专利名称：：一种防治乳腺炎的微生物制剂及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种微生物制剂，特别涉及一种防治乳腺炎的微生物制剂及其应用。
背景技术：
：乳腺炎(也叫乳房炎)是一种常见的、复杂的、造成奶牛、羊、猪养殖业严重经济损失的疾病。我国北京、上海等地调査结果表明奶牛隐性乳腺炎发病率在60%左右。目前全世界约有2.2亿头奶牛，其中约有1/3的奶牛患有各种类型的乳腺炎，每年因乳腺炎造成的损失高达350亿美元。尽管对此病已进行100多年的研究，但至今未能提出一个彻底解决的办法。病原体感染是引起乳腺炎的主要原因，有细菌、真菌、病毒、支原体等。其中主要的致病菌是细菌，常见的有金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌属和支原体。葡萄球菌和链球菌是临床型乳腺炎的主要病原菌，占50%以上，其次是大肠杆菌。这三种病原菌所致的乳腺炎常年发生，其它病原菌所致的乳腺炎多为散发或继发。目前常规的防治乳腺炎的方法主要有干乳期在奶牛、羊、猪乳腺内灌注抗生素，抗生素可根据当地流行病菌选择最佳药物，直接将药物注入乳内，药物浓度高，吸收快，疗效好。但缺点是可能会对乳腺组织产生刺激性，会引发新的炎症。如果长期大量使用抗生素会使致病菌耐药菌株增加，一些乳腺炎病例变得难以用常规方法治愈。此外，牛奶中抗生素残留会影响牛奶品质。因此市场不允许出售抗生素残留过量的牛奶，同时也造成牛奶生产者的经济损失。中草药防治乳腺炎具有无药物残留、经济效益高的优点，但有见效慢的缺点。基因工程疫苗采用疫苗防治乳腺炎的发生是较为安全、有效的方法。但是利用疫苗防治牛乳腺炎最常见的问题是细菌抗原的变异，造成疫苗在第一年效果很好，第二年却失去作用。其它的一些疗法包括，乳腺按摩、食物疗法和同种疗法等，它们的主要优点是没有副作用和不会造成牛奶中药物的残留问题，致病菌不会产生抗药性。但是，这些疗法中大部分都耗时、耗力、还需要把病牛单独处理。它们不适应现代化的规模养殖，生产效率较低。蛭弧菌是寄生于其他细菌，并能导致宿主细菌裂解的一类细菌。比一般细菌小，能通过细菌滤器，有类似噬菌体的作用。单细胞，呈弧形或逗点状，有时呈螺旋状，大小(0.20.6)x(0.81.2)微米，端生鞭毛，多为一根。革兰氏染色呈阴性，可以裂解革兰氏阴性菌。我们的最新研究表明，有些蛭弧菌可以裂解包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、停乳链球菌等一些常见奶牛乳腺炎致病菌。蛭弧菌的生活史分两个阶段自由生活，能运动，不进行增殖的游泳体阶段和在特定宿主细菌的周质空间内进行生长繁殖的蛭质体阶段。蛭弧菌游泳体是指蛭弧菌侵入宿主细菌前的生长形式。蛭弧菌在游泳体阶段，识别并与宿主发生不可逆结合，然后侵入宿主，蛭弧菌游泳体侵入宿主细菌的过程非常快，一般几秒钟内即可完成。蛭弧菌蛭质体是蛭弧菌在特定宿主细菌的周质空间内进行生长繁殖的形式。蛭弧菌进入宿主菌细胞周质空间后，主要通过降解宿主细胞的大分子成为单体，然后摄入用于其生物大分子的合成。随着细胞增殖和水解酶产生，使宿主细胞壁膜被破坏，从而裂解释放出蛭弧菌。用蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体作为控制和消除乳腺炎致病菌的微生物制剂，兼具游泳体起效快，活力强和蛭质体制备、保存容易，杀菌作用时间更久和环境耐受力更强的优点。使得蛭弧菌混合体适合作为抑止或清除生物体及其环境中致病菌的生物净化因子，从而克服了抗生素滥用带来的副作用和常规消毒剂对奶牛和牛奶品质的不利影响。
