专利名称：酰氯和磺酰氯类衍生物在制备抗肿瘤药物的新用途的制作方法
酰氯和磺酰氯类衍生物在制备抗肿瘤药物的新用途
技术领壤
本发明属于肿瘤相关的药物领域，更具体地说，涉及一类酰氯和磺酰氯异噁唑啉衍生物 在制备抗肿瘤药物方面的新用途。 背翠技术
肿癯是严重危害人类健康的恶性疾病，其死亡率仅次于心血管疾病，居各类疾病死亡率 的第二位。自1996年以来全世界每年新确诊的肿瘤患者均在1030万以上，每年全球肿瘤 死亡总数达700万人。WHO 2001年报道，世界癌症发病率和死亡率比1990年上升了 22 %，今后20年还将上升大约50%。西方发达国家较易发的癌症依次为乳腺癌、肺癌、前列 腺癌、结肠癌、直肠癌和卵巢癌。近年来，我国每年新增肿瘤患者有160 170万人，总数 估计在450万人左右。危害我国居民健康的癌症依次为胃癌(21.76%)、肝癌(17.83%)、肺 癌(15.19%)、食管癌(15.02%)、结直肠癌(4.54%)、白血病(3.53%)、子宫颈癌(1.64%)、 鼻咽癌(1.53%)和乳腺癌(1.49%)。目前肿瘤的治疗仍以手术、化疗和放疗为主。肿瘤的化 学治疗在肿瘤的治疗过程中起着举足轻重的作用，许多肿瘤通过单一的化疗取得了较好的疗 效，特别是白血病和恶性淋巴瘤的治疗。临床实验证明，术前和术后通过化疗作为肿瘤的辅 助治疗能进一步改善治疗效果。传统的化疗药物以细胞毒类药物为主，近些年抗肿瘤药物的 研发取得了很大的进步，许多不同作用机制的药物不断涌现，但仍存在一些问题如占肿瘤 90%的实体瘤仍缺乏有效的药物；现有抗肿瘤药物的毒副作用大、选择性低和易产生抗药性 等。肿瘤带给人类的危害和对社会压力的日益加重，也给医学界提出了严峻的挑战，开发具 有特异性的新型抗肿瘤药物势在必行。
中国专利申请(申请号200710060530.5)所述的酰氯和磺酰氯类衍生物，公开了通
式化合物、其制备方法、含有它们的药物组合物以及制备抗菌药物的用途，该申请的说明书 中未涉及这些物质在制备抗肿瘤药物的新用途
发明内容
'
本发明的一个目的是提供了具有通式I结构的酰氯，磺酰氯类衍生物及其药学上可 接受的盐在制备抗肿瘤药物方面的新用途。
本发明的另一个目的是提供含有通式I结构的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成 分，与一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药用组合物在制备抗肿瘤药物方 面的新用途。
现结合本发明的目的对本发明内容进行具体描述。
本发明的通式I化合物具有下述结构式
6其中
X为:C=0; 0=S=0; n=0, 1，2，3;其中
X为C-O时，n=0， 1， 2， 3; X为(^S-0时，n=0;
芳基，含有硫、氧、氮杂原子的C3-Ce杂环基，芳基并杂环基(含有硫、氧、氮杂原子的 CfC6杂环基)；
被卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、腈基、d-(v烷氧基、d-Ce二烷基氨基、c3-a环烷基、
C3-G杂环基、芳基、取代芳基等基团单或多取代的芳基；
被卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、腈基、d-Ce垸氧基、d-C6二烷基氨基、C3-Ce环垸基、 C3-Ce杂环基、芳基、取代芳基等基团单或多取代的含有硫、氧、氮杂原子的CfCe杂环基；
被卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、腈基、d-(V烷氧基、d-Cs二垸基氨基、C3-Ce环烷基、 C3-Ce杂环基、芳基、取代芳基等基团单或多取代的芳基并杂环基(含有硫、氧、氮杂原子的 C3-Ce杂环基)。
R2:为氢，单取代或多取代的d-Ce烷基。
R3:为单取代或多取代的卤素。
R4:为C,-Ce烷基，被卤素单取代或多取代的d-C6烷基。
优选以下通式I化合物或其药学上可接变的盐，其中
苯基、萘基、蒽基、咪唑、吡啶、噁唑、异噁唑、呋喃、噻唑、吡唑、噻吩、吡咯、哒
嗪、嘧啶、吡嗪、哌啶、吗啉、哌嗪、四氢呋喃、苯并呋喃；
被氟、氯、溴、羟基、羧基、氨基、硝基、腈基、C,-Ce烷氧基、d-Ce二垸基氨基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环基、芳基、取代芳基等基团单或多取代的苯基、萘基、蒽基、咪唑、吡啶、
噁哇、异噁唑、呋喃、噻唑、吡唑、噻吩、吡咯、哒嗪、嘧啶、吡嗪、哌啶、吗啉、哌嗪、 四氢呋喃、苯并呋喃。
R2:为氢，单或多取代的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、
异戊基。
R3:为单取代或多取代的氟、氯。
R4:为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基，或者被氟、 氯单取代或多取代的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基。
更优选以下通式I化合物或其药学上可接受的盐，其中
