荜茇提取物、其制备方法、其药物组合物及其应用的制作方法

专利名称：：荜茇提取物、其制备方法、其药物组合物及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种荜茇提取物、其制备方法以及包含所述荜茇提取物的药物组合物及其应用。
背景技术：
：荜茇(PiperLongumL.)为胡椒科植物荜茇的近成熟或成熟果实。果实由绿变黑时采收，除去杂质，晒干。荜茇功能与主治为温中散寒，下气止痛。用于院腹冷痛，呕吐，泄泻，偏头疼；外治牙痛。荜茇中化学成分主要有酰胺生物碱、挥发油、酸、酯和木脂素等其它成分。其中研究比较深入的主要有效成分是酰胺生物碱、胡椒酸甲酯和挥发油，其中酰胺生物碱主要在降血脂、心血管、抗惊厥、镇静、镇痛、抗菌等方面发挥作用，而挥发油主要在抗胃溃疡、心血管、抗菌方面发挥作用。荜茇中酰胺生物碱主要有胡椒碱(piperine)、胡椒诺宁碱(piemonaline)、去氢胡椒诺宁碱(dehydropipernonaline)、癸二烯酰胺(N-isobutyldeca-trans-2-trans-4-dienamide)、荜茇宁酰胺(piperlonguminine)、二氢荜茇宁酰胺(dehydropiperlonguminine)、胡椒杀虫胺(pipercide)、奎宁素(guineensine)、十八碳二烯酰胺(N-isobutyl-2E,4E-octadecadienamide)、十八碳三烯酰胺(N-Isobutyl-2E，4E,12Z-octadecatrienamide)、二十碳二烯酰胺(N-Isobutyl-2E,4E-eicosadienamide)、二十碳三烯酰胺(N-Isobutyl-2E,4E,14Z-eicosatrienamide)。荜茇中酸主要含有胡椒酸(pipericacid);酯主要含有胡椒酸甲酯(mythylpiperate)。现代药理研究证明荜茇具有以下方面药理作用1、抗胃溃疡预先给荜茇乙醇提取物能够显著抑制消炎痛、无水乙醇、阿司匹林、醋酸所致大鼠溃疡的形成。口服0.25g/kg荜茇乙醇提取物对大鼠溃疡上述造型的抑制率分别为62.9%，36.9%，38.2%，52.8%。对大鼠结扎幽门型胃溃疡、胃液量、胃液总酸度均有显著抑制作用。对利血平型溃疡抑制率为48.1%，表明它对前列腺素E的合成、代谢有较大影响，可能是增加环氧酶活性使前列腺素E合成和分泌增加，并使胃粘膜免受攻击因子破坏。对胃肠推进功能无显著影响。对兔和大鼠回肠可抑制其张力和收縮力。2、抗惊厥、镇静大鼠ipl50mg/kg，有明显的抗戊四唑的惊厥作用。使惊厥率显著降低，对电惊厥和"听源性发作"也有明显对抗作用。抗惊厥作用强度可与苯妥英钠及三甲双酮相比。小鼠注射25mg/kg，5min的活动次数244次降到95次。与硫喷妥钠有协同作用，有对抗吗啡戊巴比妥对呼吸的抑制作用，这种对抗作用比戊四唑或尼可刹米强且安全。3、抗炎杀菌挥发油对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、蜡样芽胞杆菌、结核杆菌、痢疾杆菌、伤寒沙门氏菌T和B、卵黄黄色八叠菌等及流感病毒均有抑制作用。经110种中草药对变形链球菌的抗菌活性测定发现，荜茇等7种有较强的抗菌活性。4、对心血管的作用对小鼠心肌营养性流量测定的影响小鼠分别ip不同浓度的荜茇制剂，30min后按营养性血流量测定方法，观察小鼠心肌对86Rb的摄取能力。结果随药物浓度增加心肌对86Rb的摄取能力逐渐降低。药物浓度分别为4.4g/kg，4.9g/kg和11.lg/kg时摄取率依次为7.2士4.000}(P<0.01)，6.11士4.21%CP〈0.05)和3.3士4.20%〈P>0.01)。当药物剂量增加至17.8g/kg时，与上述结果相反，能使小鼠心肌摄取率增加到9.5士3.68%(P〈O.OD，这一剂量下的效应相当于目一受体激动剂，能增加冠脉流量，改善心肌代谢。因此，在不同剂量下荜茇可分别作为P—受体阻滞剂和(3—受体激动剂。5、耐缺氧、抗急性心肌缺血、扩冠、抗心率失常荜茇挥发油能提高减压条件下的小鼠耐缺氧能力，用药组生存率为93.1%，对照组为18.6%。常压耐缺氧试验表明，可延长小鼠的存活时间37.8%，提高异丙肾上腺索所致的氧耗量增加的小鼠生存时间，比对照组提高30%，对亚硝酸钠致缺氧小鼠，提高64%的生存时间。延长氰化钾中毒小鼠的死亡时间，与对照比较提高66.6%。对夹闭小鼠两侧颈总动脉造成的组织缺氧死亡时间，与对照组比较，可延长58.3L显著对抗由垂体后叶素引起的家兔T波变化和心率减慢作用。挥发油ig具有显著预防氯仿一肾上腺素所致的心率失常作用；但口服无明显预防氯仿诱发心室颤动作用，但具有与心得安非常显著的抗氯化钡所致心率失常作用；可延长乌头碱所致室性早搏、室性心动过速及室性纤颤和心脏停搏时间；不能显著提高豚鼠心脏对哇巴因中毒耐量，但有一定增加趋势，且显著提高心脏致死的耐量。6、降血脂作用八十年代初，吴恩巴雅尔通过大量动物实验，从ll味蒙药药材中找到了具有明显降血脂作用的一味草药，并发现其它10味都没有明显药效，即胡椒科植物荜茇(PiperLongumL.)。荜茇的提取物格根钦的疗效非常显著，有效组份为荜茇酰胺生物碱和胡椒酸甲酯。7、其它作用荜茇酰胺0.1mg/kg有明显降低犬血压的作用；对雌性大白鼠或大白鼠的抗生育活性为0%，可是用它的果实粉末混合于饲料中，对实验动物有明显作用。目前对荜茇有效成分降血脂作用方面的研究主要集中在提取有效部位、提取有效成分和对有效成分进行结构改造等方面进行，但是体现蒙药荜茇降血脂、抗动脉粥样硬化、抗心肌缺血和对心血管等其它多方面保护作用的还是提取和提纯天然荜茇酰胺生物碱和胡椒酸甲酯混合有效部位的效果最全面和最令人满意。目前荜茇提取物通常使用乙醇提取，通过常规的分离方法如常压或减压回收溶剂等进行分离，通过皂化、柱层析法和高压液相色谱法等多种方法进行纯化。但是，提取得到的荜茇提取物有效成分含量低和有效组分少。CN1322543A中公开了对荜茇进行乙醇提取，并通过皂化来提纯荜茇酰胺生物碱的方法，该方法的缺点是(1)在皂化中使用了有毒和致癌溶剂苯，会造成生产中的环境污染，会引起生产工人中毒，会带来有毒溶剂残留，给产品带来安全性问题；(2)该方法科技含量较低，提取物有效成分含量也较低只有6-8%，因而产品的效果就不会太好，而且需要服用大量的提取物，就更加容易引起安全性问题。在其它文献中公开了对荜茇进行乙醇提取，并通过柱层析法或高压液相色谱法进行纯化，它们都是实验室纯化和分离荜茇中酰胺生物碱单个化合物的方法。缺点是(1)硅胶、氧化铝柱层析和高压液相色谱法不易工业化；(2)大量使用硅胶和氧化铝存在环保问题；(3)产品成本高；(4)很难得到有较多酰胺生物碱的有效部位。
发明内容本发明目的在于提供一种荜茇提取物。本发明第二个目的在于提供包含上述荜茇提取物的药物组合物。本发明第三个目的在于提供上述荜茇提取物的制备方法。本发明第四个目的在于提供上述荜茇提取物或药物组合物用于制备药物的用途，其中所述药物用于治疗高血脂、镇痛、抗炎或胃溃疡。本发明提供的一种荜茇提取物，主要含有胡椒酸甲酯(mythylpiperate)和七种荜茇酰胺化合物和胡椒酸甲酯荜茇宁酰胺(piperbnguminine)，胡椒碱(piperine)，癸二烯酰月安(N-isobutyldeca-trans-2-trans-4-dienamide)，古月椒i若宁碱(piernonaline)，奎宁素(guineensine)，十八碳三烯酰胺(N—Isobutyl-2E，4E,12Z—octadecatrienamide)和二十碳三烯酰胺(N-Isobutyl—2E,4E,14Z-eicosatrienamide)八个化合物，按重量百分比计，八种化合物总重量占荜茇提取物总重量的29.0787.80%，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的0.953.43%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的14.5242.78%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的0.823.11%,癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的1.364.27%，胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的2.968.03%，奎宁素占荜茇提取物总重量的1.043.26%，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的3.1710.94%，二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的4.2512.42%。