同的互变异构体形式存在，所有这些形式都包括在本发明的范围内。同样，本发明还包括例如化合物所有的酮-烯醇和亚胺-烯胺形式。
本发明的范围包括本发明化合物(包括本发明化合物的盐、溶剂合物、酯和前药以及前药的盐、溶剂合物和酯)所有的立体异构体(例如几何异构体、旋光异构体等)，例如由各种取代基上的不对称碳所致而存在的立体异构体，包括对映异构体(甚至在没有不对称碳的情况下也可能存在)、旋转异构体、阻转异构体和非对映异构体，还有位置异构体(例如4-吡啶基和3-吡啶基)。(例如，如果苯胺基哌嗪衍生物含有双键或稠环，则顺式和反式以及混合物均包括在本发明范围内。同样，本发明还包括例如化合物的所有酮-烯醇形式和亚胺-烯胺形式)。
例如，本发明化合物的各个立体异构体可以基本上不含其它异构体，或者可以是混合物，例如为外消旋物，或与所有其它立体异构体的混合物或与所选的其它立体异构体的混合物。本发明的手性中心可具有IUPAC 1974Recommendations定义的S构型或R构型。所使用的“盐”、“溶剂合物”、“酯”、“前药”等术语同样适用于本发明化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、位置异构体、外消旋物或前药的盐、溶剂合物、酯和前药。
本发明还包括同位素标记的本发明化合物，该化合物与本文所述化合物相同，只是一个或多个原子被原子质量或质量数不同于天然存在的原子质量或质量数的原子置换。可掺入到本发明化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别为2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。
某些同位素标记的苯胺基哌嗪衍生物(例如用3H和14C标记的苯胺基哌嗪衍生物)可用于化合物和/或底物组织分布测定。氚化(即3H)和碳-14(即14C)同位素因其易于制备，具有可检测性，故是特别优选的。此外，用较重同位素例如氘(即2H)取代，由于代谢稳定性更高(例如体内半寿期延长或剂量需求减少)，从而可提供某些治疗优势，因此在某些情况下可能是优选的。通常可根据类似于本文所公开的流程和/或实施例中的方法，用合适的同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂，来制备同位素标记的苯胺基哌嗪衍生物。
苯胺基哌嗪衍生物的多晶型物，以及苯胺基哌嗪衍生物的盐、溶剂合物、酯、前药和立体异构体的多晶型物，也包括在本发明范围内。
下文使用了具有以下含义的下列缩写Boc为叔丁氧基羰基，dba为二亚苄基丙酮，DMF为N，N-二甲基甲酰胺，DMSO为二甲亚砜，EtOAc为乙酸乙酯，LCMS为液相色谱质谱联用，MeOH为甲醇，NMR为核磁共振，PBS为磷酸缓冲盐溶液，S-phos为2-二环己基膦基-2′，6′-二甲氧基联苯，SPA为闪烁亲近测定法，Tf为三氟甲磺酸基，TFA为三氟乙酸，X-phos为5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯和Xantphos为9，9-二甲基-4，5-双(二苯膦基)咕吨。
式(I)苯胺基哌嗪衍生物 本发明提供下式(I)苯胺基哌嗪衍生物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药和立体异构体
其中虚线表示任选的额外键，且其中R1、R2、R3、R3a、R10、R10a、R11、n、p、Ar、W、Y和Z如上述式(I)中的定义。
在一个实施方案中，R1为H、烷基、烯基、芳基、亚烯基-芳基、-亚烷基-芳基、杂芳基或杂环基，其中杂芳基或杂环基可任选与苯环稠合。
在另一个实施方案中，R1为H。
在另一个实施方案中，R1为烷基。
在又一个实施方案中，R1为卤素。
在再一个实施方案中，R1为环烷基。
在另一个实施方案中，R1为苯稠合环烷基。
在再一个实施方案中，R1为杂芳基。
在又一个实施方案中，R1为苯稠合杂芳基。
在另一个实施方案中，R1为杂环基。
在另一个实施方案中，R1为杂环烯基。
在又一个实施方案中，R1为苯稠合杂环基。
在再一个实施方案中，R1为苯稠合杂环烯基。
在一个实施方案中，R1为甲基。
在一个实施方案中，R1为苯基。
在另一个实施方案中，R1为吡啶基。
在又一个实施方案中，R1为噻吩基。
在再一个实施方案中，R1为苯并呋喃基。
在又一个实施方案中，R1为2，3-二氢苯并呋喃基。
在一个实施方案中，R1为异噁唑基。
在另一个实施方案中，R1为炔基。
在再一个实施方案中，R1为-C≡C-苯基。
在另一个实施方案中，R1为环烷基。
在又一个实施方案中，R1为环丙基、环戊基或环己基。
在另一个实施方案中，R1为吡唑基。
在又一个实施方案中，R1为嘧啶基。
在一个实施方案中，R1为联苯基。
在一个实施方案中，R1为-苯基-O-苯基。
在另一个实施方案中，R1为呋喃基。
在另一个实施方案中，R1为吡咯基。
在又一个实施方案中，R1为吲哚基。
在再一个实施方案中，R1为N-烷基吲哚基。
在一个实施方案中，R1为
其中r为1、2或3。
在具体实施方案中，R1为

在一个实施方案中，R1为苯基，其中苯基具有1或2个独立选自以下的取代基烷基、烷氧基、-N(烷基)2、-CH2N(烷基)2、-NH2、-NHSO2烷基、-NHC(O)H、-NHC(O)烷基、-SO2N(烷基)2、SO2NH烷基、-S-烷基、-CH2-O-CH3或-CH2OH。
在一个实施方案中，R1为杂芳基，其中杂芳基具有1或2个独立选自以下的取代基烷基、-C(O)O-烷基、-C(O)NH-烷基、-C(O)NH-环烷基、-C(O)-杂环基、-C(O)OH、-CN、苯基或-5元杂芳基。
在另一个实施方案中，R1为
其中Ra是一个选自以下的取代基-H、-烷基、-COOH、-CN、苯基或噻吩基。
在一个实施方案中，R2为-H。
在另一个实施方案中，R2为-烷基。
在一个实施方案中，R2为-CH3。
在另一个实施方案中，R2为-α-CH3。
在另一个实施方案中，R2为-β-CH3。
在又一个实施方案中，R2为-亚烷基-NH2。
在一个实施方案中，R2为-NH2。
在另一个实施方案中，R2为-α-NH2。
在另一个实施方案中，R2为-β-NH2。
在又一个实施方案中，R2为-亚烷基-NH2。
在再一个实施方案中，R2为-CH2NH2。
在一个实施方案中，R2和与其所连接的碳原子一起形成羰基。
在一个实施方案中，R3为-H。
在另一个实施方案中，R3a为-H。
在另一个实施方案中，R3和R3a各自为-H。
在又一个实施方案中，R3为-烷基。
在另一个实施方案中，R3为卤代烷基。
在再一个实施方案中，R3为羟基烷基。
在一个实施方案中，R3为-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2。
在另一个实施方案中，R3为-(亚烷基)m-NHC(O)-R9。
在另一个实施方案中，R3为-(亚烷基)m-N(R9)2。
在一个实施方案中，R3为-CH3。
在另一个实施方案中，R3为-α-CH3。
在另一个实施方案中，R3为-β-CH3。
在一个实施方案中，R3为-NH2。
在另一个实施方案中，R3为-α-NH2。
在另一个实施方案中，R3为-β-NH2。
在又一个实施方案中，R3为-亚烷基-NH2。
在再一个实施方案中，R3为-CH2NH2。
在一个实施方案中，R3和R3a与它们所连接的共用碳原子一起连接形成羰基。
在另一个实施方案中，R3和R3a与它们所连接的共用碳原子一起连接形成环烷基。
在另一个实施方案中，R3和R3a与它们所连接的共用碳原子一起连接形成杂环基。
在一个实施方案中，R2和R3各自为-H。
在另一个实施方案中，R2为烷基，R3为-H。
在另一个实施方案中，R2为-H，R3为烷基。
在一个实施方案中，R10为-H。
在另一个实施方案中，R10a为-H。
在另一个实施方案中，R10和R10a各自为-H。
在又一个实施方案中，R10为-烷基。
在另一个实施方案中，R10为卤代烷基。
在再一个实施方案中，R10为羟基烷基。
在一个实施方案中，R10为-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2。
在另一个实施方案中，R10为-(亚烷基)m-NHC(O)-R9。
在另一个实施方案中，R10为-(亚烷基)m-N(R9)2。
在一个实施方案中，R10为-CH3。
在另一个实施方案中，R10为-α-CH3。
在另一个实施方案中，R10为-β-CH3。
在一个实施方案中，R10为-NH2。
在另一个实施方案中，R10为-α-NH2。
在另一个实施方案中，R10为-β-NH2。
在又一个实施方案中，R10为-亚烷基-NH2。
在再一个实施方案中，R10为-CH2NH2。
在一个实施方案中，R10和R10a与它们所连接的共用碳原子一起连接形成羰基。
在另一个实施方案中，R10和R10a与它们所连接的共用碳原子一起连接形成环烷基。
在另一个实施方案中，R10和R10a与它们所连接的共用碳原子一起连接形成杂环基。
在一个实施方案中，R11为-H。
在另一个实施方案中，R11为-烷基。
在一个实施方案中，R11为-CH3。
在另一个实施方案中，R11为-α-CH3。
在另一个实施方案中，R11为-β-CH3。
在又一个实施方案中，R11为-亚烷基-NH2。
在一个实施方案中，R11为-NH2。
在另一个实施方案中，R11为-α-NH2。
在另一个实施方案中，R11为-β-NH2。
在又一个实施方案中，R11为-亚烷基-NH2。
在再一个实施方案中，R11为-CH2NH2。
在另一个实施方案中，R11和与其所连接的碳原子一起形成羰基。
在一个实施方案中，n和p各自为1，R10、R10a和R11各自为H。
在另一个实施方案中，n和p各自为1，R2、R10、R10a和R11各自为H。
在又一个实施方案中，n和p各自为1，R2、R3a、R10、R10a和R11各自为H。
在一个实施方案中，Z为-N-；n和p各自为1；R10、R10a和R11各自为H。
在另一个实施方案中，Z为-N-；n和p各自为1；R2、R10、R10a和R11各自为H。
在又一个实施方案中，Z为-N-；n和p各自为1；R2、R3a、R10、R10a和R11各自为H。
在一个实施方案中，Ar为-亚芳基-。
在另一个实施方案中，Ar为-亚杂芳基-。
在另一个实施方案中，Ar为
在再一个实施方案中，Ar为
在一个实施方案中，W为-C(R4)2-。
在另一个实施方案中，W为-N(R12)-。
在另一个实施方案中，W为-O-。
在又一个实施方案中，W为-S-。
在一个实施方案中，W为-C(R4)2-，且两个R4基团与它们所连接的共用碳原子一起连接形成环烷基。
在另一个实施方案中，W为-C(R4)2-，且两个R4基团与它们所连接的共用碳原子一起连接形成杂环基。
在另一个实施方案中，W为-C(R4)2-，且两个R4基团与它们所连接的共用碳原子一起连接形成具有下式的基团
在一个实施方案中，W为-C(R4)2-，其中每个R4基团独立选自H、-(亚烷基)m-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-C(O)NH2、-OH、-C(O)O-烷基、5或6元杂芳基或羟基烷基。
在另一个实施方案中，W为-C(R4)2-，其中每个R4基团独立选自H、-(亚烷基)m-NH2、-NH--烷基、-N(烷基)2或-C(O)NH2。
在一个实施方案中，W为-C(NH2)(C(O)NH2)-。
在另一个实施方案中，W为-C(NH2)(烷基)-。
在另一个实施方案中，W为-C(NH2)(CH3)-。
在又一个实施方案中，W为-C(NH2)(-C(O)NHOH)-。
在一个实施方案中，W为-CH(-NC(O)CF3)-。
在另一个实施方案中，W为-CH(-NS(O)2烷基)-。
在又一个实施方案中，W为-C(NH2)(-C(O)NHOH)-。
在一个实施方案中，W为-CH(-CH2NH2)-。
在另一个实施方案中，W为-C(-C(O)NH2)(-NH烷基)-。
在另一个实施方案中，W为-CH(-C(O)NH2)-。
在又一个实施方案中，W为-CH2-。
在再一个实施方案中，W为-NH-。
在又一个实施方案中，W为-CH(OH)-。
在又一个实施方案中，W为-CH(NH2)-。
在一个实施方案中，W为-CH(CH3)-。
在另一个实施方案中，W为-CH(-C(O)CH3)-。
在另一个实施方案中，W为-C(OH)(烷基)-。
在另一个实施方案中，W为-C(OH)(-亚烷基-OH)-。
在另一个实施方案中，n为0；p为1或2；Z为-N-；R2、R3、R3a、R10、R10a和R11各自为H；W为-C(R4)2-；且两个R4基团与它们所连接的共用碳原子一起连接形成具有下式的基团
在一个实施方案中，n为0；p为1或2；Z为-N-；R2、R3、R3a、R10、R10a和R11各自为H；W为-C(R4)2-，其中每个R4基团独立选自H、-(亚烷基)m-NH2、-NH--烷基、-N(烷基)2、-C(O)NH2、-OH、-C(O)O-烷基、5或6元杂芳基或羟基烷基。
在另一个实施方案中，n为0；p为1或2；Z为-N-；R2、R3、R3a、R10、R10a和R11各自为H；W为-C(R4)2-，其中每个R4基团独立选自H、-(亚烷基)m-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2或-C(O)NH2。
在一个实施方案中，Y为-H。
在另一个实施方案中，Y为-卤素、-烷基或-CN。
在另一个实施方案中，Y为甲基。
在一个实施方案中，Z为-C(R7)-。
在另一个实施方案中，Z为-C-，且存在任选的额外键。
在另一个实施方案中，Z为-CH-。
在又一个实施方案中，Z为-C(烷基)-。
在再一个实施方案中，Z为-C(OH)-。
在另一个实施方案中，Z为-C(-O-烷基)-。
在又一个实施方案中，Z为-C(-CF3)-。
在又一个实施方案中，Z为-N-。
在一个实施方案中，n为0。
在另一个实施方案中，n为1，p为1。
在另一个实施方案中，n为2，p为1。
在一个实施方案中，n为0，W为-CH2-，Z为-N-。
在另一个实施方案中，n为1，W为-CH2-，Z为-N-。
在另一个实施方案中，n为1，W为-NH-，Z为-N-。
在另一个实施方案中，n为0，W为-CH2-，Z为-N-，R3为-H，R3a为-H。
在又一个实施方案中，n为1，W为-C(NH2)(C(O)NH2)-，Z为-N-，R3为-H，R3a为-H。
在再一个实施方案中，n为1，W为-CH2-，Z为-N-，R3为-H，R3a为-NH2。
在另一个实施方案中，n为1，W为-CH2-，Z为-N-，R3为-H，R3a为-β-NH2。
在又一个实施方案中，n为0，W为-CH2-，Z为-N-，R3为-H，R3a为-NH2。
在又一个实施方案中，n为0，W为-CH2-，Z为-N-，R3为-H，R3a为-α-NH2。
在另一个实施方案中，n为1，W为-CH(NH2)-，Z为-N-，R3为-H，R3a为-H。
在另一个实施方案中，n为1，W为-CH(OH)-，Z为-N-，R3为-H，R3a为-H。
在又一个实施方案中，n为1，W为-CH(NH2)(烷基)-，Z为-N-，R3为-H，R3a为-H。
在一个实施方案中，Z为-N-。
在另一个实施方案中，Y为-H，Z为-N-。
在又一个实施方案中，R2为-H，R3为-H，R3a为-H，Y为-H，Z为-N-。
在另一个实施方案中，R2为-烷基，R3为-H，Y为-H，Z为-N-。
在再一个实施方案中，R2为-CH3，R3为-H，Y为-H，Z为-N-。
在一个实施方案中，Ar为苯基，R3为-H，Z为-CH-。
在另一个实施方案中，Ar为吡啶基，R3为-H，Z为-CH-。
在具体实施方案中，基团

为


在一个实施方案中，R1为

且基团

为

在一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，其中R1、R2、R3、R3a、R10、R10a、R11、Ar、n、p、W、X、Y和Z彼此独立地进行选择。
在一个实施方案中，苯胺基哌嗪衍生物具有下式(IA)的结构
其中 R1、R2和R3如上文式(I)化合物的定义； 每个Q独立地为CH或N，因此出现的至少3个Q必需为CH；和 R8为H、烷基或-C(O)-烷基。
在一个实施方案中，R1为芳基。
在一个实施方案中，R1为苯基。
在一个实施方案中，R1为炔基。
在另一个实施方案中，R1为-亚炔基-芳基。
在另一个实施方案中，R1为杂芳基。
在又一个实施方案中，R1为苯稠合杂芳基。
在再一个实施方案中，R1为杂环基。
在又一个实施方案中，R1为苯稠合杂环基。
在一个实施方案中，R1为杂环烯基。
在另一个实施方案中，R1为苯稠合杂环烯基。
在一个实施方案中，R8为H。
在另一个实施方案中，R8为烷基。
在又一个实施方案中，R8为-C(O)烷基。
在另一个实施方案中，R8为甲基。
在又一个实施方案中，R8为-C(O)CH3。
在一个实施方案中，本发明提供式(IA)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，其中R1、R2、R3、R8、Y、和出现的每个Q彼此独立地进行选择。
在一个实施方案中，苯胺基哌嗪衍生物具有下式(IB)的结构
其中 R1为如上文式(I)化合物的定义； 在一个实施方案中，R1为芳基。
在一个实施方案中，R1为苯基。
在一个实施方案中，R1为炔基。
在另一个实施方案中，R1为-亚炔基-芳基。
在另一个实施方案中，R1为杂芳基。
在又一个实施方案中，R1为苯稠合杂芳基。
在再一个实施方案中，R1为杂环基。
在又一个实施方案中，R1为苯稠合杂环基。
在一个实施方案中，R1为杂环烯基。
在另一个实施方案中，R1为苯稠合杂环烯基。
式(I)苯胺基哌嗪衍生物的其它示例性实例包括但不限于下列式(IB)化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药和立体异构体






式(I)苯胺基哌嗪衍生物其它示例性的实例包括但不限于下列化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药和立体异构体

式(I)苯胺基哌嗪衍生物的其它非限制性实例包括下列化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药和立体异构体









