(±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(对氟苯乙酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4， 5-二氢-5-异
噁唑基]甲基]乙酰胺。
1-2: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(间氟苯乙酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4， 5-二氢-5-异 噁唑基]甲基]乙酰胺。
1-3: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(邻氟苯乙酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4, 5-二氢-5-异
噁唑基]甲基]乙酰胺。
I-4: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(间氯苯乙酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4, 5-二氢-5-异
噁唑基]甲基]乙酰胺。
I-5: (±)-N-[[3-〔3-氟-4-[4-(邻氯苯乙酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4， 5-二氢-5-异
噁唑基]甲基]乙酰胺。
1-6: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(对氯苯乙酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4， 5-二氢-5-异
噁唑基]甲基]乙酰胺。
1-7: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(3，5-二氯苯乙酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4,5-二氢
-5-异噁唑基]甲基]乙酰胺。1-8: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(邻甲氧基苯甲酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4,5-二氢
-5-异噁唑基]甲基]乙酰胺。
I-9: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(对三氟甲基苯磺酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4, 5-二氢
-5-异噁唑基]甲基]乙酰胺。
(±)-N-[[3_[3-氟-4-[4-(间羧基苯磺酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4， 5-二氢-5-
异噁唑基]甲基]乙酰胺。
1-11: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(2-氯吡啶-3-磺酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4， 5-二氢
-5-异噁唑基]甲基]乙酰胺。I-12: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(2-氯-4-氟-5-羧基苯磺酰基)-1-哌嗪基]苯 基]-4， 5-二氢-5-异噁唑基]甲基]乙酰胺。
1-13: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(2,3-二氢苯并呋喃-5-磺酰基)-1-哌嗪基]苯 基]-4, 5-二氢-5-异噁唑基]甲基]乙酰胺。
工一14: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(邻氟苯磺酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4，5-二氢-5-异噁唑基]甲基]乙酰胺。
1-15: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(5-溴噻吩-2-磺酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4，5-二 氢-5-异噁唑基]甲基]乙酰胺。
1-16: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(4-溴-2，6-二氯苯磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4,5-二氢-5-异噁唑基] 甲基] 乙酰胺。
1-17: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(间硝基苯磺酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4，5-二氢-5-异噁唑基]甲基]乙酰胺。