本发明的上述荜茇提取物，按重量百分比计，其中七种荜茇酰胺化合物和胡椒酸甲酯共八种化合物总重量优选占荜茇提取物总重量的49.6471.89%，其中荜茇宁酰胺优选占荜茇提取物总重量的1.882.54%，胡椒碱优选占荜茇提取物总重量的24.1635.16%，胡椒酸甲酯优选占荜茇提取物总重量的1.722.35%，癸二烯酰胺优选占荜茇提取物总重量的2.212.67%，胡椒诺宁碱优选占荜茇提取物总重量的4.586.75%，奎宁素优选占荜茇提取物总重量的1.832.44%，十八碳三烯酰胺优选占荜茇提取物总重量的6.059.43%，二十碳三烯酰胺优选占荜茇提取物总重量的7.2110.55%。本发明还提供包含如上所述荜茇提取物的药物组合物。所述荜茇提取物的药物组合物，为口服给药、腔肠给药、喷雾给药、注射制剂、输液制剂或透皮吸收的药物制剂。所述荜茇提取物的药物组合物，其中，口服给药的药物制剂选自片剂、胶囊、粉末、颗粒、晶体、溶液、悬液、汤、糖浆、酏剂、茶和咀嚼剂中的一种。所述药物组合物中，所述荜茇提取物可以单独使用，或者和本领域技术人员公知的有类似活性的成分联合使用。另外，本发明的药物组合物也可以包含药学上可接受的载体。这些载体是本领域技术人员公知的。在本发明该方面的一个实施方案中，所述药物组合物配制成口服给药、腔肠给药、喷雾给药、注射制剂、输液制剂和透皮吸收的药物制剂。在一个优选实施方案中，所述口服给药的药物制剂选自片剂、胶囊、粉末、颗粒、晶体、溶液、悬液、汤、糖浆、酏剂、茶和咀嚼剂。这些药物制剂均可以利用本领域技术人员公知的技术来制备。本发明提供的一种制备如上所述荜茇提取物的方法，该方法包括下列步骤步骤(a)将荜茇用浓度为70%100%(v/v)乙醇提取，以得到乙醇提取液；步骤(b)将乙醇提取液减压回收乙醇，以得到流浸膏；步骤(C)将流浸膏放置2496小时析出结晶；步骤(d)将析出结晶后的流浸膏用410倍(w:w)的1020%(w/w)KOH水溶液皂化，以得到荜茇不皂化物；步骤(e)将荜茇不皂化物用条件为压力932MPa，流速26mL/min，荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积ml^l:ll:4，温度为3577。C的C02超临界精馏法进行分离纯化，得到所述的荜茇提取物。如上所述荜茇提取物的制备方法，其中，步骤(a)中所用乙醇浓度为95。/。(v/v);步骤(c)中放置析出结晶的时间为48小时；步骤(d)中所用KOH浓度为15。/。(w/w)，KOH用量为6倍(w:w);步骤(e)中C02超临界精馏法工艺条件为压力-11.5MPa，流速-3mL/min，荜茇提取物质量g:乙醇体积mL-l:2，温度梯度二35-49-63-77""C。本发明的有益效果，主要包括1、本发明提供的荜茇提取物有效成分含量高和有效组分包含多。荜茇中降血脂有效成分为酰胺生物碱和胡椒酸甲酯，酰胺生物碱主要有胡椒碱(piperine)、胡椒诺宁碱(piemonaline)、去氢胡椒诺宁碱(dehydropipernonaline)、癸二烯酰胺(N—isobutyldeca-trans-2—trans~4~dienamide)、荜茇宁酰胺(piperlonguminine)、二氢荜茇宁酰胺(dehydropiperlonguminine)、胡椒杀虫胺(pipercide)、奎宁素(guineensine)、十八碳二烯酰胺(N-isobutyl-2E,4E"Octadecadienamide)、十八碳三烯酰胺(N-Isobuty1—2E，4E，12Z"Octadecatrienamide)、二十碳二烯酰胺(N—Isobutyl-2E，4E—eicosadienamide)、二十碳三烯酰胺(N—Isobutyl-2E,4E，14Z-eicosatrienamide)。本发明在醇提、皂化后控制条件进行超临界萃取和纯化，最大限度地保留荜茇酰胺生物碱所有成分和胡椒酸甲酯的同时高效纯化浓縮有效组份含量。因此，在本发明的荜茇提取物中，其含有荜茇宁酰胺(piperlonguminine)，胡椒碱(piperine)，胡椒酸甲酯(mythylpiperate),癸二烯酰胺(N-isobutyldeca-trans-2—trans4~dienamide)，胡椒诺宁碱(piemonaline)，奎宁素(guineensine)，十八碳三烯酰胺(N-Isobutyl—SE^EjaZ-octadecatrienamide)及二十碳三烯酰胺(N—Isobutyl—2E,4E,14Z~eicosatrienamide)八个化合物，八种化合物总重量占荜茇提取物总重量的重量百分比最高为87.80%，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比最高为3.43%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比最高为42.78%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比最高为3.11%，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比最高为4.27%，胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比最高为8.03%，奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比最高为3.26%，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比最高为10.94%，及二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比最高为12.42%。2、本发明使用KOH水溶液作为皂化剂，避免使用有机溶剂带来溶剂残留和毒性。3、本发明通过C02超临界精馏法这一绿色纯化工艺可以使有效组份充分富集，同时又避免的传统纯化工艺带来的有机溶剂残留、重金属残留或环保问题，保证了产品的安全性、有效性和环境保护的统一。图1是荜茇宁酰胺、胡椒碱和胡椒酸甲酯标准对照品HPLC图谱；图2是癸二烯酰胺、胡椒诺宁碱、奎宁素、十八碳三烯酰胺和二十碳三烯酰胺标准对照品HPLC图谱；图3是荜茇提取物HPLC图谱；图4是C02超临界精馏分离纯化荜茇提取物流程图。具体实施例方式以下通过具体实施例，对本发明做进一步说明。本领域的技术人员应该理解，这些实施例只是用于说明目的，而不限制本发明的范围。本发明的保护范围只受权利要求书的限制。在不背离权利要求书范围的条件下，本领域的技术人员可以对本发明的各个方面进行各种修改和改进，这些修改和改进也属于本发明的保护范围。另外，需要注意的是，除非特别指明，下面实施例中所用的各种材料和试剂都是本领域中常用的材料和试剂，可以通过常规的商业途径获得；所用方法均为本领域技术人员公知的常规方法。另外，除非特别指明，溶液的百分含量为体积百分含量，即％(v/v),倍数是重量倍数，其它物质的百分含量均为重量/重量百分比，即％(w/w)。实施例l称取荜茇7.37kg(购自河北安国)，20目粉碎，加入70%乙醇58.96L，浸泡过夜，室温搅拌提取4小时，抽滤，第一次提取后的残渣分别进行第二次提取，每份加入70%乙醇44.22L，室温搅拌提取2h，抽滤，合并两次提取滤液，减压浓縮至干，得到浸膏(A)，称重880g;浸膏(A)，放置，析出沉淀物胡椒碱，抽滤，去除沉淀物，母液在水浴上挥去残余乙醇至无醇味，得到荜茇乙醇提取物浸膏(B)750g，并进行含量测定，结果荜茇乙醇提取物浸膏(B)的八种有效成分总含量14.11%。配制10。/。KOH溶液2.2L，称取乙醇提取物浸膏550g(含量为14.11%)，加入配好的KOH溶液，振摇30分钟，放置3小时，放出下层碱液，上层(不皂化层)溶液加入无盐水2.5L，振摇5分钟，放置半小时，放掉水层，反复4一6次，将不皂化物洗至中性，将上层油状物，并用95%乙醇洗干净，减压浓縮至干，不皂化物浸膏称重(C)得420.5g，并进行含量测定，结果不皂化物浸膏(C)的八种有效成分总含量21.53%。使用超临界精馏工艺(见附图4)进行超临界精馏分离提纯，具体操作步骤和条件如下取不皂化物(C)420.5g，加入4倍量无水乙醇，搅拌均匀后进样进行分离纯化，压力=9(MPa)，流速6mL/min，浓度=1:4(荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL)，温度梯度=35-39-59-77°〇。实验结束后以800mL无水乙醇洗涤分馏柱，洗涤溶液合并到产品中。减压移除乙醇后得到荜茇提取物(D)252.8g。含量测定八种化合物总重量约占荜茇提取物总重量的29.07%，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为0.95%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为14.52%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为0.82%，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.36%,胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.96%，奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.04%，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为3.17%，二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为4.25%。