在一个实施方案中，本发明提供下列化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药和立体异构体






在另一个实施方案中，本发明提供下列化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药和立体异构体



苯胺基哌嗪衍生物的制备方法 用于制备式(I)苯胺基哌嗪衍生物的方法见下列流程1-11。替代机制路线和类似结构对本领域技术人员而言是显而易见的。
流程1说明式iv的中间体胺化合物的制备方法。
流程1
其中Xa为F或Cl，R2、R3、Ar和n如上文式(I)化合物的定义。
可采用微波辅助方法，在二异丙基乙胺(DIEA)存在下，使式i硝基取代的芳基或杂芳基衍生物与式ii哌嗪化合物偶合，得到偶合的化合物iii。然后可采用合适的方法，使式iii化合物的硝基还原，得到式iv的中间体胺化合物。
流程2说明用于制备式iv的中间体胺化合物的替代方法，该化合物可用于制备式(I)苯胺基哌嗪衍生物。
流程2
其中R2、R3、Ar和n如上文式(I)化合物的定义。
可采用碘化亚铜催化方法，使式v芳基碘化物与式ii哌嗪化合物偶合，得到式iv的胺中间体化合物。
流程3说明式viii的中间体胺化合物的制备方法，该化合物可用于制备式(I)苯胺基哌嗪衍生物。
流程3
其中Xa为F或Cl，R2、R3、W、Ar和n如上文式(I)化合物的定义。
可采用流程1中所述的DIEA偶合方法，使式i硝基取代的芳基或杂芳基衍生物与式vi的环状胺偶合，得到偶合的化合物vii。然后可采用合适的方法，使式vii化合物的硝基还原，得到式viii的中间体胺化合物。
流程4说明式xii的中间体胺化合物的制备方法，该化合物可用于制备式(I)苯胺基哌嗪衍生物。
流程4
其中X为Cl、Br或-OTf；M为B(OH)2、ZnX或SnBu3；R2、R3、Ar和n如上文式(I)化合物的定义。
可采用Pd催化的偶合方法(例如Suzuki偶合、Negishi偶合或Stille偶合)，使式ix的硝基取代的芳基或杂芳基衍生物与式x的哌啶化合物偶合，得到偶合的化合物xi。可采用合适的还原方法，使式xi化合物的硝基还原，得到式xii的中间体胺化合物。
流程5说明式xv的中间体胺化合物的制备方法，该化合物可用于制备式(I)苯胺基哌嗪衍生物。
流程5
其中X为-Cl、-Br或-OTf；M为B(OH)2、ZnX或SnBu3；R2、R3、W、Ar和n如上文式(I)化合物的定义。
可采用流程4中所述的Pd偶合方法，使式ix硝基取代的芳基或杂芳基衍生物与式xiii化合物偶合，得到式xiv化合物。然后可采用合适的方法，使式xiv化合物的硝基还原，得到式xv的中间体胺化合物。
流程6说明2-取代噻唑-5-甲酸化合物的制备方法，该化合物是用于制备式(I)苯胺基哌嗪衍生物有用的中间体。
流程6
其中R1如上文式(I)化合物的定义。
可采用合适的钯偶合条件，使2-溴噻唑-5-甲酸乙酯(xvi)与以下化合物反应(i)式xvii硼酸化合物，(ii)式xx硼酸频哪醇酯(boronic pinacolester)化合物，或(iii)式xxi溴化锌化合物，得到式xviii的2-取代噻唑酯中间体。然后可采用LiOH，将式xviii化合物水解，例如得到式xix的2-取代噻唑-5-甲酸化合物。
流程7说明式(I)苯胺基哌嗪衍生物的制备方法，其中W为-NH-，Z为N。
流程7
式(I)化合物， 其中W为NH，z为N 其中R1、R2、R3、Ar、n和Y如上文式(I)化合物的定义。
可在N，N-二异丙基乙胺存在下，采用六氟磷酸2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓(HATU)，使式xxii的2-溴-噻唑-4-甲酸化合物(通过使式xvi化合物的酯部分水解来制备)与式iv胺化合物偶合，得到式xxiii的酰氨基中间体。然后，可采用流程6中所述的钯催化方法，使式xxiii化合物与R1基团偶合，得到式xxiv化合物。用酸(例如TFA或甲酸)，脱去式xxiv化合物的Boc保护基，得到式(I)苯胺基哌嗪衍生物，其中W为-NH-，Z为N。
流程8说明式(I)苯胺基哌嗪衍生物的制备方法，其中W为-C(R4)2-；Z为N。
流程8
式(I)化合物， 其中W为-C(R4)2-，z为N 其中R1、R2、R3、Ar、W、Y和n如上文式(I)化合物的定义。
可采用流程7中所述的HATU偶合方法，使式xxii的2-溴-噻唑-4-甲酸化合物与式viii胺中间体偶合，得到式xxv的酰氨基中间体。然后可采用流程6中所述的钯催化方法，使式xxv化合物与R1基团偶合，得到式(I)苯胺基哌嗪衍生物，其中W为-C(R4)2-，Z为N。
流程9说明式(I)苯胺基哌嗪衍生物的制备方法，其中W为-NH-，Z为CR7。
流程9
式(I)化合物， 其中W为NH，z-CR7 其中R1、R2、R3、Ar、Y和n如上文式(I)化合物的定义。
可采用流程7中所述方法，用中间体胺化合物xxii替换中间体胺化合物xxi，来制备式(I)苯胺基哌嗪衍生物，其中W为-NH-，Z为CR7。
流程10说明式(I)苯胺基哌嗪衍生物的制备方法，其中W为-C(R4)2-，Z为-CR7。
流程10
式(I)化合物， 其中W为-C(R4)2-，z为-CR7 其中R1、R2、R3、Ar、Y和n如上文式(I)化合物的定义。
可采用流程8中所述方法，用中间体胺化合物xv替换中间体胺化合物xxi，来制备式(I)苯胺基哌嗪衍生物，其中W为-C(R4)2-，Z为CR7。
流程11说明用于制备式(I)苯胺基哌嗪衍生物的替代方法，该方法包括使式xv胺化合物与式xix的2-取代噻唑-5-甲酸偶合。
流程11
式(I)化合物 其中R1、R2、R3、Ar、W、Y、Z和n如上文式(I)化合物的定义。
可采用流程7中所提供的HATU介导的偶合方法，使式xix的2-取代噻唑-5-甲酸与式xv胺化合物偶合，然后必要时，采用上文流程7和流程9中所提供的方法进一步精制，得到式(I)苯胺基哌嗪衍生物。
实施例 通用方法 市售的溶剂、试剂和中间体可按来样使用。不是市售的试剂和中间体可按下列方式制备。1H NMR谱用Varian AS-400(400MHz)获取，以距Me4Si的ppm低磁场表示，括号内注明质子数、峰裂数和耦合常数(赫兹)。如果提供LC/MS数据，则使用Applied Biosystems API-100质谱仪和Shimadzu SCL-10A LC柱Altech铂C18，3微米，33mm×7mm内径；梯度流0分钟-10％CH3CN，5分钟-95％CH3CN，7分钟-95％CH3CN，7.5分钟-10％CH3CN，9分钟-终止。MS数据用Agilent Technologies LC/MSD SL或1100系列LC/MSD质谱仪获得。最终化合物用PrepLC纯化，采用Varian Pursuit XRs C1810μm 250×21.2mm柱及流动相A和B的洗脱混合物。流动相A由0.1％TFA/H2O组成，流动相B由CH3CN(95％)/H2O(5％)/TFA(0.1％)组成。在室温下以20ml/分钟的流速从柱中洗脱出流动相A和B的混合物。所有最终分离的化合物的纯度都用LCMS检查，采用Higgins Haisil HL C185μm 150×4.6mm柱及流动相A和B的洗脱混合物，其中流动相A由0.1％TFA/H2O组成，流动相B由CH3CN(95％)/H2O(5％)/TFA(0.1％)组成。柱子在60℃温度下以3ml/分钟的流速洗脱。中间体化合物用LCMS表征，采用Higgins Haisil HL C185μm 50×4.6mm柱及流动相A和B的洗脱混合物，其中流动相A由0.1％TFA/H2O组成，流动相B由CH3CN(95％)/H2O(5％)/TFA(0.1％)组成。柱子在60℃柱温下以3ml/分钟的流速洗脱。
实施例1 化合物10的制备 步骤1-2-(4-甲氧基-苯基)-噻唑-4-甲酸乙酯的合成 将2-溴-噻唑-4-甲酸乙酯(1.00mmol，236mg)、4-甲氧基苯基硼酸(1.50mmol，228mg)、Pd2(DBA)3(0.020mmol，18mg)、S-Phos(0.060mmol，25mg)和磷酸三钾一水合物(1.5mmol，0.35g)加入装有搅拌棒的Schlenk管中。Schlenk管盖上有橡胶隔片(rubber septum)的盖子，抽真空后，再充入氮气。用注射器穿过隔片加入甲苯(2ml)，在氮气流下，用特氟隆螺旋盖将Schlenk管密封，放到100℃油浴中。将反应物在100℃下搅拌15小时，然后使反应混合物冷却至室温后，经硅藻土过滤。将滤液真空浓缩，所得粗制残余物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱液己烷/EtOAc(4∶1))，得到2-(4-甲氧基-苯基)-噻唑-4-甲酸乙酯，为黄色固体。
步骤2-2-(4-甲氧基-苯基)-噻唑-4-甲酸的合成 将2-(4-甲氧基-苯基)-噻唑-4-甲酸乙酯和氢氧化锂一水合物(2.0mmol，84mg)的混合物用2∶1THF∶H2O的混合物(6ml)稀释，将所得反应物在室温下搅拌约15小时。反应混合物然后用HCl水溶液(1M，10ml)酸化，然后经由冷冻干燥法干燥，得到2-(4-甲氧基-苯基)-噻唑-4-甲酸，为氯化铵盐。HPLC-MS RT＝1.37分钟；对于式C11H9NO3S，质量计算值235.03，LCMS m/z实测值236.10(M+H)。
步骤3-化合物10的合成 向2-(4-甲氧基-苯基)-噻唑-4-甲酸(0.1mmol)、N，N-二异丙基乙胺(0.50mmol，87μl)和HATU(0.10mmol，38mg)的DMF(1ml)溶液中加入4-(2-氨基苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.10mmol，28mg)。将所得反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌15小时，之后使反应混合物冷却至室温后，真空浓缩。所得残余物边搅拌边用TFA(0.5ml)处理10分钟后，将反应物真空浓缩，将得到的溶质溶于DMSO/ACN(3∶1)，所得溶液用反相HPLC纯化，得到化合物10，为铵盐。
实施例2 化合物2的制备 向噻唑-5-甲酸(0.050mmol，10mg)、N，N-二异丙基乙胺(0.20mmol，26mg)和HATU(0.050mmol，19mg)的DMF(1ml)溶液中加入4-(2-氨基苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.10mmol，28mg)。将所得反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌15小时，之后使反应混合物冷却至室温后，真空浓缩。使所得残余物与TFA(0.5ml)反应10分钟。然后将TFA溶液真空浓缩，得到的粗制残余物用反相HPLC纯化，得到化合物2。
实施例3 化合物3的制备 采用上文实施例1中所述方法，用甲基硼酸替换步骤1中的4-甲氧基苯基硼酸，来制备化合物3。
实施例4 化合物4的制备 采用上文实施例1中所述方法，用苯基硼酸替换步骤1中的4-甲氧基苯基硼酸，来制备化合物4。
实施例5 化合物5的制备 向2-溴-噻唑-5-甲酸(0.050mmol，10mg)、N，N-二异丙基乙胺(0.20mmol，26mg)和HATU(0.050mmol，19mg)的DMF(1ml)溶液中加入4-(2-氨基苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.10mmol，28mg)。将所得反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌15小时，之后使反应混合物冷却至室温后，真空浓缩。使所得残余物与TFA(0.5ml)反应10分钟。然后将TFA溶液真空浓缩，得到的粗制残余物用反相HPLC纯化，得到化合物5。
实施例6 化合物6的制备 采用上文实施例1中所述方法，用3-吡啶基硼酸替换步骤1中的4-甲氧基苯基硼酸，来制备化合物6。
实施例7 化合物7的制备 采用上文实施例1中所述方法，用4-吡啶基硼酸替换步骤1中的4-甲氧基苯基硼酸，来制备化合物7。
实施例8 化合物8的制备 采用上文实施例1中所述方法，用2-噻吩硼酸替换步骤1中的4-甲氧基苯基硼酸，来制备化合物8。
实施例9 化合物9的制备 采用上文实施例1中所述方法，用5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯并呋喃替换步骤1中的4-甲氧基苯基硼酸，来制备化合物9。
实施例10 化合物11的制备 向2-(2，3-二氢-苯并呋喃-5-基)-4-甲基-噻唑-5-甲酸(0.10mmol，26mg)、N，N-二异丙基乙胺(0.50mmol，87μl)和HATU(0.10mmol，38mg)的DMF(1ml)溶液中加入4-(2-氨基苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.10mmol，28mg)。将所得反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌15小时，之后使反应混合物冷却至室温后，真空浓缩。所得残余物边搅拌边用TFA(0.5ml)处理10分钟，然后将TFA溶液真空浓缩。将所得残余物溶于DMSO/ACN(3∶1)后，用反相HPLC纯化，得到化合物11，为铵盐。
实施例11 化合物12的制备 步骤1-2-(5-甲基-异噁唑-3-基)-噻唑-4-甲酸的合成 将2-(5-甲基-异噁唑-3-基)-噻唑-4-甲酸乙酯(0.24g，1.0mmol)和氢氧化锂一水合物(84mg，2.0mmol)的混合物溶于THF/H2O(2/1，9ml)。将所得反应物在室温下搅拌约15小时，然后用20％HCl水溶液酸化。通过冷冻干燥除去溶剂，得到2-(5-甲基-异噁唑-3-基)-噻唑-4-甲酸(21mg)。
步骤2-化合物12的合成 向2-(5-甲基-异噁唑-3-基)-噻唑-4-甲酸(0.10mmol，21mg)、N，N-二异丙基乙胺(0.50mmol，87μl)和HATU(0.10mmol，38mg)的DMF(1ml)溶液中加入4-(2-氨基苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.10mmol，28mg)。将所得反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌15小时，之后使反应混合物冷却至室温后，真空浓缩。所得残余物边搅拌边用TFA(0.5ml)处理10分钟，然后将TFA溶液真空浓缩，得到化合物12，为铵盐。
实施例12 中间体化合物A的制备
步骤1-4-(3-硝基-吡啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成 4-氯-3-硝基-吡啶(2.0mmol，0.32g)、三乙胺(3.0mmol，0.42ml)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.5mmol，0.47g)的二噁烷(2ml)溶液在150℃温度下用微波照射8分钟。将反应混合物真空浓缩，所得残余物用硅胶快速柱色谱法纯化(洗脱液乙酸乙酯)，得到4-(3-硝基-吡啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(633mg，定量收率，黄色固体)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.87(s，1H)，8.40(d，J＝5.6Hz，1H)，6.87(d，J＝6.0Hz，1H)，3.68-3.56(m，4H)，3.32-3.18(m，4H)，1.48(s，9H)。
步骤2-化合物A的合成 向4-(3-硝基-吡啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(633mg)的MeOH/EtOAc(1∶1，7ml)溶液中加入Pd/C(5％Pd)。将反应混合物在氢气氛、室温下搅拌约15小时，然后通过硅藻土垫过滤。将滤液真空浓缩，得到化合物A，为固体。HPLC-MS RT＝1.10分钟，对于式C14H22N4O2，质量计算值278.17，LCMS m/z实测值279.28(M+H)。
实施例13 中间体化合物B的制备
将3-碘-吡啶-2-基胺(1.0mmol，0.22g)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.2mmol，0.22g)，CuI(0.10mmol，19mg)和K3PO4(2.0mmol，0.42g)加到装有搅拌棒的Schlenk管中。该管盖上有橡胶隔片的盖子，抽真空后，再充入氮气。用注射器穿过隔片加入乙二醇(2.0mmol，0.11ml)和2-丙醇(2ml)。在氮气流下，用特氟隆螺旋盖将该管密封后，放到95℃油浴中。将反应物在此温度下搅拌约15小时，然后冷却到室温后，经硅藻土过滤。将滤液真空浓缩，所得残余物用硅胶快速柱色谱法纯化(洗脱液EtOAc/MeOH/Et3N(90∶5∶5))，得到化合物B(26mg)。HPLC-MS RT＝1.18分钟，对于式C14H22N4O2，质量计算值278.17，LCMS m/z实测值279.25(M+H)。
实施例14 中间体化合物C的制备
采用实施例13中所述方法，用3-碘-吡啶-4-基胺替换3-碘-吡啶-2-基胺，来制备中间体化合物C(36mg，固体)。HPLC-MS RT＝1.14分钟，对于式C14H22N4O2，质量计算值278.17，LCMS m/z实测值279.25(M+H)。
实施例15 中间体化合物D的制备
步骤1-4-(2-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯的制备 将1-氯-2-硝基苯(3.00mmol，475mg)、Pd2(DBA)3(0.060mmol，55mg)、S-Phos(0.18mmol，75mg)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(4.0mmol，1.2g)和K3PO4(4.5mmol，1.0g)加到装有搅拌棒的Schlenk管中。该管盖上有橡胶隔片的盖子，抽真空后，再充入氮气。用注射器穿过隔片加入甲苯(5ml)，在氮气流下，用特氟隆螺旋盖将该管密封后，放到100℃油浴中。将反应物在此温度下搅拌约15小时，然后使反应混合物冷却至室温后，经硅藻土过滤。将滤液真空浓缩，所得残余物用硅胶快速柱色谱法纯化(洗脱液14％EtOAc/己烷)，得到4-(2-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(660mg，72％，褐色固体)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.90(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.58-7.53(m，1H)，7.44-7.39(m，1H)，7.30-7.27(m，1H)，5.62-5.58(m，1H)，4.04-4.01(m，2H)，3.64(t，J＝5.2Hz，2H)，2.36-2.30(m，2H)，1.49(s，9H)。
步骤2-化合物D的合成 将0.15g(0.50mmol)4-(2-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯与九水硫化钠(0.31g，1.3mmol)和EtOH/H2O(1/1，2ml)的溶液混合。将反应物加热至60℃，并在此温度下搅拌约15小时，之后反应物加水猝灭。所得溶液用EtOAc/乙醚(1/1)萃取三次，合并的有机物依次用水和盐水洗涤。将有机物真空浓缩，得到中间体化合物D(112mg，82％，油状物)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.10-7.06(m，1H)，7.01-6.98(m，1H)，6.82-6.74(m，2H)，5.82-5.74(m，1H)，4.08-4.02(m，2H)，3.63(t，J＝5.6Hz，2H)，2.44-2.38(m，2H)，1.49(s，9H)。HPLC-MSRT＝1.69分钟，对于式C16H22N2O2，质量计算值274.17，LCMS m/z实测值297.20(M+Na)。
实施例16 中间体化合物E的制备
将4-(2-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(500mg)的MeOH/EtOAc(1∶1，10ml)溶液与Pd/C(5％Pd，400mg)混合。将反应物在氢气氛、室温下搅拌约15小时，然后反应混合物经硅藻土垫过滤，将滤液真空浓缩，得到中间体化合物E(424mg，收率93％，油状物)。HPLC-MS RT＝1.57分钟，对于C16H24N2O2，质量计算值式276.18，LCMS m/z实测值277.33(M+H)。
实施例17 中间体化合物F的制备
步骤1-3-甲基-4-(2-硝基-苯基)-哌嗪-甲酸叔丁酯的合成 将1-溴-2-硝基苯(2.00mmol，404mg)、Pd(OAc)2(0.100mmol，22.5mg)、Palucki-Phos(0.120mmol，45.8mg)和Cs2CO3(3mmol，1g)加到装有搅拌棒的Schlenk管中。该管盖上有橡胶隔片的盖子，抽真空后，再充入氮气。通过注射器穿过隔片将3-甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.48ml，2.5mmol)和甲苯(3ml)加到反应物中，在氮气流下，用特氟隆螺旋盖将该管密封后，放到100℃油浴中。将反应物在此温度下搅拌约15小时，然后冷却至室温后，经硅藻土过滤。将滤液真空浓缩，所得残余物用硅胶快速柱色谱法纯化(洗脱液己烷/EtOAc(5∶1)，得到3-甲基-4-(2-硝基-苯基)-哌嗪-甲酸叔丁酯。
步骤2-化合物F的合成 向3-甲基-4-(2-硝基-苯基)-哌嗪-甲酸叔丁酯的MeOH/EtOAc(1∶1，20ml)溶液中加入Pd/C(5％Pd，50mg)。将反应混合物在氢气氛下搅拌约15小时，然后通过硅藻土垫过滤。将滤液真空浓缩，得到化合物F(30mg，固体)。HPLC-MS RT＝1.55分钟，对于式C16H25N3O2，质量计算值291.19，LCMS m/z实测值292.37(M+H)。
实施例18 化合物14和化合物15的制备
向2-(2，3-二氢-苯并呋喃-5-基)-噻唑-4-甲酸(0.10mmol，25mg)、N，N-二异丙基乙胺(0.50mmol，87μl)和HATU(0.10mmol，38mg)的DMF(2ml)溶液中加入4-(2-氨基苯基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.1mmol，30mg)。将反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌约15小时，然后将反应混合物冷却至室温后，真空浓缩。将所得残余物溶于DMSO/ACN(3∶1)，外消旋产物用反相HPLC纯化，得到2个对映体。用TFA(0.5ml)处理10分钟分离出每个对映体后，将各独立的TFA溶液真空浓缩。将所得残余物分别溶于DMSO/ACN(3∶1)，溶液用反相HPLC纯化，得到化合物14和化合物15，为它们的铵盐。
实施例19 化合物16的制备 向2-(2，3-二氢-苯并呋喃-5-基)-噻唑-4-甲酸(0.10mmol，25mg)、N，N-二异丙基乙胺(0.50mmol，87μl)和HATU(0.10mmol，38mg)的DMF(2ml)溶液中加入4-(2-氨基-苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.1mmol)。将反应混合物加热至80℃，并在此温度下搅拌约15小时，然后真空浓缩后，所得残余物边搅拌边用TFA(0.5ml)处理10分钟。然后将TFA溶液真空浓缩，将所得残余物溶于DMSO/ACN(3∶1)，并用反相HPLC纯化，得到化合物16，为铵盐。
采用上述方法，用合适的苯胺偶合配偶体替换4-(2-氨基-苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯，来制备化合物17-28。如果苯胺偶合配偶体中不存在Boc基团，则得自反应混合物浓缩的残余物不用TFA处理，而是溶于DMSO/ACN(3∶1)后，用反相HPLC纯化，就可得到所需产物。
实施例20 化合物29的制备 步骤1-中间体化合物A的合成
向2-溴-噻唑-4-甲酸(2.0mmol，0.42g)、N，N-二异丙基乙胺(3.0mmol，0.52ml)和HATU(2.0mmol，0.76g)的DMF(10ml)溶液中加入4-(2-氨基苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.0mmol，0.56g)。将反应混合物在80℃下搅拌3小时后，真空浓缩。用硅胶柱色谱法处理(使用己烷/EtOAc(4.5/1))，得到化合物A(0.67g，72％，黄色固体)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.38(s，1H)，8.49(dd，J＝8.0，1.2Hz，1H)，8.14(s，1H)，7.23-7.10(m，3H)，3.72(br s，4H)，2.89-2.87(m，4H)，1.50(s，9H)。HPLC-MS RT＝2.39分钟，对于式C19H23BrN4O3S，质量计算值466.07，LCMS m/z实测值467.05(M+H)。
步骤1-化合物29的合成 将化合物A(0.051mmol，24mg)、PdCl2(CH3CN)2(5.0μmol，2.0mg)、X-Phos(0.010mmol，4.8mg)和Cs2CO3(0.10mmol，33mg)加到装有搅拌棒的Schlenk管中。加入乙腈(0.25ml)，该管用氮气吹扫。在氮气氛下，通过注射器将苯乙炔(0.092mmol，10μl)加到反应混合物中，将该管密封后，放到85℃油浴中。将所得反应物在此温度下搅拌约15小时，然后使反应混合物冷却至室温后，用乙腈(5ml)稀释。然后将所得溶液在约1000rpm下离心约2小时。收集所得上清液，真空浓缩，所得残余物边搅拌边用TFA(0.5ml)处理10分钟。将TFA溶液真空浓缩，将所得残余物溶于DMSO/ACN(3∶1)后，用反相HPLC纯化，得到化合物29，为铵盐。
实施例21 化合物30的制备 将化合物A(0.051mmol，24mg，按照上述方法制备)、PdCl2(CH3CN)2(5.0μmol，2.0mg)、X-Phos(0.010mmol，4.8mg)和Cs2CO3(0.10mmol，33mg)加到装有搅拌棒的Schlenk管中。该管盖上有橡胶隔片的盖子，抽真空后，再充入丙炔气体。用注射器穿过隔片加入乙腈(0.25ml)。在丙炔气流下，用特氟隆螺旋盖将该管密封后，放到80℃油浴中。将所得反应物在此温度下搅拌约15小时，然后使反应混合物冷却至室温后，用乙腈(5ml)稀释。然后将所得溶液在约1000rpm下离心约2小时。收集所得上清液，真空浓缩，所得残余物边搅拌边用TFA(0.5ml)处理10分钟。将TFA溶液真空浓缩，将所得残余物溶于DMSO/ACN(3∶1)后，用反相HPLC纯化，得到化合物30，为铵盐。
实施例22 化合物31的制备 步骤1-4-(2-{[2-(5-乙氧羰基-噻吩-2-基)-噻唑-4-羰基]-氨基}-苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成 将化合物A(0.40mmol，190mg，按照上述方法制备)、Pd2(DBA)3(0.020mmol，18.3mg)和Ru-Phos(0.050mmol，23.3mg)加到装有搅拌棒的Schlenk管中。该管盖上有橡胶隔片的盖子，抽真空后，再充入氮气。通过注射器将5-乙氧羰基-2-噻吩基溴化锌的THF溶液(0.50M，2.0ml)穿过隔片加到反应混合物中，然后在氮气流下，用特氟隆螺旋盖将该管密封后，放到90℃的油浴中。将所得反应物在此温度下搅拌约15小时，然后使反应混合物冷却至室温后，用水猝灭。所得溶液用EtOAc/乙醚(1∶1)萃取三次，将合并的有机物真空浓缩。所得残余物用硅胶快速柱色谱法纯化(采用己烷/EtOAc(2∶1))，得到4-(2-{[2-(5-乙氧羰基-噻吩-2-基)-噻唑-4-羰基]-氨基}-苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(110mg，51％，黄色固体)。LC/MS，HPLC-MS RT＝2.56分钟，对于式C26H30N4O5S2，质量计算值542.17，LCMS m/z实测值543.10(M+H)。
步骤2-化合物31的合成 将4-(2-{[2-(5-乙氧羰基-噻吩-2-基)-噻唑-4-羰基]-氨基}-苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(23mg)溶于TFA(0.5ml)，将所得溶液在室温下搅拌10分钟。然后将TFA溶液真空浓缩，将所得残余物溶于DMSO/ACN(3∶1)后，所得溶液用反相HPLC纯化，得到化合物31，为铵盐。
实施例23 化合物32的制备 将4-(2-{[2-(5-乙氧羰基-噻吩-2-基)-噻唑-4-羰基]-氨基}-苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(87mg，0.16mmol，按照实施例22步骤1中所述方法制备)与氢氧化锂一水合物(0.32mmol)混合，将该混合物溶于2∶1THF∶H2O混合物(6ml)中。将所得反应物在室温下搅拌约15小时。反应混合物然后用HCl水溶液(1M，1ml)酸化，并通过冷冻干燥除去溶剂。将所得残余物溶于DMF(3ml)，向所得溶液中依次加入HATU(60.8mg，0.16mmol)和DIEA(87μl，0.5mmol)及环丙胺(1.1μl，0.16mmol)。将所得反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌约15小时。然后使反应混合物冷却至室温后，真空浓缩，所得残余物边搅拌边用TFA(0.5ml)处理10分钟。然后将TFA溶液真空浓缩，将所得残余物溶于DMSO/ACN(3∶1)，并用反相HPLC纯化，得到化合物32，为铵盐。
实施例24 化合物33的制备 采用实施例23中所述方法，用氮杂环丁烷替换环丙胺，来制备化合物33。
实施例25 中间体化合物G的制备
向2-溴-噻唑-4-甲酸(0.78mmol，0.16g)、N，N-二异丙基乙胺(1.5mmol，0.26ml)和HATU(0.78mmol，0.30g)的DMF(10ml)溶液中加入4-(3-氨基-吡啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.78mmol，0.22g)。将反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌约15小时，然后使反应混合物冷却至室温后，真空浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱液EtOAc)，得到中间体化合物G，为黄色固体。HPLC-MS RT＝1.40分钟，对于式C18H22BrN5O3S，质量计算值467.06，LCMS m/z实测值468.05(M+H)。
实施例26 硼酸/酯与2-溴噻唑衍生物偶合的通用方法
将硼酸或频哪醇酯(0.1mmol)和K3PO4(0.10mmol，21mg)加到装有搅拌棒的Schlenk管中，并向该管中加入Pd2(DBA)3(5.0μmol，4.6mg)、S-Phos(0.010mmol，4.1mg)和2-溴噻唑衍生物(0.050mmol，23mg)的二噁烷(0.5ml)溶液。该管用氮气剧烈吹扫，紧紧密封起来后，放到100℃油浴中。将反应物在此温度下搅拌约15小时，然后使反应混合物冷却至室温后，用乙腈(5ml)稀释。使所得溶液在大约1000rpm下离心约2小时。收集所得上清液后，真空浓缩，如果偶合产物不含Boc基团，则将所得残余物溶于DMSO/ACN(3∶1)，用反相HPLC纯化。如果偶合产物含有Boc基团，则所得残余物边搅拌边用TFA(0.5ml)处理10分钟。然后将TFA溶液真空浓缩，将所得残余物溶于DMSO/ACN(3∶1)，并用反相HPLC纯化，得到所需产物，为铵盐。
采用上述方法和合适的偶合配偶体，来制备化合物34-78。
实施例27 化合物79的制备 采用实施例26中所述方法，用苯并噻吩-2-硼酸(0.1mmol)和化合物G(0.050mmol，23mg)作为偶合配偶体，来制备化合物79。
实施例28 化合物80的制备 采用实施例26中所述方法，用2-氟-5-甲氧基-苯基硼酸(0.1mmol)和化合物G(0.050mmol，23mg)作为偶合配偶体，来制备化合物80。
实施例29 化合物81的制备 向2-(2-噻吩基)-1，3-噻唑-4-甲酸(21mg，0.1mmol)、N，N-二异丙基乙胺(0.50mmol，87μl)和HATU(0.10mmol，38mg)的DMF(1ml)溶液中加入4-(3-氨基-吡啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.10mmol，28mg)。将反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌约15小时，然后使反应混合物冷却至室温后，真空浓缩。在室温下，使所得残余物与TFA(0.5ml)反应10分钟后，将TFA溶液真空浓缩。所得残余物用反相HPLC纯化，得到化合物81。
示例性苯胺基哌嗪衍生物的LCMS数据和HPLC保留时间见下表，表中化合物的编号与本说明书中的编号一致。
表1 实施例30 化合物83-88的制备 采用实施例26中所述方法，用合适的反应物来制备下列示例性的本发明化合物后，用反相HPLC纯化。


实施例31 下式化合物的制备

步骤A-通用方法 将2-溴噻唑化合物(实施例26中所述中间体G)(0.1mmol，0.046g)、1-Boc-吡唑-4-硼酸吡啶甲酸酯(0.2mmol)、PddppfCl2(10mol％)和K3PO4溶于二噁烷。脱气并用氩气吹扫后，加热至80℃约15小时。除去二噁烷，将残余物溶于乙酸乙酯，用水、盐水洗涤后，经无水硫酸钠干燥。过滤并真空浓缩后，用硅胶柱纯化。得到收率良好的所需产物。对于式C21H25N7O3S，质量计算值455.11，LCMS m/z实测值456.20(M+H)。
步骤B-标题化合物的制备 向化合物31A(0.10mmol，0.045g)的甲苯(0.5ml)溶液中加入3，4-二甲氧基苯基溴(0.11mmol)、CuI(0.004g)、K2CO3(0.21mmol，0.030g)和反式-N，N-二甲基环己烷(10μl)。使混合物脱气并用氩气吹扫后，加热至100℃达16小时。使混合物冷却至室温后，减压浓缩。将粗产物溶于EtOAc(2ml)，过滤后用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥。过滤后浓缩，得到粗产物，将其用制备型LC纯化。将由制备型LC纯化得到的产物溶于1ml二噁烷，向其中加入1ml 4N HCl后搅拌1小时。将反应混合物浓缩后冻干，得到标题化合物。对于式C24H25N7O3S，质量计算值491.17，LCMS m/z实测值492.20(M+H)。
采用上述方法，在步骤B中使用合适的苯基溴，制备下列示例性的本发明化合物。


实施例32 中间体化合物32A的制备
将3-溴丙酮酸(16.37g，98.05mmol)的无水二噁烷(90ml)混合物在50℃下用草酸硫代酰胺乙酯(13.08g，98.22mmol)处理1.2小时后，在50℃下浓缩，得到无水黄色固体。将粗产物溶于饱和碳酸氢钠(150ml)和水(150ml)中。该溶液用乙酸乙酯(6×400ml)萃取。水层用浓HCl水溶液(21ml)酸化至pH 2，导致形成大量沉淀。该悬浮液用乙酸乙酯(5×500ml)萃取。合并这些萃取物，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，真空干燥约15小时后，得到化合物32A(14.36g，收率73％，棕红色固体)，无需进一步纯化便可使用。
实施例33 中间体化合物33A的制备
使32A(2.03g，9.89mmol)的叔丁醇(18.0ml，188mmol)和吡啶(5.5ml，68mmol)溶液在冰水浴中冷却至0℃，一次性加入对甲苯磺酰氯(4.430g，23.24mmol)，在逐渐升温至室温的同时搅拌反应物约15小时。反应物用水(20ml)和饱和碳酸钾溶液(～6M，20ml)稀释后搅拌30分钟，得到深褐色两相溶液。水层用乙醚(3×100ml)萃取。合并乙醚萃取物后，用5％饱和碳酸钾水溶液(2×100ml)和5％饱和碳酸钾水溶液/95％盐水(1×50ml)洗涤。合并的萃取物经硫酸钠干燥，过滤后在35-50℃下浓缩，得到深褐色油状物，将其再溶于二氯甲烷后，在55℃下浓缩，得到化合物33A(2.03g，收率80％，浅褐色固体)。
实施例34 中间体化合物34A的制备
化合物33A(0.777g，2.87mmol)的乙醇(4.00ml)和四氢呋喃(8.00ml)溶液用2M氢氧化钠水溶液(2.00ml)处理。将所得深棕红色溶液在50℃下加热2小时。使反应混合物冷却至室温后，真空浓缩。然后将残余物溶于水(13ml)，得到pH为9的溶液，将其用2N HCl(1.80ml)酸化，导致溶液中出现白色沉淀物。混合物用乙酸乙酯(4×100ml)萃取。合并萃取物，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤后浓缩。将粗制酸溶于无水DMF(4.0ml)后，依次用PYBOP(0.809g，1.55mmol)、4-甲基吗啉(0.500ml，4.55mmol)和1，2-苯二胺(0.423g，3.91mmol)处理。将反应物在45-50℃下搅拌14小时。反应物用水(50ml)稀释后，用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。合并萃取物，经硫酸钠干燥，过滤后在55℃下浓缩，得到深棕红色油状物(0.628g)。将该油状物溶于二氯甲烷(8ml)后，用快速色谱法纯化(用0-3％二氯甲烷-丙酮洗脱)，得到化合物34A(0.138g，收率56％，黄色油状物)。
实施例35 中间体化合物35A的制备
将密封管中的化合物34A(0.059g，0.144mmol)的1.25M氯化氢/甲醇(2.0ml)溶液在室温下搅拌14小时。再加入1.25M HCl/甲醇(2.0ml)后，将反应物在室温下再搅拌3天。反应物溶液在50℃下浓缩后，真空干燥。残余物再溶于乙酸(10.0ml，176mmol)，并在90℃下加热约15小时。然后使反应物冷却至室温后，在65℃下浓缩，得到橙黄色油状物，将其与5ml半饱和的碳酸钾溶液混合后，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。合并萃取物，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤后浓缩，得到化合物35A(0.030g，收率100％，橙色油状物)。
实施例36 下式化合物的制备
将化合物35A(0.042g，0.117mmol)的四氢呋喃(2.00ml)、甲醇(2.00ml)和水(1.00ml)溶液用2M氢氧化钠水溶液(0.060ml)处理。将溶液在室温下搅拌约15小时，然后在50℃下搅拌5小时。之后将该溶液在50℃下浓缩并真空干燥1.5小时，得到橙色油性残余物(0.049g)。该粗产物羧酸钠再溶于N，N-二甲基甲酰胺(5.00ml)，依次用PYBOP(0.124g，0.238mmol)、4-甲基吗啉(0.100ml，0.910mmol)和制备实施例2(0.069g，0.246mmol)处理。将反应混合物在45℃下搅拌4天。然后使反应混合物冷却至室温后，在55-60℃下浓缩，得到橙黄色油状物。加入50％饱和碳酸钾水溶液(15ml)，该混合物用二氯甲烷(2×15ml)萃取。合并萃取物，经无水硫酸钠干燥，过滤后浓缩，得到橙色油状物(0.157g)。将该油状物溶于氯仿(3.0ml)和三氟乙酸(3.0ml)，在室温下搅拌约15小时。然后将反应物溶液浓缩，将残余物再溶于2.0ml 1∶1甲酸∶水后，用反相色谱法纯化(Waters 25mm PrepLC柱)，得到标题化合物(0.011g，收率21％，无色油状物)。1H NMR(DMSO)δ9.86(s，1H)，9.00(br s，1H)，8.88(br s，2H)，8.72(s，1H)，8.41(br s，1H)，7.68(br s，2H)，7.30-7.34(m，3H)，3.46(br s，4H)，3.32(br s，4H)；MH+＝406。
实施例37 下式化合物的制备
将K3PO4(0.20mmol，42mg)、Pd2(dba)3(7.0μmol，6.4mg)、X-Phos(0.020mmol，9.6mg)、4-{2-[(2-溴-噻唑-4-羰基)-氨基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.10mmol，47mg)和4-吡唑硼酸频哪醇酯(0.20mmol，39mg)加到装有搅拌棒的Schlenk管中。该管盖上有橡胶隔片的盖子，抽真空后，再充入氮气。通过注射器穿过隔片将甲苯(0.5ml)加到反应混合物中，然后在氮气流下，用特氟隆螺旋盖将该管密封后，放到110℃油浴中。将所得反应物在此温度下搅拌15小时后，使反应混合物冷却至室温。将反应混合物通过硅藻土垫过滤后，将滤液真空浓缩。使残余物与TFA(0.5ml)反应10分钟。将TFA溶液真空浓缩。标题化合物用反相HPLC纯化。HPLC-MS RT＝2.95分钟，LCMS m/z实测值355.28(M+H)。
实施例38 下式化合物的制备
将2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.10mmol，21mg)和CDI(0.10mmol，16mg)的DMF(0.5ml)溶液在室温下搅拌1小时。向该溶液中加入2-哌啶-1-基-苯胺(0.10mmol，18mg)。将所得反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌15小时。使反应混合物冷却至室温，然后溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝6.20分钟，LCMS m/z实测值370.23(M+H)。
采用该方法，使用合适的反应物，制备下列示例性的本发明化合物
实施例39 下式化合物的制备
步骤A-中间体化合物39A的合成
将1-氟-2-硝基-苯(2.0mmol，0.21ml)、三乙胺(3.0mmol，0.42ml)和硫代吗啉(3.0mmol，0.30ml)的二噁烷(2ml)溶液在160℃温度下用微波照射15分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到4-(2-硝基-苯基)-硫代吗啉。向该硝基化合物的MeOH(10ml)溶液中加入Pd/C(5％Pd，100mg)。将所得反应混合物在氢气氛、室温下搅拌约15小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤后，将滤液真空浓缩，得到化合物39A。HPLC-MS RT＝1.06分钟，对于式C10H14N2S，质量计算值194.09，LCMS m/z实测值195.10(M+H)。
步骤2-标题化合物的合成 采用实施例38中所述方法，代替化合物39A作为胺偶合配偶体，制备标题化合物。HPLC-MS RT＝5.99分钟，LCMS m/z实测值388.06(M+H)。
采用该方法，使用合适的反应物，制备下列示例性的本发明化合物
LCMS m/z实测值449.15(M+H)
HPLC-MS RT＝5.74分钟，LCMS m/z实测值474.13(M+H)
HPLC-MS RT＝4.13分钟，LCMS m/z实测值449.20(M+H)
HPLC-MS RT＝5.35分钟，LCMS m/z实测值516.21(M+H) 实施例40 下式化合物的制备
步骤1-中间体化合物40A的制备
将2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(4.0mmo1，0.85g)和CDI(4.0mmol，0.65g)的DMF(10ml)溶液在室温下搅拌1小时。向所得溶液中加入4-(2-氨基-苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.0mmol，1.1g)，将所得反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌3小时，之后使反应混合物冷却至室温后，真空浓缩，得到粗制残余物。粗制残余物用硅胶快速柱色谱法纯化(使用己烷/EtOAc/甲苯(4/1/2.5)作为洗脱液)，得到化合物40A，为黄色固体。
步骤2-中间体化合物40B的制备
将中间体化合物40A的TFA(5ml)溶液在室温下搅拌10分钟后，真空浓缩。将所得残余物溶于ACN/水(1/1)。将该溶液冻干，得到中间体化合物40B(2.2g，TFA盐)。
步骤3-标题化合物的制备 将苯磺酰氯(8.8mg，0.050mmol)、N，N-二异丙基乙胺(44μl，0.25mmol)和中间体化合物40B TFA盐(24mg，0.050mmol)的DMF(1ml)溶液在180℃温度下用微波照射15分钟。然后将反应混合物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，并用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MSRT＝5.65分钟，LCMS m/z实测值511.15(M+H)。
采用该方法，使用合适的反应物，制备下列示例性的本发明化合物