1-18: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(间氨基苯磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4, 5-二氢-5-异噁唑基]甲基]乙酰胺。
1-19: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(2-氯吡啶-3-磺酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4,5-二氢 -5-异噁唑基]甲基]乙酰胺盐酸盐。
1-20: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(2-氯吡啶-3-磺酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4， 5-二氢 -5-异噁唑基]甲基]乙酰胺柠檬酸盐。
1-21: (±)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(间羧基苯磺酰基)-1-哌嗪基]苯基]-4,5-二氢 -5-异噁唑基]甲基]乙酰胺钾盐。
本发明所述具有通式I结构化合物的药学上可接受的盐系指本发明化合物与无机酸、 有机酸成盐，特别优选的盐是盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、 乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐、琥珀 酸盐、酒石酸盐、枸橼酸盐、富马酸盐、牛磺酸盐等等。此外，本发明所述的盐，还可以是 化合物与氢氧化钾、氢氧化钠形成的盐。
本发明所述化合物的药物组合物制备如下使用标准和常规的技术，使本发明化合物与
制剂学上可接受的固体或液体载体结合，以及使之任意地与制剂学上可接受的辅助剂和赋形 剂结合制备成微粒或微球。口服剂型包括片剂、分散片、咀嚼片、泡腾片、口崩片、胶囊、
颗粒剂、缓释片、缓释微丸、滴丸等；注射剂型包括小容量注射剂、大容量注射剂、无菌粉 针等。载体可以是一种物质或多种物质的组合，其可以充当稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑
剂、包衣剂、矫味剂、甜味剂、增溶剂、混悬剂、防腐剂以及抑菌剂等。稀释剂包括磷酸氢
9钙、乳糖、淀粉、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、糊精硫酸钙一种或几种组合物；粘合剂包括甲基 纤维素、羟丙甲基纤维素、羧甲纤维素钠、聚维酮、聚乙二醇(400-6000)、明胶、果胶、乙 基纤维素等一种或几种组合物；崩解剂包括交联聚维酮、交联羧甲纤维素钠、羧甲淀粉钠、
低取代甲基纤维素、微晶纤维素、粉状纤维素等一种或几种组合物；润滑剂或助流剂包括硬 脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石粉、二氧化硅、聚乙二醇、氢化植物袖、聚氧乙烯单硬脂 酸酯的一种或几种组合物；包衣剂包括羟丙甲基纤维素、聚维酮、丙烯酸树脂类胃溶及肠溶、 缓释材料；矫味剂和甜味剂包括阿司巴甜、甜菊糖、蛋白糖、香精、蔗糖、山梨醇一种或几 种组合物；增溶剂包括阴离子或阳离子表面活性剂、柠檬酸、精氨酸、三羟基甲基溴硅烷、 十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠等；混悬剂包括甲基纤维素、交联羧甲纤维素钠、羟丙甲 基纤维素等；防腐剂以及抑菌剂包括丙二醇、聚山梨酯80、苯甲酸钠、尼泊金、乙醇等。
本发明所述化合物或其组合物在制备抗肿瘤药物方面的应用。所用的化合物的量或浓度 在一个较宽的范围内调节，本发明活性化合物的量范围为组合物的0.5%-99%，优选的范围 为0.5%-50%。药物组合物或含有的活性成份的量可以根据患者的病情、医生诊断的情况特定 的加以应用，这些情况包括被治疗者的身体状态、给药途径、年龄、体重、对药物的个体 反应，症状的严重程度等。
本发明所述化合物或其组合物可应用于治疗结肠癌、白血病、胃腺癌、乳腺癌、口腔癌、 肺癌、肉瘤、黑色素瘤。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例仅为解释性的，决不意味着它 以任何方式限制本发明的范围。
实施例l
片剂 1-1
乳糖
预胶化淀粉 微晶纤维素 羧甲淀粉钠 10。/。聚维酮溶液
硬脂酸镁
滑石粉
100片
5.0g
15.0g
2.5g
3.5g
0.8g
QS
QS
QS制备工艺将活性成分和辅料预先粉碎过筛100目，称取主药加辅料乳糖、预胶化淀粉 羧甲淀粉钠、和微晶纤维素充分混合，过60目筛三次，加入聚维酮溶液，混合，制软材，过
20目筛，制湿颗粒，于50-60'C干燥后，加硬脂酸镁和滑石粉预先过筛，然后加入到上述的 颗粒中充分混合后，测定中间体颗粒，压片。
实施例2
胶囊剂
1-2
二氧化硅 硬脂酸镁
制备工艺将活性成分粉碎过100目筛，
间体含量，灌装于4号胶囊。
100粒
99.0g
l.Og
QS
加辅料二氧化硅、硬脂酸镁混合均匀，测定中