含量测定分析方法(见附图1、2、3):本专利中所有含量测定都使用高效液相色谱法(HPLC)中外标法进行测定，所用仪器为高效液相色谱仪，Agilent1100泵，1100二级管列阵检测器，1100自动进样器，Agilent色谱工作站。所用对照品共八个，其中荜茇宁酰胺(批号20031110)，胡椒酸甲酯(批号20040202)，癸二烯酰胺(批号20040107)，胡椒诺宁碱(批号20040227),奎宁素(批号20040115)，十八碳三烯酰胺(批号20040321)及二十碳三烯酰胺(批号20040322)以上七个为自制；另一个胡椒碱对照品从中国药品生物制品检定所购买，批号0775-9702，含量测定用。实施例2称取荜茇7.37kg(购自河北安国)，20目粉碎，加入95%乙醇58.96L，浸泡过夜，室温搅拌提取4小时，抽滤，第一次提取后的残渣分别进行第二次提取，每份加入95%乙醇44.22L，室温搅拌提取2h，抽滤，合并两次提取滤液，减压浓縮至干，得到浸膏(A)，称重662g;浸膏(A)，放置，析出沉淀物胡椒碱，抽滤，去除沉淀物，母液在水浴上挥去残余乙醇至无醇味，得到荜茇乙醇提取物浸膏(B)556g，并进行含量测定，结果荜茇乙醇提取物浸膏(B)的八种有效成分总含量22.45%。配制8%KOH溶液3.3L，称取乙醇提取物浸膏556g(含量为23.11%)，加入配好的KOH溶液，振摇30分钟，放置3小时，放出下层碱液，上层(不皂化层)溶液加入无盐水2.5L，振摇5分钟，放置半小时，放掉水层，反复4一6次，将不皂化物洗至中性，将上层油状物，并用95%乙醇洗干净，减压浓縮至干，不皂化物浸膏称重(C)得305.6g，并进行含量测定，结果不皂化物浸膏(C)的八种有效成分总含量29.89%。使用超临界精馏工艺(见附图4)进行超临界精馏提纯，具体操作步骤和条件如下取不皂化物(C)305.6g，加入2倍量无水乙醇，搅拌均匀后进样进行分离纯化，压力=28(MPa)，流速2mL/min，浓度=1:2(荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL)，温度梯度=35-45-59-71"。实验结束后以800mL无水乙醇洗涤分馏柱，洗涤溶液合并到产品中。减压移除乙醇后得到荜茇提取物(D)132.6g。含量测定八种化合物总重量约占荜茇提取物总重量的重量百分比为39.77%，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.49%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为19.52%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.04%，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.78%,胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为3.86%，奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.46%，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为4.77%，二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为5.85%。实施例3称取荜茇7.37kg(购自河北安国)，20目粉碎，加入100%乙醇58.96L，浸泡过夜，室温搅拌提取4小时，抽滤，第一次提取后的残渣分别进行第二次提取，每份加入100%乙醇44.22L，室温搅拌提取2h，抽滤，合并两次提取滤液，减压浓縮至干，得到浸膏(A),称重650g;浸膏(A)，放置，析出沉淀物胡椒碱，抽滤，去除沉淀物，母液在水浴上挥去残余乙醇至无醇味，得到荜茇乙醇提取物浸膏(B)550g，并进行含量测定，结果荜茇乙醇提取物浸膏(B)的八种有效成分总含量20.67%。配制20%KOH溶液5.5L，称取乙醇提取物浸膏550g(含量为20.67%)，加入配好的KOH溶液，振摇30分钟，放置3小时，放出下层碱液，上层(不皂化层)溶液加入无盐水2.5L，振摇5分钟，放置半小时，放掉水层，反复4一6次，将不皂化物洗至中性，将上层油状物，并用95%乙醇洗干净，减压浓縮至干，不皂化物浸膏称重(C)得320.5g，并进行含量测定，结果不皂化物浸膏(C)的八种有效成分总含量30.65%。使用超临界精馏工艺(见附图4)进行超临界精馏提纯，具体操作步骤和条件如下取不皂化物(C)320.5g，加入2倍量无水乙醇，搅拌均匀后进样进行分离纯化，压力=32(MPa)，流速=411711±1，浓度=1:2(荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL)，温度梯度=35-45-59-711:。实验结束后以800mL无水乙醇洗涤分馏柱，洗涤溶液合并到产品中。减压移除乙醇后得到荜茇提取物(D)141.3g。含量测定八种化合物总重量约占荜茇提取物总重量的41.65%,其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.61%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为20.15%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.23%,癸二烯酰胺占荜发提取物总重量的重量百分比为2.04%，胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为3.94%,奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.75%，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为5.06%，二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为5.87%。实施例4称取荜茇7.37kg(购自河北安国)，20目粉碎，加入95%乙醇58.96L，浸泡过夜，室温搅拌提取4小时，抽滤，第一次提取后的残渣分别进行第二次提取，每份加入95%乙醇4422L，室温搅拌提取2h，抽滤，合并两次提取滤液，减压浓縮至干，得到浸膏(A)，称重680g;浸膏(A)，放置，析出沉淀物胡椒碱，抽滤，去除沉淀物，母液在水浴上挥去残余乙醇至无醇味，得到荜茇乙醇提取物浸膏(B)540g，并进行含量测定，结果荜茇乙醇提取物浸膏(B)的八种有效成分总含量23.11%。配制10。/。KOH溶液5.5L，称取乙醇提取物浸膏540g(含量为23.11%)，加入配好的KOH溶液，振摇30分钟，放置3小时，放出下层碱液，上层(不皂化层)溶液加入无盐水5L，振摇5分钟，放置半小时，放掉水层，反复4_6次，将不皂化物洗至中性，将上层油状物，并用95%乙醇洗干净，减压浓縮至干，不皂化物浸膏称重(C)得242.5g，并进行含量测定，结果不皂化物浸膏(C)的八种有效成分总含量36.42%。使用超临界精馏工艺(见附图4)进行超临界精馏提纯，具体操作步骤和条件如下取不皂化物(C)242.5g，加入2倍量无水乙醇，搅拌均匀后进样进行分离纯化，压力=19.5(MPa)，流速z4mL/min，浓度=1:2(荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL)，温度梯度二35-43-51-71'C。每次实验结束后以800mL无水乙醇洗漆分馏柱，洗涤溶液合并到产品中。减压移除乙醇后得到荜茇提取物(D)162.8g。含量测定八种化合物总重量约占荜茇提取物总重量的重量百分比为49.64%，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.88%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为24.16%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.72%，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.21%，胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为4.58%，奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为.1.83%,十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为6.05%，二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为7.21%。