专利名称：一种三萜化合物及其药物组合物与治疗肿瘤的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一个新的三萜类化合物及其在制备防治肿瘤疾病药物中的应用，具体 涉及一个羊毛留烷型四环三萜类新化合物、及其制备方法和抗肿瘤的作用，并包括含该化 合物的药物组合物。
背景技术：
目前全世界每年死于癌症者700万以上，现在癌症患者约3700万，我国每年新发 病100万人，死亡80万人，在很多国家，目前癌症居死亡原因首位或第二位。其中，消化系统 的三大恶性肿瘤胃癌、肝癌、结肠癌更是以其发病率、死亡率高，转移迅速，愈后差的特点， 严重威胁着人类的健康。阿里红(FomesofficinaliWill.ex Fr.)Ames)是苦白蹄的干燥 菌瘤，具有温肺化痰、降气、活血消肿、利尿的作用。主要含有三萜酸类、脂肪酸类、留醇类及 微量元素等成分，其中三萜类成分复杂，质量不易控制。阿里红中三萜酸类成份有齿孔酸、 去氢齿孔酮酸、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸、硫色多孔菌酸、fomelactoneB, Versisponic acid D、去氢齿孔酸、阿里红酸Α、阿里红酸G。
发明内容
本发明要解决的技术问题是从阿里红药材中开发具有抗肿瘤作用的活性单体化 合物，特别是用于治疗肝癌、胃癌、直肠癌等实体瘤方面。为解决上述问题，本发明提供如下技术方案。本发明提供了阿里红活性单体3〃 β，4〃 α-二甲基-2〃(R)，3 〃(S)， 4" (S)-四氢呋喃-5〃 -酮-2〃 -螺-23-5' β-甲基-5' (S)-六氢氧杂|并[3 ‘，4' 13，17]-3 α-羟基-甾-8烯(Fomefficinol B)，及其制备方法和在制备防治肿瘤疾病药物 中的应用，特别是在治疗肝癌、胃癌、直肠癌等实体瘤方面的应用。同时，本发明还提供了含有Fomefficinol B防治肿瘤疾病的药物组合物；及药物 组合物给药途径及制备方法。如式 I 所示的 FomefTicinol B。 式I化合物在制备防治肿瘤疾病药物中的应用，尤其是式I化合物在制备防治消 化系统肿瘤药物中的应用，优选式I化合物在制备防治肝癌、结肠癌、直肠癌药物中的应
用。
含有式1化合物的药物组合物，其特征在于由有效量的式I化合物和药学上可接 受的辅料组成；所述药物可通过口服、舌下、经皮、肌肉或皮下、皮肤粘膜、尿道、阴道或静脉 途径给药；所述药物以口服剂、注射剂及局部给药制剂形式存在；所述口服剂包括胶囊剂、 口服液、口嚼剂、丸剂、片剂、颗粒剂；所述注射剂包括注射液、注射用冻干粉针剂型；局部 给药制剂包括霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂。本发明人通过系列实验证实了 Fomefficinol B具有防治肿瘤疾病的作用，尤其是 防治肝癌、结肠癌、直肠癌等作用显著。本发明人采用了体外细胞实验证实，Fomefficinol B能抑制多种肿瘤细胞的生 长，尤其能有效的抑制H印G2细胞、胃癌BGC-823细胞、结肠癌HCT-8细胞的生长，其抑制各 细胞生长的半数有效剂量IC5Q平均值分别为(0. 0375 士0. 002)mg/ml、(0. 030 士0. 002) mg/ ml、(0. 028 + 0. 002)mg/mlo本实验结果表明Fomefficinol B可以用于制备抗肿瘤尤其是防治肝癌、结肠癌、 直肠癌等药物。在制备防治肝癌、结肠癌、直肠癌等肿瘤疾病药物时可以单独使用，也可与 其他三萜类化合物的药物组合物的形式使用。本发明还提供了以Fomefficinol B为活性成分用于防治肿瘤疾病的药物组合物 及其药物剂型。本发明提供的药物组合物可按本领域内已知方法制备，并可通过口服、舌 下、经皮、肌肉或皮下、皮肤粘膜、尿道、阴道或静脉等途径给药。本发明提供的药物组合物 的剂型可按本领域已知方法制备，即以上述有效量的Fomefficinol B为有效活性成分，并 包括了药剂学上可接受的其他辅料组分，其中所述的Fomefficinol B含量可以为 99.99%。本发明的药物制剂包括口服剂和非肠道给药制剂，其中口服剂包括胶囊剂、口服 液、口嚼剂、丸剂、片剂、颗粒剂等，非肠道给药制剂包括注射液剂型及注射用冻干粉针剂型 等。本发明的药物制剂还包括局部给药制剂，如霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂等。本发明所述 的剂型并不限于此。在制备口服制剂时选用的辅料可以是淀粉、糊精或环糊精、蔗糖、硬脂酸盐等常规充填剂。在制备冻干粉针剂可以通过无菌喷雾干燥、低温真空干燥、冷冻干燥等方法制备。各制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定，故在此不 予详述。