发明内容本发明的首要目的在于克服现有技术中尚未同时应用蛭弧菌蛭质体和游泳体制备防治乳腺炎的微生物制剂不足之处，提供一种防治乳腺炎的微生物制剂。本发明的另一目的在于提供所述微生物制剂的应用。本发明的目的通过下述技术方案实现一种防治乳腺炎的微生物制剂，由蛭弧菌游泳体和蛭弧菌蛭质体构成；所述的蛭弧菌蛭质体为蛭弧菌存在于宿主菌内的状态；所述的蛭弧菌游泳体为蛭弧菌游离在宿主菌外部的状态；所述蛭弧菌蛭质体优选通过以下方法制备在含有宿主菌的DNB(dilutenutrientbroth)液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于1000ml蒸馏水中，pH值为7.27.6)中接入蛭弧菌，于2535。C、150300rpm培养3648h，得到含蛭弧菌蛭质体和蛭弧菌游泳体的培养液，培养液经4°C60008000rpm离心1520min后，去除含蛭弧菌游泳体的上清，得到的沉淀即是蛭弧菌蛭质体；所述宿主菌为乳腺炎致病菌；所述乳腺炎致病菌更有选为奶牛乳腺炎致病菌；所述奶牛乳腺炎致病菌包括能引起奶牛乳腺炎的大肠杆菌(￡"/^nW》co/i')、金黄色葡萄球菌(S啤/2;v/occocMSawrews)、表皮葡萄球菌(iS鄉/^/ococcwe//cfermzVfo)、无孚L链球菌CSVreptococcwsaga/a"/")和停乳链球菌(5V^pfococctw所述蛭弧菌蛭质体优选用DNB液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于1000ml蒸馏水中，pH值为7.27.6)、水、生理盐水或0.2mol/LpH值为7.27.6的磷酸盐缓冲液悬浮；所述蛭弧菌游泳体的制备方法为将蛭弧菌蛭质体制备方法中的含蛭弧菌游泳体的上清经1600018000rpm离心1520min后，得到的沉淀即是蛭弧菌游泳体；所述蛭弧菌游泳体优选用DNB液体培养基(营养肉汤0.8g,酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于1000ml蒸馏水中，pH值为7.27.6)、水、生理盐水或0.2mol/LpH值为7.27.6的磷酸盐缓冲液悬浮；所述蛭弧菌优选为蛭弧菌(Bcfe//ovAn'osp.)BDS01或蛭弧菌(^/e//ov/&n'osp.)BDS02的一种或两种；所述微生物制剂优选蛭弧菌游泳体和蛭弧菌蛭质体按细菌数1:1混合；所述蛭弧菌(5^//cm7v7'osp.)BDS01于2009年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M209169;对所述蛭弧菌BDS01进行负染后于电子显微镜下形态观察BDS01呈单细胞，弧形，大小为0.9x0.25^m，端生鞭毛，鞭毛长度为4pm;所述蛭弧菌BDSOl以双层平板法于28'C培养四天可形成直径l2mm的透明圆形噬菌斑；所述蛭弧菌(5&〃oW6n'osp.)BDS02于2009年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M209170;将所述蛭弧菌BDS02进行负染后于电子显微镜下形态观察BDS02呈单细胞，弧形，大小为0.65x0.2|im，端生鞭毛，鞭毛长度至少1.8(om;所述蛭弧菌BDS02以双层平板法于28。