实施例5称取荜茇7.37kg(购自河北安国)，20目粉碎，加入95%乙醇58.96L，浸泡过夜，室温搅拌提取4小时，抽滤，第一次提取后的残渣分别进行第二次提取，每份加入95%乙醇44.22L，室温搅拌提取2h，抽滤，合并两次提取滤液，减压浓縮至干，得到浸膏(A)，称重655g;浸膏(A)，放置，析出沉淀物胡椒碱，抽滤，去除沉淀物，母液在水浴上挥去残余乙醇至无醇味，得到荜茇乙醇提取物浸膏(B)546g，并进行含量测定，结果荜茇乙醇提取物浸膏(B)的八种有效成分总含量24.03%。配制15%K0H溶液5.5L，称取乙醇提取物浸膏546g(含量为24.03%)，加入配好的KOH溶液，振摇30分钟，放置3小时，放出下层碱液，上层(不皂化层)溶液加入无盐水5L，振摇5分钟，放置半小时，放掉水层，反复4一6次，将不皂化物洗至中性，将上层油状物，并用95%乙醇洗干净，减压浓縮至干，不皂化物浸膏称重(C)得242.5g，并进行含量测定，结果不皂化物浸膏(C)的八种有效成分总含量36.42%。使用超临界精馏工艺(见附图4)进行超临界精馏提纯，具体操作步骤和条件如下取不皂化物(C)242.5g，加入2倍量无水乙醇，搅拌均匀后进样进行分离纯化，压力=19(MPa)，流速二4mL/min，浓度=1:2(荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL)，温度梯度二35-43-51-77'C。每次实验结束后以800mL无水乙醇洗涤分馏柱，洗涤溶液合并到产品中。减压移除乙醇后得到荜茇提取物(D)162.8g。含量测定八种化合物总重量约占荜茇提取物总重量的重量百分比为51.73%，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.15%,胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为24.32%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.94%，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.56%，胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为4.84%，奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.06%，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为6.41%，及二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为7.45%。实施例6取200kg荜茇(购于河北安国)，粉碎(FFC-330型瓜型粉碎机)，20目过筛，用8倍量(1600L)95。/。乙醇浸泡24h，常温搅拌4h，滤过，回收乙醇，滤渣再用6倍量(1200L)95%乙醇提取第二次，常温搅拌2h,过滤，合并第一、二次滤液，约2500L.减压回收滤液中的乙醇得到提取物浸膏(A)25.5kg。浸膏(A),放置48小时，析出沉淀物胡椒碱，抽滤，得到沉淀物为1.0kg，母液在水浴上挥去残余乙醇至无醇味，得到乙醇提取物浸膏(B)14kg，并进行含量测定，结果荜茇乙醇提取物浸膏(B)的八种有效成分总含量34.28%。取乙醇提取物浸膏(B)14kg，加6倍量(84kg)15。/。的KOH水溶液，搅拌10min后，放出皂化液到分离柱内，放置过夜，后弃去碱液，上层(不皂化层)溶液加入纯水50L，搅拌10分钟，放置过夜后，放出水层，不皂化物放入搅拌锅内，加入纯水50L,搅拌10分钟，放置30分钟，分出水层，反复4一6次，将不皂化物洗至中性，用95%乙醇将搅拌锅内不皂化物洗净，合并乙醇液及不皂化物减压蒸出乙醇及水分，得到不皂化物浸膏(C)7.3kg。并进行含量测定，结果不皂化物浸膏(C)的八种有效成分总含量53.36%。使用超临界精馏工艺(见附图4)进行超临界精馏提纯，具体操作步骤和条件如下取不皂化物浸膏(C)7.3kg，加入2倍量无水乙醇，搅拌均匀后进样进行分离纯化，压力=11.5(MPa)，流速-3mL/min，浓度=1:2(荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL)，温度梯度二35-49-63-77'C。实验结束后以800mL无水乙醇洗涤分馏柱，洗涤溶液合并到产品中。减压移除乙醇得到荜茇提取物(D)5.85kg。含量测定八种化合物总重量约占荜茇提取物总重量的重量百分比为61.04%，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.22%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为29.63%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.83%，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.40%，胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为5.90%，奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.99%，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为8.09%，及二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为8.98%。实施例7取200kg荜茇(购于河北安国)，粉碎(FFC-330型瓜型粉碎机)，20目过筛,用8倍量95%乙醇浸泡2411，常温搅拌4h，滤过，回收乙醇，滤渣再用6倍量95%乙醇提取第二次,常温搅拌2h，过滤,合并第一、二次滤液,.减压回收滤液中的乙醇得到提取物浸膏(A)27.3kg。浸膏(A)，放置，析出沉淀物胡椒碱，抽滤，得到沉淀物为1847g，母液在水浴上挥去残余乙醇至无醇味，得到乙醇提取物浸膏(B)18kg，并进行含量测定，结果荜茇乙醇提取物浸膏(B)的八种有效成分总含量28.02%。取乙醇提取物浸膏(B)18kg，加6倍量(108kg)15Q/。的KOH水溶液，搅拌10min后，放出皂化液到分离柱内，放置过夜，后弃去碱液，上层(不皂化层)溶液加入纯水50L，搅拌10分钟，放置过夜后，放出水层，不皂化物放入搅拌锅内，加入纯水50L,搅拌10分钟，放置30分钟，分出水层，反复4一6次，将不皂化物洗至中性，用95%乙醇将搅拌锅内不.皂化物洗净，合并乙醇液及不皂化物减压蒸出乙醇及水分，得到不皂化物浸膏(C)7.9kg。并进行含量测定，结果不皂化物浸膏(C)的八种有效成分总含量49.56%。使用自行研制的带有四节精馏柱的超临界精馏工艺(见附图4)进行超临界精馏提纯，具体操作步骤和条件如下取不皂化物浸膏(C)7.9kg，加入2倍量无水乙醇，搅拌均匀后进样进行分离纯化，压力=11.5(MPa)，流速二3mL/min，浓度=1:2(荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL)，温度梯度^35-49-63-77'C。每次实验结束后以800mL无水乙醇洗涤分馏柱，洗涤溶液合并到产品中。减压移除乙醇得到荜茇提取物(D)6.11kg。含量测定八种化合物总重量约占荜茇提取物总重量的重量百分比为59.99%，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.28%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为28.25%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.87%，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.27%,胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为5.86%，奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.04%，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为8.19%，及二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为9.23%。