实施例3
分散片
1-3
乳糖
微晶纤维素
交联聚维酮
阿斯巴甜
橘子香精
2%羟丙甲纤维素
二氧化硅
硬脂酸镁
100片
20.0g
20.0g
5.0g
2.0g
0.2g
0.2g
QS
QS
QS
制备工艺将活性成分加辅料乳糖、部分交联聚维酮、微晶纤维素、阿斯巴甜和橘子香 精过筛充分混合均匀，加入2%羟丙甲纤维素溶液，混合，制软材，过24目筛，制湿颗粒， 于50-60'C干燥后，20目筛整粒。将剩余交联聚维酮、硬脂酸镁和滑石粉过筛后，加入到上 述的颗粒中充分混合后，测定中间体颗粒，压片。
实施例4
口崩片
100片1-5 l.Og
甘露醇 19.0g
微晶纤维素 19.0g
交联羧甲纤维素钠 l.Og
硬脂酸镁 QS
二氧化硅 QS
制备工艺将主药与辅料分别过100目筛，充分混合，采用辊压机压饼，再用整粒剂过 18目筛整粒，最后加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀压片。
实施例5
泡腾片100片
1-7lO.Og
乳糖16.0g
酒石酸5.0g
碳酸氢钠6.0g
麦芽糖醇0.5g
柠檬香精0.5g
2%甲基纤维素QS
硬脂酸镁QS
滑石粉QS
制备工艺将活性成分5g加辅料乳糖8g、酒石酸、麦芽糖醇、柠檬香精过筛，充分混 合，加入甲基纤维素水溶液，混合，制软材，过筛，制湿颗粒A;再将活性成分5g加辅料乳 糖8g、与碳酸氨钠充分混合，加入甲基纤维素水溶液，混合，制软材，过筛，制湿颗粒B。 A、 B颗粒于50-60"C分别干燥后，18目筛整粒。然后将硬脂酸镁和滑石粉加入到上述的颗粒 中充分混合后，测定中间体颗粒，压片。
实施例6
咀嚼片 1-8
甘露醇 山梨醇
100片
20.0g
25.0g
3.0g5%聚乙二醇6000 (50%乙醇)QS
甜菊甙 0.5g
橙皮酊 0.5g
硬脂酸 QS
制备工艺将活性成分粉碎过100目筛，加辅料甘露醇、山梨醇、甜菊甙和橙皮酊，充 分混合，加入5%聚乙二醇6000溶液，混合，制软材，过18目筛，制湿颗粒，于50-60。C干 燥后，18目筛整粒。将硬脂酸镁和滑石粉预先过筛，然后加入到上述的颗粒中充分混合后， 测定中间体颗粒，压片。
实施例7
颗粒剂 100 袋
1-10 40.0g
乳糖 45.0g
甘露醇 14.0g
阿司巴甜 0.05g
香精 0.05g 2%羟丙甲纤维素(纯水配制)QS
制备工艺将主药与辅料分别过100目筛，充分混合，然后称取处方量辅料与主药充分 混合。再加入粘合剂制软材，14目筛制粒，55'C干燥，12目筛整粒，测定袋重包装。
实施例8
肠溶片100片
素片处方，
1-115.0 g
磷酸氢钙8.0g
预胶化淀粉l.Og
羟丙纤维素0.5g
羧甲淀粉钠0.5g
8%聚维酮QS
硬脂酸镁QS
制备工艺同实施例l。包衣处方:
素片肌Og
丙烯酸树脂L100-5515.0g
滑石粉3.0g
二氧化钛1.5g
柠檬酸三乙酯QS
95%乙醇加至145ml
包衣工艺
a、 将处方量的丙烯酸树脂L100-55、 二氧化钛、滑石粉、柠檬酸三乙酯溶于95%的乙 醇中，充分混匀。
b、 将处方量素片置于包衣锅中，开动鼓风，使片温为40'C左右，用喷枪喷入肠溶衣， 喷速为5ml/分钟，至肠溶衣喷完，干燥lh，分装即可。
实施例9
肠溶胶囊100粒
1-135.0g
乳糖".0g
预胶化淀粉4.5g
羟丙纤维素2.0g
羧甲淀粉钠1.5g
30%乙醇QS
硬脂酸镁QS
制备工艺将活性成分与乳糖、预胶化淀粉、羟丙纤维素、羧甲淀粉钠混合均匀，加粘
合剂30%乙醇制软材，过20目筛制粒，55'C干燥，18目筛整粒，测定颗粒含量，装入肠溶 胶囊或包肠溶衣后装普通胶囊即可实现。 同实例2取。
实施例10
口服溶液混悬剂 100瓶量
1-14 20.0g
14甘露醇
山梨酸
橙味香精
甜菊糖
尼泊金
蒸馏水
16.0g
2.0g
l.Og
l.Og
QS
l.OL
制备工艺取蒸馏水0.8L，称取处方量的山梨酸、甘露醇、橙味香精、甜菊糖、样品搅
拌使溶解，加入防腐剂后，加水至全量，灌装于10ml瓶中。
实施例11
缓释片 1-15
硬脂酸 川蜡
羟丙纤维素 硬脂酸镁
100片 5.0g
22.0g 12.0g l.Og QS
制备工艺称取处方量的活性成分加入硬脂酸、川蜡、羟丙纤维素充分混合均匀后，置 于80'C水浴上加热搅拌熔融均匀后，取出过20目筛制粒，晾干至室温，加入硬脂酸镁混合 后，用异型冲按标示片重压片。
实施例12
肠溶缓释片
1-16
乳糖
乙基纤维素 2%羟丙甲纤维素 硬脂酸镁 滑石粉
100片
2.0 g
15.0g
13.0g
QS
QS
QS
制备工艺称取活性成分加乳糖、乙基纤维素混合均匀，加入2%羟丙甲纤维素制软材， 过24目筛，55'C烘箱干燥，干颗粒20目整粒，加入硬脂酸镁混合均匀，压片，制得缓释片。 再按照实施例8处方包肠溶衣即得肠溶缓释片。实施例13
缓释胶囊
含药处方
1-17lOO.Og
乳糖20.0g
微晶纤维素50.0g
淀粉40.0g
聚乙二醇6000".0g
二氧化硅5.0g
硬脂酸镁5.0g
50%乙醇QS
制备工艺将活性成分、乳糖、微晶纤维素、淀粉混合均匀，加入聚乙二醇6000配制的 粘合剂，用造粒机(或包衣锅)起母并滚丸至所需的目数15—30目(边滚丸边加入润滑剂和助流 剂)，烘干，筛出最佳的18—25目作为含药微丸。