C培养四天可形成直径12rnrn的透明圆形噬菌斑；所述微生物制剂应用于防治乳腺炎；所述乳腺炎优选为奶牛乳腺炎、羊乳腺炎或猪乳腺炎；所述微生物制剂用于预防哺乳动物的乳腺炎时，哺乳动物为健康哺乳动物，是以浸泡冲洗、或喷洒的方法处理哺乳动物的乳腺，若浸泡冲洗，时间为lmin;若喷洒，将奶牛乳腺均匀喷洒两遍，要做到不留死角；其中的蛭弧菌浓度至少达到103pfU/ml，其优选范围为105108pfU/ml;所述微生物制剂用于治疗哺乳动物的乳腺炎时，乳腺为已经感染乳腺炎的乳腺，每次浸泡lmin，若喷洒，每次均匀喷洒两遍；每天2次，持续5天；所用蛭弧菌的浓度至少达到103pfli/ml，其优选范围为105108pfo/ml。本发明相对于现有技术，具有如下的优点及效果1、本发明所述微生物制剂在防治哺乳动物的乳腺炎中的效果显著。如表35所示，本发明中所述防治哺乳动物乳腺炎的微生物制剂在对哺乳动物乳腺炎的治疗上有显著效果，基本上跟常用抗生素的治疗效果相当。微生物制剂对健康哺乳动物预防乳腺炎效果也非常显著。2、本发明所述微生物制剂在防治哺乳动物乳腺炎应用中安全性好。微生物制剂中蛭弧菌通过裂解而消除可引起奶牛乳腺炎致病菌的方法是生物方法。蛭弧菌可侵染、裂解宿主细菌的特性使之适合作为抑止或清除生物体及其环境中致病菌的生物净化因子，且其在裂解完宿主细菌后，会因饥饿而自动消亡，从而克服了抗生素滥用带来的副作用。3、含有本发明所述防治微生物制剂适合推广应用于奶牛、羊、猪等哺乳动物养殖过程。蛭弧菌对人和奶牛、羊、猪等哺乳动物无毒副作用。适合于奶牛、羊、猪等大规模工厂化养殖，可以为肉制品和乳制品的绿色加工生产提供保障并且为防治哺乳动物乳腺炎提供了一种新方法。5、含有本发明所述防治奶牛乳腺炎的微生物制剂适用范围广，对人也可适用。具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例1(1)防治乳腺炎的微生物制剂的制备使用的蛭弧菌菌株分别为蛭弧菌BDS01和蛭弧菌BDS02。蛭弧菌BDS01于2009年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M209169;对所述蛭弧菌BDSOl进行负染后于电子显微镜下形态观察BDS01呈单细胞，弧形，大小为0.9x0.25pm，端生鞭毛，鞭毛长度为4pm，将其以双层平板法于28'C培养四天可形成直径12mm的透明圆形噬菌斑。所述蛭弧菌BDS02于2009年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M209170;将所述蛭弧菌BDS02进行负染后于电子显微镜下形态观察BDS02呈单细胞，弧形，大小为0.65x0.2pm，端生鞭毛，鞭毛长度至少1.8pm，将其以双层平板法于28'C培养四天可形成直径12mm的透明圆形噬菌斑。蛭弧菌蛭质体的制备分别在2个装有100mLLB(Luria-Bertani)液体培养基(蛋白胨10g，酵母膏5g,蒸馏水lOOOmL，pH7.2)的锥形瓶中接种大肠杆菌(购自广东省微生物菌种保藏中心，编号GIM1.137)，200rpm、28°C摇床培养18小时，培养液分别于4。C、5000rpm离心15min，弃上清。分别将沉淀加入到2个装有100mLDNB液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于1000ml蒸馏水中，pH值为7.27.6)的锥形瓶中，再分别加入从双层平板上挑取的蛭弧菌BDS01的噬菌斑和蛭弧菌BDS02的噬菌斑。恒温摇床250rpm、28'C培养36h。培养液分别于4°C6000rpm离心20min，去除含蛭弧菌游泳体的上清，保留沉淀(即蛭弧菌蛭质体)，加入生理盐水悬浮蛭弧菌蛭质体；蛭弧菌游泳体的制备将蛭弧菌蛭质体制备方法中的含蛭弧菌游泳体的上清经16000rpm离心20min后，得到的沉淀即是蛭弧菌游泳体，加入DNB液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于1000ml蒸馏水中，pH值为7.27.6)悬浮蛭弧菌游泳体。