实施例8取200kg荜茇(购于河北安国)，粉碎(FFC-330型瓜型粉碎机)，20目过筛,用8倍量95%乙醇浸泡24h，常温搅拌4h，滤过，回收乙醇，滤渣再用6倍量95%乙醇提取第二次,常温搅拌2h,过滤,合并第一、二次滤液，减压回收滤液中的乙醇得到提取物浸膏(A)26.1kg。浸膏(A)，放置，析出沉淀物胡椒碱，抽滤，得到沉淀物为1869g，母液在水浴上挥去残余乙醇至无醇味，得到乙醇提取物浸膏(B)17.4kg，并进行含量测定，结果荜茇乙醇提取物浸膏(B)的八种有效成分总含量27.45%。取乙醇提取物浸膏(B)17.4kg，加6倍量15。/。的KOH水溶液，搅拌10min后，放出皂化液到分离柱内，放置过夜，后弃去碱液，上层(不皂化层)溶液加入纯水50L，搅拌10分钟，放置过夜后，放出水层，不皂化物放入搅拌锅内，加入纯水50L,搅拌10分钟，放置30分钟，分出水层，反复4一6次，将不皂化物洗至中性，用95%乙醇将搅拌锅内不皂化物洗净，合并乙醇液及不皂化物减压蒸出乙醇及水分，得到不皂化物浸膏(C)6.9kg。并进行含量测定，结果不皂化物浸膏(C)的八种有效成分总含量48.26%。使用超临界精馏工艺(见附图4)进行超临界精馏提纯，具体操作步骤和条件如下取不皂化物浸膏(C)6.9kg，加入1.5倍量无水乙醇，搅拌均匀后进样进行分离纯化，压力=19.5(MPa)，流速二3mL/min,浓度=1:1.5(荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL)，温度梯度=41-51-63-77匸。每次实验结束后以800mL无水乙醇洗涤分馏柱，洗涤溶液合并到产品中。减压移除乙醇得到荜茇提取物(D)4.22kg。含量测定八种化合物总重量约占荜茇提取物总重量的重量百分比为69.86%，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.50%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为34.07%,胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.31%，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.60%，胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为6.62%,奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.36%,十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为9.22%，及二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为10.18%。实施例9取200kg荜茇(购于河北安国)，粉碎(FFC-330型瓜型粉碎机)，20目过筛，用8倍量95%乙醇浸泡24h，常温搅拌4h，滤过，回收乙醇，滤渣再用6倍量95%乙醇提取第二次，常温搅拌2h,过滤，合并第一、二次滤液，减压回收滤液中的乙醇得到提取物浸膏(A)24.8kg。浸膏(A)，放置，析出沉淀物胡椒碱，抽滤，得到沉淀物为1641g，母液在水浴上挥去残余乙醇至无醇味，得到乙醇提取物浸膏(B)16.7kg，并进行含量测定，结果荜茇乙醇提取物浸膏(B)的八种有效成分总含量29.33%。取乙醇提取物浸膏(B)16.7kg，加6倍量(100kg)15%的KOH水溶液，搅拌10min后，放出皂化液到分离柱内，放置过夜，后弃去碱液，上层(不皂化层)溶液加入纯水50L，搅拌10分钟，放置过夜后，放出水层，不皂化物放入搅拌锅内，加入纯水50L,搅拌10分钟，放置30分钟，分出水层，反复4一6次，将不皂化物洗至中性，用95%乙醇将搅拌锅内不皂化物洗净，合并乙醇液及不皂化物减压蒸出乙醇及水分，得到不皂化物浸膏(C)6.2kg。并进行含量测定，结果不皂化物浸膏(C)的八种有效成分总含量50.39%。使用超临界精馏工艺(见附图4)进行超临界精馏提纯，具体操作步骤和条件如下取不皂化物浸膏(C)6.2kg，加入1.5倍量无水乙醇，搅拌均匀后进样进行分离纯化，压力=19.5(MPa)，流速二3mL/min，浓度=1:1.5(荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL),温度梯度=43-51-63-77匸。每次实验结束后以800mL无水乙醇洗涤分馏柱，洗涤溶液合并到产品中。减压移除乙醇得到荜茇提取物(D)4.26kg。含量测定八种化合物总重量约占荜茇提取物总重量的重量百分比为71.89%，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.54%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为35.16%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.35%，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.67%，胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为6.75%,奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.44%，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为9.43%，及二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为10.55%。实施例10取200kg荜茇(购于河北安国)，粉碎(FFC-330型瓜型粉碎机)，20目过筛,用8倍量95。/。乙醇浸泡24h，常温搅拌4h，滤过，回收乙醇，滤渣再用6倍量95%乙醇提取第二次,常温搅拌2h,过滤,合并第一、二次滤液，减压回收滤液中的乙醇得到提取物浸膏(A)22.8kg。浸膏(A)，放置，析出沉淀物胡椒碱，抽滤，得到沉淀物为2013g，母液在水浴上挥去残余乙醇至无醇味，得到乙醇提取物浸膏(B)15.8kg，并进行含量测定，结果荜茇乙醇提取物浸膏(B)的八种有效成分总含量26.34%。取乙醇提取物浸膏(B)15.8kg，加6倍量(95kg)15。/。的KOH水溶液，搅拌10min后，放出皂化液到分离柱内，放置过夜，后弃去碱液，上层(不皂化层)溶液加入纯水50L，搅拌10分钟，放置过夜后，放出水层，不皂化物放入搅拌锅内，加入纯水50L,搅拌10分钟，放置30分钟，分出水层，反复4一6次，将不皂化物洗至中性，用95%乙醇将搅拌锅内不皂化物洗净，合并乙醇液及不皂化物减压蒸出乙醇及水分，得到不皂化物浸膏(C)6.1kg。并进行含量测定，结果不皂化物浸膏(C)的八种有效成分总含量47.28%。使用超临界精馏工艺(见附图4)进行超临界精馏提纯，具体操作步骤和条件如下取不皂化物浸膏(C)6.1kg，加入1.2倍量无水乙醇，搅拌均匀后进样进行分离纯化，压力=23(MPa)，流速二2.5mL/min，浓度=1:1.2(荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL)，温度梯度=35-49-63-77°0。每次实验结束后以800mL无水乙醇洗涤分馏柱，洗涤溶液合并到产品中。减压移除乙醇得到荜茇提取物(D)3.15kg。含量测定八种化合物总重量约占荜茇提取物总重量的重量百分比为79.75%，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.88%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为38.85%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.81%，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为3.59%，胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为7.41%，奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.99%，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为9.98%，及二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为11.24%。实施例11取200kg荜茇(购于河北安国)，粉碎(FFC-330型瓜型粉碎机)，20目过筛,用8倍量95y。