包衣处方
含药微丸 150.0g
丙烯酸树脂RSIOO 20.0g
丙烯酸树脂RL100 2.0g
柠檬酸三乙酯 3.0g
滑石粉 12.0g
90%乙醇 250ml
包衣将含药微丸置于流化床(或包衣锅)中，使微丸的温度保持在35'C-4(TC。将丙烯 酸树脂溶于乙醇中，再加入柠檬酸三乙酯和滑石粉，搅拌均匀，以5ml/min的流速，喷涂于 含药微丸的外层制成缓释微丸。测定含量，根据不同规格灌装不同的胶囊。
实施例14
小容量注射液 规格lmg/ml
1-18 50.0mg
磷酸二氢钠 15.0mg
柠檬酸 35.0mg
16氯化钠 50.0mg 注射用水 50ml
制备工艺取注射用水50ml，称取处方量的柠檬酸、磷酸二氢钠、氯化钠搅拌使溶解， 加入主药搅拌溶解，用0.1mol/L的盐酸或氢氧化钠调pH值为4.0-7.0，加入0.1%的活性炭吸 附20分钟。先用0.45nm滤膜滤过，再用0,22nm精滤。按每安瓿1毫升灌装，105'C高温灭 菌30分钟即得注射液。
实施例15
冻干剂
1-19 5.0g
泊洛沙姆 l.Og
氢氧化钠 0.2g
枸橼酸 QS
甘露醇 23.0g
乳糖 20.0g
注射用水 100ml
制备工艺取注射用水80ml，加主药、甘露醇、乳糖、泊洛沙姆搅拌使溶解后，加lmol/L 的枸櫞酸调节PH至7.0—9.0,补加水至100ml。加入0.5g活性炭，在30'C下搅拌20分钟， 脱炭，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液按每支lml进行分装，预冻2小时后，冷冻下减压干燥 12小时，至样品温度到室温后，再干燥5小时，制得白色疏松块状物，封口即得。
实施例16
小针注射液
1-20 l.Og
焦亚硫酸钠 3.0g
氢氧化钠 0.5g
碳酸氢钠 QS
注射用水 200ml
制备工艺取注射用水100ml，加主药、焦亚硫酸钠、碳酸氢钠搅拌使溶解后，加适量 氨氧化钠调节PH为7.0—9.0，补加注射用水至200ml，加入2g活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭、精滤、以每支2ml灌封、灭菌，即得
实施例17
小输液
三羟甲基氨基甲烷
25.0g 15.0g
低分子右旋糖苷
500.0g
EDTA-2Na
".0g
QS
碳酸氢钠
注射用水
5000ml
制备工艺取注射用水2000ml，加主药、三羟甲基氨基甲垸、低分子右旋糖苷、EDTA-2Na 搅拌使溶解后，用碳酸氢钠调节PH为7.0-9.0，加入10g活性炭，在20-50'C下搅拌吸附30 分钟，除炭，补加水至5000ml，精滤、灌封每瓶50ml，灭菌，即得。
细胞株结肠癌SW-480细胞、白血病HL-60细胞、胃腺癌SGC-7901细胞、乳腺癌 MCF-7细胞、口腔癌KB细胞、肺癌A-549细胞，均购自中国科学院上海细胞研究所。
试剂MTT， Amresco分装，批号04M0卯4; DMEM培养基，Gibco,批号1290007; 小牛血清，兰州民海生物，批号20080218;胰蛋白酶，Amresco分装，批号016B0604; 氟尿嘧啶注射液，0.25g/10ml(支)，天津金耀氨基酸有限公司，批号0512022。
仪器超净工作台，苏州净化设备厂；C02培养箱，Thermo公司，型号HERACelll50; 倒置显微镜，Carl Zeiss公司，型号Axiovert200;酶联免疫检测仪，TECAN公司，型号 Sunrise;离心机，Kerdro公司，型号Heraeus。
细胞培养肿瘤细胞接种在含10%小牛血清，100IU/ml青霉素G钠盐及100ug/ml硫酸 链霉素的DMEM培养液中，置37 °C、 100%相对湿度、含5%<:02的培养箱中，传代3次 后备用。
MTT法测定取对数生长期的细胞，经0.25%胰蛋白酶消化后(悬浮细胞无须消化)， 悬浮于含10%小牛血清的DMEM培养液中，用玻璃滴管轻轻吹打成单细胞悬液，显微镜
实施例18
(1)材料
(2)方法下用血细胞记数板记数活细胞。96孔培养板每孔接种细胞悬液90 pi (细胞浓度调整为8 10xl()4个/ml)，在37°C、 100%相对湿度、含5%C02、 95%空气的培养箱培养24h后， 每孔加10 pi药液(终浓度设为40pg/ml、 20pg/ml、 10pg/ml、 5 pg/ml和2.5 ng/ml五个 浓度)。另外，每个浓度设阴性对照(等浓度DMSO)及空白本底(不加细胞)，各组均设6 个复孔。再连续培养24h，然后每孔加入10nl5mg/ml的MTT溶液，继续培养4h后， 仔细吸去上清液(悬浮细胞，需要先离心，再吸去上清)。每孔加入100 ^ DMSO，置微量 振荡器震荡以使结晶完全溶解，酶标仪492nm单波长比色，测定OD值。以下述方法计算 细胞生长抑制率作为评价指标。
抑制率(％)=[1-(实验组OD均值-空白组OD均值)/ (对照组OD均值-空白组OD均 值)]xl00%。根据细胞生长抑制率，以直线回归方法计算ICso值。
(3)结果
表l.对体外培养的肿瘤细胞的ICsoOig/ml)
组别SW-480HL-60SGC-7901MCF-7KBA-549