微生物制剂A由浓度为103pfb/ml的蛭弧菌BDSOl游泳体菌液和浓度为103pfU/ml的蛭弧菌BDS01蛭质体菌液按细菌数1:1混合组成；微生物制剂B由浓度为103pfu/ml的蛭弧菌BDS02游泳体菌液和浓度为103pfb/ml的蛭弧菌BDS02蛭质体菌液按细菌数1:1混合组成；将微生物制剂A和微生物制剂B按细菌数2:1混合，得到微生物制剂C;将微生物制剂A和微生物制剂B按细菌数1:1混合，得到微生物制剂D;将微生物制剂A和微生物制剂B按细菌数1:2混合，得到微生物制剂E。(2)微生物制剂治疗感染乳腺炎的病奶牛A、试验药物实验组步骤(1)制备的微生物制剂对照组乳酸环丙沙星(洛阳惠中兽药有限公司生产)；B、治疗病例共治疗临床型乳腺炎138例，其中乳酸环丙沙星组和微生物制剂A、B、C、D、E组各23例；C、用药剂量及方法用药剂量如下乳酸环丙沙星1.5W20mL;蛭弧菌103pfb/mll000mL;用药方法如下乳酸环丙沙星为乳区注射，用体积百分比75%酒精棉球消毒乳头，注完药液后用手按摩乳区35min使药液充分均匀扩散，最后用1°/。碘酊药浴乳头lmin，每天1次，连用5天；蛭弧菌为浸泡乳腺lmin或均匀喷洒乳腺两遍，每天2次，连用5天；D、疗效判定标准分临床痊愈、有效和无效三种；临床痊愈乳房红肿热痛硬消失，乳汁肉眼观察正常，奶产量回升，检测牛乳体细胞数小于50万个/mL;有效乳房红肿热痛硬明显好转，乳汁无凝块或仅有少量奶块，奶产量回升或痊愈停药5天内又复发者，检测牛乳体细胞数介于100万个/mL和200万个/mL之间；无效乳房红肿热痛硬无明显改善或更严重，乳汁异常，奶产量持续下降，检测牛乳体细胞数大于200万个/mL。牛乳体细胞数的检测采用国际乳业联合会(IDF)推荐采用的体细胞计数法。牛乳体细胞数推荐分级标准的具体规定见表l。具体测试过程首先用体积百分比75%酒精清洗每一个乳头端，并弃去第l-2把乳汁，取每一个乳头所挤的2-5mL乳放入相应的小平皿中。在每一个小平皿中加入定量检测试剂，即可根据反应现象和美国加利福尼亚乳房测试法(CMT法)判定标准进行判断。CMT法判定标准见表2。结果如表3所示，微生物制剂A组和微生物制剂B组的治疗效果不及抗生素组，但是对奶牛乳腺炎也具有一定的治疗效果。微生物制剂C、D、E组的治疗效果已与抗生素治疗组相当。并且微生物制剂D组治疗效果最好。蛭弧菌在乳腺表面通过裂解而消除病原菌，不会对奶牛健康产生影响，长期治疗致病菌不会产生抗药性，也不会导致抗生素在牛奶中的残留。如果加大蛭弧菌用量可能会取得更加显著的效果。蛭弧菌治疗奶牛乳腺炎工序简单，操作简便，成本也低。蛭弧菌在奶牛乳腺炎的治疗上具有很大的利用价值和应用潜力。表l、牛乳体细胞数分级标准牛乳等级体细胞数(万个/mL)乳房炎的判断A级B级C级D级乳房卫生优良隐性乳房炎患乳房炎严重乳房表2、CMT法判定标准判定符号被检乳乳汁反应细胞总数(万个/mL)—阴性混合物呈液状，倾斜检验盘时，液体流动流畅，皿底无凝块02可疑混合物呈液状，皿底可出现微量沉淀，稍加摇动，沉淀即刻消失1550+弱阳性皿底出现少量稀薄黏性沉淀，但不成胶状，摇动时，沉淀物散布于皿底，并有一定的黏性皿底沉淀物较多，较黏稠，微呈胶状，倾斜检验盘时沉淀物5080++阳性有明显黏附于皿底而难以流动的现象，当检验盘作旋转时，沉淀物有聚集于中心倾向80500+++皿内混合物的大部分或全部参与形成明显胶状沉淀物，几乎强阳性完全黏附于皿底，旋转检验时，凝胶聚集中心呈团块，难以散开>500y酸性乳乳汁呈黄色、酸败，为乳房炎>500p碱性乳乳汁呈深紫色，同时伴有奶产量减少的现象，为乳房炎；乳中掺碱时，乳汁易呈深紫色>500注分娩后l周内或泌乳后期的母牛都会出现强阳性反应，即初乳期和泌乳末期乳中体细胞数均出现生理性升高，故该法不适于检査初乳期和泌乳末期的乳样。