乙醇浸泡24h，常温搅拌4h，滤过，回收乙醇，滤渣再用6倍量95%乙醇提取第二次,常温搅拌2h，过滤,合并第一、二次滤液，减压回收滤液中的乙醇得到提取物浸膏(A)27.9kg。浸膏(A)，放置，析出沉淀物胡椒碱，抽滤，得到沉淀物为1947g，母液在水浴上挥去残余乙醇至无醇味，得到乙醇提取物浸膏(B)18.7kg，并进行含量测定，结果荜茇乙醇提取物浸膏(B)的八种有效成分总含量28.43%。取乙醇提取物浸膏(B)18.7kg，加6倍量(112kg)15。/。的KOH水溶液，搅拌10min后，放出皂化液到分离柱内，放置过夜，后弃去碱液，上层(不皂化层)溶液加入纯水50L，搅拌10分钟，放置过夜后，放出水层，不皂化物放入搅拌锅内，加入纯水50L,搅拌10分钟，放置30分钟，分出水层，反复4一6次，将不皂化物洗至中性，用95%乙醇将搅拌锅内不皂化物洗净，合并乙醇液及不皂化物减压蒸出乙醇及水分，得到不皂化物浸膏(C)8.2kg。并进行含量测定，结果不皂化物浸膏(C)的八种有效成分总含量47.56%。使用超临界精馏工艺(见附图4)进行超临界精馏提纯，具体操作步骤和条件如下取不皂化物浸膏(C)8.2kg，加入1.2倍量无水乙醇，搅拌均匀后进样进行分离纯化，压力=23(MPa)，流速二2.0mL/min，浓度=1:1.2(荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL)，温度梯度二35-49-63-77'C。每次实验结束后以800mL无水乙醇洗涤分馏柱，洗涤溶液合并到产品中。减压移除乙醇得到荜茇提取物(D)2.91kg。含量测定八种化合物总重量约占荜茇提取物总重量的重量百分比为81.39%,其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.96%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为39.14%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.89%，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为3.77%，胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为7.65%，奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为3.02%，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为10.33%，及二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为11.63%。实施例12取200kg荜茇(购于河北安国)，粉碎(FFC-330型瓜型粉碎机)，20目过筛,用8倍量95%乙醇浸泡24h，常温搅拌4h，滤过，回收乙醇，滤渣再用6倍量95。/。乙醇提取第二次,常温搅拌2h，过滤,合并第一、二次滤液，减压回收滤液中的乙醇得到提取物浸膏(A)26.25kg。浸膏(A)，放置，析出沉淀物胡椒碱，抽滤，得到沉淀物为1539g，母液在水浴上挥去残余乙醇至无醇味，得到乙醇提取物浸膏(B)15.2kg，并进行含量测定，结果荜茇乙醇提取物浸膏(B)的八种有效成分总含量27.47%。取乙醇提取物浸膏(B)15.2kg，加6倍量(91.2kg)15%的KOH水溶液，搅拌10min后，放出皂化液到分离柱内，放置过夜，后弃去碱液，上层(不皂化层)溶液加入纯水50L，搅拌10分钟，放置过夜后，放出水层，不皂化物放入搅拌锅内，加入纯水50L,搅拌10分钟，放置30分钟，分出水层，反复4一6次，将不皂化物洗至中性，用95%乙醇将搅拌锅内不皂化物洗净，合并乙醇液及不皂化物减压蒸出乙醇及水分，得到不皂化物浸膏(C)5.6kg。并进行含量测定，结果不皂化物浸膏(C)的八种有效成分总含量46.55%。使用超临界精馏工艺(见附图4)进行超临界精馏提纯，具体操作步骤和条件如下取不皂化物浸膏(C)5.6kg，加入1.0倍量无水乙醇，搅拌均匀后进样进行分离纯化，压力二27(MPa)，流速二2.5mL/min，浓度=1:1.0(荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL)，温度梯度=41-59-69-77°<:。每次实验结束后以800mL无水乙醇洗涤分馏柱，洗涤溶液合并到产品中。减压移除乙醇得到荜茇提取物(D)1.66kg。含量测定八种化合物总重量约占荜茇提取物总重量的重量百分比为87.80%，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为3.26%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为42.78%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为3.11%，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为4.21%，胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为8.03%，奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为3.26%，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为10.85%，及二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为12.30%。实施例13取200kg荜茇(购于河北安国)，粉碎(FFC-330型瓜型粉碎机)，20目过筛，用8倍量95%乙醇浸泡24h，常温搅拌4h，滤过，回收乙醇，滤渣再用6倍量95%乙醇提取第二次,常温搅拌2h,过滤,合并第一、二次滤液，减压回收滤液中的乙醇得到提取物浸膏(A)22.3kg。浸膏(A)，放置，析出沉淀物胡椒碱，抽滤，得到沉淀物为2159g，母液在水浴上挥去残余乙醇至无醇味，得到乙醇提取物浸膏(B)14.8kg，并进行含量测定，结果荜茇乙醇提取物浸膏(B)的八种有效成分总含量25.98%。取乙醇提取物浸膏(B)14.8kg，加6倍量(89kg)15。/。的KOH水溶液，搅拌10min后，放出皂化液到分离柱内，放置过夜，后弃去碱液，上层(不皂化层)溶液加入纯水50L，搅拌10分钟，放置过夜后，放出水层，不皂化物放入搅拌锅内，加入纯水50L,搅拌10分钟，放置30分钟，分出水层，反复4一6次，将不皂化物洗至中性，用95%乙醇将搅拌锅内不皂化物洗净，合并乙醇液及不皂化物减压蒸出乙醇及水分，得到不皂化物浸膏(C)5.1kg。并进行含量测定，结果不皂化物浸膏(C)的八种有效成分总含量49.24%。使用超临界精馏工艺(见附图4)进行超临界精馏提纯，具体操作步骤和条件如下取不皂化物浸膏(C)5.1kg，加入1.0倍量无水乙醇，搅拌均匀后进样进行分离纯化，压力=32(MPa)，流速二2.0mL/min，浓度=1:1.0(荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL)，温度梯度二41-59-69-77'C。每次实验结束后以800mL无水乙醇洗涤分馏柱，洗涤溶液合并到产品中。减压移除乙醇得到荜茇提取物(D)1.72kg。含量测定八种化合物总重量约占荜茇提取物总重量的重量百分比为87.14%,其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为3.43%，胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为42.20%，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为3.01%，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为3.99%，胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为7.94%，奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为3.21%，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为10.94%，及二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为12.42%。实施例14中药荜茇的有效部位是经超临界流体萃取的萃取物，具有降血脂作用。该萃取物含有胡椒碱，胡椒碱甲酯等多种成分，内含挥发油，呈半固体状。经分析该萃取物对光不稳定，挥发油易挥发，为了将其制成质量稳定可控的固体制剂，拟采用卩-环糊精包合工艺将其制成包合物。