细胞细胞细胞细胞细胞细胞
1-114.6510.2126.1421.0835.8227.19
1-230.1821.4319.8724.5728.0821.04
1-39.649.0821.6718.6921.8916.56
1-527.4312.8118.4517.18 31.3520.86
1-717.8514.4123.1819.5628.9822.60
1-1018.4215.6116.4117.6534.4228.62
1-1233.2118.7324.1529.8725.1864.89
1-1516.2914.8540.6819.7132.4326.48
1-1818,1113.7221.2916.3446.2528.71
1-1936.1017.6419.2026.1619.2746.63
1-2140.4616.0853.9618.6734.5529.52
氟尿嘧啶26.6518.1320.8723.4628.2129.15
(4)结论
从上述体外试验结果可以看出，具有通式I结构的酰氯和磺酰氯类衍生物在体外作用24h 后对这6种人类癌细胞均具有较强的抑制作用，其中1-3、 1-5、 1-7、 1-10、 1-15、 1-18、 1-19 对3种以上细胞的ICso值小于20 pg/ml。
实施例19
(1)材料
细胞株肉瘤S180细胞、黑色素瘤B16细胞，均购自中国科学院上海细胞研究所。阳性对照药环磷酰胺，批号07020121，江苏恒瑞医药股份有限公司。
仪器PB303-N型千分之一电子天平，梅特勒-托利多公司生产。
动物昆明小鼠、Cs7BL/6小鼠，SPF级，雄性，体重18 22g，购于中国医学科学院放射医学研究所，合格证号SCXK (津)2005-0001。
(2)方法取接种瘤株7天，肿瘤生长良好的荷瘤小鼠，无菌条件操作，剔除包膜和坏死部分，选取完好的瘤块，置于玻璃匀浆器内，加入适量生理盐水，配成瘤细胞混悬液，细胞数为(1~2) *107/ml，接种于小鼠右前肢腋部皮下(0.2ml/鼠)，所有操作在30min内完成。次日将接种瘤液个鼠按体重随机分组，即荷瘤对照组，环磷酰胺组(25mg/kg)， 1-3组(100mg/kg 、 50mg/kg、 25mg/kg)。各给药组均腹腔注射给药，每日一次，对照组给予同体积生理盐水。小鼠连续给药10天，末次给药24h后，脱颈椎处死，剥离肿瘤，称取瘤重与动物体重，计算各组小鼠瘤重平均值及抑制率。
抑制率-[(对照组平均瘤重一实验组平均瘤重)/对照组平均瘤重]*100%
(3)结果
表2.对S180荷瘤小鼠瘤重及抑制率的影响(7土sd)
组别 剂量 动物数 体重(g) 瘤重 抑制_(mg/kg) (n) 给药前 给药后一 (g) 率(％)
对照 ------- T5 20.32±1.12 28.32±2.51 ~~1.63±0.30~-----
环磷酰胺 25 10 20.45±0.97 25.56±1.98 0.49±0.16** 69.94
1-3 100 10 20.21±1.34 24.89±2.64 0.88±0.39* 46.01
1-3 50 10 20.37±1.04 26.48±1.571.24±0.36 23.93
1-3 25 10 20.09±1.83 27.69±1.821.47±0.41 10.88
注与对照组相比"p〈0.01， *p<0.05。
表3.对B16荷瘤小鼠瘤重及抑制率的影响(7isd)
ii 动物数 体重(g) — ~ii 抑制
_(mg/kg) (n) 给药前 给药后一 (g) 率(％)
ij^ ------- IB 20.31±1.45 26.85±2.47~""1.53±0.53 -----
环磷酰胺25 10 20.18±1.17 24.57±2.06 0.87±0.41** 43. 14
1-3100 10 20.22±1.63 25.71±2.10 0.89±0.29* 41.83
1-3 50 10 20.34±1.35 26.56±1.921.23±0.42 19.61
1-3 25 10 20.27±1.29 26.99±2.241.49±0.50 2.61
注与对照组相比"pO.Ol, *p<0.05。(4)结论
从上述动物体内试验结果可以看出，I-3对S180及B16荷瘤小鼠的肿瘤生长具有一定的抑制作用，并呈剂量依赖关系，其中在100 rag/kg剂量腹腔注射给药时抑制率均大于40%
权利要求
1.具有通式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物方面的用途通式I其中X为C＝O；O＝S＝O；n＝0，1，2，3；其中X为C＝O时，n＝0，1，2，3；X为O＝S＝O时，n＝0；R1为芳基，含有硫、氧、氮杂原子的C3-C6杂环基，芳基并杂环基(含有硫、氧、氮杂原子的C3-C6杂环基)；被卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、腈基、C1-C6烷氧基、C1-C6二烷基氨基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环基、芳基、取代芳基等基团单或多取代的芳基；被卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、腈基、C1-C6烷氧基、C1-C6二烷基氨基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环基、芳基、取代芳基等基团单或多取代的含有硫、氧、氮杂原子的C3-C6杂环基；被卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、腈基、C1-C6烷氧基、C1-C6二烷基氨基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环基、芳基、取代芳基等基团单或多取代的芳基并杂环基(含有硫、氧、氮杂原子的C3-C6杂环基)。