表3微生物制剂治疗感染奶牛乳腺炎病牛效果治疗剂效果乳酸环丙微生物制微生物制微生物制微生物制微生物制沙星剂A剂B剂c剂D剂E例%例%例%例%例%例％痊愈1669.6939.11147.91252.21565.21356.5有效417.4834.8730.4626.1417.4626.1无效313.0626.121.721.7417.4417.4合计231002310023100231002310023100实施例2微生物制剂治疗感染乳腺炎小尾寒羊病羊，具体过程如下:A、试验药物实验组实施例l步骤(1)制备的微生物制剂对照组乳酸环丙沙星(洛阳惠中兽药有限公司生产)；B、治疗病例共治疗临床型乳腺炎120例，其中乳酸环丙沙星组和微生物制剂A、B、C、D、E组各20例；C、用药剂量及方法用药剂量如下乳酸环丙沙星1.5%10mL;蛭弧菌103pfii/ml1000mL;用药方法如下①先挤净乳汁，用体积百分比75%酒精消毒乳头，将乳导管插入乳腺，注入乳酸环丙沙星，然后抓住乳头由下向上顺次按摩乳房，使药液扩散于整个乳腺，每日2次，连用5天。②50g/L碘酊100mL，涂擦乳房皮肤(注意不要涂于乳头部)；蛭弧菌为浸泡乳腺lmin或均匀喷洒乳腺两遍，每天2次，连用5天；D、疗效判定标准分临床痊愈、有效和无效三种；临床痊愈乳房红肿、发热、疼痛消失，乳房无硬块，乳汁肉眼观察正常，奶产量回升；有效乳房红肿、发热、疼痛明显好转，乳汁无凝块或仅有少量奶块，奶产量回升或痊愈停药5天内又复发者；无效乳房红肿、发热、触诊表现疼痛，泌乳减少或停止，乳汁变性。结果如表4所示，微生物制剂A组和微生物制剂B组的治疗效果稍差，微生物制剂C、E组的治疗效果比较显著，微生物制剂D已与抗生素治疗组疗效相当。总体来说，微生物制剂对奶羊的治疗痊愈率低于奶牛，但是有效率高于奶牛。_表4微生物制剂治疗感染乳腺炎病羊效果__治疗剂_效果乳酸环丙微生物制微生物制微生物制微生物制微生物制沙星剂A剂B剂C剂D剂E例%例%例%例%例%例%痊愈12606302594511551050有效630945945630420630无效2102563052525420合计201002010020100201002010020100实施例3(1)防治母猪乳腺炎的微生物制剂的制备制备过程同实施例1步骤(1)，区别仅在于制备微生物制剂A、B、C、D、E时所用悬浮蛭质体和游泳体的溶液用PBS缓冲液(0.2mol/L，pH值为7.2)。(2)微生物制剂治疗感染乳腺炎病猪A、试验药物实验组步骤(1)制备的微生物制剂对照组0.5-1%盐酸普鲁卡因，青霉素(四川迪康科技药业股份有限公司生产)；B、治疗病例共治疗临床型乳腺炎120例，其中乳酸环丙沙星组和微生物制剂A、B、C、D、E组各20例；C、用药剂量及方法用药剂量如下盐酸普鲁卡因0.5-1%15mL，青霉素40万国际单位；蛭弧菌103pfli/ml1000mL;用药方法如下先挤净乳汁，局部涂上鱼石脂软膏，用0.5-1%盐酸普鲁卡因15毫升加入青霉素40万国际单位作乳区封闭注射，每日1次，连用5天；蛭弧菌为浸泡乳腺lmin或均匀喷洒乳腺两遍，每天2次，连用5天；D、疗效判定标准分临床痊愈、有效和无效三种；临床痊愈乳房潮红、肿胀、发热、发硬、疼痛消失，乳汁肉眼观察正常；有效乳房潮红、肿胀、发热、发硬、疼痛明显好转，乳汁无凝块或仅有少量奶块或痊愈停药5天内又复发者；无效乳房潮红、肿胀、发热、发硬、有痛感，不让仔猪吃奶。