实施例41 下式化合物的制备
步骤1-中间体化合物41A的合成
将1-氟-2-硝基-苯(0.32mmol，34μl)、N，N-二异丙基乙胺(1.6mmol，0.28ml)和4-咪唑-1-基-哌啶HCl盐(0.53mmol，0.10g)的ACN(2ml)溶液在180℃温度下用微波照射10分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到4-咪唑-1-基-1-(2-硝基-苯基)-哌啶(71mg，收率81％)。向该硝基化合物的EtOAc(15ml)溶液中加入Pd/C(5％Pd，55mg)。将所得反应混合物在氢气氛、室温下搅拌约15小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤后，将滤液真空浓缩，得到化合物41A(54mg，收率86％)。HPLC-MS RT＝0.63分钟，对于式C14H18N4，质量计算值242.15，LCMS m/z实测值243.30(M+H)。
步骤2-标题化合物的合成 向2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.050mmol，11mg)和HATU(0.050mmol，19mg)的DMF(0.5ml)预混合溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.25mmol，44μl)和41A(0.050mmol，12mg)。将所得反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌15小时。将反应混合物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝3.86分钟，LCMS m/z实测值436.17(M+H)。
采用该方法，将4-咪唑-1-基-哌啶替换成4-[1，2，4]三唑-1-基-哌啶，制备下列示例性的本发明化合物
HPLC-MS RT＝4.82分钟，LCMS m/z实测值437.16(M+H)。
实施例42 下式化合物的制备
步骤1-中间体化合物42A的合成
将1-氟-2-硝基-苯(0.50mmol，53μl)、N，N-二异丙基乙胺(0.50mmol，87μl)和哌啶-4-基-氨基甲酸叔丁酯(0.50mmol，0.10g)的1，4-二噁烷(2ml)溶液在180℃温度下用微波照射10分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到[1-(2-硝基-苯基)-哌啶-4-基]-氨基甲酸叔丁酯(0.12g，收率77％)。向该硝基化合物的EtOAc(15ml)溶液中加入Pd/C(5％Pd，55mg)。将所得反应混合物在氢气氛、室温下搅拌约15小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤后，将滤液真空浓缩，得到中间体化合物42A(97mg，收率86％)。
步骤2-标题化合物的合成 将2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.050mmol，11mg)和CDI(0.050mmol，8.1mg)的DMF(0.5ml)溶液在室温下搅拌1小时。向该溶液中加入中间体化合物42A[1-(2-氨基-苯基)-哌啶-4-基]-氨基甲酸叔丁酯(0.050mmol，15mg)。将所得反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌15小时。使反应混合物冷却至室温后浓缩。使残余物与TFA(0.5ml)反应10分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝3.67分钟，LCMS m/z实测值385.12(M+H)。
实施例43 下式化合物的制备
采用实施例42中所述方法，将哌啶-4-基-氨基甲酸叔丁酯替换成甲基-哌啶-4-基-氨基甲酸叔丁酯，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.77分钟，LCMS m/z实测值399.13(M+H)。
实施例44 下式化合物的制备
采用实施例42中所述方法，将哌啶-4-基-氨基甲酸叔丁酯替换成4-叔丁氧基羰基氨基-哌啶-4-甲酸甲酯，来制备标题化合物。HPLC-MSRT＝3.93分钟，LCMS m/z实测值443.20(M+H)。
实施例45 下式化合物的制备
采用实施例42中所述方法，将哌啶-4-基-氨基甲酸叔丁酯替换成(S)-哌啶-3-基-氨基甲酸叔丁酯，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.85分钟，LCMS m/z实测值385.18(M+H)。
实施例46 下式化合物的制备
采用实施例42中所述方法，将哌啶-4-基-氨基甲酸叔丁酯替换成(R)-哌啶-3-基-氨基甲酸叔丁酯，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.86分钟，LCMS m/z实测值385.15(M+H)。
实施例47 下式化合物的制备
采用实施例42中所述方法，将哌啶-4-基-氨基甲酸叔丁酯替换成氮杂环丁烷-3-基-氨基甲酸叔丁酯，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.11分钟，LCMS m/z实测值357.17(M+H)。
实施例48 下式化合物的制备
步骤1-中间体化合物48A的合成
使1-t-Boc-哌啶-4-螺-5′-乙内酰脲(1.9mmol，0.50g)在室温下与TFA水溶液(90％，5ml)反应1小时。通过冷冻干燥除去溶剂，得到中间体化合物48A。
步骤2-标题化合物的合成 采用实施例24中所述方法，用48A替换硫代吗啉，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.51分钟，LCMS m/z实测值454.18(M+H)。
实施例49 下式化合物的制备
采用实施例48中所述方法，将哌啶-4-基-氨基甲酸叔丁酯替换成(4-氨基甲酰基-哌啶-4-基)-氨基甲酸叔丁酯，来制备化合物152。HPLC-MS RT＝3.26分钟，LCMS m/z实测值428.13(M+H)。
实施例50 下式化合物的制备
在室温下，将得自实施例49的标题化合物(10mg)溶于1∶1THF和水混合物(1ml)中的溶液与氢氧化锂(10mg)一起搅拌约15小时。将反应混合物浓缩，残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，并用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝3.58分钟，LCMS m/z实测值429.20(M+H)。
实施例51 下式化合物的制备
步骤1-中间体化合物51A的合成
将1-氟-2-硝基-苯(2.0mmol，0.21ml)、N，N-二异丙基乙胺(2.5mmol，0.44ml)和(4-甲基-哌啶-4-基)-氨基甲酸苄酯(2.3mmol，0.57g)的DMF(2ml)溶液在180℃温度下用微波照射15分钟。然后使溶液冷却至室温后，真空浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到中间体化合物51A。
步骤2-中间体化合物51B的合成
向中间体化合物51A(2.0mmol，0.74g)的EtOH(50ml)溶液中加入锌(78mmol，5.1g)和氯化钙(2.0mmol，0.22g)。将反应混合物在回流的乙醇中搅拌约15小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤后，将滤液真空浓缩，得到中间体化合物51B。HPLC-MS RT＝1.45分钟，对于式C20H25N3O2，质量计算值339.19，LCMS m/z实测值340.10(M+H)。
步骤2-标题化合物的合成 采用实施例2中所述方法，将2-哌啶-1-基-苯胺替换成中间体化合物51B，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝6.19分钟，LCMS m/z实测值533.23(M+H)。
实施例52 下式化合物的制备
使得自实施例51的标题化合物(10mg)在浓HCl水溶液(12M，10ml)中回流1小时。使反应混合物冷却至室温后浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝3.85分钟，LCMS m/z实测值399.18(M+H)。
实施例53 下式化合物的制备
向2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.050mmol，11mg)和HATU(0.050mmol，19mg)的DMF(0.5ml)预混合溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.25mmol，44μl)和4，6-二甲氧基-2-哌嗪-1-基甲基-嘧啶(0.050mmol，17mg)。将所得反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌15小时。将反应混合物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝4.24分钟，LCMS m/z实测值523.24(M+H)。
实施例54 下式化合物的制备
步骤1-中间体化合物54A的合成
采用实施例53中所述方法，将苯磺酰氯替换成4-氯甲基-2，2-二甲基-[1，3]二氧杂环戊烷，来制备中间体化合物54A。HPLC-MS RT＝4.06分钟，对于式C24H28N4O3S2，质量计算值484.16，LCMS m/z实测值485.21(M+H)。
步骤2-标题化合物的合成 将中间体化合物54A(10mg)的HCl水溶液(1M，5ml)在室温下搅拌1小时。将反应混合物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到化合物157。HPLC-MS RT＝3.37分钟，LCMS m/z实测值445.21(M+H)。
实施例55 下式化合物的制备
采用实施例74中所述方法，将4-咪唑-1-基-哌啶替换成2-哌嗪-1-基-苯并噻唑，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝5.88分钟，LCMSm/z实测值504.12(M+H)。
实施例56 下式化合物的制备
采用实施例74中所述方法，将4-咪唑-1-基-哌啶替换成3-哌嗪-1-基-苯并[d]异噻唑，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝6.54分钟，LCMS m/z实测值504.14(M+H)。
实施例57 下式化合物的制备
步骤1-中间体化合物57A的合成
将1-氟-2-硝基-苯(0.60mmol，65μl)、N，N-二异丙基乙胺(1.0mmol，0.18ml)和2-(4-氮杂环丁烷-3-基-哌嗪-1-基)-乙醇三盐酸盐(1.0mmol，0.30g)的ACN(2ml)溶液在180℃温度下用微波照射10分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到中间体化合物57A(0.13g，收率72％)。
步骤2-中间体化合物57B的合成
向中间体化合物57A(0.22mmol，66mg)的THF(1ml)溶液中加入Boc酐(0.32mmol，71mg)。将所得反应混合物在50℃温度下搅拌48小时。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到中间体化合物57B(19mg，收率22％)。HPLC-MS RT＝1.26分钟，对于式C20H30N4O5，质量计算值406.22，LCMS m/z实测值407.20(M+H)。
步骤3-中间体化合物57C的合成
向中间体化合物57B(0.047mmol，19mg)的EtOAc(15ml)溶液中加入Pd/C(5％Pd，10mg)。将所得反应混合物在氢气氛、室温下搅拌约15小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤后，将滤液真空浓缩，得到中间体化合物57C(7.5mg，收率42％)。HPLC-MS RT＝0.97分钟，对于式C20H32N4O3，质量计算值376.25，LCMS m/z实测值377.20(M+H)。
步骤4-标题化合物的合成 向2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.050mmol，11mg)和HATU(0.050mmol，19mg)的DMF(0.5ml)预混合溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.25mmol，44μl)和中间体化合物57C(0.020mmol，7.5mg)。将所得反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌15小时。使反应混合物冷却至室温后浓缩。使残余物与TFA(0.5ml)反应30分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝3.35分钟，LCMS m/z实测值470.17(M+H)。
实施例58 下式化合物的制备
步骤1-中间体化合物58A的合成
将2-氯-3-硝基吡啶(6.3mmol，1.0g)、N，N-二异丙基乙胺(6.9mmol，1.2ml)和1-N-Boc-哌嗪(7.0mmol，1.3g)的ACN(10ml)溶液在160℃温度下用微波照射15分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱混合物为己烷/EtOAc)，得到中间体化合物58A(1.98g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.35(dd，J＝1.6，4.8Hz，1H)，8.16(dd，J＝1.6，8.4Hz，1H)，6.80(dd，J＝4.8，8.4Hz，1H)，3.60-3.54(m，4H)，3.48-3.38(m，4H)，1.48(s，9H)。
步骤2-中间体化合物58B的合成
向中间体化合物58A(1g)的EtOAc(20ml)溶液中加入Pd/C(5％Pd，0.2g)。将所得反应混合物在氢气氛、室温下搅拌约15小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤后，将滤液真空浓缩，得到中间体化合物58B，即4-(3-氨基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯。
步骤3-标题化合物的制备 向2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.10mmol，21mg)和HATU(0.10mmol，38mg)的DMF(0.5ml)预混合溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.50mmol，87μl)和中间体化合物58B(0.10mmol，28mg)。将所得反应物加热至80℃，并在此温度下搅拌15小时。使反应混合物冷却至室温后浓缩。使残余物与TFA(1.0ml)反应10分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝3.21分钟，LCMS m/z实测值372.15(M+H)。
实施例59 中间体化合物59A的制备
向2-溴-噻唑-4-甲酸(2.0mmol，0.42g)、N，N-二异丙基乙胺(3.0mmol，0.52ml)和HATU(2.0mmol，0.76g)的DMF(10ml)预混合溶液中加入4-(2-氨基苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.0mmol，0.56g)。将反应混合物在80℃下搅拌3小时后，真空浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱液己烷∶EtOAc(4.5∶1))，得到化合物59A(0.67g，72％，黄色固体)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.38(s，1H)，8.49(dd，J＝8.0，1.2Hz，1H)，8.14(s，1H)，7.23-7.10(m，3H)，3.72(br s，4H)，2.89-2.87(m，4H)，1.50(s，9H)。HPLC-MS RT＝2.39分钟，对于式C19H23BrN4O3S，质量计算值466.07，LCMS m/z实测值467.05(M+H)。
实施例60 下式化合物的制备
将化合物59A(0.050mmol，23mg)、K3PO4(0.10mmol，21mg)、Pd2(dba)3(5.0μmol，4.6mg)、S-Phos(0.010mmol，4.1mg)和2-氟吡啶-5-硼酸频哪醇酯(0.10mmol，22mg)加到装有搅拌棒的Schlenk管中。该管盖上有橡胶隔片的盖子，抽真空后，再充入氮气。通过注射器穿过隔片将甲苯(0.5ml)加到反应混合物。在氮气流下，用特氟隆螺旋盖将该管密封，放到118℃油浴中。将所得反应物在此温度下搅拌15小时。使反应混合物冷却至室温。将反应混合物通过硅藻土垫过滤后，将滤液真空浓缩。使残余物与TFA(1.0ml)反应10分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到化合物196。HPLC-MS RT＝3.27分钟，LCMS m/z实测值384.13(M+H)。
实施例61 下式化合物的制备
采用实施例60中所述方法，将2-氟吡啶-5-硼酸频哪醇酯替换成3-氟吡啶-5-硼酸频哪醇酯，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.25分钟，LCMS m/z实测值384.22(M+H)。
实施例62 化合物198的制备
采用实施例60中所述方法，将2-氟吡啶-5-硼酸频哪醇酯替换成3-羧基噻吩-2-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.18分钟，LCMS m/z实测值415.14(M+H)。
实施例63 下式化合物的制备
将化合物59A(0.050mmol，23mg)、氰化钠(0.10mmol，5.0mg)、碘化亚铜(5.0μmol，1.0mg)和碘化钾(0.010mmol，1.7mg)加到装有搅拌棒的Schlenk管中。该管盖上有橡胶隔片的盖子，抽真空后，再充入氮气。通过注射器穿过隔片将N，N′-二甲基-乙烷-1，2-二胺(0.050mmol，5.4μl)和甲苯(0.5ml)加到反应混合物中。在氮气流下，用特氟隆螺旋盖将该管密封后，放到100℃油浴中。将所得反应物在此温度下搅拌15小时。使反应混合物冷却至室温。将反应混合物通过硅藻土垫过滤后，将滤液真空浓缩。使残余物与TFA(1.0ml)反应10分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝2.65分钟，LCMS m/z实测值314.18(M+H)。
实施例64 中间体化合物64A的制备
向2-溴-噻唑-4-甲酸(2.0mmol，0.42g)、N，N-二异丙基乙胺(3.0mmol，0.52ml)和HATU(2.0mmol，0.76g)的DMF(3ml)预混合溶液中加入[1-(2-氨基-苯基)-哌啶-4-基]-氨基甲酸叔丁酯(2.0mmol，0.60g)。将反应混合物在80℃下搅拌3小时后，真空浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱液己烷∶EtOAc(4∶1))，得到化合物64A(0.27g，28％，黄色固体)。HPLC-MS RT＝2.30分钟，对于式C20H25BrN4O3S，质量计算值480.08，LCMS m/z实测值481.00(M+H)。
实施例65 下式化合物的制备
采用实施例60中所述方法，将化合物195替换成化合物200(实施例102)，将2-氟吡啶-5-硼酸频哪醇酯替换成2-甲氧基-4-吡啶硼酸，来制备化合物201。HPLC-MS RT＝3.57分钟，LCMS m/z实测值410.18(M+H)。
实施例66 下式化合物的制备
在室温下，使得自实施例65的标题化合物与碘三甲基硅烷的氯仿溶液反应约15小时。将反应混合物浓缩后，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝3.14分钟，LCMS m/z实测值396.17(M+H)。
实施例67 下式化合物的制备
采用实施例38中所述方法，将4-{2-[(2-溴-噻唑-羰基)-氨基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯替换成化合物200，将4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑替换成7-氮杂吲哚-5-硼酸频哪醇酯，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝1.99分钟，LCMS m/z实测值419.17(M+H)。
实施例68 下式化合物的制备
采用实施例98中所述方法，将化合物195替换成化合物200，将2-氟吡啶-5-硼酸频哪醇酯替换成2，4-二甲氧基嘧啶-5-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.78分钟，LCMS m/z实测值441.12(M+H)。
实施例69 下式化合物的制备
使[1-(2-{[2-(2，4-二甲氧基-嘧啶-5-基)-噻唑-4-羰基]-氨基}-苯基)-哌啶-4-基]-氨基甲酸叔丁酯与碘三甲基硅烷的氯仿溶液(1ml)在室温下反应约15小时。将反应混合物浓缩后，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝2.64分钟，LCMS m/z实测值413.05(M+H)。
实施例70 下式化合物的制备
步骤1-中间体化合物70A的合成
将K3PO4(3.5mmol，0.74g)、Pd2(dba)3(0.080mmol，73mg)、S-Phos(0.20mmol，82mg)、二硼酸二频哪醇酯(4mmol，1g)和3-溴-噻吩-2-甲腈(2.0mmol，0.38g)加到装有搅拌棒的Schlenk管中。该管盖上有橡胶隔片的盖子，抽真空后，再充入氮气。通过注射器穿过隔片将甲苯(3ml)加到反应混合物中，然后在氮气流下，用特氟隆螺旋盖将该管密封，放到110℃油浴中。将所得反应物在此温度下搅拌12小时，然后使反应混合物冷却至室温。将反应混合物通过硅藻土垫过滤后，将滤液真空浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱混合物为己烷∶EtOAc(4∶1))，得到中间体化合物70A(0.30g，收率64％，黄色固体)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.71(d，J＝5.2Hz，1H)，7.65(d，J＝5.2Hz，1H)，1.26(s，12H)。
步骤2-标题化合物的制备 采用实施例97中所述方法，用化合物200替换化合物195，用中间体化合物7替换2-氟吡啶-5-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MSRT＝3.49分钟，LCMS m/z实测值410.11(M+H)。
实施例71 下式化合物的制备
在室温下，将[1-(2-{[2-(2-氰基-噻吩-3-基)-噻唑-4-羰基]-氨基}-苯基)-哌啶-4-基]-氨基甲酸叔丁酯与叠氮化钠(0.10mmol，6.5mg)和三乙胺盐酸盐(0.10mmol，14mg)与甲苯(1ml)的混合物一起搅拌约15小时。反应混合物经硅藻土垫过滤后，将滤液真空浓缩。使残余物与TFA(1.0ml)反应10分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝3.01分钟，LCMS m/z实测值453.18(M+H)。
实施例72 下式化合物的制备
采用实施例93中所述方法，将4-氨基甲基苯基硼酸盐酸盐用成4-羟基苯基硼酸频哪醇酯替换，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝5.12分钟，LCMS m/z实测值379.05(M+H)。
实施例73 下式化合物的制备
采用实施例93中所述方法，将4-氨基甲基苯基硼酸盐酸盐用3-羟基苯基硼酸频哪醇酯替换，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.62分钟，LCMS m/z实测值379.11(M+H)。
实施例74 下式化合物的制备
步骤1-中间体化合物74A的合成
将1-(2-硝基-苯基)-咪唑烷-2-酮(1.0mmol，0.21g)、氢化钠(60％的矿物油溶液，1.5mmol，60mg)和N-(2-溴乙基)邻苯二甲酰亚胺(1.5mmol，0.38g)与DMA(2ml)的反应混合物在60℃温度下搅拌约15小时。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱混合物为DCM/MeOH(1.5％MeOH))，得到中间体化合物74A。
步骤2-中间体化合物74B的合成
向中间体化合物74A的MeOH(15ml)溶液中加入Pd/C(5％Pd，55mg)。将所得反应混合物在氢气氛、室温下搅拌约15小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤后，将滤液真空浓缩，得到中间体化合物74B。
步骤3-标题化合物的制备 采用实施例77中所述方法，将2-咪唑-1-基-苯胺用中间体化合物74B替换，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.05分钟，LCMS m/z实测值544.16(M+H)。
实施例78 下式化合物的制备
将得自实施例77的标题化合物和一水合肼/DCM的混合物在室温下搅拌约15小时。将反应混合物真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝2.81分钟，LCMS m/z实测值414.23(M+H)。
实施例79 化合物79A的制备
将1-苄基-4-甲基氨基-4-哌啶甲酰胺(3.03mmol，750mg)装到100ml圆底烧瓶中。依次向该烧瓶中加入40ml甲醇和300mg 10％披钯碳。该烧瓶用隔片密封并真空脱气10分钟。通过气囊加入氢气后，将反应物在室温下搅拌18小时。将该混合物在二氯甲烷助滤条件下经Celite牌硅藻土过滤。溶液经真空浓缩，得到化合物79A，无需进一步纯化便可使用。
实施例80 化合物80A的制备
向化合物79A(8.65mmol，1.36g)和DIEA(9.52mmol，1.66ml)与乙腈(8ml)和甲醇(1ml)的溶液中加入2-氟硝基苯(9.52mmol，1.00ml)。将所得反应物在Biotage Initiator微波合成仪中加热至180℃，并在此温度下搅拌30分钟。使反应混合物冷却至室温后，通过硅胶色谱法纯化，得到化合物80A。
实施例81 化合物81A的制备
向化合物80A(7.19mmol，2.00g)的甲醇(50ml)溶液中加入10％披钯碳(800mg)。该烧瓶用隔片密封并真空脱气10分钟。通过气囊加入氢气后，将反应物在室温下搅拌18小时。该混合物在二氯甲烷助滤条件下经Celite牌硅藻土过滤。溶液经真空浓缩。所需产物81A无需进一步纯化便可使用。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.28-7.22(s，1H)，6.98-6.92(s，1H)，6.88-6.83(d，J＝7.6Hz，1H)，6.77-6.71(t，J＝7.4Hz，1H)，6.64-6.59(d，J＝7.6Hz，1H)，6.52-6.46(t，J＝7.4Hz，1H)，4.64(s，2H)，2.86-2.77(t，J＝10.0Hz，2H)，2.74-2.66(m，2H)，2.12-2.08(d，J＝5.0Hz，3H)，2.07-2.02(t，J＝5.4Hz，1H)，2.01-1.92(m，2H)，1.64-1.56(d，J＝13.0Hz，2H)。
实施例82 化合物82A的制备
将2-溴噻唑-4-甲酸(2.40mmol。500mg)、化合物81A(2.52mmol，627mg)和HATU(2.52mmol，959mg)的DMF(20ml)溶液在室温下搅拌18小时。将混合物真空浓缩后，通过硅胶色谱法纯化。将化合物82A由MeOH和Et2O中再结晶出来后过滤，得到灰白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.03-10.00(s，1H)，8.48(s，1H)，8.34-8.30(dd，J＝7.8，1.6Hz，1H)，7.27-7.22(dd，J＝7.4，1.6Hz，1H)，7.20-7.11(m，2H)，3.13-3.04(m，2H)，2.90-2.82(m，2H)，2.54-2.45(m，5H)，2.15-2.06(m，2H)。
实施例83 下式化合物的制备
向20ml闪烁管装入化合物82A(0.034mmol，15mg)、1H-吡唑-5-硼酸(0.051mmol，5.8mg)、K3PO4(0.068mmol，14.5mg)、palladiumtetrakis(0.0034mmol，4mg)和3∶11，4-二噁烷∶H2O(1ml)。闪烁管用氩气吹扫，用特氟隆带密封。使反应物在100℃振荡18小时。将混合物真空浓缩，残余物通过反相HPLC纯化(3∶1DMSO∶乙腈)，得到标题化合物。LC/MS(10分钟TFA，保留时间＝2.48分钟，可见质量为(M+H)＝426.23)。
实施例84 化合物217的制备
采用实施例83中所述方法，用1H-吡唑-4-硼酸替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.44分钟，可见质量为(M+H)＝426.25)。
实施例85 下式化合物的制备
采用实施例83中所述方法，用吡啶-4-硼酸替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.15分钟，可见质量为(M+H)＝437.22)。
实施例86 下式化合物的制备
向20ml闪烁管中装入l-{2-[(2-溴-噻唑-4-羰基)-氨基]-苯基}-4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺(0.034mmol，15mg)、[5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-吡啶-2-基]-氨基甲酸叔丁酯(0.051mmol，16.4mg)、K3PO4(0.068mmol，14.5mg)、palladium tetrakis(0.0034mmol，4mg)和3∶1 1，4-二噁烷∶H2O(1ml)。闪烁管用氩气吹扫，用特氟隆带密封。使反应物在100℃振荡18小时。将反应混合物真空浓缩后，溶于1ml 4N HCl/1，4-二噁烷加25μl H2O溶液中，在室温下搅拌1小时。将混合物真空浓缩，溶于3∶1DMSO∶乙腈后，通过反相HPLC纯化出标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.04分钟，可见质量为(M+H)＝452.23)。
实施例87 下式化合物的制备
采用实施例86中所述方法，用3，5-二甲基-异噁唑-4-硼酸替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.86分钟，可见质量为＝455.23)。
实施例88 下式化合物的制备
采用实施例86中所述方法，用2-甲氧基吡啶-5-硼酸替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.77分钟，可见质量为(M+H)＝468.21)。
实施例89 下式化合物的制备
向实施例88的标题化合物(0.034mmol，16mg)中依次加入2ml 2∶1THF∶H2O和1N LiOH(水溶液)(0.068mmol，68μl)。将溶液在BiotageInitiator微波合成仪中加热至180℃达20分钟。将混合物真空浓缩，溶于3∶1DMSO∶乙腈后，通过反相HPLC纯化出标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.15分钟，可见质量为(M+H)＝454.20)。
实施例90 下式化合物的制备
采用实施例86中所述方法，用1-甲基吡唑-4-硼酸频哪醇酯替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.65分钟，可见质量为(M+H)＝440.21)。
实施例91 下式化合物的制备
采用实施例86中所述方法，用4-(氰基甲基)苯硼酸频哪醇酯替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备化合物224。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.09分钟，可见质量为(M+H)＝475.23)。
实施例92 下式化合物的制备
采用实施例86中所述方法，用4-(2-氰基丙-2-基)苯基硼酸替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.46分钟，可见质量为(M+H)＝503.30)。
实施例93 下式化合物的制备
采用实施例86中所述方法，用1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯-3-硼酸替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.70分钟，可见质量为(M+H)＝425.26)。
实施例94 下式化合物的制备
采用实施例86中所述方法，用1H-吲哚-5-硼酸频哪醇酯替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.25分钟，可见质量为(M+H)＝475.22)。
实施例95 下式化合物的制备
采用实施例86中所述方法，用噻吩-3-硼酸替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.94分钟，可见质量为(M+H)＝442.18)。
实施例96 下式化合物的制备
采用实施例86中所述方法，用3，5-二甲基吡唑-4-硼酸频哪醇酯替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.77分钟，可见质量为(M+H)＝454.23)。
实施例97 下式化合物的制备
采用实施例86中所述方法，用3-氨基苯基硼酸一水合物替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.51分钟，可见质量为(M+H)＝451.23)。
实施例98 下式化合物的制备
采用实施例86中所述方法，用2-氟吡啶-4-硼酸替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.84分钟，可见质量为(M+H)＝455.23)。
实施例99 下式化合物的制备
向20ml闪烁管中装入3′-[(2-溴-噻唑-4-羰基)-氨基]-4-甲基氨基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡啶-4-甲酰胺(0.034mmol，15mg)、1H-吡唑-4-硼酸(0.051mmol，5.8mg)、K3PO4(0.068mmol，14.5mg)、palladiumtetrakis(0.0034mmol，4mg)和3∶11，4-二噁烷∶H2O(1ml)。闪烁管用氩气吹扫，用特氟隆带密封。使反应物在100℃下振荡18小时。将混合物真空浓缩，化合物232通过反相HPLC纯化(3∶1DMSO∶乙腈)。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.06分钟，可见质量为(M+H)＝427.17)。
实施例100 下式化合物的制备
采用实施例99中所述方法，用1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯-3-硼酸替换1H-吡唑-4-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.36分钟，可见质量为(M+H)＝426.25)。
实施例101 下式化合物的制备
采用实施例99中所述方法，用1H-吲哚-5-硼酸频哪醇酯替换1H-吡唑-4-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.99分钟，可见质量为(M+H)＝476.21)。
实施例102 下式化合物的制备
采用实施例99中所述方法，用噻吩-3-硼酸替换1H-吡唑-4-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.65分钟，可见质量为(M+H)＝443.17)。
实施例103 下式化合物的制备
将1-(2-氨基-苯基)-4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺(0.156mmol，38.8mg)、2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.142mmol，30mg)和HATU(0.156mmol，59.3mg)的3ml DMF溶液在室温下搅拌18小时。然后将反应混合物真空浓缩，溶于3∶1DMSO∶乙腈，通过反相HPLC纯化出标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.30分钟，可见质量为(M+H)＝442.12)。
实施例104 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用化合物104A替换103A，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.74分钟，可见质量为(M+H)＝443.17)。
实施例105 化合物105A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物来制备化合物105A。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.05-7.01(dd，J＝1.6，8.2Hz，1H)，6.94-6.89(td，J＝1.6，7.6Hz，1H)，6.75-6.70(m，2H)，4.0-3.9(br s，2H)，3.75-3.70(t，J＝4.6Hz，4H)，3.10-2.95(m，4H)，2.67-2.63(t，J＝4.6Hz，4H)，2.02-1.95(m，4H)。
实施例106 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用化合物105A替换化合物103A，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.60分钟，可见质量为(M+H)＝498.29)。
实施例107 化合物107A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物来制备化合物107A。
实施例108 化合物108A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物来制备化合物108A。
实施例109 化合物109A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物来制备化合物109A。
实施例110 化合物110A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物来制备化合物110A。
实施例111 化合物111A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物来制备化合物111A。
实施例112 化合物112A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物来制备化合物112A。
实施例113 化合物113A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物来制备化合物113A。
实施例114 化合物114A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物来制备化合物114A。
实施例115 化合物115A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物来制备化合物115A。
实施例116 化合物116A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物来制备化合物116A。
实施例117 化合物117A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物来制备化合物117A。
实施例118 化合物118A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物来制备化合物118A。
实施例119 化合物119A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物和另外1.1当量DIEA，来制备化合物116A。
实施例120 化合物120C的制备