R2为氢，单取代或多取代的C1-C6烷基。R3为单取代或多取代的卤素。R4为C1-C6烷基，被卤素单取代或多取代的C1-C6烷基。
2. 如权利要求1所述的用途，其特征在于优选的通式I的化合物或其药学上可接受的盐中Ri为苯基、萘基、蒽基、咪唑、吡啶、噁唑、异噁唑、呋喃、噻唑、吡唑、噻吩、吡咯、晚 嗪、嘧啶、吡嗪、哌啶、吗啉、哌嗪、四氢呋喃、苯并呋喃；被氟、氯、溴、羟基、羧基、氨基、硝基、腈基、d-C6烷氧基、Q-C6二烷基氨基、C3-C6 环烷基、C3-C6杂环基、芳基、取代芳基等基团单或多取代的苯基、萘基、蒽基、咪唑、吡啶、 噁唑、异噁唑、呋喃、噻唑、吡唑、噻吩、吡咯、哒嗪、嘧啶、吡嗪、哌啶、吗啉、哌嗪、 四氢呋喃、苯并呋喃。R2:为氢，单或多取代的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、 异戊基。R3:为单取代或多取代的氟、氯。R4:为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基，或者被氟、氯单取代或多取代的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基。
3. 如权利要求2所述的用途，其特征在于通式I的化合物或其药学上可接受的盐优选自 (士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(对氟苯乙酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4，5-二氢-5-异噁唑基]甲基]乙酰胺。(士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(间氟苯乙酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4，5-二氢-5-异噁唑基]甲基] 乙酰胺。(士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(邻氟苯乙酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4，5-二氢-S-异噁唑基]甲基]乙酰胺。(土)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(间氯苯乙酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4,5-二氢-5-异噁唑基]甲基] 乙酰胺。(i)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(邻氯苯乙酰基)-l-哌嗪基苯基〗-4,5-二氢-5-异噁唑基]甲基] 乙酰胺。(士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(对氯苯乙酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4，5-二氢-5-异噁唑基]甲基] 乙酰胺。(士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(3,5-二氯苯乙酰基H-哌嗪基]苯基]-4,5-二氢-5-异噁唑基]甲 基]乙酰胺。(土)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(邻甲氧基苯甲酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4，5-二氢-5-异噁唑基]甲 基]乙酰胺。(士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(对三氟甲基苯磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4,5-二氢-5-异噁唑基〗 甲基]乙酰胺。(土)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(间羧基苯磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4，5-二氢-5-异噁唑基]甲基] 乙酰胺。