初期乳汁稀薄，内混絮状小块。后乳汁少而浓，混有白色絮状物，有时带血丝甚至有黄褐色脓液，有臭味。_表5微生物制剂治疗感染乳腺炎病猪效果_<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>结果如表5所示，微生物制剂A组和微生物制剂B组的治疗效果不如微生物制剂C、E组的治疗效果显著，微生物制剂D治疗效果最好。治疗效果虽不如抗生素，但是不会对母猪及仔猪的身体健康造成危害，长期使用也不会产生抗药性，并且加大微生物制剂的浓度会有更加显著的效果。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。权利要求1、一种防治乳腺炎的微生物制剂，其特征在于所述微生物制剂由蛭弧菌游泳体和蛭弧菌蛭质体构成。2、根据权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于所述蛭弧菌为保藏日期为2009年8月7日、保藏编号为CCTCCNO:M209169的蛭弧菌(B&〃ovAn'osp.)BDS01或保藏日期为2009年8月7日、保藏编号为CCTCCNO:M209170的蛭弧菌(^fe〃ovAn'osp.)BDS02的一种或两种。3、根据权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于所述的微生物制剂为蛭弧菌游泳体和蛭弧菌蛭质体按细菌数kl混合。4、根据权利要求13任一项所述的微生物制剂，其特征在于所述蛭弧菌蛭质体通过以下方法制备在含有宿主菌的DNB液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于1000ml蒸馏水中，pH值为7.27.6)中接入蛭弧菌，于2535。C、150300rpm培养3648h，培养液经4°C60008000rpm离心1520min后，去除含蛭弧菌游泳体的上清，得到的沉淀即是蛭弧菌蛭质体；将所述含蛭弧菌游泳体的上清经1600018000rpm离心1520min后，得到的沉淀即是所述的蛭弧菌游泳体。5、权利要求13任一项所述微生物制剂的应用，其特征在于所述微生物制剂应用于防治乳腺炎。6、根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述乳腺炎为奶牛乳腺炎、羊乳腺炎或猪乳腺炎。7、根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述微生物制剂处理乳腺，所述微生物制剂中的蛭弧菌的浓度至少达到103pfli/ml。全文摘要本发明公开了一种防治乳腺炎的微生物制剂及其应用。本发明将蛭弧菌游泳体和蛭弧菌蛭质体制备成防治乳腺炎的微生物制剂。通过检测，所述的微生物制剂对猪、羊和牛的乳腺炎具有良好的预防和治疗作用。用蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体作为控制和消除乳腺炎致病菌的微生物制剂，兼具游泳体起效快，活力强和蛭质体制备、保存容易，杀菌作用时间更久和环境耐受力更强的优点。并且蛭弧菌对奶牛无毒副作用，因此由蛭弧菌游泳体和蛭弧菌蛭质体制备得到的微生物制剂适合于猪、羊和牛大规模工厂化养殖，可以为肉制品和乳制品的绿色加工生产提供保障并且为防治乳腺炎致病菌提供了一种新方法。文档编号A61K35/66GK101642475SQ20091004226公开日2010年2月10日申请日期2009年8月28日优先权日2009年8月28日发明者孙丽滢,蔡俊鹏,陈小红申请人:华南理工大学