采用催化氢化使化合物120A脱保护，得到化合物120B。然后，采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物，将化合物120B转化成化合物120C。
实施例121 化合物121A的制备
向4-N-Boc-氨基哌啶(10mmol，2.00g)和DIEA(11mmol，1.92ml)的乙腈(10ml)溶液中加入2-氯-3-硝基吡啶(10mmol，1.58g)。将所得反应物在Biotage Initiator微波合成仪中加热至150℃，并在此温度下搅拌15分钟。使反应混合物冷却至室温后，通过硅胶色谱法纯化，得到化合物121A。
实施例122 化合物122A的制备
采用实施例3中所述方法，用(3′-硝基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡啶-4-基)-氨基甲酸叔丁酯替换4-甲基氨基-1-(2-硝基-苯基)-哌啶-4-甲酰胺，来制备化合物122A。
实施例123 化合物123A的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物来制备化合物123A。
实施例124 化合物124A的制备
采用Metwally，Kamel A.等人所述方法(Metwally，Kamel A.等，J.Med.Chem.1998，第41卷(25)，5084-5093)，来制备化合物124A。
实施例125 化合物125A的制备
向4-氨基-1-苄基-哌啶-4-甲酰胺(8.27mmol，1.93g)的DCM(80ml)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(75mmol，16.2g)。将该溶液在室温下搅拌40小时。然后将反应混合物真空浓缩后，通过硅胶色谱法纯化，得到化合物125A。
实施例126 化合物126A的制备
采用实施例1、实施例115和实施例116中所述方法，用(1-苄基-4-氨基甲酰基-哌啶-4-基)-氨基甲酸叔丁酯替换1-苄基-4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺，来制备化合物263。
实施例127 化合物127A的制备
采用实施例103中所述方法，用4-叔丁氧基-哌啶替换4-N-Boc-氨基哌啶，来制备化合物264。
实施例128 化合物128A的制备
采用实施例159和实施例160中所述方法，用(4-氨基甲酰基-哌啶-4-基)-氨基甲酸叔丁酯替换4-N-Boc-氨基哌啶，来制备化合物128A。
实施例129 化合物129A的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物和另外1.1当量DIEA，来制备化合物129A。
实施例130 下式化合物的制备
将(R)-[1-(2-氨基-苯基)-吡咯烷-3-基]-氨基甲酸叔丁酯(0.047mmol，13.1mg)、2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.047mmol，10mg)和HATU(0.047mmol，17.9mg)的1ml DMF溶液在室温下搅拌18小时。然后将反应混合物真空浓缩。将残余物溶于4N HCl的1，4-二噁烷溶液后，在室温下搅拌1小时后，真空浓缩。将该残余物溶于1.5ml3∶1DMSO∶乙腈后，通过反相HPLC纯化出标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.46分钟，可见质量为(M+H)＝371.14)。
实施例131 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用2-[4-(5-三氟甲基-[1，3，4]噻二唑-2-基)-哌嗪-1-基]-苯胺替换1-(2-氨基-苯基)-4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝6.00分钟，可见质量为(M+H)＝523.10)。
实施例132 下式化合物的制备
采用实施例36中所述方法，用2-(4-噻唑-2-基-哌嗪-1-基)-苯胺替换1-(2-氨基-苯基)-4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝4.46分钟，可见质量为(M+H)＝454.17)。
实施例133 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝4.20分钟，可见质量为(M+H)＝461.18)。
实施例134 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝4.19分钟，可见质量为(M+H)505.24)。
实施例135 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝4.59分钟，可见质量为(M+H)386.14)。
实施例136 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.43分钟，可见质量为(M+H)＝470.09)。
实施例137 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝4.34分钟，可见质量为(M+H)＝413.16)。
实施例138 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.75分钟，可见质量为(M+H)＝411.19)。
实施例139 化合物139A的制备
采用实施例81和实施例82中所述方法，用标明的反应物制备化合物139A。
实施例140 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.70分钟，可见质量为(M+H)＝399.12)。
实施例141 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.90分钟，可见质量为(M+H)＝425.12)。
实施例142 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.82分钟，可见质量为(M+H)＝441.11)。
实施例143 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.88分钟，可见质量为(M+H)＝386.12)。
实施例144 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.48分钟，可见质量为(M+H)＝384.14)。
实施例145 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.95分钟，可见质量为(M+H)399.16)。
实施例146 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.28分钟，可见质量为(M+H)＝387.54)。
实施例147 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.07分钟，可见质量为(M+H)437.55)。
实施例148 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.88分钟，可见质量为(M+H)＝436.17)。
实施例149 化合物149A的制备
将(R)-1-N-Boc-哌啶-3-甲胺(1.0mmol，214mg)的吡啶(4ml)溶液在冰浴中冷却至0℃。向其中加入三氟乙酸酐(3.0mmol，418μl)。使所得溶液升温至室温后搅拌40小时。40小时后，将反应物在25ml乙酸乙酯中稀释，用1N HCl(水溶液)(3次)、盐水洗涤后，经Na2SO4干燥。化合物149A无需进一步纯化便可使用。
实施例150 化合物150A的制备
将(R)-3-[(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-甲基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1mmol，310mg)溶于4ml 4N HCl/1，4-二噁烷加50μl H2O溶液中，在室温下搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩，化合物150A无需进一步纯化便可使用。
实施例151 化合物151A的制备
采用实施例149和实施例150中所述方法，用(S)-1-N-Boc-哌啶-3-甲胺替换(R)-1-N-Boc-哌啶-3-甲胺，来制备化合物151A。
实施例152 化合物152A的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备化合物152A。
实施例153 化合物153A的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备化合物153A。
实施例154 化合物154A的制备
采用Kim，In Ho等人所述方法(Kim，In Ho等，Bioorganic andMedicinal Chemistry Letters，2007，第17卷(5)，1181-1184)，来制备化合物154A。
实施例155 化合物155A的制备
将化合物154A(2.12mmol，895mg)溶于1，4-二噁烷(15ml)。向该溶液中加入4N HCl/1，4-二噁烷(5ml)。将所得溶液在室温下搅拌2小时后，真空浓缩，得到化合物155A，无需进一步纯化便可使用。
实施例156 化合物156A的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物，另加入1.1当量DIEA，来制备化合物156A。
实施例157 化合物157A的制备
采用实施例103中所述方法，用标明的反应物制备化合物157A。
实施例158 化合物158A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物制备化合物158A。
实施例159 化合物159A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物制备化合物159A。
实施例160 化合物160A的制备
采用Metwally，Kamel A.等人所述方法(Metwally，Kamel A.等，J.Med.Chem.1998，第25卷，5084-5093)，来制备化合物160A。
实施例161 化合物161A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用标明的反应物制备化合物161A。
实施例162 化合物162A的制备
向4，6-二氯-5-硝基嘧啶(5.15mmol，1.00g)的二氯甲烷(30ml)溶液中加入二异丙基乙胺(6.70mmol，1.17ml)。将该溶液在干冰/异丙醇浴中冷却至-78℃。向该溶液中滴加4-叔丁氧基-哌啶(5.20mmol，817mg)的DCM(10ml)溶液。在-78℃下搅拌18小时。将该溶液真空浓缩后，使化合物162A通过硅胶色谱法纯化。
实施例163 化合物163A的制备
向4-(4-叔丁氧基-哌啶-1-基)-6-氯-5-硝基-嘧啶(4.48mmol，1.41g)的乙醇(200ml)溶液中加入三乙胺(5.83mmol，820μl)。在50巴和60℃下，将该溶液用H-cube氢化器处理。将该溶液真空浓缩至40ml后，用200ml乙酸乙酯稀释，将其用浓碳酸氢钠水溶液洗涤(1次)后，用浓盐水溶液洗涤(1次)，经无水硫酸钠干燥，将该溶液真空浓缩，得到化合物163A，为微细灰白色粉末。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.07(s，1H)，7.83(s，1H)，4.75-4.72(s，2H)，3.68-3.55(m，3H)，2.87-2.78(m，2H)，1.77-1.69(m，2H)，1.56-1.45(m，2H)，1.13(s，9H)。
实施例164 化合物164A的制备
采用实施例162和实施例163中所述方法，用标明的原料制备化合物164A。
实施例165 化合物165A的制备
将1-(2-氨基-苯基)-3-羟基-吡咯烷-3-甲酸甲酯(0.317mmol，75mg)溶于～7N NH3的甲醇溶液(4ml)中。向该溶液中加入氰化钾(0.032mmol，2mg)。将反应管密封后，将溶液加热至55℃达18小时。反应物然后用乙酸乙酯(15ml)稀释，用浓碳酸氢钠水溶液洗涤后，经硫酸钠干燥。将该溶液真空浓缩，化合物165A无需进一步纯化便可使用。
实施例166 化合物166A的制备
采用实施例166中所述方法，用1-(3-氨基-吡啶-2-基)-3-羟基-吡咯烷-3-甲酸甲酯替换1-(2-氨基-苯基)-3-羟基-吡咯烷-3-甲酸甲酯，来制备化合物166A。
实施例167 化合物167A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用3-羟基氮杂环丁烷替换4-N-Boc-氨基哌啶，来制备化合物167A。
实施例168 化合物168A的制备
采用实施例80和实施例81中所述方法，用3-羟甲基-吡咯烷-3-甲酸乙酯替换4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺，来制备化合物168A。
实施例169 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用[1-(5-氨基-嘧啶-4-基)-哌啶-4-基]-氨基甲酸叔丁酯替换(R)-[1-(2-氨基-苯基)-吡咯烷-3-基]-氨基甲酸叔丁酯，来制备化合物316。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝1.89分钟，可见质量为(M+H)＝387.16)。
实施例170 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用(3′-硝基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡啶-4-基)-氨基甲酸叔丁酯替换1-(2-氨基-苯基)-4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺，来制备化合物318。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.74分钟，可见质量为(M+H)＝429.19)。
实施例171 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用(S)-2，2，2-三氟-N-哌啶-3-基甲基-乙酰胺盐酸盐替换1-(2-氨基-苯基)-4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝5.17分钟，可见质量为(M+H)＝495.57)。
实施例172 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用(R)-2，2，2-三氟-N-哌啶-3-基甲基-乙酰胺盐酸盐替换1-(2-氨基-苯基)-4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝5.17分钟，可见质量为(M+H)＝495.59)。
实施例173 下式化合物的制备
采用实施例178中所述方法，用N-(2-{3-[(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-(R)-甲基]-哌啶-1-基}-苯基)-2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酰胺替换N-(2-{3-[(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-(S)-甲基]-哌啶-1-基}-苯基)-2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酰胺，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.77分钟，可见质量为(M+H)＝399.60)。
实施例174 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用1-(3-氨基-吡啶-2-基)-3-羟基-吡咯烷-3-甲酰胺替换1-(2-氨基-苯基)-4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.35分钟，可见质量为(M+H)＝416.13)。
实施例175 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用1-(2-氨基-苯基)-氮杂环丁烷-3-醇替换(R)-[1-(2-氨基-苯基)-吡咯烷-3-基]-氨基甲酸叔丁酯，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝4.68分钟，可见质量为(M+H)＝358.10)。
实施例176 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用(S)-[1-(2-氨基-苯基)-吡咯烷-3-基]-氨基甲酸叔丁酯替换(R)-[1-(2-氨基-苯基)-吡咯烷-3-基]-氨基甲酸叔丁酯，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.44分钟，可见质量为(M+H)＝371.12)。
实施例177 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用N-{1-(2-氨基-苯基)-4-[(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-甲基]-哌啶-4-基}-2，2，2-三氟-乙酰胺替换1-(2-氨基-苯基)-4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺，来制备标题化合物。最终产物通过硅胶色谱法纯化。
实施例178 下式化合物的制备
向N-(2-{4-(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-4-[(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-甲基]-哌啶-1-基}-苯基)-2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酰胺(0.065mmol，40mg)的2∶1THF∶H2O(3ml)溶液中加入1N LiOH(水溶液)(0.20mmol，200μl)。将所得溶液在室温下搅拌18小时。将溶液真空浓缩后，溶于3∶1DMSO∶乙腈，通过反相HPLC纯化出标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.94分钟，可见质量为(M+H)＝414.14)。
实施例179 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用4-(2-氨基-4-甲氧基羰基-苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯替换1-(2-氨基-苯基)-4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺，来制备标题化合物。最终产物通过硅胶色谱法纯化。
实施例180 下式化合物的制备
在室温下，将4-{4-甲氧基羰基-2-[(2-噻吩-2-基-噻唑-4-羰基)-氨基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.076mmol，40mg)在9∶1三氟乙酸∶H2O(2ml)溶液中搅拌2小时。将溶液真空浓缩后，溶于3∶1DMSO∶乙腈，通过反相HPLC纯化出标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.54分钟，可见质量为(M+H)＝429.09)。
实施例181 化合物181A的制备
向4-{4-甲氧基羰基-2-[(2-噻吩-2-基-噻唑-4-羰基)-氨基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.152mmol，80mg)的2∶1THF∶H2O(3ml)溶液中加入1N LiOH(水溶液)(0.20mmol，200μl)。将所得溶液在室温下搅拌18小时。18小时后，用IR-120H+强酸树酯使反应物酸化至pH＝4后，过滤除去树脂。真空除去溶剂，化合物181A无需进一步纯化便可使用。
实施例182 下式化合物的制备
采用实施例180中所述方法，用4-{4-甲酸-2-[(2-噻吩-2-基-噻唑-4-羰基)-氨基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯替换4-{4-甲氧基羰基-2-[(2-噻吩-2-基-噻唑-4-羰基)-氨基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.69分钟，可见质量为(M+H)＝4151.15)。
实施例183 下式化合物的制备
向4-{4-甲酸-2-[(2-噻吩-2-基-噻唑-4-羰基)-氨基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.082mmol，42.2mg)的DMF(2ml)溶液中加入氯化铵(0.164mmol，8.8mg)、EDC(0.180mmol，34.4mg)、HOBt(0.180mmol，24.3mg)和DIEA(0.25mmol，44μl)。将反应物在室温下搅拌18小时，届时真空除去DMF。将残余物溶于2ml 9∶1TFA∶H2O，在室温下搅拌2小时。将溶液真空浓缩后，溶于3∶1DMSO∶乙腈，通过反相HPLC纯化出标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.78分钟，可见质量为(M+H)＝414.10)。
实施例184 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用8-(2-氨基-苯基)-1，3，8-三氮杂-螺[4.5]癸-4-酮替换1-(2-氨基-苯基)-4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.62分钟，可见质量为(M+H)＝440.16)。
实施例185 下式化合物的制备
采用实施例103中所述方法，用1-(2-氨基-苯基)-3-羟甲基-吡咯烷-3-甲酸乙酯替换1-(2-氨基-苯基)-4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺，来制备标题化合物。最终产物通过硅胶色谱法纯化。
实施例186 下式化合物的制备
将3-羟甲基-1-{2-[(2-噻吩-2-基-噻唑-4-羰基)-氨基]-苯基}-吡咯烷-3-甲酸乙酯(0.05mmol，23mg)装入20ml闪烁管中。再依次向该管中装入2∶1THF∶H2O(3ml)和1N LiOH(水溶液)(0.06mmol，60μl)。将该溶液在室温下搅拌70小时。反应物用IR-120+强酸树酯调节至pH＝4。滤出树脂后，真空除去溶剂，将残余物溶于3∶1DMSO∶乙腈，通过反相HPLC纯化出标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝4.10分钟，可见质量为(M+H)＝430.13)。
实施例187 下式化合物的制备
向3-羟甲基-1-{2-[(2-噻吩-2-基-噻唑-4-羰基)-氨基]-苯基}-吡咯烷-3-甲酸(0.04mmol，17.2mg)的DMF(2ml)溶液中加入氯化铵(0.1mmol，5.4mg)、二异丙基乙胺(0.12mmol，21μl)、EDC(0.06mmol，11.5mg)和HOBt(0.06mmol，8.1mg)。将反应物在室温下搅拌18小时。将溶液真空浓缩后，溶于3∶1DMSO∶乙腈，通过反相HPLC纯化出标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝3.83分钟，可见质量为(M+H)＝429.16)。
实施例188 下式化合物的制备
采用实施例99中所述方法，用呋喃-3-硼酸替换1H-吡唑-5-硼酸，来制备标题化合物。最终产物用LC/MS观测(10分钟TFA，保留时间＝2.79分钟，可见质量为(M+H)＝426.20)。
实施例189 下式化合物的制备
用上文实施例99中所述方法，将3-吡啶-硼酸替换成5-氟3-吡啶-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝2.79分钟，对于C22H23FN6O2S，质量计算值式454.16，LCMS m/z实测值455.17(M+H)。
实施例190 下式化合物的制备
用上文实施例99中所述方法，将3-吡啶-硼酸替换成(2-氨基)苯-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝2.97分钟，对于式C22H23FN6O2S，质量计算值454.16，LCMS m/z实测值455.17(M+H)。
实施例191 下式化合物的制备
用上文实施例99中所述方法，将3-吡啶-硼酸替换成吡咯-2-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝2.59分钟，对于式C23H26N6O2S，质量计算值424.17，LCMS m/z实测值425.18(M+H)。
实施例192 下式化合物的制备
用上文实施例99中所述方法，将3-吡啶-硼酸替换成吲唑-4-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝2.98分钟，对于式C24H25N7O2S，质量计算值475.18，LCMS m/z实测值476.18(M+H)。
实施例193 下式化合物的制备
用上文实施例99中所述方法，将3-吡啶-硼酸替换成3-氟-苯-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.19分钟，对于式C23H24FN5O2S，质量计算值453.16，LCMS m/z实测值454.16(M+H)。
实施例194 下式化合物的制备
用上文实施例99中所述方法，将3-吡啶-硼酸替换成3，5-二氟-苯-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.27分钟，对于式C23H23F2N5O2S，质量计算值471.15，LCMS m/z实测值472.16(M+H)。
实施例195 下式化合物的制备
用上文实施例99中所述方法，将3-吡啶-硼酸替换成2-氰基-噻吩-3-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.01分钟，对于式C22H22N6O2S2，质量计算值466.12，LCMS m/z实测值467.13(M+H)。
实施例196 下式化合物的制备
用上文实施例99中所述方法，将3-吡啶-硼酸替换成3-羟基-苯-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝2.86分钟，对于式C23H25N5O3S，质量计算值451.17，LCMS m/z实测值452.17(M+H)。
实施例197 下式化合物的制备
用上文实施例99中所述方法，将3-吡啶-硼酸替换成2-氟-3-羟基-苯-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝2.98分钟，对于式C23H24FN5O3S，质量计算值469.16，LCMS m/z实测值470.17(M+H)。
实施例198 下式化合物的制备
用上文实施例99中所述方法，将3-吡啶-硼酸替换成5-氟-3-羟基-苯-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝2.88分钟，对于式C23H24FN5O3S，质量计算值469.16，LCMS m/z实测值470.17(M+H)。
实施例199 下式化合物的制备
步骤1-化合物199A的合成
使4-三丁基锡烷基-哒嗪(200mg，0.55mmol)、2-溴-噻唑-4-甲酸乙酯(120mg，0.50mmol)、Pd(Ph3P)4(60mg)与甲苯(3ml)的混合物脱气，在氩气氛、110℃下加热12小时。将混合物浓缩后，用快速柱色谱法纯化(硅胶，CH2Cl2/EtOAc，1∶1)，得到化合物199A，为浅褐色固体1H NMR 8.55(s，1H)，9.39(dd，1H，J＝7.8Hz，1.2Hz)，8.80(s，1H)，8.18(m，2H)，4.34(q，2H，J＝6.8Hz)，1.34(3H，J＝6.8Hz)。
步骤2-化合物199B的合成
将化合物199A(360mg，1.53mmol)和氢氧化锂一水合物(160mg，2.5eq)与THF/H2O(2∶1，15ml)的混合物在室温下搅拌12小时。真空除去THF后，所得含水混合物用1N HCl中和。所得固体产物经过滤收集后，真空干燥，得到化合物199B。1H NMR 10.57(s，1H，OH)，9.40(d，1H，J＝7.8Hz，1.2Hz)，8.75(s，1H)，8.09(m，2H)。
步骤3-标题化合物的合成 将化合物199B(42mg，0.20mmol)、化合物81A(50mg，0.2mmol)、EDCI(80mg，0.4mmol)与吡啶(2.0ml)的混合物在室温下搅拌2小时，浓缩后，用制备型LC纯化，得到标题化合物(42mg，0.20mmol)，为TFA盐。HPLC-MS RT＝2.37分钟，对于式C21H23N7O2S，质量计算值437.16，LCMS m/z实测值438.17(M+H)。
实施例200 下式化合物的制备
步骤1-化合物200A的合成
使4-甲基氨基-哌啶-4-甲酰胺(200mg，0.55mmol)、1，2-二氟-3-硝基-苯(120mg，0.75mmol)、三乙胺(0.10ml，0.55mmol)与4/1CH3CN/MeOH(5.0ml)、甲苯(3ml)的混合物脱气后，在氩气氛、150℃下用微波加热30分钟。将混合物浓缩后，用快速柱色谱法纯化(硅胶，CH2Cl2/EtOAc，1∶1)，得到化合物200A，为黄色固体。
步骤2-化合物200B的合成
使化合物200A(100mg，0.33mmol)和10％Pd/C(10mg)与EtOAc/MeOH(1∶1，5ml)的混合物脱气后，在氢气氛、室温下搅拌4小时。将混合物过滤后浓缩，无需进一步纯化便可用于下一步骤。
步骤3-化合物200C的合成
将化合物200C(62mg，0.32mmol)、化合物200B(86mg，0.32mmol)、EDCI(125mg，0.64mmol)与吡啶(5.0ml)的混合物在室温下搅拌2小时，浓缩后，用制备型LC纯化，得到标题化合物，为TFA盐。HPLC-MS RT＝2.46分钟，对于式C20H22N7O2S，质量计算值443.15，LCMS m/z实测值444.16(M+H)。
实施例201 下式化合物的制备
将4-吲唑-硼酸(17mg，0.07mmol)、(24mg，0.05mmol)、Pd(Ph3P)4、K2CO3(22mg)与3∶1二噁烷/H2O混合物(1ml)的混合物在150℃下用微波加热30分钟。使混合物冷却，浓缩后，在室温下用9∶1TFA/H2O混合物处理2小时，然后浓缩。将残余物溶于3∶1DMSO/CH3CN混合物后，用制备型LC纯化，得到标题化合物，为TFA盐。HPLC-MS RT＝1.72分钟，对于式C20H19N7OS，质量计算值405.14，LCMS m/z实测值406.15(M+H)。
实施例202 下式化合物的制备
采用上文实施例201中所述方法，将4-吲唑-硼酸替换成5-吲唑-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝1.62分钟，对于式C20H19N7OS，质量计算值405.14，LCMS m/z实测值406.15(M+H)。
实施例203 下式化合物的制备
采用上文实施例201中所述方法，将4-吲唑-硼酸替换成7-吲唑-硼酸，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝1.82分钟，对于式C20H19N7OS，质量计算值405.14，LCMS m/z实测值406.15(M+H)。
实施例204 下式化合物的制备
向2-氟-5-硝基-苯胺(1.0g，6.4mmol)和(2-哌啶-3-基-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(1.9g，8.3mmol)的无水1，4-二噁烷(5ml)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(1.11ml，6.4mmol)。将混合物在100℃下加热16小时。使反应混合物冷却，浓缩后，用快速柱色谱法纯化(30％-50％EtOAc/己烷)，得到标题化合物(1.44g，62％)。HPLC-MS RT＝2.13分钟，对于式C18H28N4O4，质量计算值364.21，LCMS m/z实测值365.91(M+H)。
实施例205 下式化合物的制备
向{2-[1-(2-氨基-4-硝基-苯基)-哌啶-3-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(1.0g，2.75mmol)和2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酰氯(0.76g，3.30mmol)与无水二氯甲烷(7ml)和1，4-二噁烷(7ml)的溶液中加入三乙胺(0.77ml，5.5mmol)。将混合物在50℃下加热16小时。使反应混合物冷却后浓缩。将残余物溶于乙醇(10ml)，在大气压下，在Pd/C(10％，120mg)和H2存在时搅拌6小时。将反应混合物过滤后浓缩。粗制残余物用2.0N HCl的1，4-二噁烷溶液(2ml)在室温下处理2小时后浓缩。将残余物溶于3∶1DMSO/CH3CN混合物后，用制备型LC纯化，得到标题化合物，为其TFA盐。HPLC-MS RT＝2.62分钟，对于式C21H25N5OS2，质量计算值427.15，LCMS m/z实测值428.15(M+H)。
实施例206 下式化合物的制备
将[2-(1-{4-硝基-2-[(2-噻吩-2-基-噻唑-4-羰基)-氨基]-苯基}-哌啶-3-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.18mmol)用2.0N HCl的1，4-二噁烷溶液(2ml)在室温下处理2小时后浓缩。将残余物溶于3∶1DMSO/CH3CN混合物后，用制备型LC纯化，得到标题化合物，为其TFA盐。HPLC-MS RT＝3.93分钟，对于式C21H23N5O3S2，质量计算值457.12，LCMS m/z实测值458.13(M+H)。
实施例207 下式化合物的制备
向2-硝基-萘-1-酚(1.0g，5.3mmol)和N，N-二异丙基乙胺(1.11ml，6.4mmol)的无水二氯甲烷(5ml)溶液中加入三氟甲磺酸酐(1.5g，5.3mmol)。将混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物浓缩后，用快速柱色谱法纯化(20％-30％EtOAc/己烷)，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝2.18分钟，对于式C11H6F3NO5S，质量计算值320.99，LCMS m/z实测值321.99(M+H)。
实施例208 下式化合物的制备
向三氟-甲磺酸2-硝基-萘-1-基酯(1.7g，5.3mmol)和(2-哌啶-3-基-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(1.21g，5.30mmol)的无水1，4-二噁烷(4ml)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.77ml，5.5mmol)。将混合物在160℃下加热2小时。使反应混合物冷却后浓缩。将残余物溶于乙醇(10ml)，在大气压下，在Pd/C(10％，120mg)和H2存在时搅拌6小时。将反应混合物过滤后浓缩。向粗制残余物(110mg)和2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酰氯(90mg，0.387mmol)的无水二氯甲烷(1ml)溶液中加入三乙胺(0.08ml)。将反应混合物搅拌16小时后浓缩。将粗制残余物用2.0N HCl的1，4-二噁烷溶液(2ml)在室温下处理2小时后浓缩。将残余物溶于3∶1DMSO/CH3CN混合物后，用制备型LC纯化，得到标题化合物，为其TFA盐。HPLC-MS RT＝4.56分钟，对于式C25H26N4OS2，质量计算值462.15，LCMS m/z实测值463.16(M+H)。
实施例209 下式化合物的制备
步骤1-中间体209A的合成
将4-(1-吡咯烷基)哌啶(1.29mmol，0.20g)、N，N-二异丙基乙胺(1.0当量，1.29mmol，224.7μl)和1-氟-2-硝基苯(0.60当量，82μl)的ACN(2ml)溶液在180℃温度下用微波照射10分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，得到化合物209A。HPLC-MS RT＝1.00分钟，对于式C15H21N3O2，质量计算值275.35，LCMS m/z实测值276.18(M+H)。
步骤2-化合物209B的合成
从反应瓶中取出50mg，加到4ml瓶中。加入2勺阿姆伯拉特树脂(Amberlite resin)、2勺异氰酸酯树脂、DCM(1ml)和DMF(1ml)。将溶液和树脂在室温下振荡24小时。滤出树脂后，使溶剂蒸发。加入10％Pd/碳(15mg)和乙酸乙酯(15ml)，使溶液脱气后，加H2气囊。将该溶液在室温下搅拌约30分钟(或直到黄色消失)，通过硅藻土滤出Pd/C，得到化合物209B。HPLC-MS RT＝0.702分钟，对于式C15H23N3，质量计算值245.36，LCMS m/z实测值246.23(M+H)。
步骤3-标题化合物的合成 向化合物209B(0.095mmol)的溶液中加入2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.095mmol，0.020g)的DMF(1ml)溶液。接着，加入N，N-二异丙基乙胺(1当量，0.095mmol，16.5μl)、HOBT(1当量，0.095mmol，0.013g)、EDC(1当量，0.095mmol，0.018g)。将所得反应物在50℃下搅拌15小时。将反应混合物浓缩后，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝3.85分钟，对于式C23H26N4OS2，质量计算值438.15，LCMS m/z实测值439.15(M+H)。
实施例210 下式化合物的制备
采用实施例209中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.31分钟，对于式C20H20N4O2S2，质量计算值412.10，LCMS m/z实测值413.12(M+H)。
实施例211 下式化合物的制备
采用实施例209中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.83分钟，对于式C18H17N3O2S2，质量计算值371.08，LCMS m/z实测值372.09(M+H)。
实施例212 下式化合物的制备
采用实施例209中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝5.40分钟，对于式C25H23N3O2S2，质量计算值461.12，LCMS m/z实测值462.14(M+H)。
实施例213 下式化合物的制备
采用实施例209中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.55分钟，对于式C20H21N3O2S2，质量计算值399.53，LCMS m/z实测值400.14(M+H)。
实施例214 下式化合物的制备
采用实施例209中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.82分钟，对于式C18H17N3O2S2，质量计算值371.08，LCMS m/z实测值372.08(M+H)。
实施例215 下式化合物的制备
采用实施例209中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.56分钟，对于式C19H19N3O2S2，质量计算值385.09，LCMS m/z实测值386.10(M+H)。
实施例216 下式化合物的制备
采用实施例209中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.68分钟，对于式C20H21N3O2S2，质量计算值399.11，LCMS m/z实测值400.07(M+H)。
实施例217 下式化合物的制备
采用实施例209中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.41分钟，对于式C21H22N4O2S2，质量计算值426.12，LCMS m/z实测值427.14(M+H)。
实施例218 下式化合物的制备
采用实施例209中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.31分钟，对于式C20H20N4O2S2，质量计算值412.10，LCMS m/z实测值413.12(M+H)。
实施例219 下式化合物的制备