为了选择最佳包合工艺，本文考察了饱和水溶液法、手工研磨法、球磨机法制备荜茇提取物-卩-环糊精包合物的最佳工艺条件，现论述如下1、饱和水溶液法取圆底烧瓶加入一定体积的蒸馏水，如热至8(TC以上，再将一定量的P-环糊精溶解于其中，然后降至规定温度，使成饱和溶液。取0.5g原料药溶于3ml95。/。的乙醇溶液中，然后逐滴加入，搅拌下滴加至上述饱和溶液中。搅拌一定时间后，静置0~4X:冷藏24h后，滤过，用少量蒸馏水洗涤沉淀。自然干燥后再用少量乙醚洗涤包合物，然后将包合物置于真空干燥箱中室温干燥24h即得类白色的包合物。2、手工研磨法取0.5g原料药溶于3ml95%的乙醇溶液。取一定量的(3-环糊精于研钵中，加入一定比例的蒸馏水，研磨成糊状，然后在研磨下逐滴加入原料药的乙醇溶液。研磨一定时间后，滤过，并用少量蒸馏水洗涤沉淀。自然干燥后再用少量乙醚洗涤包合物，然后将包合物置于以五氧化二磷为干燥剂的真空干燥箱中室温干燥24h，即得类白色的包合物。3、球磨机法取一定量的P-环糊精加入球磨机中，再加入一定比例的蒸馏水。取0.5g原料药溶于3m195。/。的乙醇溶液中，然后加入球磨机中。设定研磨时间，启动球磨机。研磨结束后取出，其后操作同手工研磨法。3种方法在各自的最佳包合工艺下进行3次重复实验，对其包合效果进行比较。经重复试验证实各最佳包合工艺稳定可行，包合率和产率分别可达到70%和75%以上。饱和水溶液法的包合率最高，为79.21%,但产率相对较低约为75.23%;手工研磨法产率最高，为86.7%，包合率为78.66%，其包合率与饱和水溶液法的包合率相近；球磨机法包合率相对较低(包合率为74.68%),产率为82.23%。在优化出的最佳包合工艺中，P-环糊精与药物的最佳比例在3种方法中是一致的，即卩-CD与荜茇提取物的比例为8:1(g'g-l)。这可以用药物与P-环糊精的投料比与药物的性质有关来解释，同一种药物，性质相同，因此包合方法虽然不同但其投料比却相同。包合物的产率与水的用量有关。饱和水溶液法水的用量是手工研磨法和球磨机法水用量的22倍，因此饱和水溶液法的产率明显低于后2种方法，虽然经冷藏，但溶解于其中被弃掉的包合物仍大于后两者，因此造成产率较低，有人认为可以通过加入有机溶剂的方法将溶于水中的包合物尽可能多的"挤出"，而国外有文献报道[4]将其母液循环使用，可以减少水的用量，提高产率。3种方法的包合率都达到了70%以上，产率都达到了75%以上，都是较好的包合方法。手工研磨法的包合率和产率都较高，简便易行，适合于实验室筛选工艺，但此法只能手工操作，不适合工业化生产；球磨机法效率高，可以用于工业化生产，但需要有设备条件；饱和水溶液法的包合率较高，产率虽较低，但工业中可通过循环使用母液来提高产率。因此，实验室和工厂可以根据自身的仪器设备条件及需要选用不同的方法。实施例15:含荜茇提取物的片剂的制备配方每1000片配方组成如下(3-环糊精包合物131.6g(含荜茇提取物20g)交联PVP40g乳糖20g微晶纤维素8()g硬脂酸镁"8适量1%的HPMC的25%乙醇溶液按选定配方、工艺进行中试，取荜茇提取物的(3-环糊精包合物1316g;交联PVP400g;乳糖200g;微晶纤维素800g，分别过100目筛，准确称量后过80目筛混合三遍，用1%的HPMC(w/v，25%乙醇配制)制软材，16目筛制粒，在50。C烘箱内干燥，整粒(控制颗粒水分含量在3%左右)，将硬脂酸镁14g过80目筛，与颗粒混匀后，压片，理论投药量为10000片，成品为9590片，包水溶性白色薄膜衣。包衣材料欧巴代购于上海卡乐康包衣技术有限公司(产品代号为85G68918)。实施例16:荜茇提取物对高血脂大鼠血脂的影响为了观察本发明的荜茇提取物降血脂作用，将50只大鼠随机分成5组对照组、高脂饲料组(模型组)、荜茇提取物小剂量(20mg'kg+cf1)、中剂量(60mg'kg"'d—1)、大剂量(120mglg+cT1)+高脂词料组，测定荜茇提取物对血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)以及低密度脂蛋白(LDL)的影响。结果表明实施例1一13的提取物有明显的降血脂效应。以实施例5得到的荜茇提取物为例，由表1可见，模型组与对照组相比，TC与TG含量显著升高，说明造模成功；而给予荜茇提取物的各组TC、TG含量与模型组比较有显著性降低，分别为尸<0.01禾口尸<0.05;HDL-C的含量与模型组比较尸<0.05，且随荜茇提取物的含量增加而增加，具有剂量依赖性；LDL-C的含量与模型组比较尸<0.05和尸<0.01，且随着荜茇提取物的含量升高而降低，说明荜茇提取物有显著的降血脂效应，其机理一方面可能是促进了脂蛋白之间的代谢与转化，另外可能是因为抑制了肠道胆固醇的吸收、减少了肝脏胆固醇的合成、促进了血清和肝脏甘油三酯的分解。表l荜茇提取物对试验性高血脂模型大鼠血脂水平的影响(x±s,n=10)组别TC含量TG含量LDL-C含量HDL-C含量(mmolL-)(mmolL甲4(mmol，1/1)(mmol■「)对照组2.21±0.73b0.90±0.08b0.73±0.52b1.24±0.20b模型组9.78±0.911.89±0.137.65±0.120.82±0.07小剂量组6.82±1.02a1.58±0.365.11±0.48a0.94±0.11a中剂量组6.04±0.87b1.31±0.19b4.30±0.60b1.01±0.15b大剂量组5.62±0.81b1.03±0.12b3.83±0.54b1.22±0.21b注与模型组相比ap<0.05,bp<0,01。实施例17:荜茇提取物镇痛和抗炎作用为了观察本发明的荜茇提取物镇痛和抗炎作用，釆用小鼠醋酸刺激扭体法(表2和表3)和小鼠热板刺激法(表4)研究荜茇提取物的镇痛作用；采用荜茇提取物对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性(表5和表6)和二甲苯致小鼠耳廓肿胀(表7)的抑制研究其抗炎作用。结果表明实施例1_13的提取物有明显的镇痛和抗炎作用。以实施例6得到的荜茇提取物为例，由表2—7可知与阴性对照组比较，100mg'kg—1200mg'kg"的荜茇提取物就能明显延长小鼠的疼痛域值(尸<0.05或尸<0.01);lOOmg'kg"的荜茇提取物就能明显抑制小鼠腹腔毛细血管通透性(尸O.05);200n^kg"的荜茇提取物就能明显抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀(P0.05)。结论荜茇提取物具有较明显的镇痛和抗炎作用。表2荜茇提取物对醋酸所致小鼠扭体的影响组别剂量(mg/kg)潜伏期(s)扭体次数阴性对照273.31±82.7127.8±15.72荜茇提取物100524.20±359.0411.3±13.15*200610.00±338.42*6.8±7.44**400894.30±336.70**2.0±2.54***8001057.2±311.05**1.2±3.46***阿司匹林300664.50±398.57*6.8±7.57**注与阴性对照组组相比*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。表3BBP不同给药时间对HAC所致小鼠的扭体影响组别齐糧(mg/kg)给药时间(min)扭体次数(次)阴性对照33.95±13,68荜茇提取物2001524.82±12.212003023.45±14.442006021.91±9.68**2009020.80±13.59*20012019.50±12.15**2001809.10±7.00***20024025,20±10.67注与阴性对照组组相比*p<0.05，**p<0.01，,p〈0扁。表4荜茇提取物对热板致痛小鼠痛阈的影响组别剂量(mg/kg)基础痛阈(s)30min60min90min阴性对照18.0±5.6519.7±6.7217.6±9.2318.6±10.11荜茇提取物10017.8±4.0429.0±7.59**28.2±10.92**24.5±13.53*20018,0±5,7532.1±10.02**30.6±11.53**26.7±13.90*40018,5±4,6533.0±13.76**32.4±9.50**25.0±8.00*盐酸吗啡1018.4±5.4723.7±12.18*22.5±10.28*26.9±15.33*注与阴性对照组组相比*p<0.05，**p<0.01。表.5荜茇提取物对醋酸所致小鼠腹腔血管通透性亢进的影响组别剂量(mg/kg)光密度P值阴性对照0,299±0.118荜茇提取物訓0.188±0馬0.0162000.174±0.0970.0134000,213±0.0960.0678000.128±0.0550.00025阿司匹林2000.258±0.1060.407表6荜茇提取物对醋酸所致小鼠腹腔通透性的影响组别齐糧(mg/kg)光密度P值阴性对照0.360±0,172荜茇提取物1000.247±0.0890.0512000.377±0,1570.8104000.227±0.1340.0468000.197±0.0410扁06阿司匹林2000.366±0.1080.912表7荜茇提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响组另lj_剂量(mg/kg)_重量差(mg)_P值阴性对照^27.4±16.6荜茇提取物12.530.1±15.10.662526.95±13.