(士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(2-氯吡啶-3-磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]4,5-二氢-S-异噁唑基]甲 基]乙酰胺。(士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(2-氯-4-氟-5-羧基苯磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4，5-二氢-5-异噁 唑基]甲基]乙酰胺。(士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(2，3-二氢苯并呋喃-5-磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4,5-二氢-5-异 噁唑基]甲基]乙酰胺。(士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(邻氟苯磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4,5-二氧-5-异噁唑基]甲基]乙酰胺。(士)-N-[[3-[3-氛-4-[4-(5-溴噻吩-2-磺酰基)-l-哌嗪基]苯基H，5-二氢-5-异噁唑基]甲 基]乙酰胺。(士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(4-溴-2,6-二氯苯磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4,5-二氢-5-异噁唑 基]甲基]乙酰胺。(士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(间硝基苯磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4，5-二氢-5-异噁唑基]甲基] 乙酰胺。(土)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(间氨基苯磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4,5-二氢-5-异噁唑基]甲基〗 乙酰胺。(土)-N-[[3-[3-氟斗[4-(2-氯吡啶-3-磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4,5-二氢-5-异噁唑基]甲 基]乙酰胺盐酸盐。(士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(2-氯吡啶-3-磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4,5-二氢-5-异噁唑基]甲 基]乙酰胺柠檬酸盐。(士)-N-[[3-[3-氟-4-[4-(间羧基苯磺酰基)-l-哌嗪基]苯基]-4，5-二氢-5-异噁唑基]甲基]乙酰胺钾盐。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于活性成份选自所述式I化合物的药学上可接 受的盐，是与无机酸、有机酸成盐，优选盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢 盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、马来酸盐、苯 甲酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、枸槺酸盐、富马酸盐、牛磺酸盐等。此外，本发明所述的盐， 还可以是化合物与氢氧化钾、氢氧化钠形成的盐。
5. 如权利要求1一4之一所述的用途，其特征在于一种活性成份与辅料形成药物组合物， 其含量以重量比例计算在0.5%-99%,优选的范围为1%-50%。
6. 如权利要求1-4之一所述的用途，其特征在于药物组合物制备成口服制剂，其形式为 下列剂型之一片剂、分散片、口崩片、肠溶片、缓释片、咀嚼片、泡腾片、胶囊、肠溶胶 囊、缓释胶囊、颗粒剂、溶液剂。
7. 如权利要求l一4之一所述的用途，其特征在于药物组合物制备成注射剂，其形式为 下列剂型之一小针、输液、无菌粉针(冻干、直接分装)。
8. 如权利要求l-7所述的用途，其抗肿瘤包括结肠癌、白血病、胃腺癌、乳腺癌、口腔 癌、肺癌、肉瘤、黑色素瘤。
全文摘要
本发明涉及如中国专利申请(CN 200710060530.5)所述的具有通式I结构的酰氯和磺酰氯类衍生物在抗肿瘤方面的医药新用途。特征为该类化合物及其药学上可接受的盐或其药物组合物在制备抗肿瘤药物方面的新用途。具体地说，是在治疗结肠癌、白血病、胃腺癌、乳腺癌、口腔癌、肺癌、肉瘤、黑色素瘤方面的应用。其中，各基团定义如说明书所述。
文档编号A61K31/496GK101675931SQ20081015147
公开日2010年3月24日 申请日期2008年9月19日 优先权日2008年9月19日
发明者任晓文, 巍 刘, 颖 刘, 默 刘, 刘登科, 张士俊, 徐为人, 汤立达, 王景阳, 王玉丽 申请人:天津药物研究院