采用实施例209中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.69分钟，对于式C23H26N4O2S2，质量计算值454.15，LCMS m/z实测值455.13(M+H)。
实施例220 下式化合物的制备
采用实施例209中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.95分钟，对于式C21H22N4O2S2，质量计算值442.11，LCMS m/z实测值443.12(M+H)。
实施例221 下式化合物的制备
采用实施例209中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝5.49分钟，对于式C22H20N4OS3，质量计算值452.08，LCMS m/z实测值453.08(M+H)。
实施例222 下式化合物的制备
采用实施例209中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.66分钟，对于式C22H22N4O2S2，质量计算值438.12，LCMS m/z实测值439.14(M+H)。
实施例223 下式化合物的制备
步骤1-化合物223A的合成
将3-(N-Boc-氨基乙基)哌啶(1.31mmol，0.300g)、N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，1.57mmol，274μl)和1-氟-2-硝基苯(0.98当量，135μl)的ACN(2ml)溶液在200℃温度下用微波照射20分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱混合物为己烷/EtOAc)后浓缩，得到化合物223A(0.353g)。HPLC-MS RT＝2.37分钟，对于式C18H27N3O4，质量计算值349.20，LCMS m/z实测值350.20(M+H)。
步骤2-化合物223B的合成
将中间体化合物223A(0.353g)的EtOAc(40ml)溶液按照下列设置在H-Cube中用10％Pd/C柱体进行氢化 H-Cube设置 将所得反应混合物真空浓缩，得到化合物223B(0.302g)。HPLC-MS RT＝1.40分钟，对于式C18H29N3O2，质量计算值319.23，LCMS m/z实测值320.20(M+H)。
步骤3-标题化合物的制备 向化合物223B(0.31mmol，0.1g)的DMF(2ml)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.37mmol，48μl)、HATU(1.2当量，0.37mmol，143mg)和2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.31mmol，65mg)。将所得反应物在室温下搅拌15小时。将反应混合物浓缩。使残余物与TFA∶H2O(90∶10)(1.0ml)反应30分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)后，用反相HPLC纯化，得到标题化合物(0.113g)。HPLC-MS RT＝3.71分钟，对于式C21H24N4OS2，质量计算值412.14，LCMS m/z实测值413.18(M+H)。
实施例224 下式化合物的制备
步骤1-化合物224A的合成
将1-(2-硝基-苯基)-咪唑烷-2-酮(0.070g)的甲醇(10ml)溶液按照下列设置在H-Cube中用10％Pd/C柱体进行氢化 H-Cube设置 将所得反应混合物真空浓缩，得到化合物224A(0.055g)。HPLC-MS RT＝0.219分钟，对于式C9H11N3O，质量计算值177.09，LCMS m/z实测值178.10(M+H)。
步骤2-标题化合物的制备 向化合物224A(0.31mmol，0.055g)的DMF(2ml)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.37mmol，64.8μl)、HATU(1.2当量，0.37mmol，0.141g)和2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.31mmol，0.065mg)。将所得反应物在室温下搅拌15小时。将反应混合物浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)后，用反相HPLC纯化，得到N-[2-(2-氧代-咪唑烷-1-基)-苯基]-2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酰胺(0.087g)。HPLC-MS RT＝3.32分钟，对于式C17H14N4O2S2，质量计算值370.06，LCMS m/z实测值371.17(M+H)。
实施例225 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.05分钟，对于式C20H22N3OS2，质量计算值398.12，LCMS m/z实测值399.23(M+H)。
实施例226 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.48分钟，对于式C23H26N4O2S2，质量计算值454.15，LCMS m/z实测值455.19(M+H)。
实施例227 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法(只是在室温下使用10％Pd/C粉过夜，而不是使用步骤2中的H-Cube)，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.40分钟，对于式C19H20N4OS2，质量计算值384.11，LCMS m/z实测值385.17(M+H)。
实施例228 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法(只是在最后步骤中不用90∶10TFA∶H2O脱去Boc基团)，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MSRT＝5.11分钟，对于式C24H28N4O3S2，质量计算值484.16，LCMS m/z实测值485.60(M+H)。
实施例229 下式化合物的制备
按照与实施例17相同的步骤，只是在步骤1后按照下列方法将Boc基团引入羟基上 加入2ml THF、N，N-二异丙基乙胺(2当量)和二碳酸二叔丁酯(0.5当量)和DMAP。将溶液加热至100℃过夜。使溶剂蒸发后，装柱(50∶50乙酸乙酯∶己烷)。另注释 H-Cube设置 HPLC-MS RT＝4.24分钟，对于式C19H19N3O3S2，质量计算值401.09，LCMS m/z实测值402.10(M+H)。
实施例230 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.88分钟，对于式C25H28N4O2S2，质量计算值480.17，LCMS m/z实测值481.21(M+H)。
实施例231 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.51分钟，对于式C25H30N4OS2，质量计算值466.19，LCMS m/z实测值467.22(M+H)。
实施例232 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.44分钟，对于式C21H24N4OS2，质量计算值412.14，LCMS m/z实测值413.15(M+H)。
实施例233 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.05分钟，对于式C20H22N4OS2，质量计算值398.12，LCMS m/z实测值399.23(M+H)。
实施例234 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.64分钟，对于式C23H26N4OS2，质量计算值438.15，LCMS m/z实测值439.20(M+H)。
实施例235 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.48分钟，对于式C22H24N4OS2，质量计算值424.14，LCMS m/z实测值425.22(M+H)。
实施例236 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.58分钟，对于式C22H24N4OS2，质量计算值424.14，LCMS m/z实测值425.27(M+H)。
实施例237 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.72分钟，对于式C23H26N4OS2，质量计算值438.15，LCMS m/z实测值439.27(M+H)。
实施例238 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.12分钟，对于式C19H20N4OS2，质量计算值384.11，LCMS m/z实测值385.21(M+H)。
实施例239 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.16分钟，对于式C20H21N5O2S2，质量计算值427.11，LCMS m/z实测值428.14(M+H)。
实施例240 下式化合物的制备
采用实施例233中所述方法，用合适的反应物制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.11分钟，对于式C19H20N4OS2，质量计算值384.11，LCMS m/z实测值385.23(M+H)。
实施例241 下式化合物的制备
步骤1-化合物241A的合成
将2-(3-氯-4-硝基-苯基)-乙酰胺(0.14mmol，0.030g)、N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.17mmol，22.0μl)和(2-哌啶-3-基-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(1.0当量，32.0mg)的ACN(2ml)溶液在180℃温度下用微波照射18分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，得到化合物241A(0.020g)。HPLC-MS RT＝1.72分钟，对于式C20H30N4O5，质量计算值406.22，LCMS m/z实测值407.20(M+H)。
步骤2-化合物241B的合成
化合物241A的甲醇(5.0ml)溶液按照下列设置在H-Cube中用5％Pd/C柱体进行氢化 H-Cube设置 将所得反应混合物真空浓缩，得到化合物241B(0.017g)。HPLC-MS RT＝1.19分钟，对于式C20H32N4O3，质量计算值376.25，LCMS m/z实测值377.20(M+H)。
步骤3-标题化合物的合成 向化合物241B(17mg)的DMF(1ml)溶液中加入2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.98当量，9mg)。将该混合物加热至50℃。然后，加入N，N-二异丙基乙胺(1.5当量，11.7μl)和HATU(1.5当量，0.026g)溶液。将所得反应物在室温下搅拌15小时。将所得溶液浓缩后，用1mlTFA∶H2O(90∶10)处理。将反应混合物浓缩后，用反相HPLC纯化成标题化合物。HPLC-MS RT＝3.20分钟，对于式C23H27N5O2S2，质量计算值469.16，LCMS m/z实测值470.30(M+H)。
实施例242 下式化合物的制备
采用实施例241中所述方法，用3-氯-4-硝基(三氟甲基)苯替换步骤1中的2-(3-氯-4-硝基-苯基)-乙酰胺，来制备标题化合物。HPLC-MSRT＝4.31分钟，对于式C22H23F3N4OS2，质量计算值480.13，LCMS m/z实测值481.27(M+H)。
注释 H-Cube设置 实施例243 下式化合物的制备
采用实施例241中所述方法，用4-氯-2-氟硝基苯替换步骤1的2-(3-氯-4-硝基-苯基)-乙酰胺，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝4.12分钟，对于式C21H23ClN4OS2，质量计算值446.10，LCMS m/z实测值447.24(M+H)。
注释 H-Cube设置 实施例244 下式化合物的制备
采用实施例241中所述方法，用3-氟-4-硝基苯甲腈替换步骤1中的2-(3-氯-4-硝基-苯基)-乙酰胺，来制备标题化合物。HPLC-MS RT＝3.62分钟，对于式C23H23N5OS2，质量计算值449.13，LCMS m/z实测值450.21(M+H)。
实施例245 下式化合物的制备
采用实施例244中所述方法，用下列步骤替换步骤3，来制备标题化合物 向7-(2-氨基-5-氰基-苯基)-2，7-二氮杂-螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯溶液中加入2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(步骤2的产物，0.98当量)的DMF(1ml)溶液。然后，加入溶液N，N-二异丙基乙胺(1.5当量)、HATU(1.5当量)。将所得反应物在室温下搅拌15小时后浓缩，用3ml(4∶1)TFA∶H2SO4处理。将反应混合物浓缩后，用反相HPLC纯化，得到N-{2-[3-(2-氨基-乙基)-哌啶-1-基]-4-氨基甲酰基甲基-苯基}-2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酰胺。HPLC-MS RT＝3.13分钟，对于式C23H25N5O2S2，质量计算值467.14，LCMS m/z实测值468.21(M+H)。
实施例246 下式化合物的制备
采用实施例244中所述方法，用下列步骤替换步骤3，来制备标题化合物 向中间体4-氨基-3-[9-(2，2，2-三氟-乙酰基)-2，9-二氮杂-螺[5.5]十一碳-2-基]-苯甲腈中加入2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(098当量)的DMF(1ml)溶液。然后，加入溶液N，N-二异丙基乙胺(1.5当量)、HATU(1.5当量)。将所得反应物在室温下搅拌15小时后浓缩，用3ml(4∶1)TFA∶H2SO4处理。将反应混合物浓缩后，用反相HPLC纯化，得到N-{4-氨基甲酰基-2-[9-(2，2，2-三氟-乙酰基)-2，9-二氮杂-螺[5.5]十一碳-2-基]-苯基}-2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酰胺。HPLC-MS RT＝4.46分钟，对于式C26H26F3N5O3S2，质量计算值577.14，LCMS m/z实测值578.21(M+H)。
实施例247 下式化合物的制备
步骤1-化合物247A的合成
将(2-哌啶-3-基-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(0.087mmol，0.020g)和4-溴-2-氟硝基苯(1.0当量，0.019g)、N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，13.5μl)的ACN(2ml)溶液在130℃温度下用微波照射18分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，得到{2-[1-(5-溴-2-硝基-苯基)-哌啶-3-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。HPLC-MS RT＝2.37分钟，对于式C18H26BrN3O4，质量计算值427.11，LCMS m/z实测值428.22和430.11(M+H)。
步骤2-化合物247B的合成
向化合物247A的乙酸乙酯(10ml)溶液中加入5％Pd/C粉，用氩气和H2气囊脱气。将溶液在室温下搅拌1小时，或者直到黄色消失。将所得反应混合物真空浓缩，得到中间体{2-[1-(2-氨基-5-溴-苯基)-哌啶-3-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.037g)。HPLC-MS RT＝2.06分钟，对于式C18H28BrN3O2，质量计算值397.14，LCMS m/z实测值398.15和400.15(M+H)。
步骤3-标题化合物的合成 向化合物247B的DMF(2ml)溶液中加入2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(098当量，0.019g)。然后，加入溶液N，N-二异丙基乙胺(1.5当量，24.3μl)、HATU(1.5当量，0.042g)。将所得反应物在室温下搅拌15小时。将所得溶液浓缩后，用1ml TFA∶H2O(90∶10)处理。将反应混合物浓缩后，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝4.18分钟，对于式C21H23BrN4OS2，质量计算值490.05，LCMS m/z实测值491.09和492.97(M+H)。
实施例248 下式化合物的制备
步骤1-化合物248A的合成
将(2-氧代-2-哌嗪-1-基-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(1.23mmol，0.300g)、1-溴-2，5-二氟-4-硝基-苯(0.98当量，0.287g)和N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，257μl)的ACN(2ml)溶液在200℃温度下用微波照射20分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩。在将中间体溶于DCM后，将该溶液加到50∶50乙酸乙酯∶己烷的柱中后，浓缩成化合物248A(0.306g)。HPLC-MS RT＝2.14分钟，对于式C17H22BrFN4O5，质量计算值460.08，LCMS m/z实测值405.10(LCMS期间脱去叔丁基)(M+H)。
步骤2-化合物248B的合成
向化合物248A的THF溶液中加入4，4，5，5-四甲基-2-乙烯基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷(1.5当量)、Pd2(DBA)3(0.05当量)、S-Phos(0.15当量)和K3PO4(2当量)后在80℃下过夜。将该溶液洗涤后，用乙酸乙酯、乙醚和盐水萃取，通过孔径大小为0.45μm的Whatman滤器过滤，得到化合物248B。HPLC-MS RT＝2.18分钟，对于式C19H25FN4O5，质量计算值408.18，LCMS m/z实测值409.15(M+H)。
步骤3-化合物248C的合成
化合物248B按照下列设置用具有10％Pd/C柱体的H-Cube进行氢化 H-Cube设置 将所得反应混合物真空浓缩，得到化合物248C(0.017g)。HPLC-MS RT＝1.72分钟，对于式C19H29FN4O3，质量计算值380.22，LCMS m/z实测值381.25(M+H)。
步骤4-标题化合物的合成 向化合物248C的DMF(2ml)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，43.4μl)、HATU(1.2当量，0.091g)、2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.98当量，0.042g)。将所得反应物在室温下搅拌15小时。将所得溶液浓缩后，用1ml TFA∶H2O(90∶10)处理。然后，将反应混合物浓缩后，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝3.83分钟，对于式C22H24FN5O2S2，质量计算值473.14，LCMS m/z实测值474.24(M+H)。
实施例249 下式化合物的制备
步骤1-化合物249A的合成
将1-溴-2，5-二氟-4-硝基苯(0.42mmol，0.1g)、N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.54mmol，73μl)和(2-哌啶-4-基-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(1.2当量，0.50mmol，0.115g)的ACN(2ml)溶液在200℃温度下用微波照射20分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱混合物为己烷/EtOAc)，得到化合物249A(0.353g)。HPLC-MS RT＝2.37分钟，对于式C18H25BrFN3O4，质量计算值445.10，LCMS m/z实测值446.05(M+H)。
步骤2-化合物249B的合成
将异丙烯基溴化镁的THF(0.50M，3.0ml)溶液加到氯化锌的THF(0.50M，3.0ml)溶液中。将反应混合物在氮气氛、室温下搅拌1小时后，加到装有Pd2(DBA)3(0.035mmol，32mg)、S-Phos(0.10mmol，41mg)和化合物249A(0.45mmol，0.20g)的Schlenk管中。将反应混合物在65℃温度下搅拌过夜。使反应混合物冷却至室温后浓缩。残余物用乙酸乙酯和乙醚(1∶1)混合物稀释。有机物用盐水洗涤两次。将有机层浓缩后，通过含有乙酸乙酯的Whatman 0.45μm柱体过滤。将滤液浓缩，得到化合物249B。HPLC-MS RT＝2.67分钟，对于式C21H30FN3O4，质量计算值407.22，LCMS m/z实测值408.30(M+H)。
步骤3-化合物249C的合成
将化合物249B(粗产物，0.112g)的EtOAc(30ml)溶液按照下列设置在H-Cube中用10％Pd/C柱体进行氢化 H-Cube设置 将所得反应混合物真空浓缩，将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到化合物249C(0.8mg)。HPLC-MS RT＝2.10分钟，对于式C21H34FN3O2，质量计算值379.26，LCMS m/z实测值380.20(M+H)。
步骤4-标题化合物的合成 向化合物249C(0.8mg，0.002mmol)的DMF(1ml)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.31mmol，0.42μl)、HATU(1.2当量，0.91mg)和2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(1当量，0.42mg)。将所得反应物在室温下搅拌15小时。将反应混合物浓缩。使残余物与TFA∶H2O(90∶10)(1.0ml)反应30分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到N-{2-[4-(2-氨基-乙基)-哌啶-1-基]-5-氟-4-异丙基-苯基}-2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酰胺(0.36mg)。HPLC-MS RT＝4.40分钟，对于式C24H29FN4OS2，质量计算值472.18，LCMS m/z实测值473.21(M+H)。
实施例250 下式化合物的制备
按照与实施例249相同步骤的方法。HPLC-MS RT＝4.26分钟，对于式C24H27FN4OS2，质量计算值470.16，LCMS m/z实测值471.42(M+H)。
实施例251 下式化合物的制备
步骤1-化合物251A的合成
将3-氟-4-硝基-苯甲酸甲酯(0.50mmol，0.106g)、N，N-二异丙基乙胺(3.0当量，1.5mmol，261μl)和(2-哌啶-3-基-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(1.0当量，0.50mmol，0.114g)的DMA(2ml)溶液在180℃温度下用微波照射18分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，得到化合物251A。
步骤2-化合物251B的合成
将化合物251A、O-叔丁基羟胺盐酸盐(2.0当量)和KOH/DMA(2ml)溶液在180℃温度下用微波照射18分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，得到化合物251B。
步骤3-化合物251C的合成
采用下列设置的H-Cube，将化合物251B的25ml甲醇溶液用10％Pd/C柱体进行氢化 H-Cube设置 然后将氢化溶液真空浓缩，得到化合物251C。HPLC-MS RT＝3.41分钟，对于式C23H38N4O4，质量计算值434.29，LCMS m/z实测值435.38(M+H)。
步骤3-标题化合物的合成 向化合物251C(0.006mmol，0.0026g)的DMF(1ml)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.007mmol，1.2μl)、HATU(1.2当量，0.007mmol，0.0027g)和2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(1当量，0.0013g)。将所得反应物在50℃下搅拌15小时后浓缩。然后混合物用1mlTFA∶H2O(90∶10)脱保护后，再加入200μl甲酸。将反应混合物浓缩后，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝3.11分钟，对于式C22H25N5O3S2，质量计算值471.14，LCMS m/z实测值472.20(M+H)。
实施例252 下式化合物的制备
按照与实施例251相同步骤的方法。HPLC-MS RT＝3.49分钟，对于式C22H24N4O3S2，质量计算值456.13，LCMS m/z实测值457.22(M+H)。
实施例253 下式化合物的制备
步骤1-化合物253A的合成
将1-溴-2，5-二氟-4-硝基苯(0.42mmol，0.1g)、N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.54mmol，73μl)和(2-哌啶-4-基-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(1.2当量，0.50mmol，0.115g)的ACN(2ml)溶液在200℃温度下用微波照射20分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱混合物为己烷/EtOAc)，得到化合物253A(0.353g)。HPLC-MS RT＝2.37分钟，对于式C18H25BrFN3O4，质量计算值445.10，LCMS m/z实测值446.05和448.15(M+H)。
步骤2-化合物253B的合成
将化合物253A(粗产物，0.112g)的EtOAc(30ml)溶液按照下列设置在H-Cube中用10％Pd/C柱体进行氢化 H-Cube设置 将所得反应混合物真空浓缩后，将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到化合物253B(0.8mg)。HPLC-MS RT＝4.42分钟，对于式C18H27BrFN3O2，质量计算值415.13，LCMS m/z实测值416.11(M+H)。
步骤3-标题化合物的合成 向化合物253B(0.8mg，0.002mmol)中加入N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.31mmol，0.42μl)、HATU(1.2当量，0.91mg)和2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(1当量，0.42mg)的DMF(1ml)溶液。将所得反应物在室温下搅拌15小时。将反应混合物浓缩。使残余物与TFA∶H2O(90∶10)(1.0ml)反应30分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物(0.25mg)。HPLC-MSRT＝4.25分钟，对于式C21H22BrFN4OS2，质量计算值508.04，LCMS m/z实测值509.11(M+H)。
实施例254 下式化合物的制备
按照与实施例249相同步骤的方法，只是未使用异丙基。HPLC-MS RT＝3.26分钟，对于式C20H21BrFN5OS2，质量计算值509.04，LCMS m/z实测值510.12(M+H)。
实施例255 下式化合物的制备
按照与实施例249相同步骤的方法，只是未使用异丙基。HPLC-MS RT＝3.99分钟，对于式C21H20BrFN4OS2，质量计算值506.02，LCMS m/z实测值507.06(M+H)。
实施例256 下式化合物的制备
按照与实施例249相同步骤的方法，只是未使用异丙基。HPLC-MS RT＝3.81分钟，对于式C19H18BrFN4OS2，质量计算值480.01，LCMS m/z实测值481.06(M+H)。
实施例257 下式化合物的制备
步骤1-化合物257A的合成
将2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(1.99mmol，0.478g)、N，N-二异丙基乙胺(1.5当量，519μl)和1-氟-2-硝基苯(1.0当量，207μl)的ACN (2ml)溶液在200℃温度下用微波照射20分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，得到化合物257A(0.603g)。HPLC-MS RT＝2.26分钟，对于式C19H27N3O4，质量计算值361.20，LCMS m/z实测值362.20(M+H)。
步骤2-化合物257B的合成
将化合物257A的甲醇(50.0ml)溶液按照下列设置在H-Cube中用10％Pd/C柱体进行氢化 H-Cube设置 将所得反应混合物真空浓缩，得到化合物257B(0.500g)。HPLC-MS RT＝1.74分钟，对于式C19H29N3O2，质量计算值331.23，LCMS m/z实测值332.20(M+H)。
步骤3-化合物257C的合成
向化合物257B(1.00g，4.81mmol)的DCM(25ml)溶液中加入2-叔丁基-1，3-二异丙基异脲(29mmol，8.8g)。将所得溶液加热至回流后，在回流下搅拌18小时。18小时后，将沉淀物通过微细玻璃料过滤，将溶质真空浓缩。将残余物溶于DCM，通过硅胶色谱法纯化出化合物257C。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.40(s，1H)，1.51(s，9H)。
步骤4-化合物257D的合成
向40ml闪烁管中装入化合物257C(500mg，1.90mmol)、4-吡唑硼酸频哪醇酯(551mg，2.84mmol)、K3PO4(807mg，3.80mmol)和四(三苯基膦)合钯(219mg，190mmol)。向其中加入3∶11，4-二噁烷∶H2O溶液(16ml)。闪烁管用氩气吹扫，用特氟隆带密封。将反应物加热至100℃达18小时。使之冷却至室温，用DCM(80ml)稀释后，用1N HCl(水溶液)洗涤。有机层然后经Na2SO4干燥后，真空浓缩。然后残余物用0％-15％MeOH∶DCM梯度纯化，得到2-(1H-吡唑-4-基)-噻唑-4-甲酸叔丁酯(354mg)。该产物用4N HCl/1，4-二噁烷(20ml)加H2O(1ml)处理后，在室温下搅拌。将溶液真空浓缩，得到化合物257D。
步骤5-标题化合物的合成 向化合物257D(0.077mmol，0.025g)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(1.5当量，20μl)、HATU(1.5当量，0.029g)和2-(1H-吡唑-4-基)-噻唑-4-甲酸(1.0当量，0.015g)的DMF(1ml)溶液。将所得反应物在室温下搅拌15小时，将所得溶液浓缩后，用1ml TFA∶H2O(90∶10)处理。将反应混合物浓缩后，用反相HPLC纯化，得到N-[2-(2，7-二氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-苯基]-2-(1H-吡唑-4-基)-噻唑-4-甲酰胺。HPLC-MS RT＝2.87分钟，对于式C21H24N6OS，质量计算值408.17，LCMS m/z实测值409.28(M+H)。
实施例258 下式化合物的制备
步骤1-化合物258A的合成
将3-(N-Boc-氨基乙基)-哌啶(0.09mmol，0.020g)、N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.014mmol，18.8μl)和3-氟-4-硝基甲苯(0.98当量，0.014g)的ACN(2ml)溶液在200℃温度下用微波照射20分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，得到化合物258A(0.040g)。HPLC-MS RT＝2.48分钟，对于式C19H29N3O4，质量计算值363.22，LCMS m/z实测值364.30(M+H)。
步骤2-化合物258B的合成
将化合物258A(0.040g)的甲醇(10ml)溶液按照下列设置在H-Cube中用10％Pd/C柱体进行氢化 H-Cube设置 将所得反应混合物真空浓缩，得到化合物258B(0.032g)。HPLC-MS RT＝1.48分钟，对于式C19H31N3O2，质量计算值333.24，LCMS m/z实测值334.30(M+H)。
步骤3-标题化合物的合成 向化合物258B(0.097mmol，0.032g)中加入N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.12mmol，20.3μl)、HATU(1.2当量，0.12mmol，0.044g)和2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.98当量，20mg)的DMF(2ml)溶液。将所得反应物在室温下搅拌15小时。将反应混合物浓缩。使残余物与1mlTFA∶H2O(90∶10)反应30分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物(0.018g)。HPLC-MS RT＝3.85分钟，对于式C22H26N4OS2，质量计算值426.15，LCMS m/z实测值427.25(M+H)。
实施例259 下式化合物的制备
步骤1-化合物259A的合成
3-(N-Boc-氨基乙基)-哌啶(0.098mmol，0.020g)、N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.12mmol，20.5μl)和乙基3-氟-硝基苯(0.98当量，0.020g)的ACN(2ml)溶液在200℃温度下用微波照射20分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，得到化合物259A(0.047g)。HPLC-MS RT＝2.54分钟，对于式C21H31N3O6，质量计算值421.22，LCMS m/z实测值422.20(M+H)。
步骤2-化合物259B的合成
将化合物259A(0.047g)的甲醇(10ml)溶液按照下列设置在H-Cube中用10％Pd/C柱体进行氢化 H-Cube设置 将所得反应混合物真空浓缩，得到化合物259B(粗产物0.038g)。HPLC-MS RT＝2.00分钟，对于式C21H33N3O4，质量计算值391.25，LCMS m/z实测值392.20(M+H)。
步骤3-标题化合物的合成 向中间体化合物259B(0.098mmol，0.038g)中加入N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.12mmol，20.5μl)、HATU(1.2当量，0.12mmol，0.045g)和2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.98当量，20mg)的DMF(2ml)溶液。将所得反应物在室温下搅拌15小时后，在50℃搅拌3小时。将反应混合物浓缩。使残余物与lml TFA∶H2O(90∶10)反应30分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)后，用反相HPLC纯化，得到标题化合物(0.006g)。HPLC-MS RT＝4.14分钟，对于式C24H28N4O3S2，质量计算值484.16，LCMS m/z实测值485.29(M+H)。
实施例260 下式化合物的制备
步骤1-化合物260A的合成
将3-氟-4-硝基-苯甲腈(0.5mmol，83mg)、DIEA(1.5mmol，0.26ml)和(2-哌啶-3-基-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(0.60mmol，0.14g)的DMA(2ml)溶液在200℃温度下用微波照射20分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，得到化合物260A，无需进一步纯化便可用于下一步骤。
步骤2-化合物260B的合成
将化合物260A的甲醇(30ml)按照下列设置在H-Cube中用10％Pd/C柱体进行氢化 H-Cube设置 将所得反应混合物真空浓缩，得到化合物260B。将中间体溶于DMSO/乙腈(3∶1)后，用反相HPLC纯化(0.119g)。HPLC-MS RT＝3.91分钟，对于式C19H28N4O2，质量计算值344.22，LCMS m/z实测值345.34(M+H)。
步骤3-标题化合物的合成 向化合物260B(0.34mmol，0.119g)中加入N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.41mmol，72.1μl)、HATU(1.2当量，0.41mmol，0.157g)和2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.98当量，0.071mg)的DMF(2ml)溶液。将所得反应物在室温下搅拌15小时后，在50℃下搅拌3小时。将反应混合物浓缩。使残余物与1ml TFA∶H2O(90∶10)反应30分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)后，用反相HPLC纯化，得到标题化合物(0.024g)。HPLC-MS RT＝3.76分钟，对于式C22H23N5OS2，质量计算值437.13，LCMS m/z实测值438.21(M+H)。
实施例261 下式化合物的制备
步骤1-化合物261A的合成
将3-氟-4-硝基-苯甲腈(5.0mmol，0.83g)的约7.0ml TFA-H2SO4混合物(4∶1，体积/体积)的溶液在室温下搅拌过夜。在反应完成后，将反应混合物倒入冰冷的水中。反应混合物用乙酸乙酯萃取，将有机溶液真空浓缩，得到化合物261A，无需进一步纯化便可用于下一步骤。
步骤2-化合物261B的合成
将3-氟-4-硝基-苯甲酰胺(0.5mmol)、DIEA(1.5mmol，0.26ml)和化合物261A(0.60mmol，0.14g)的DMA(2ml)溶液在200℃温度下用微波照射20分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，得到化合物261B，无需进一步纯化便可用于下一步骤。HPLC-MS RT＝1.77分钟，对于式C19H28N4O5，质量计算值392.21，LCMS m/z实测值393.25(M+H)。
步骤3-化合物261C的合成
将化合物258A的甲醇(30ml)溶液按照下列设置在H-Cube中用10％Pd/C柱体进行氢化 H-Cube设置 将所得反应混合物真空浓缩，得到化合物261C。将中间体溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC(0.016g)纯化。HPLC-MS RT＝2.43分钟，对于式C19H30N4O3，质量计算值362.23，LCMS m/z实测值363.36(M+H)。
步骤4-标题化合物的合成 向化合物261C中加入N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.053mmol，9.2μl)、HATU(1.2当量，0.053mmol，0.020g)和2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.98当量，0.0091mg)的DMF(2ml)溶液。将所得反应物在室温下搅拌15小时。将反应混合物浓缩。使残余物与1ml TFA∶H2O(90∶10)反应30分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)后，用反相HPLC纯化，得到N-{2-[3-(2-氨基-乙基)-哌啶-1-基]-4-氨基甲酰基-苯基}-2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酰胺(0.013g)。HPLC-MS RT＝3.23分钟，对于式C22H25N5O2S2，质量计算值455.14，LCMS m/z实测值456.25(M+H)。
实施例262 下式化合物的制备
步骤1-化合物262A的合成
将Boc-4-氨基六氢-4H-氮杂