%0,9335022.23±12.400.339310022,60±5.810,2420016.66±8.290.0134阿司匹林30014.卯±7.780.0068实施例18:荜茇提取物对胃溃疡动物模型的保护作用为了观察本发明的荜茇提取物对胃溃疡动物模型的保护作用，采用应急性胃溃疡(表8)、乙醇性胃溃疡(表9)、利血平性胃溃疡(表9)和大鼠幽门结扎性胃溃疡(表IO)4种模型研究和评价荜茇提取物抗胃溃疡的作用。按传统方法造模、给药，记录溃疡点数和面积，给药组与模型组进行比较。结果表明实施例1一13的提取物有明显的防治胃溃疡作用。以实施例9得到的荜茇提取物为例，由表8—10可知与模型组比较，荜茇提取物能显著抑制和减少小鼠应激性溃疡的溃疡点数、溃疡面积、出血灶大小和出血程度(尸<0.05或户<0.01)(见表8);与模型组比较，荜茇提取物能显著抑制和减少小鼠乙醇胃溃疡的溃疡点数、溃疡面积和溃疡指数(户<0.05或尸<0.01)(见表9);与模型组比较，荜茇提取物能显著抑制和减少小鼠利血平胃溃疡的溃疡点数、溃疡面积和溃疡指数(尸<0.05或尸<0.01)(见表9);与模型组比较，荜茇提取物能显著抑制和减少大鼠幽门结扎溃疡的溃疡点数、溃疡面积和溃疡指数(尸<0.05或户<0.01)(见表IO)。结论荜茇提取物有明显的防治胃溃疡作用。表8荜茇提取物对小鼠实验性溃疡血灶的影响(5±s,n=10)IE剂量(11^'1^-1)出血程度出血灶(mm2):模型组2.63±1.786.35±1.35阳性对照组2002.25±1.924.69±2.16*荜茇提取物401.71±1.94*4.08±1.62**1201.52士1.44**2.49±1154**__1.26士1.45**_2.12±1.86**_与模型组比较*P<0.05,**P<0.01表9荜茇提取物对小鼠实验性溃疡指数的影响(5±s,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表10荜茇提取物对大鼠幽门结扎胃溃疡的影响(5土s,n-lO)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>与模型组比较*P<0.05,**P<0.01实施例19:毒性研究大鼠急性毒性试验和长期毒性试验研究结果均表明实施例1_13制备得到的荜茇提取物安全范围较宽。并且长期毒性实验表明，大鼠连续给药3个月，血常规、肝肾功能及心脏、胸腺、肺脏、胸骨、胰腺、肝脏、脾脏、肾脏、肾上腺、卵巢、子宫、乳腺、脑、垂体、视神经、胃、大肠、小肠、膀胱、甲状腺、股骨组织学镜检，未见异常。以实施例8提取得到的荜茇提取物为例，大鼠长期毒性试验的安全剂量为300mg，kg—1《1。权利要求1、一种荜茇提取物，其特征在于，该提取物主要含有胡椒酸甲酯和七种荜茇酰胺化合物荜茇宁酰胺，胡椒碱，癸二烯酰胺，胡椒诺宁碱，奎宁素，十八碳三烯酰胺和二十碳三烯酰胺八个化合物，按重量百分比计，八种化合物总重量占荜茇提取物总重量的29.07～87.80％，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的0.95～3.43％，胡椒碱占荜茇提取物总重量的14.52～42.78％，胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的0.82～3.11％，癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的1.36～4.27％，胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的2.96～8.03％，奎宁素占荜茇提取物总重量的1.04～3.26％，十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的3.17～10.94％，二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的4.25～12.42％。2.权利要求1所述的荜茇提取物，其中八种化合物总重量占荜茇提取物总重量的49.6471.89%。3.权利要求1或2所述的荜茇提取物，其中荜茇宁酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.882.54%。4.权利要求1或2所述的荜茇提取物，其中胡椒碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为24.1635.16%。5.权利要求1或2所述的荜茇提取物，其中胡椒酸甲酯占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.722.35%。6.权利要求1或2所述的荜茇提取物，其中癸二烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为2.212.67%。7.权利要求1或2所述的荜茇提取物，其中胡椒诺宁碱占荜茇提取物总重量的重量百分比为4.586.75%。8.权利要求1或2所述的荜茇提取物，其中奎宁素占荜茇提取物总重量的重量百分比为1.832.44%。9.权利要求1或2所述的荜茇提取物，其中十八碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为6.059.43%。10.权利要求1或2所述的荜茇提取物，其中二十碳三烯酰胺占荜茇提取物总重量的重量百分比为7.2110.55%。11、包含权利要求i-io任一项所述的荜茇提取物的药物组合物。12、权利要求11所述的药物组合物，其特征在于该组合物为口服给药、腔肠给药、喷雾给药、注射制剂、输液制剂或透皮吸收的药物制剂。13、权利要求12所述的药物组合物，其中口服给药的药物制剂选自片剂、胶囊、粉末、颗粒、晶体、溶液、悬液、汤、糖浆、酏剂、茶和咀嚼剂中的一种。14、一种制备权利要求1一10任一项所述的荜茇提取物的方法，其特征在于，该方法包括下列步骤步骤(a)将荜茇用浓度为70%100%乙醇提取，以得到乙醇提取液；步骤(b)将乙醇提取液减压回收乙醇，以得到流浸膏；步骤(c)将流浸膏放置2496小时析出结晶；步骤(d)将析出结晶后的流浸膏用410倍重量的1020%KOH水溶液皂化，以得到荜茇不皂化物；步骤(e)将荜茇不皂化物用条件为压力932MPa，流速二26mL/min，荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积mL=l:ll:4，温度为3577。C的C02超临界精馏法进行分离纯化，得到权利要求1一10任一项所述的荜茇提取物。15.权利要求14所述制备荜茇提取物的方法，其特征在于步骤(a)中所用乙醇浓度为95%。16.权利要求14所述制备荜茇提取物的方法，其特征在于步骤(c)中放置析出结晶的时间为48小时。17.权利要求14所述制备荜茇提取物的方法，其特征在于步骤(d)中所用KOH浓度为15%，K0H用量为6倍。18.权利要求14所述制备荜茇提取物的方法，其特征在于步骤(e)中C02超临界精馏法工艺条件为压力41.5MPa，流速二3mL/min，荜茇不皂化物浸膏质量g:乙醇体积ml^l:2，温度梯度二35-49-63-77。C。19.权利要求1一10任一项所述的荜茇提取物在制备药物中的应用，其中所述的药物用于治疗高血脂、镇痛、抗炎或胃溃疡。20.权利要求11_13任一项所述的药物组合物在制备药物中的应用，其中所述的药物用于治疗高血脂、镇痛、抗炎或胃溃疡。全文摘要本发明涉及荜茇提取物、其制备方法及其药物组合物。所述荜茇提取物主要含有胡椒酸甲酯和七种荜茇酰胺化合物荜茇宁酰胺，胡椒碱，癸二烯酰胺，胡椒诺宁碱，奎宁素，十八碳三烯酰胺及二十碳三烯酰胺八个化合物。按重量百分比计，所述八种化合物总重量占荜茇提取物总重量的29.07～87.80％，其中，荜茇宁酰胺占0.95～3.43％，胡椒碱占14.52～42.78％，胡椒酸甲酯占0.82～3.11％，癸二烯酰胺占1.36～4.27％，胡椒诺宁碱占2.96～8.03％，奎宁素占1.04～3.26％，十八碳三烯酰胺占3.17～10.94％，二十碳三烯酰胺占4.25～12.42％。还提供上述荜茇提取物的制备方法，其药物组合物及其应用。文档编号A61K9/20GK101352487SQ20081011771公开日2009年1月28日申请日期2008年8月4日优先权日2008年8月4日发明者晔刘,林刘,廖幼鸣,杨福艳,熊善丽,红王,王洪权,王海燕,宇田,由丽双,赵颖涛,雪韩申请人:北京宝泰宁堂医药科技有限公司