(0.93mmol，0.20g)、N，N-二异丙基乙胺(1.1当量，1.02mmol，179μl)和1-氟-2-硝基苯(1.0当量，98.3μl)的乙腈(4ml)溶液在170℃温度下用微波照射20分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱混合物为己烷/Et0Ac)，得到化合物262A。HPLC-MS RT＝2.09分钟，对于式C17H25N3O4，质量计算值335.18，LCMS m/z实测值336.20(M+H)。
步骤2-化合物262B的合成
通过加入5％Pd/C(0.1g)，再加上H2充气气囊(密封并真空脱气)，使化合物262A的EtOAc(50ml)溶液氢化。将该溶液在室温下搅拌1小时后，经硅藻土过滤后真空浓缩，得到化合物262B。HPLC-MS RT＝1.74分钟，对于式C17H27N3O2，质量计算值305.21，LCMS m/z实测值306.25(M+H)。
步骤3-标题化合物的合成 向化合物262B(0.05mmol，0.016g)中加入N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，0.072mmol，10.5μl)、HATU(1.2当量，0.072mmol，0.023g)和2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(0.98当量，0.058mmol，0.010g)的DMF(1ml)溶液。将所得反应物在室温下搅拌15小时。将反应混合物浓缩，使残余物与1ml TFA∶H2O(90∶10)在室温下反应30分钟。将TFA溶液真空浓缩，将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物(0.023g)。HPLC-MS RT＝3.30分钟，对于式C20H22N4OS2，质量计算值398.12，LCMS m/z实测值399.24(M+H)。
实施例263 下式化合物的制备
向N-[2-(4-氨基-氮杂环辛烷-1-基)-苯基]-2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酰胺(0.06mmol，0.018g，为实施例262的产物)的DCM(2ml)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(4.0当量，0.024mmol，41.8μl)和甲磺酰氯(4.0当量，0.024mmol，18.6μl)。将所得反应物在室温下搅拌15小时。将反应混合物浓缩，将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物(0.015g)。HPLC-MS RT＝4.24分钟，对于式C21H24N4O3S3，质量计算值476.10，LCMS m/z实测值477.20(M+H)。
实施例264 下式化合物的制备
按照与实施例249相同步骤的方法。HPLC-MS RT＝4.11分钟，对于式C22H25FN4OS2，质量计算值444.15，实测值LCMS m/z 445.20(M+H)。
实施例265 下式化合物的制备
步骤1-化合物265A的合成
向中间体2-溴-4-异丙基-苯胺(20mmol，4.28g)的甲苯(150ml)溶液中一次性慢慢加入m-CPBA(25g)(放热)。使混合物回流并搅拌过夜后，冷却至室温，过滤。滤液用NaOH(10％)碱化，用乙醚萃取后，用盐水洗涤。然后将该溶液浓缩，用硅胶色谱法处理(己烷∶DCM(4∶1))，得到化合物265A。
步骤2-化合物265B的合成
向化合物265A(0.5mmol，122mg)的DMF(5ml)溶液中加入2-吡咯烷-3-基-吡嗪3HCl(0.5mmol，130mg)，再加入N，N-二异丙基乙胺(3.0mmol，500μl)。将该溶液在200℃下照射20分钟。用硅胶进行色谱法处理(使用30％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物265B，为黄色产物。HPLC-MS RT＝2.08分钟，对于式C17H20N4O2，质量计算值312.16，LCMS m/z实测值313.15(M+H)。
步骤3-化合物265C的合成
向化合物265B(0.4mmol)中加入Zn(16mmol，1.0g)和CaCl2(0.4mmol，44mg)。使混合物在乙醇(25ml)中回流4小时后进行后处理，得到化合物265C，无需进一步纯化便可使用。HPLC-MS RT＝1.27分钟，对于式C17H22N4，质量计算值282.18，LCMS m/z实测值283.20(M+H)。
步骤4-标题化合物的合成 向化合物265C(0.11mmol，30.0mg)中加入2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(1当量，22.4mg)、N，N-二异丙基乙胺(1.2当量，22.0μl)、HATU(1.2当量，48.0mg)的DMF(2ml)溶液。将该溶液在室温下搅拌过夜后浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝5.01分钟，对于式C25H25N5OS2，质量计算值475.15，LCMS m/z实测值476.23(M+H)。
实施例266 下式化合物的制备
步骤1-化合物266A的合成
将1-苄基-吡咯烷-3-基甲基氨基甲酸叔丁酯(300mg)溶于乙酸乙酯(30ml)。将溶液用下列设置在H-Cube中进行氢化，得到化合物266A H-Cube设置 HPLC-MS RT＝0.57分钟，对于式C10H20N2O2，质量计算值200.15，LCMS m/z实测值201.15(M+H)。
步骤2-化合物266B的合成
将化合物266A(0.10mmol，0.200g)、N，N-二异丙基乙胺(1.0当量，17.4μl)和12-氯-3-硝基-吡啶(0.80当量，2.7mg)的DMF(2ml)溶液在150℃温度下用微波照射10分钟。然后使该溶液冷却至室温后真空浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱混合物为己烷/EtOAc)(50∶50))后浓缩，得到化合物266B(0.088g)。HPLC-MS RT＝1.85分钟，对于式C15H22N4O4，质量计算值322.16，LCMS m/z实测值323.20(M+H)。
步骤3-化合物266C的合成
向化合物266B中加入10％Pd/碳(15mg)和乙酸乙酯(10ml)，使溶液脱气后，用H2充气气囊氢化。将该溶液在室温下搅拌约30分钟(或直到黄色消失)后，通过硅藻土滤出Pd/C，得到化合物266C。HPLC-MSRT＝0.89分钟，对于式C15H24N4O2，质量计算值292.19，LCMS m/z实测值293.20(M+H)。
步骤3-标题化合物的合成 向化合物266C(0.22mmol，0.066g)中加入N，N-二异丙基乙胺(1.0当量，38μl)、HATU(1.0当量，83.6mg)和2-噻吩-2-基-噻唑-4-甲酸(1.0当量，46mg)的DMF(2ml)溶液。将所得反应物在室温下搅拌15小时。将反应混合物浓缩，使残余物与TFA∶H2O(90∶10)(1.0ml)反应30分钟。将TFA溶液真空浓缩。将残余物溶于DMSO/乙腈(3∶1)，用反相HPLC纯化，得到标题化合物。HPLC-MS RT＝2.07分钟，对于式C18H19N5OS2，质量计算值385.10，LCMS m/z实测值386.13(M+H)。
实施例267 CHK1SPA实验 利用在杆状病毒表达系统中表达的重组His-CHK1作为酶源，基于CDC25C 的生物素化肽作为底物(生物素-RSGLYRSPSMPENLNRPR)，开发出一种体外实验法。
材料与试剂 1)将CDC25C Ser 216C端生物素化肽底物(25mg)保存在-20℃下，由Research Genetics承接合成生物素-RSGLYRSPSMPENLNRPR2595.4MW 2)His-CHK1本公司批次P976，235μg/ml，保存在-80℃下 3)D-PBS(不含CaCl和MgCl)GIBCO，目录号14190-144 4)SPA微珠Amersham，目录号SPQ0032500mg/小瓶 将10ml D-PBS加到500mg SPA微珠中以制成工作浓度为50mg/ml。保存在4℃下。水合后2周内使用。
5)具有结合GF/B滤纸的96孔白色微量培养板Packard，目录号6005177 6)顶部密封膜(Top seal)-96孔粘膜Perkin Elmer，目录号6005185 7)96孔非结合白色聚苯乙烯板Corning，目录号6005177 8)MgCl2Sigma，目录号M-8266 9)DTTPromega，目录号V3155 10)ATP，保存在4℃下Sigma，目录号A-5394 11)γ33P-ATP，1000-3000Ci/mMolAmersham，目录号AH9968 12)NaClFisher Scientific，目录号BP358-212 13)H3PO485％Fisher，目录号A242-500 14)Tris-HCl pH 8.0Bio-Whittaker，目录号16-015V 15)星形孢菌素，100μgCALBIOCHEM，目录号569397 16)Hypure细胞培养级水，500mlHyClone，目录号SH30529.02 反应混合物 1)激酶缓冲液50mM Tris pH 8.0；10mM MgCl2；1mM DTT 2)His-CHK1，本公司批号P976，MW～30KDa，保存在-80℃下。
需要6nM，得到阳性对照为～5,000CPM。对于1块板(100rxn)将8μl 235g//ml(7.83μM)母液稀释于2ml激酶缓冲液中。这便制成31nM混合物。每孔加入20μl。这使最终反应浓度为6nM。
3)CDC25C生物素化肽。
将CDC25C稀释成1mg/ml(385μM)母液，并保存在-20℃下。对于1块板(100rxn)将10μl1mg/ml肽母液稀释于2ml激酶缓冲液中。这便得到1.925μM混合物。加入20μl/rxn。这便得到最终反应浓度为385nM。
4)ATP混合物 对于1块板(100rxn)将10μl 1mM ATP(冷的)母液和2μl新鲜P33-ATP(20μCi)稀释于5ml激酶缓冲液中。这便得到2μM ATP(冷的)溶液；每孔加入50μl开始反应。最终体积为100μl/rxn，因此最终反应浓度将为1μM ATP(冷的)和0.2μCi/rxn。
5)终止溶液对于1块板加入10ml洗涤缓冲液2(2M NaCl1％H3PO4)1ml SPA微珠浆(50mg)；加入100μl/孔 6)洗涤缓冲液12M NaCl 7)洗涤缓冲液22M NaCl，1％H3PO4 实验方法
*实验反应物总体积。**反应终止时(加入终止溶液后)的最终反应物体积。
1)将化合物在水/10％DMSO中稀释成所需要的浓度-这将在反应中达到最终1％的DMSO浓度。将10μl/反应分配到合适的各孔中。将10μl 10％DMSO加到阳性(CHK1+CDC25C+ATP)对照孔和阴性(仅CHK1+ATP)对照孔。
2)使酶在冰上融化-将酶在激酶缓冲液(参见反应混合物)中稀释到适当浓度，并将20μl分配到各孔中。
3)将生物素化底物在冰上融化，并在激酶缓冲液(参见反应混合物)稀释。除阴性对照孔外每孔加入20μl。而这些阴性孔则加入20μl激酶缓冲液。
4)将ATP(冷的)和P33-ATP稀释于激酶缓冲液(参见反应混合物)。每孔加入50μl开始反应。
5)使反应在室温下进行2小时。
6)通过加入100μl SPA微珠/终止溶液(参见反应混合物)来终止反应，在收获前使之温育15分钟。
7)将空白Packard GF/B滤纸板置于真空过滤装置(Packard板收获器)中，吸入200ml水以使该系统湿润。
8)取出空白板，放上Packard GF/B滤纸板。
9)使反应物吸入滤纸板。
10)洗涤每次用200ml洗涤；1次用2M NaCl；1次用2M NaCl/1％H3PO4。
11)使滤纸板干燥15分钟。
12)将TopSeal-A粘膜包在滤纸板上。
13)将滤纸板放入Top Count中进行计数。
设置数据模式CPM 放射性核素Manual SPAP33 闪烁剂Liq/plast 能量范围低 IC50测定根据由抑制化合物连续稀释的8个点、每点一式两份所得到的抑制数据绘制剂量反应曲线。将化合物浓度对％激酶活性作图，将处理样品的CPM除以未处理样品的CPM计算得到％激酶活性。为了得到IC50值，然后将剂量反应曲线拟合成标准S型曲线，通过非线性回归分析得到IC50值。
当用该实验进行测定时，选定的本发明苯胺基哌嗪衍生物的IC50值范围为约1nM至约10μM。
实施例268 CDK2实验 杆状病毒构建通过PCR将细胞周期蛋白E克隆到pVL1393(Pharmingen，La Jolla，California)上，在氨基端添加5个组氨酸残基以便在镍树脂上纯化。表达的蛋白质大约为45kDa。通过PCR将CDK2克隆到pVL1393上，在羧基端添加血细胞凝集素表位标签(YDVPDYAS)。表达的蛋白质大小约为34kDa。
酶生产将表达细胞周期蛋白E和CDK2的重组杆状病毒按相等的感染复数(MOI＝5)共感染SF9细胞达48小时。通过在1000RPM下离心10分钟来收获细胞，然后使沉淀物在体积是沉淀物5倍的裂解缓冲液中在冰上裂解30分钟，裂解缓冲液含有50mM Tris(pH 8.0)，150mM NaCl、1％NP40、1mM DTT和蛋白酶抑制剂(Roche DiagnosticsGmbH，Mannheim，Germany)。将裂解物在15000RPM下离心10分钟后，保留上清液。将5ml镍微珠(对于1升SF9细胞)在裂解缓冲液(Qiagen GmbH，Germany)中洗涤三次。将咪唑加到杆状病毒上清液中至终浓度为20mM，然后与镍微珠在4℃下温育45分钟。蛋白质用含有250mM咪唑的裂解缓冲液洗脱。使洗脱液在2升含有50mM Tris(pH 8.0)、1mM DTT、10mM MgCl2、100μM原钒酸钠和20％甘油的激酶缓冲液中透析过夜。将酶按等分量保存在-70℃下。
实施例269 体外细胞周期蛋白E/CDK2激酶实验 细胞周期蛋白E/CDK2激酶实验在低蛋白质结合96孔板(CorningInc，Corning，New York)中进行。将酶在含有50mM Tris(pH 8.0)、10mM MgCl2、1mM DTT和0.1mM原钒酸钠的激酶缓冲液中稀释至终浓度为50μg/ml。用于这些反应的底物为衍生自组蛋白H1(得自Amersham，UK)的生物素化肽。使底物在冰上融化，在激酶缓冲液中稀释至2μM。将化合物在10％DMSO中稀释至所需要的浓度。对于每次激酶反应，将20μl 50μg/ml酶溶液(1μg酶)和20μl 2μM底物溶液混合，然后与各孔中的10μl经稀释的化合物混合用于测定。加入50μl2μM ATP和0.1μCi 33P-ATP(得自Amersham，UK)后开始激酶反应。将反应在室温下进行1小时。加入200μl终止缓冲液15分钟后停止反应，终止缓冲液含有0.1％曲通(Triton)X-100、1mM ATP、5mM EDTA和5mg/ml链霉抗生物素包被的SPA微珠(得自Amersham，UK)。然后采用Filtermate通用收获器(Packard/Perkin Elmer Life Sciences)，使SPA微珠俘获在96孔GF/B滤纸板(Packard/Perkin Elmer Life Sciences)上。用2M NaCl洗涤微珠两次后，再用2M NaCl与1％磷酸洗涤两次，以消除非特异性信号。然后用TopCount 96孔液体闪烁计数器(得自Packard/Perkin Elmer Life Sciences)测定放射性信号。
IC50测定根据由抑制化合物连续稀释的8个点、每点一式两份所得到的抑制数据绘制剂量反应曲线。将化合物浓度对％激酶活性作图，将处理样品的CPM除以未处理样品的CPM计算得到％激酶活性。为了得到IC50值，然后将剂量反应曲线拟合成标准S型曲线，通过非线性回归分析得到IC50值。
实施例270 MEK1激酶实验 通过杆状病毒感染用表达未加标签的组成型活性Raf-1的杆状病毒共感染的Hi-Five细胞，使全长活性磷酸化MEK1表达为加有6个组氨酸标签的蛋白质(His6-MEK1)。几毫克活性His6-MEK1依次用Ni-NTA亲和层析法和凝胶过滤层析法纯化。全长鼠催化性失活的ERK2KR(在亚结构域II中的赖氨酸突变为精氨酸)用作底物。ERK2KR在IPTG诱导的BL21D3大肠杆菌(E.coli)中通过载体pET32aRC表达为生物素化的加有6个组氨酸和硫氧还蛋白标签的融合蛋白，依次用Ni-NTA亲和层析法和Mono Q离子交换层析法纯化。在96孔板中按一式两份33μl/孔在25℃下进行激酶反应15分钟，反应物由20nM His6-MEK1、2μM ERK2KR、2μM ATP、10μCi/μl[γ-33P]-ATP、10mM MgCl2、0.01％β-辛基葡糖苷、1mM DTT、20mMHEPES(pH 7.5)、3％DMSO和范围为20μM-0.08nM的试验化合物组成。通过加入30μl1.5％o-磷酸后停止激酶反应，将其转移MilliporeMultiscreen-PH板上，温育5分钟使ERK2KR结合。从预钝化反应估算非特异性活性，在该反应中在每孔加入酶之前加入30μl 1.5％o-磷酸。终止板通过真空过滤用0.75％o-磷酸洗涤3次，接着用100％乙醇洗涤2次后，风干。将50μl闪烁混合物加到各孔中，采用WallacMicrobeta 1450JET闪烁计数器，检测掺入ERK2KR的33P。运用ActivityBase软件，计算出百分比抑制、IC50和Hill斜率值。
当用该实验进行测定时，选定的本发明苯胺基哌嗪衍生物的IC50值范围为约10nM至约100μM。
实施例271 MEK1TdF实验的通用方法 将1μM蛋白质在白色96孔PCR板中与20μl微摩尔浓度(通常1-50μM)化合物的测定缓冲液(25mM HEPES(pH 7.4)、300mM NaCl、1mM DTT、2％DMSO、Sypro Orange 5x)混合。板用透明条带密封，并放到循环变温器(Chromo4，BioRad)中。在自25℃到95℃的解链期间，每升高0.5℃时便对荧光强度进行监测。将数据录入excel表格，并进行常规曲线拟合算法以得到TdF Kd值。由于结合的焓变化的不确定性导致所有TdF Kd值具有～50％的误差容限。
当用该实验进行测定时，选定的本发明苯胺基哌嗪衍生物的Kd值范围为约1μM至约100μM。
实施例272 MEK1Delfia酶活性实验的通用方法 用基于DELFIA(Perkin-Elmer)的酶实验测定了化合物的抑制作用，该实验中同时进行化合物各自的百分比抑制和剂量反应曲线(IC50测定)。将活化重组人MEK1(5纳摩尔终浓度)的缓冲液(含有Hepes、氯化镁、二硫苏糖醇和ATP(2微摩尔终浓度))预温育10分钟后，加入含有生物素标记的重组MEK1底物ERK(1微摩尔终浓度)开始反应。在20℃下进行反应60分钟，届时将等分量反应物转移到含有DELFIA测定缓冲液(Perkin-Elmer#4002-0010)的ROCHE链霉抗生物素微量培养板(Perkin-Elmer#11734776001)后终止反应。在室温下振荡结合1小时后，各板用DELFIA洗涤缓冲液(Perkin-Elmer#4010-0010)洗涤，之后将含有磷酸酪氨酸特异性抗体(Perkin Elmer#AD0040)的DELFIA测定缓冲液加到各板中，并如上温育1小时。第二次洗涤后，加入Perkin-Elmer增强溶液(#4001-0010)，使各板显色后，边振荡边温育10分钟。用Victor 1420荧光板读数仪读取铕荧光。通过将含有化合物的实验与反应对照进行比较，测定百分比抑制和IC50。
当用该实验进行测定时，选定的本发明苯胺基哌嗪衍生物的IC50值范围为约10nM至约100μM。
实施例273 体外Aurora TdF实验 Aurora A实验 Aurora A激酶实验在低蛋白质结合384孔板(Corning Inc)中进行。使所有试剂在冰上融化。将试验化合物稀释于100％DMSO至所需要的浓度。各反应物由8nM酶(Aurora A，Upstate目录号14-511)、100nMTamra-PKAtide(Molecular Devices，5TAMRA-GRTGRRNSICOOH)、25μM ATP(Roche)、1mM DTT(Pierce)和激酶缓冲液(10mM Tris、10mM MgCl2、0.01％吐温(Tween)20)组成。对于每个反应，将14μl含有TAMRA-PKAtide、ATP、DTT和激酶缓冲液的溶液与1μl经稀释的化合物混合。加入5μl经稀释的酶后开始激酶反应。在室温下使反应进行2小时。加入60μl IMAP微珠(逐步加入1∶400微珠(94.7％缓冲液A5.3％缓冲液B)1X缓冲液、24mM NaCl)后终止反应。再经2小时后，采用Analyst AD(Molecular devices)测量荧光偏振。
Aurora B实验 Aurora A激酶实验在低蛋白质结合384孔板(Corning Inc)中进行。使所有试剂在冰上融化。将试验化合物稀释于100％DMSO至所需要的浓度。各反应物由26nM酶(Aurora B，Invitrogen目录号pv3970)、100nM Tamra-PKAtide(Molecular Devices，5TAMRA-GRTGRRNSICOOH)、50μM ATP(Roche)、1mM DTT(Pierce)和激酶缓冲液(10mM Tris、10mM MgCl2、0.01％吐温20)组成。对于每个反应，将14μl含有TAMRA-PKAtide、ATP、DTT和激酶缓冲液的溶液与1μl经稀释的化合物混合。加入5μl经稀释的酶后开始激酶反应。在室温下使反应进行2小时。加入60μl IMAP微珠(逐步加入1∶400微珠(94.7％缓冲液A5.3％缓冲液B)1X缓冲液、24mM NaCl)后终止反应。再经2小时后，采用Analyst AD(Molecular devices)测量荧光偏振。
IC50测定 根据由试验化合物连续稀释的8个点、每点一式两份所得到的抑制数据绘制剂量反应曲线。将化合物浓度对激酶活性作图，通过荧光偏振度计算出激酶活性。为了得到IC50值，然后将剂量反应曲线拟合成标准S型曲线，通过非线性回归分析得到IC50值。
当用Aurora A和Aurora B实验进行测定时，选定的本发明苯胺基哌嗪衍生物的Kd值的范围为约1nM至约100μM。
苯胺基哌嗪衍生物的用途 苯胺基哌嗪衍生物可用于治疗或预防患者的病症。
可通过给予有效量的至少一种苯胺基哌嗪衍生物而治疗的具体疾病和病症包括但不限于美国专利第6,413,974号中公开的疾病和病症，该专利通过引用结合到本文中。
心血管疾病的治疗和预防 苯胺基哌嗪衍生物可用于治疗或预防患者的心血管疾病。
因此，在一个实施方案中，本发明提供用于治疗患者的心血管疾病的方法，该方法包括给予患者有效量的一种或多种苯胺基哌嗪衍生物。
可用本发明方法治疗或预防的心血管疾病的示例性实例包括但不限于动脉粥样硬化、充血性心力衰竭、心律失常、心肌梗死、心房纤维性颤动、心房扑动、循环性休克、左心室肥大、室性心动过速、室上性心动过速、冠状动脉疾病、心绞痛、感染性心内膜炎、非感染性心内膜炎、心肌病、外周动脉疾病、雷诺现象(Reynaud′sphenomenon)、深静脉血栓形成、主动脉瓣狭窄、左房室瓣狭窄、肺动脉瓣狭窄和右房室瓣狭窄。
在一个实施方案中，心血管疾病是动脉粥样硬化。
在另一个实施方案中，心血管疾病是充血性心力衰竭。
在另一个实施方案中，心血管疾病是冠状动脉疾病。
CNS疾病的治疗和预防 苯胺基哌嗪衍生物可用于治疗或预防患者的中枢神经系统(CNS)疾病。
因此，在一个实施方案中，本发明提供用于治疗患者的CNS疾病的方法，该方法包括给予患者有效量的一种或多种苯胺基哌嗪衍生物。
可用本发明方法治疗或预防的CNS疾病的示例性实例包括但不限于中枢神经系统活性不足、中枢神经系统活性过高、神经变性性疾病、阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease)、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、克罗伊茨费尔特-雅各布病(Creutzfeldt-Jakob disease)、亨廷顿舞蹈病(Huntington disease)、多发性硬化、路易体病(Lewy body disorder)、抽搐障碍(tic disorder)、图雷特综合征(Tourette′s Syndrome)、帕金森病(Parkinson disease)、皮克病(Pick′s disease)、朊病毒病或精神分裂症、癫痫、偏头痛、焦虑症、双相性精神障碍、抑郁症、注意力缺陷/多动症(ADHD)和痴呆。
在一个实施方案中，CNS疾病是阿尔茨海默病。
在另一个实施方案中，CNS疾病是帕金森病。
在另一个实施方案中，CNS疾病是ALS。
病毒性疾病的治疗和预防 苯胺基哌嗪衍生物可用于治疗或预防患者的病毒性疾病。
因此，在一个实施方案中，本发明提供用于治疗患者的病毒性疾病的方法，该方法包括给予患者有效量的一种或多种苯胺基哌嗪衍生物。
可用本发明方法治疗或预防的病毒性疾病的示例性实例包括但不限于以下病毒引起的疾病HIV、人乳头瘤病毒(HPV)、疱疹病毒、痘病毒、埃巴病毒、新培斯病毒和腺病毒。
在一个实施方案中，病毒性疾病是HIV。
在另一个实施方案中，病毒性疾病是HPV。
真菌感染的治疗和预防 苯胺基哌嗪衍生物可用于治疗或预防患者的真菌感染。
因此，在一个实施方案中，本发明提供用于治疗患者的真菌感染的方法，该方法包括给予患者有效量的一种或多种苯胺基哌嗪衍生物。
可用本发明方法治疗或预防的真菌感染的示例性实例包括但不限于曲霉病、芽生菌病、念珠菌病、球孢子菌病、隐球菌病、组织胞浆菌病、机会致病真菌(opportunistic fungi)(包括酵母和霉菌)、毛霉菌病、足分支菌病、巴西芽生菌病和孢子丝菌病。
在一个实施方案中，真菌感染是念珠菌病。
蛋白激酶活性相关疾病的治疗或预防 苯胺基哌嗪衍生物可以是蛋白激酶的抑制剂、调节剂或调制剂，因此可用于治疗或预防患者的与蛋白激酶活性有关的疾病。
因此，在一个实施方案中，本发明提供用于治疗患者的与蛋白激酶活性有关的疾病的方法，该方法包括给予患者有效量的一种或多种苯胺基哌嗪衍生物。
可用本发明方法治疗或预防的与蛋白激酶活性有关的疾病的示例性实例包括但不限于细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)，例如CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6和CDK7、CDK8；aurora激酶，例如Aurora-A、Aurora-B和Aurora-C；促分裂原活化蛋白激酶(MAPK/ERK)；糖原合酶激酶3(GSK3β)；c-Met激酶，例如c-Met；Pim-1激酶；限制点激酶，例如Chk1和Chk2；酪氨酸激酶，例如HER亚家族(包括例如EGFR(HER1)、HER2、HER3和HER4)、胰岛素亚家族(包括例如INS-R、IGF-IR、IR和IR-R)、PDGF亚家族(包括例如PDGF-α受体和PDGF-β受体、CSFIR、c-kit和FLK-II)、FLK家族(包括例如激酶插入域受体(KDR)、胎肝激酶-1(FLK-1)、胎肝激酶-4(FLK-4)和fms样酪氨酸激酶-1(flt-1))；非受体蛋白酪氨酸激酶，例如LCK、Src、Frk、Btk、Csk、Abl、Zap70、Fes/Fps、Fak、Jak、Ack、和LIMK；以及生长因子受体酪氨酸激酶，例如VEGF-R2、FGF-R、TEK、Akt激酶等。
在一个实施方案中，本发明提供在有需要的患者体内抑制一种或多种限制点激酶的方法，该方法包括给予患者治疗有效量的至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗有需要的患者的与一种或多种限制点激酶有关的疾病或者减缓所述疾病进程的方法，该方法包括给予治疗有效量的至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗一种或多种与限制点激酶有关的疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗的患者至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体；以及至少一种另外的抗癌药，其中至少一种苯胺基哌嗪衍生物和至少一种抗癌药的量产生治疗效果。
在又一个实施方案中，本发明提供治疗有需要的患者的与一种或多种限制点激酶有关的疾病或者减缓所述疾病进程的方法，该方法包括给予治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种药学上可接受的载体和至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体组合。
在一个实施方案中，被抑制、调制或调节的限制点激酶是Chk1。在另一个实施方案中，被抑制、调制或调节的限制点激酶是Chk2。
在一个实施方案中，本发明提供在有需要的患者体内抑制一种或多种酪氨酸激酶的方法，该方法包括给予患者治疗有效量的至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗有需要的患者的与一种或多种酪氨酸激酶有关的疾病或者减缓所述疾病的进程的方法，该方法包括给予治疗有效量的至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗一种或多种与酪氨酸激酶有关的疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗的患者至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体；以及至少一种另外的抗癌药，其中至少一种苯胺基哌嗪衍生物和至少一种抗癌药的量产生治疗效果。
在又一个实施方案中，本发明提供治疗有需要的患者的与一种或多种酪氨酸激酶有关的疾病或者减缓所述疾病的进程的方法，该方法包括给予治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种药学上可接受的载体和至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体组合。
在具体实施方案中，被抑制、调制或调节的酪氨酸激酶是VEGFR(VEGF-R2)、EGFR、HER2、SRC、JAK或TEK或其组合。
在一个实施方案中，本发明提供在有需要的患者体内抑制一种或多种Pim-1激酶的方法，该方法包括给予患者治疗有效量的至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗有需要的患者的与一种或多种Pim-1激酶有关的疾病或者减缓所述疾病的进程的方法，该方法包括给予治疗有效量的至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗一种或多种与Pim-1激酶有关的疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗的患者至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体；以及至少一种另外的抗癌药，其中至少一种苯胺基哌嗪衍生物和至少一种抗癌药的量产生治疗效果。
在又一个实施方案中，本发明提供治疗有需要的患者的与一种或多种Pim-1激酶有关的疾病或者减缓所述疾病的进程的方法，该方法包括给予治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种药学上可接受的载体和至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体的组合。
在一个实施方案中，本发明提供治疗一种或多种与Aurora激酶有关的疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗的患者至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体；以及至少一种另外的抗癌药，其中至少一种苯胺基哌嗪衍生物和至少一种抗癌药的量产生治疗效果。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗有需要的患者的与一种或多种Aurora激酶有关的疾病或者减缓所述疾病的进程的方法，该方法包括给予治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种药学上可接受的载体和至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体组合。
在一个实施方案中，本发明提供治疗一种或多种与细胞周期蛋白依赖性激酶有关的疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗的患者适量的第一化合物和适量的至少一种第二化合物，其中第一化合物和第二化合物的量产生治疗效果，所述第一化合物是苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，所述第二化合物是不同于苯胺基哌嗪衍生物的抗癌药。
苯胺基哌嗪衍生物还可用于抑制编码蛋白激酶的癌基因。这类癌基因的非限制性实例包括C-Met。
增殖性疾病的治疗和预防 苯胺基哌嗪衍生物可用于治疗或预防患者的增殖性疾病。
因此，在一个实施方案中，本发明提供用于治疗患者的增殖性疾病的方法，该方法包括给予患者有效量的一种或多种苯胺基哌嗪衍生物。
可用本发明方法治疗或预防的增殖性疾病的示例性实例包括但不限于癌症、动脉粥样硬化、良性前列腺增生、家族性腺瘤性息肉病、神经纤维瘤、动脉粥样硬化、肺纤维变性、关节炎、牛皮癣、肾小球性肾炎、血管成形术或血管手术后再狭窄、肥厚性瘢痕形成、炎性肠病、移植排斥反应、内毒素休克、特发性肺纤维变性、硬皮病和肝硬化。
细胞凋亡的诱导或抑制 苯胺基哌嗪衍生物可用于在患者体内诱导或抑制细胞凋亡。
因此，在一个实施方案中，本发明提供在患者体内诱导或抑制细胞凋亡的方法，该方法包括给予患者有效量的一种或多种苯胺基哌嗪衍生物。
在各种人类疾病中细胞凋亡反应发生异常，作为细胞凋亡调制剂的苯胺基哌嗪衍生物，可用于治疗癌症、病毒性感染、预防HIV感染个体的AIDS发展、自身免疫性疾病(包括但不限于系统性红斑狼疮、自身免疫介导的肾小球性肾炎、类风湿性关节炎、牛皮癣、炎性肠病和自身免疫性糖尿病)、神经变性性疾病(包括但不限于阿尔茨海默病、AIDS相关痴呆、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化、色素性视网膜炎、脊髓性肌萎缩和小脑变性)、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、与心肌梗死相关的缺血性损伤、中风和再灌注损伤、心律失常、动脉粥样硬化、毒素诱导性或酒精性肝病、血液病(包括但不限于慢性贫血和再生障碍性贫血)、肌肉骨骼系统变性性疾病(包括但不限于骨质疏松症和关节炎)、阿司匹林敏感性鼻窦炎、囊性纤维变性、多发性硬化、肾病和癌症疼痛。
癌症的治疗和预防 苯胺基哌嗪衍生物可用于治疗或预防患者的癌症。
因此，在一个实施方案中，本发明提供用于治疗患者的癌症的方法，该方法包括给予患者有效量的一种或多种苯胺基哌嗪衍生物。
可用本发明方法治疗或预防的癌症的示例性实例包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、间皮瘤和巨细胞癌)、头颈部癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌或皮肤癌(包括鳞状细胞癌和黑素瘤)；淋巴系造血系统肿瘤(包括但不限于白血病，例如急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病或急性成淋巴细胞白血病；淋巴瘤，例如B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(Hodgkins lymphoma)、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、骨髓瘤或伯基特淋巴瘤(Burkett′s lymphoma))；不明原发部位癌症；髓系造血系统肿瘤，包括但不限于急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞白血病；间充质源肿瘤，包括但不限于纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢神经系统和外周神经系统肿瘤，包括但不限于脑肿瘤，例如星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤(例如多形性成胶质细胞瘤)或神经鞘瘤；以及其它肿瘤，包括精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺滤泡性癌和卡波西肉瘤(Kaposi′s sarcoma)。苯胺基哌嗪衍生物可用于治疗原发性癌和/或转移癌。
苯胺基哌嗪衍生物还可用于癌症的化学预防。化学预防定义为通过阻断启动诱变事件或者通过阻断已遭受攻击的恶化前细胞的进程或抑制肿瘤复发来抑制侵袭性癌的发展。
苯胺基哌嗪衍生物还可用于抑制肿瘤血管生成和转移。
在一个实施方案中，被治疗或预防的癌症选自乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、皮肤癌、白血病和淋巴瘤。
在另一个实施方案中，被治疗或预防的癌症选自乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌和前列腺癌。
在一个实施方案中，被治疗或预防的癌症是乳腺癌。
在另一个实施方案中，被治疗或预防的癌症是肺癌。
在另一个实施方案中，被治疗或预防的癌症是结肠直肠癌。
在又一个实施方案中，被治疗或预防的癌症是前列腺癌。
在又一个实施方案中，被治疗或预防的癌症是白血病。
在又一个实施方案中，被治疗或预防的癌症是淋巴瘤。
在一个实施方案中，被治疗或预防的癌症是实体瘤。
在另一个实施方案中，被治疗或预防的癌症是血癌或淋巴癌。
在一个实施方案中，被治疗或预防的癌症是原发性癌。
在另一个实施方案中，被治疗或预防的癌症是转移癌。
在又一个实施方案中，对患者的原发性癌和转移癌进行治疗。
联合疗法 在一个实施方案中，本发明提供用于治疗患者疾病的方法，该方法包括给予患者一种或多种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯或前药和至少一种另外的不是苯胺基哌嗪衍生物的治疗药，其中给药量合起来可有效治疗或预防疾病。
用于本发明方法的另外的治疗药包括但不限于抗癌药、用于治疗心血管疾病的药物、用于治疗CNS疾病的药物、抗病毒药、抗真菌药、抗增殖药、抗脱发药、抗炎药、用于治疗蛋白激酶相关疾病的药物、抗缺血药或这些药物的任两种或更多种的组合。
在另一个实施方案中，另外的治疗药是用于降低苯胺基哌嗪衍生物的任何潜在副作用的药物。这类潜在的副作用包括但不限于恶心、呕吐、头痛、发热、嗜眠、肌肉痛、腹泻、全身痛和注射部位疼痛。
当给予需要这类治疗的患者联合疗法时，可按任何顺序给予组合的治疗药或包含治疗药的一种或多种组合物，例如序贯、共同、一起、同时等。这类联合疗法中各种活性成分的量可以是不同的量(不同剂量)或是相同的量(相同剂量)。
在一个实施方案中，一种或多种苯胺基哌嗪衍生物在另外的治疗药发挥其预防或治疗作用的期间给予，反之亦然。
在另一个实施方案中，按照当这类药物用作治疗疾病的单一疗法时通常所采用的剂量给予一种或多种苯胺基哌嗪衍生物和另外的治疗药。
在另一个实施方案中，按照比当这类药物用作治疗疾病的单一疗法时通常所采用的剂量低的剂量给予一种或多种苯胺基哌嗪衍生物和另外的治疗药。
在又一个实施方案中，一种或多种苯胺基哌嗪衍生物和另外的治疗药起增效作用，并按照比当这类药物用作治疗疾病的单一疗法时通常所采用的剂量低的剂量给予。
在一个实施方案中，一种或多种苯胺基哌嗪衍生物和另外的治疗药存在于同一组合物中。在一个实施方案中，该组合物适于口服给药。在另一个实施方案中，该组合物适于静脉内给药。
一种或多种苯胺基哌嗪衍生物和另外的治疗药可起相加作用或增效作用。增效组合使得能使用较低剂量的一种或多种药物和/或较低频率给予联合疗法的一种或多种药物。以较低剂量或较低频率给予一种或多种药物可降低该疗法的毒性而又无需降低该疗法的功效。
在一个实施方案中，给予一种或多种苯胺基哌嗪衍生物和另外的治疗药可以抑制疾病对这些药物的一种或多种的抗性。
在一个实施方案中，另外的治疗药按其已知的治疗有效量使用。在另一个实施方案中，另外的治疗药按其正常的处方剂量使用。在另一个实施方案中，另外的治疗药按比其正常处方剂量或其已知的治疗有效量小的量使用。
用于本发明联合疗法以治疗和预防疾病的其它药物的剂量和剂量方案由主治临床医生在考虑包装说明书中的批准剂量和剂量方案；患者年龄、性别和一般健康状况；以及病毒性感染或相关疾病或病症的类型和严重程度后做出决定。当联合给药时，苯胺基哌嗪衍生物和用于治疗上述疾病或病症的其它药物可以同时或序贯给药。这对于当联合给药的组分在不同的给药时间给予时特别有用，例如，一个组分一天给药一次，另一组分每6小时给药一次，或者当组合物不相同时，例如一种是片剂，另一种是胶囊剂。装有分开的剂型的药盒因此是有利的。
一般而言，当作为联合疗法给药时，一种或多种苯胺基哌嗪衍生物和另外的治疗药的总日剂量的范围可为约0.1mg/天至约2000mg/天，尽管必要时可随疗法靶标、患者和给药途径而变化。在一个实施方案中，剂量为约0.2mg/天至约100mg/天，以单剂量或以2-4次分剂量给药。在另一个实施方案中，剂量为约1mg/天至约500mg/天，以单剂量或以2-4次分剂量给药。在另一个实施方案中，剂量为约1mg/天至约200mg/天，以单剂量或以2-4次分剂量给药。在又一个实施方案中，剂量为约1mg/天至约100mg/天，以单剂量或以2-4次分剂量给药。在再一个实施方案中，剂量为约1mg/天至约50mg/天，以单剂量或以2-4次分剂量给药。在又一个实施方案中，剂量为约1mg/天至约20mg/天，以单剂量或以2-4次分剂量给药。
用于治疗癌症的联合疗法 本发明化合物还可用于(同时或以任何顺序序贯给药)与一种或多种独立的抗癌疗法例如手术、放射疗法、生物疗法(例如抗癌免疫疗法)联用和/或给予至少一种不同于苯胺基哌嗪衍生物的另外的抗癌药物，以治疗或预防患者的癌症。本发明化合物可存在于与另外的抗癌药相同的同一剂量单位中，或者存在于单独的剂量单位中。
适于与本发明的化合物联用的另外的抗癌药(亦称抗肿瘤药)的非限制性实例包括细胞生长抑制剂、细胞毒药物(例如但不限于DNA相互作用剂(例如顺铂(cisplatin)或多柔比星(doxorubicin))；紫杉烷类药(taxanes)(例如泰索帝(taxotere)、秦素(taxol))；拓扑异构酶II抑制剂(例如依托泊苷(etoposide)或替尼泊苷(teniposide))；拓扑异构酶I抑制剂(例如伊立替康(irinotecan)(或CPT-11)、盐酸伊立替康和山梨醇注射剂(camptostar)或托泊替康(topotecan))；微管蛋白相互作用剂(例如紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)或埃坡霉素(epothilone))；激素类药(例如他莫昔芬(tamoxifen))；胸苷酸合成酶抑制剂(例如5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil))；抗代谢药(例如甲氨蝶呤(methoxtrexate))；烷化剂(例如替莫唑胺(temozolomide)(TEMODARTM，得自Schering-Plough公司，Kenilworth，New Jersey)、环磷酰胺(cyclophosphamide))；法呢基蛋白转移酶抑制剂(例如SARASARTM(4-[2-[4-[(11R)-3，10-二溴-8-氯-6，11-二氢-5H-苯并[5，6]环庚三烯并[1，2-b]吡啶-11-基-]-1-哌啶基]-2-氧代乙基]-1-哌啶甲酰胺或SCH 66336，得自Schering-Plough公司(Kenilworth，New Jersey))、替匹法尼(tipifarnib)(

或R115777，得自Janssen Pharmaceuticals)、L778，123(法呢基蛋白转移酶抑制剂，得自Merck&Company，Whitehouse Station，New Jersey)、BMS 214662(法呢基蛋白转移酶抑制剂，得自BristoL-Myers Squibb Pharmaceuticals，Princeton，New Jersey)；信号转导抑制剂(例如易瑞沙(Iressa)(得自Astra Zeneca Pharmaceuticals，England)、它赛瓦(Tarceva)(EGFR激酶抑制剂)、抗EGFR抗体(例如C225)、GLEEVECTM(C-abl激酶抑制剂，得自Novartis Pharmaceuticals，East Hanover，New Jersey)；干扰素例如甘乐能(intron)(得自Schering-Plough公司)、聚二乙醇化干扰素a-2b粉针剂(Peg-Intron)(得自Schering-Plough公司)；激素疗法组合；芳香酶组合；ara-C、阿霉素(adriamycin)、环磷酰胺制剂(Cytoxan)和吉西他滨(gemcitabine)。
其它有用的另外的抗癌药包括但不限于乌拉莫司汀(Uracilmustard)、氮芥(Chlormethine)、异环磷酰胺(Ifosfamide)、美法仑(Melphalan)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、哌泊溴烷(Pipobroman)、曲他胺(Triethylenemelamine)、ara-C、阿霉素、环磷酰胺制剂、氯法拉滨(Clofarabine)(

得自Genzyme Oncology，Cambridge，Massachusetts)、克拉屈滨(cladribine)(

得自Janssen-CilagLtd.)、阿非迪霉素(aphidicolin)、美罗华(rituxan)(得自Genentech/BiogenIdec)、舒尼替尼(sunitinib)(

得自Pfizer)、达沙替尼(dasatinib)(或BMS-354825，得自Bristol-Myers Squibb)、tezacitabine(得自AventisPharma)、Sml1、氟达拉滨(fludarabine)(得自Trigan OncologyAssociates)、喷司他丁(pentostatin)(得自BC Cancer Agency)、triapine(得自Vion Pharmaceuticals)、didox(得自Bioseeker Group)、trimidox(得自ALS Therapy Development Foundation)、amidox、3-AP(3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲)、MDL-101，731((E)-2′-脱氧-2′-(氟亚甲基)胞苷)和吉西他滨。
其它有用的另外的抗癌药包括但不限于三亚乙基硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramine)、白消安(Busulfan)、卡莫司汀(Carmustine)、洛莫司汀(Lomustine)、链佐星(Streptozocin)、达卡巴嗪(Dacarbazine)、氟尿苷(Floxuridine)、阿糖胞苷(Cytarabine)、6-巯基嘌呤(6-Mercaptopurine)、6-硫鸟嘌呤(6-Thioguanine)、磷酸氟达拉滨(Fludarabine phosphate)、奥沙利铂(oxaliplatin)、亚叶酸(leucovirin)、奥沙利铂(ELOXATINTM，得自Sanofi-Synthelabo Pharmaceuticals，France)、喷司他丁、长春碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)、长春地辛(Vindesine)、博来霉素(Bleomycin)、放线菌素D(Dactinomycin)、柔红霉素(Daunorubicin)、多柔比星、表柔比星(Epirubicin)、伊达比星(Idarubicin)、光神霉素(Mithramycin)、脱氧考福霉素(Deoxycoformycin)、丝裂霉素-C(Mitomycin-C)、L-天冬酰胺酶(L-Asparaginase)、替尼泊苷、17α-炔雌醇(17α-Ethinylestradiol)、己烯雌酚(Diethylstilbestrol)、睾酮(Testosterone)、泼尼松(Prednisone)、氟甲睾酮(Fluoxymesterone)、丙酸屈他雄酮(Dromostanolone propionate)、睾内酯(Testolactone)、醋酸甲地孕酮(Megestrolacetate)、甲泼尼龙(Methylprednisolone)、甲睾酮(Methyltestosterone)、泼尼松龙(Predni solone)、曲安西龙(Triamcinolone)、氯烯雌醚(Chlorotrianisene)、羟孕酮(Hydroxyprogesterone)、氨鲁米特(Aminoglutethimide)、雌莫司汀(Estramustine)、醋酸甲羟孕酮(Medroxyprogesteroneacetate)、亮丙立德(Leuprolide)、氟他胺(Flutamide)、托瑞米芬(Toremifene)、戈舍瑞林(goserelin)、顺铂、卡铂(Carboplatin)、奥沙利铂、Aroplatin、羟基脲(Hydroxyurea)、安吖啶(Amsacrine)、丙卡巴肼(Procarbazine)、米托坦(Mitotane)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、左旋咪唑(Levamisole)、诺维本(Navelbene)、阿那曲唑(Anastrazole)、来曲唑(Letrazole)、卡培他滨(Capecitabine)、瑞罗沙吩(Reloxafine)、屈洛沙吩(Droloxafine)、六甲基蜜胺(Hexamethylmelamine)、阿瓦斯丁(Avastin)、赫赛汀(Herceptin)、贝克萨(Bexxar)、万珂(Velcade)、吉维林(Zevalin)、三仙诺(Trisenox)、希罗达(Xeloda)、长春瑞滨(Vinorelbine)、卟吩姆(Porfimer)、爱必妥(Erbitux)、Liposomal、塞替派(Thiotepa)、六甲蜜胺(Altretamine)、美法仑、曲妥珠单抗(Trastuzumab)、列若唑(Lerozole)、氟维司群(Fulvestrant)、依西美坦(Exemestane)、氟维司群、异环磷酰胺(Ifosfomide)、利妥昔单抗(Rituximab)、C225和肯巴斯(Campath)。
在一个实施方案中，其它抗癌药选自细胞生长抑制剂、顺铂、多柔比星、泰索帝、泰素、依托泊苷、伊立替康、盐酸伊立替康和山梨醇注射剂、托泊替康、紫杉醇、多西他赛、埃坡霉素、他莫昔芬、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、替莫唑胺、环磷酰胺、SCH 66336、R115777、L778，123、BMS 214662、易瑞沙、它赛瓦、抗EGFR抗体、格列卫(Gleevec)、甘乐能(intron)、ara-C、阿霉素、环磷酰胺制剂、吉西他滨、乌拉莫司汀、氮芥、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、曲他胺、三亚乙基硫代磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链佐星、达卡巴嗪、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁、长春碱、长春新碱、长春地辛、博来霉素、放线菌素D、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、光神霉素、脱氧考福霉素、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、替尼泊苷、17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾酮、泼尼松、氟甲睾酮、丙酸屈他雄酮、睾内酯、醋酸甲地孕酮、甲泼尼龙、甲睾酮、泼尼松龙、曲安西龙、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、醋酸甲羟孕酮、亮丙立德、氟他胺、托瑞米芬、戈舍瑞林、卡铂、羟基脲、安吖啶、丙卡巴肼、米托坦、米托蒽醌、左旋咪唑、诺维本、阿那曲唑、来曲唑、卡培他滨、瑞罗沙吩、屈洛沙吩、六甲基蜜胺、阿瓦斯丁、赫赛汀、贝克萨、万珂、吉维林、三仙诺、希罗达、长春瑞滨、卟吩姆、爱必妥、Liposomal、塞替派、六甲蜜胺、美法仑、曲妥珠单抗、列若唑、氟维司群、依西美坦、异环磷酰胺、利妥昔单抗、C225、盐酸多柔比星脂质体注射剂(Doxil)、昂他克(Ontak)、Deposyt、Mylotarg、肯巴斯(Campath)、西乐葆(Celebrex)、Sutent、Aranesp、优保津(Neupogen)、Neulasta、Kepivance、SU11248和PTK787。
在一个实施方案中，其它抗癌药是铂类药物，例如顺铂、顺铂或奥沙利铂。
在另一个实施方案中，其它抗癌药是烷化剂。
在另一个实施方案中，其它抗癌药是长春花属生物碱，例如长春新碱或长春碱。
在又一个实施方案中，其它抗癌药是拓扑异构酶I抑制剂。
在另一个实施方案中，其它抗癌药是拓扑异构酶II抑制剂。
在又一个实施方案中，其它抗癌药是抗代谢药。
在另一个实施方案中，其它抗癌药是纺锤体毒物(spindlepoison)。
在另一个实施方案中，其它抗癌药是抗肿瘤抗生素。
如果配制成固定剂量，则这类组合产品采用本文所述剂量范围内的本发明化合物和其剂量范围内的其它药用活性剂或治疗。例如，曾发现CDC2抑制剂奥罗莫星(olomucine)与已知的细胞毒药物在诱导细胞凋亡中起协同作用(J.Cell Sci.，(1995)108，2897)。当组合剂型不适宜时，苯胺基哌嗪衍生物还可与已知的抗癌药或细胞毒药物一起序贯给予。本发明不限制给药顺序，可以在已知的抗癌药或细胞毒药物给药前或给药后给予苯胺基哌嗪衍生物。例如，细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂黄酮吡多的细胞毒活性受抗癌药给药顺序的影响(CancerResearch，(1997)57，3375)。这些技术为本领域技术人员以及主治医师所掌握。
因此，一方面，本发明包括用于治疗患者的癌症的方法，该方法包括给予患者适量的至少一种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，以及一种或多种其它抗癌治疗法，其中适量的苯胺基哌嗪衍生物/其它治疗法产生所需要的治疗效果。在一个实施方案中，至少一种苯胺基哌嗪衍生物和一种或多种其它的治疗法起增效作用。在另一个实施方案中，至少一种苯胺基哌嗪衍生物和一种或多种其它的治疗法起相加作用。
在一个实施方案中，其它的治疗法是手术。
在另一个实施方案中，其它的治疗法是放射疗法。
在另一个实施方案中，其它的治疗法是生物疗法，例如激素疗法或抗癌免疫疗法。
可通过多个药理实验来证实本发明化合物的药理性质。本文下面描述的示例性药理实验用本发明的化合物及其盐、溶剂合物、酯或前药进行。
组合物与给药 本发明还涉及包含至少一种苯胺基哌嗪衍生物或所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂合物、酯或前药以及至少一种药学上可接受的载体的药物组合物。
对于用本发明所述的化合物来制备药物组合物，药学上可接受的惰性载体可以是固体或液体。固体形式的制剂包括散剂、片剂、可分散颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。散剂和片剂可包含约5％至约95％的活性成分。合适的固体载体为本领域所知，例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖或乳糖。片剂、散剂、扁囊剂和胶囊剂可用作适于口服给药的固体剂型。药学上可接受的载体和各种组合物的制备方法的实例可参见A.Gennaro(主编)，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania。
液体形式的制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂。可能提及的实例是用于胃肠外注射剂的水或水-丙二醇溶液或者用于口服溶液剂、混悬剂和乳剂而添加的甜味剂和遮光剂。液体形式的制剂还可包括用于鼻内给药的溶液剂。
适于吸入的气雾剂可包括溶液剂和粉末形式的固体剂型，可与药学上可接受的载体(例如氮气等惰性压缩气体)联用。
所包括的还有在临用前转化成适于口服或胃肠外给药的液体制剂的固体制剂。这些液体形式包括溶液剂、混悬剂和乳剂。
本发明化合物还可以经皮递药。透皮组合物可呈乳膏剂、洗剂、气雾剂和/或乳剂的形式，并且可包入骨架型或贮库型的透皮贴剂中，正如本领域为此目的的常规做法一样。
本发明化合物还可以皮下递药。
优选化合物经口服或静脉内或鞘内或其某些适合的组合给药。
优选药物制剂为单位剂型。在这种剂型中，制剂被再分成大小适宜的单位剂量，其中含有合适剂量(例如达到所需目的的有效量)的活性组分。
制剂的单位剂量中，活性化合物的含量可在约0.001mg至约500mg间变动或调整。在一个实施方案中，制剂的单位剂量中活性化合物的量为约0.01mg至约250mg。在另一个实施方案中，制剂的单位剂量中活性化合物的量为约0.1mg至约100mg。在另一个实施方案中，制剂的单位剂量中活性化合物的量为约1.0mg至约100mg。在另一个实施方案中，制剂的单位剂量中活性化合物的量为约1.0mg至约50mg。在又一个实施方案中，制剂的单位剂量中活性化合物的量为约1.0mg至约25mg。
所采用的实际剂量可根据患者需求和待治疗疾病的严重程度而变化。特殊情况下合适剂量方案的确定法为本领域技术人员所掌握。为方便起见，总日剂量可拆分并按需要在一天内分次给予。
本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐的给药量和给药频率，将根据主治临床医生对患者的年龄、状况和体重以及待治疗症状的严重程度等因素的判断进行调整。对于口服给药，一般推荐的苯胺基哌嗪衍生物的日剂量方案可介于约约0.01mg/天至约2000mg/天。在一个实施方案中，口服给药的日剂量方案为约1mg/天至1000mg/天。在另一个实施方案中，口服给药的日剂量方案为约1mg/天至500mg/天。在另一个实施方案中，口服给药的日剂量方案为约100mg/天至500mg/天。在另一个实施方案中，口服给药的日剂量方案为约1mg/天至250mg/天。在另一个实施方案中，口服给药的日剂量方案为约100mg/天至250mg/天。在又一个实施方案中，口服给药的日剂量方案为约1mg/天至100mg/天。在又一个实施方案中，口服给药的日剂量方案为约50mg/天至100mg/天。在又一个实施方案中，口服给药的日剂量方案为约1mg/天至50mg/天。在另一个实施方案中，口服给药的日剂量方案为约25mg/天至50mg/天。在又一个实施方案中，口服给药的日剂量方案为约1mg/天至25mg/天。日剂量可按单剂量给药，或者可分成2-4次的分剂量。
药盒 一方面，本发明提供包含有效量的一种或多种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯或前药，以及药学上可接受的载体的药盒。
另一方面，本发明提供包含适量的一种或多种苯胺基哌嗪衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯或前药，以及适量的至少一种上述另外的治疗药的药盒，其中总量有效用于治疗或预防患者的病症。
当联合疗法方案的组分以一种以上的组合物给药时，它们可以药盒提供，该药盒装有单个包装，该包装中装有一个或多个容器，其中第一容器中装有一种或多种苯胺基哌嗪衍生物和药学上可接受的载体，第二个独立的容器中装有另外的治疗药和药学上可接受的载体，各组合物的活性组分的含量使得这种组合是治疗有效的组合。
另一方面，本发明提供药盒，该药盒装有适量的至少一种苯胺基哌嗪衍生物或所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂合物、酯或前药，以及适量的至少一种上述的抗癌疗法和/或另外的抗癌药物，其中两种或更多种成分的量产生所需要的治疗效果。
本发明不限于实施例中所公开的具体实施方案的范围，所述实施例用来说明本发明的少数方面，功能上等同的任何实施方案都落入本发明的范围内。实际上，除本文所描述和说明的以外，对本发明的各种修改对于相关领域技术人员来说都是显而易见的，并且都落入随附权利要求书的范围内。
本发明引用了多份参考文献，其完整的公开内容都通过引用全部结合到本文中。
权利要求
1.一种化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，所述化合物具有下列结构式
其中虚线表示任选的额外键，且其中
R1为H、烷基、烯基、炔基、卤素、-(亚烷基)m-芳基、-亚烯基-芳基、-亚炔基-芳基、-(亚烷基)m环烷基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂环烯基，其中任何芳基、环烷基、杂芳基、杂环基或杂环烯基可任选被最多5个可以相同或不同并独立选自以下的取代基取代卤素、烷基、环烷基、-(亚烷基)m-N(R9)2、-(亚烷基)m-O-烷基、-O-芳基、-C(O)R8、-S-烷基、-O-芳基、-(亚烷基)m-CN、炔基、烯基、羟基烷基、卤代烷基、-O-卤代烷基、-C(O)OR7、-NHC(O)R7、-C(O)N(R7)2、-S(O)2N(R8)2、-NHS(O)2R8、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-杂环基和-(亚烷基)m-芳基；其中烷基、烯基或炔基可被一个或多个可以相同或不同且独立选自以下的取代基取代卤素、烷基、-N(R7)2、-C(O)OH、芳基和-O-烷基；其中任何环状R1基团可任选与环烷基、芳基、杂芳基或杂环基稠合；使得当R1为杂芳基、杂环基或杂环烯基时，这些基团通过环碳原子与式(I)化合物的其余部分连接；
R2为H、烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、-(亚烷基)m-NHC(O)-R9或-(亚烷基)m-N(R9)2，或者R2和与其所连接的环碳原子一起形成羰基；
R3为H、-烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、-(亚烷基)m-NHC(O)-R9或-(亚烷基)m-N(R9)2，或者R3和R3a与其各自所连接的共用碳原子一起连接形成羰基、环烷基或杂环基；
R3a为H、-烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、-(亚烷基)m-NHC(O)-R9或-(亚烷基)m-N(R9)2；
R4每次出现时都独立地为H、-烷基、-(亚烷基)m-芳基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-N(R8)2、-(亚烷基)m-OH、-(亚烷基)m-NHC(O)R8、羟基烷基、卤代烷基、-CH2NH2、-C(O)R5、-C(O)OR8、-C(O)-(亚烷基)m-N(R8)2、-C(O)NH-烷基、-C(O)N(烷基)2、-(亚烷基)m-NHC(O)R6、-NHC(O)OR8、-CR2C(O)NH2、-CR2C(O)NH(烷基)、-CR2C(O)NH(烷基)2或-NHS(O)2R6；
R5为H、烷基、芳基、-杂芳基或-NHOH；
R6每次出现时都独立地为H、烷基、芳基或卤代烷基；
R7每次出现时都为H、-OH、烷基、-O-烷基、环烷基或卤代烷基；
R8每次出现时都独立地为H、烷基、-(亚烷基)m-芳基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂芳基或-(亚烷基)m-环烷基；
R9每次出现时都为H、烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-芳基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂芳基或-(亚烷基)m-环烷基；
R10为H、-烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、(亚烷基)m-NHC(O)-R9或-(亚烷基)m-N(R9)2，或者R10和R10a与其各自所连接的共用碳原子一起连接形成羰基、环烷基或杂环基；
R10a为H、-烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、-(亚烷基)m-NHC(O)-R9或-(亚烷基)m-N(R9)2；
R11每次出现时都独立地为H、烷基、卤代烷基、羟基烷基、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、-(亚烷基)m-NHC(O)-R9或-(亚烷基)m-N(R9)2，或者任何R11和与其所连接的环碳原子一起形成羰基；
R12每次出现时都独立地为H、烷基、-(亚烷基)m-芳基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-杂环基、-S(O)2-烷基、-S(O)2-芳基、-S(O)2-杂芳基、羟基烷基、-C(O)R8或-C(O)OR8；
Ar为亚芳基或亚杂芳基，其中亚芳基或亚杂芳基通过其相邻环碳原子中的任意两个连接，且其中亚芳基或亚杂芳基可任选被最多4个可以相同或不同且独立选自以下的取代基取代卤素、烷基、-OH、-OR9、-(亚烷基)m-N(R6)2-N(烷基)2、-SR9、-S(O)R8、-S(O)2R8、-S(O)2NHR9、-C(O)R8、-C(O)OR9、-(亚烷基)m-C(O)N(R8)2、-NHC(O)R9、卤代烷基、羟基烷基、-CN和NO2，使得当Ar为四氢亚萘基时，R2和R3各自都不为氢；
W为-N(R12)-、-S-、-O-或-C(R4)2-，其中两个R4基团与它们所连接的共用碳原子一起连接形成各自可被进一步取代的环烷基或杂环基；
Y为H、卤素、烷基或-CN；
Z为-C(R7)-或-N-，使得当任选的额外键存在时，Z为-C(R7)-；
m每次出现时都独立地为0或1；
n为0-2的整数；
p为0或1。
2.权利要求1的化合物，其中R1为-芳基、-芳基烷基、苯稠合环烷基、杂芳基、苯稠合杂芳基或苯稠合杂环烯基。
3.权利要求1的化合物，其中R1为苯基、吡啶基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、异噁唑基、吡唑基、嘧啶基、联苯基、苯基-O-苯基、呋喃基、吡咯基、吲哚基、N-烷基吲哚基或
其中r为1、2或3。
4.权利要求1的化合物，其中R1为
5.权利要求1的化合物，其中Ar为
6.权利要求5的化合物，其中n为1，Y为H。
7.权利要求6的化合物，其中Z为N，R2和R3各自为-H。
8.权利要求6的化合物，其中Z为N，R2和R3之一为-H，R2和R3中的另一个为甲基。
9.权利要求6的化合物，其中Z为CR7，R2和R3各自为-H。
10.权利要求的9化合物，其中Z为CH。
11.权利要求6的化合物，其中W为NH。
12.权利要求6的化合物，其中W为-C(R4)2。
13.权利要求12的化合物，其中W为-CH(烷基)-。
14.权利要求12的化合物，其中W为-CH(-C(O)-烷基)-。
15.权利要求1的化合物，其中Ar为
16.权利要求1的化合物，其中基团
17.权利要求16的化合物，其中R1为
18.权利要求1的化合物，所述化合物具有下列结构式
其中
R1如权利要求1中定义；
每个Q独立地为CH或N，这样出现的至少3个Q都必为CH；
R8为H、烷基或-C(O)-烷基。
19.权利要求18的化合物，其中Q每次出现时都为CH，R2、R3、R8和Y各自为-H。
20.权利要求19的化合物，其中R1为-芳基、-苯稠合环烷基、-杂芳基、-苯稠合杂芳基或-苯稠合杂环烯基。
21.具有下列结构的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体
22.权利要求1的化合物，所述化合物是纯化形式的化合物。
23.一种药物组合物，所述药物组合物包含有效量的至少一种权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，以及药学上可接受的载体。
24.权利要求23的组合物，所述组合物还包含至少一种另外的抗癌药，其中另外的抗癌药物与权利要求1的化合物不同。
25.权利要求24的组合物，其中至少一种另外的抗癌药选自细胞生长抑制剂、顺铂、多柔比星、泰索帝、泰素、依托泊苷、伊立替康、盐酸伊立替康和山梨醇注射剂、托泊替康、紫杉醇、多西他赛、埃坡霉素、他莫昔芬、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、替莫唑胺、环磷酰胺、SCH66336、R115777、L778，123、BMS 214662、易瑞沙、它赛瓦、抗EGFR抗体、格列卫、甘乐能、ara-C、阿霉素、环磷酰胺制剂、吉西他滨、乌拉莫司汀、氮芥、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、曲他胺、三亚乙基硫代磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链佐星、达卡巴嗪、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁、长春碱、长春新碱、长春地辛、博来霉素、放线菌素D、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、光神霉素、脱氧考福霉素、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、替尼泊苷17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾酮、泼尼松、氟甲睾酮、丙酸屈他雄酮、睾内酯、醋酸甲地孕酮、甲泼尼龙、甲睾酮、泼尼松龙、曲安西龙、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、醋酸甲羟孕酮、亮丙立德、氟他胺、托瑞米芬、戈舍瑞林、卡铂、羟基脲、安吖啶、丙卡巴肼、米托坦、米托蒽醌、左旋咪唑、诺维本、阿那曲唑、来曲唑、卡培他滨、瑞罗沙吩、屈洛沙吩、六甲基蜜胺、阿瓦斯丁、赫赛汀、贝克萨、万珂、吉维林、三仙诺、希罗达、长春瑞滨、卟吩姆、爱必妥、Liposomal、塞替派、六甲蜜胺、美法仑、曲妥珠单抗、列若唑、氟维司群、依西美坦、异环磷酰胺、利妥昔单抗、C225、盐酸多柔比星脂质体注射剂、昂他克、Deposyt、Mylotarg、肯巴斯、西乐葆、Sutent、Aranesp、优保津、Neulasta、Kepivance、SU11248和PTK787。
26.一种药物组合物，所述药物组合物包含有效量的至少一种权利要求21的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，以及药学上可接受的载体。
27.权利要求的26组合物，所述组合物还包含至少一种另外的抗癌药，其中另外的抗癌药物不是权利要求21的化合物。
28.权利要求27的组合物，其中至少一种另外的抗癌药选自细胞生长抑制剂、顺铂、多柔比星、泰索帝、泰素、依托泊苷、伊立替康、盐酸伊立替康和山梨醇注射剂、托泊替康、紫杉醇、多西他赛、埃坡霉素、他莫昔芬、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、替莫唑胺、环磷酰胺、SCH66336、R115777、L778，123、BMS 214662、易瑞沙、它赛瓦、抗EGFR抗体、格列卫、甘乐能、ara-C、阿霉素、环磷酰胺制剂、吉西他滨、乌拉莫司汀、氮芥、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、曲他胺、三亚乙基硫代磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链佐星、达卡巴嗪、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁、长春碱、长春新碱、长春地辛、博来霉素、放线菌素D、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、光神霉素、脱氧考福霉素、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、替尼泊苷、17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾酮、泼尼松、氟甲睾酮、丙酸屈他雄酮、睾内酯、醋酸甲地孕酮、甲泼尼龙、甲睾酮、泼尼松龙、曲安西龙、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、醋酸甲羟孕酮、亮丙立德、氟他胺、托瑞米芬、戈舍瑞林、卡铂、羟基脲、安吖啶、丙卡巴肼、米托坦、米托蒽醌、左旋咪唑、诺维本、阿那曲唑、来曲唑、卡培他滨、瑞罗沙吩、屈洛沙吩、六甲基蜜胺、阿瓦斯丁、赫赛汀、贝克萨、万珂、吉维林、三仙诺、希罗达、长春瑞滨、卟吩姆、爱必妥、Liposomal、塞替派、六甲蜜胺、美法仑、曲妥珠单抗、列若唑、氟维司群、依西美坦、异环磷酰胺、利妥昔单抗、C225、盐酸多柔比星脂质体注射剂、昂他克、Deposyt、Mylotarg、肯巴斯、西乐葆、Sutent、Aranesp、优保津、Neulasta、Kepivance、SU11248和PTK787。
29.一种用于治疗患者的与细胞周期蛋白依赖性激酶有关的疾病的方法，该方法包括给予患者有效量的至少一种权利要求1的化合物。
30.权利要求29的方法，其中所述细胞周期蛋白依赖性激酶是CDK1。
31.权利要求29的方法，其中所述细胞周期蛋白依赖性激酶是CDK2。
32.一种治疗患者的与限制点激酶有关的疾病的方法，该方法包括给予患者有效量的至少一种权利要求1的化合物。
33.权利要求32的方法，其中所述限制点激酶是Chk1。
34.权利要求32的方法，其中所述限制点激酶是Chk2。
35.一种治疗患者的与aurora激酶有关的疾病的方法，该方法包括给予患者有效量的至少一种权利要求1的化合物。
36.权利要求35的方法，其中所述aurora激酶是Aurora-A。
37.权利要求35的方法，其中所述aurora激酶是Aurora-B。
38.权利要求35的方法，其中所述aurora激酶是Aurora-C。
39.一种治疗患者的与酪氨酸激酶有关的疾病的方法，该方法包括给予患者有效量的至少一种权利要求1的化合物。
40.权利要求39的方法，其中所述酪氨酸激酶选自VEGF-R2、EGFR、HER2、SRC、JAK和TEK。
41.权利要求40的方法，其中所述酪氨酸激酶是VEGF-R2。
42.权利要求40的方法，其中所述酪氨酸激酶是EGFR。
43.一种抑制Pim-1激酶并治疗患者的与Pim-1激酶有关的疾病的方法，该方法包括给予患者有效量的至少一种权利要求1的化合物。
44.一种用于治疗患者的与c-Met激酶有关的疾病的方法，该方法包括给予患者有效量的至少一种权利要求1的化合物。
45.权利要求44的方法，其中所述c-Met激酶是c-Met。
46.一种治疗患者的与MEK激酶有关的疾病的方法，该方法包括给予患者有效量的至少一种权利要求1的化合物。
47.权利要求46的方法，其中所述mek激酶是MEK-1。
48.一种用于治疗患者的癌症的方法，该方法包括给予患者有效量的至少一种权利要求1的化合物。
49.权利要求48的方法，该方法还包括给予患者有效量的至少一种另外的抗癌药，其中所述另外的抗癌药物与权利要求1的化合物不同。
50.权利要求48的方法，其中所述癌症是膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、脑癌或中枢神经系统的其它癌症、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、头颈部癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、子宫癌、皮肤癌、白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、骨髓瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺滤泡性癌或卡波西肉瘤。
51.权利要求49的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药选自细胞生长抑制剂、顺铂、aroplatin、多柔比星、泰索帝、泰素、依托泊苷、伊立替康、盐酸伊立替康和山梨醇注射剂、托泊替康、紫杉醇、多西他赛、埃坡霉素、他莫昔芬、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、替莫唑胺、环磷酰胺、SCH 66336、R115777、L778123、BMS 214662、易瑞沙、它赛瓦、抗EGFR抗体、格列卫、甘乐能、干扰素、白介素、ara-C、吉西他滨、乌拉莫司汀、氮芥、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、曲他胺、三亚乙基硫代磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链佐星、达卡巴嗪、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、博来霉素、放线菌素D、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、光神霉素、脱氧考福霉素、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、替尼泊苷、17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾酮、泼尼松、氟甲睾酮、丙酸屈他雄酮、睾内酯、醋酸甲地孕酮、甲泼尼龙、甲睾酮、泼尼松龙、曲安西龙、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、醋酸甲羟孕酮、亮丙立德、氟他胺、托瑞米芬、戈舍瑞林、卡铂、羟基脲、安吖啶、丙卡巴肼、米托坦、米托蒽醌、左旋咪唑、诺维本、阿那曲唑、来曲唑、吉西他滨、卡培他滨、瑞罗沙吩、屈洛沙吩、六甲基蜜胺、阿瓦斯丁、赫赛汀、贝克萨、万珂、吉维林、三仙诺、希罗达、卟吩姆、爱必妥、liposomal、塞替派、六甲蜜胺、美法仑、曲妥珠单抗、列若唑、氟维司群、依西美坦、利妥昔单抗、C225、盐酸多柔比星脂质体注射剂、昂他克、deposyt、mylotarg、肯巴斯、cutent、aranesp、neulasta、kepivance、SU11248和PTK787。
52.权利要求48的方法，该方法还包括给予患者放射疗法。
53.一种用于治疗患者的癌症的方法，该方法包括给予患者有效量的至少一种权利要求21的化合物。
54.权利要求53的方法，该方法还包括给予患者有效量的至少一种另外的抗癌药，其中所述另外的抗癌药物与权利要求21的化合物不同。
55.权利要求53的方法，其中所述癌症是膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、脑癌或中枢神经系统的其它癌症、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、头颈部癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、子宫癌、皮肤癌、白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、骨髓瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺滤泡性癌或卡波西肉瘤。
56.权利要求54的方法，其中所述至少一种另外的抗癌药选自细胞生长抑制剂、顺铂、aroplatin、多柔比星、泰索帝、泰素、依托泊苷、伊立替康、盐酸伊立替康和山梨醇注射剂、托泊替康、紫杉醇、多西他赛、埃坡霉素、他莫昔芬、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、替莫唑胺、环磷酰胺、SCH 66336、R115777、L778123、BMS 214662、易瑞沙、它赛瓦、抗EGFR抗体、格列卫、甘乐能、干扰素、白介素、ara-C、吉西他滨、乌拉莫司汀、氮芥、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、曲他胺、三亚乙基硫代磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链佐星、达卡巴嗪、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、博来霉素、放线菌素D、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、光神霉素、脱氧考福霉素、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、替尼泊苷、17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾酮、泼尼松、氟甲睾酮、丙酸屈他雄酮、睾内酯、醋酸甲地孕酮、甲泼尼龙、甲睾酮、泼尼松龙、曲安西龙、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、醋酸甲羟孕酮、亮丙立德、氟他胺、托瑞米芬、戈舍瑞林、卡铂、羟基脲、安吖啶、丙卡巴肼、米托坦、米托蒽醌、左旋咪唑、诺维本、阿那曲唑、来曲唑、吉西他滨、卡培他滨、瑞罗沙吩、屈洛沙吩、六甲基蜜胺、阿瓦斯丁、赫赛汀、贝克萨、万珂、吉维林、三仙诺、希罗达、卟吩姆、爱必妥、liposomal、塞替派、六甲蜜胺、美法仑、曲妥珠单抗、列若唑、氟维司群、依西美坦、利妥昔单抗、C225、盐酸多柔比星脂质体注射剂、昂他克、deposyt、mylotarg、肯巴斯、cutent、aranesp、neulasta、kepivance、SU11248和PTK787。
57.权利要求53的方法，该方法还包括给予患者放射疗法。
全文摘要
本发明涉及新的式(I)苯胺基哌嗪衍生物、包含苯胺基哌嗪衍生物的组合物和使用苯胺基哌嗪衍生物治疗或预防以下疾病的方法增殖性疾病、癌症、抗增殖性疾病、炎症、关节炎、中枢神经系统疾病、心血管疾病、脱发、神经元疾病、缺血性损伤、病毒性疾病、真菌感染或与蛋白激酶活性有关的疾病。
文档编号A61K31/427GK101578275SQ200780049077
公开日2009年11月11日 申请日期2007年10月29日 优先权日2006年10月31日
发明者G·W·小席普, C·C·程, X·黄, T·O·菲斯柯曼, J·S·杜卡, M·里察斯, H·曾, B·孙, P·A·兰迪, T·T·王, P·K·塔迪肯德, M·A·西迪昆, M·M·拉伯里, C·波克, T·J·古奇 申请人:先灵公司