图1、本发明化合物的质谱图2、本发明化合物的HNMR谱图3、本发明化合物的HMBC谱图4、本发明化合物的HMQC谱图5、本发明化合物的碳谱
具体实施例方式实施例1 :Fomefficinol B的制备方法将阿里红药材5kg采用95%乙醇提取，浓缩提取液，得浸膏2.5kg，用丙酮溶解浸 膏，加3kg(100-200目)硅胶拌样，将样品装柱后，依次用30L石油醚、40L 二氯甲烷、40L乙 酸乙酯、30L丙酮洗脱，将二氯甲烷洗脱液浓缩的到的375g浸膏，与等量的硅胶拌样，Ikg硅 胶干法装柱，用氯仿丙酮(1 0,10 1,3 1)梯度洗脱，收集10 1洗脱的流份反复 用硅胶柱进行细分，用氯仿甲醇(30 1)重结晶后，得化合物晶体(42mg)。通过核磁共振技术及质谱技术解析化合物结构，谱图见附图1-5。 化学名称为3 〃 β，4 〃 α - 二甲基-2 〃 (R)，3 〃 (S)，4 〃 (S)-四氢呋
喃-5〃 -酮-2〃 -螺-23-5' β-甲基-5' (S)-六氢氧杂；^ 并[3 ‘，4' :13，17]-3α-羟
基-留-8烯。熔点194-196°C。为白色不定型粉末，溶解性易溶于氯仿，可溶于甲醇，丙 酮，乙酸乙酯。薄层鉴别时，采用硅胶板，展开溶剂为石油醚乙酸乙酯(10 1),Rf = 0.5, 遇浓硫酸加热后，显紫色。实施例2 =Fomefficinol B片剂的制备Rf = 0. 5,遇浓硫酸加热后，显紫色。实施例2 =Fomefficinol B片剂的制备取Fomefficinol B20g，研磨粉碎，过80目筛。加过80目筛的微晶纤维素20g混合均勻后，加入2 %的羟丙甲纤维素作为粘合剂进行制软材，制粒干燥整粒，加入4%的崩 解剂羧甲基淀粉钠和润滑剂0. 5%硬脂酸镁与细粉混合均勻整粒，混勻，压片，即得。每片含 Fomefficinol BO. 03g。口服给药，每日3次，每次1片。实施例3 :Fomefficinol B冻干粉针剂的制备取Fomefficinol B20g，加入2. 3 %的甘露醇为支架剂，加入注射用水至1800ml 搅拌溶解后，加入总配置量2. 0%。活性炭，搅拌半小时，过滤，定容至2000ml，继以0. 45 u m, 0. 22um微孔滤膜分级过滤，滤液以每瓶2ml定量分装于西林瓶中，冷冻干燥，回充氮气，加 塞，轧盖，包装，即得。每支冻干粉针剂含量有Fomefficinol B0. 02g，每天注射给药1次，每 次1支。为了便于理解Fomefficinol B防治肿瘤疾病的效果，本发明进行了如下药效学实验实验例1 :Fomefficinol B体外对结肠癌细胞HCT-8的影响用含10% FBS的DMEM细胞培养液将Fomefficinol B (所用样品可采用实施例1的 制备方法制备，或采用其它制备方法制备)稀释成不同浓度，加入接种有结肠癌细胞HCT-8 的96孔板中，每孔200 iU，每组设5个复孔，平行设置细胞对照组。置于37°C，5% C02培 养箱中培养，每日观察细胞状态。药物作用72小时后，取出96孔板，吸去各孔内培养液，并 加入0. 5mg/ml的MTT溶液200 yl，平行设置空白对照组，置于37°C，5% C02培养箱中继续 培养4小时后取出，吸出各孔内的MTT溶液，分别加入DMS0溶液200 u 1，室温放置10分钟， 充分震荡60秒后，于96孔板酶标检测仪上测定570nm处的0D值，计算各个浓度组药物对 细胞的生长抑制率和IC5(I，共进行两批实验。第一批实验中药物浓度从lmg/ml设起，依次2 倍比稀释成 9 个浓度，分别为 1、0. 5,0. 25,0. 125,0. 063,0. 031,0. 016,0. 008,0. 004mg/ml ； 根据第一批实验结果，第二批实验中将药物2倍比稀释成5个浓度，依次为0. 125,0. 063、 0. 031,0. 016,0. 008mg/ml，具体实验结果见表 1 表1 Fomefficinol B体外对结肠癌细胞HCT-8的影响 注FomefficinolB 毒性结果，第-批 IC5(1 为(0. 027士0. 002)mg/ml，第二批 IC5(1 为(0.029士0.002)mg/ml。“——”第二批实验中未设该剂量组。药物抑制细胞生长的半数有效剂量IC5Q < 300 u g/ml (摩尔浓度< 200 y M)时，即 具有抗肿瘤活性。本实验中阿里红新化合物Fomefficinol B对HCT-8细胞的IC5(1平均为 (0. 028士0. 002)mg/ml，可知该Fomefficinol B有较好的抗结肠癌活性。实验例2 :Fomefficinol B体外对胃癌细胞BGC-823的影响用含10% FBS的DMEM细胞培养液将Fomefficinol B稀释成不同浓度，加入接种 有胃癌细胞BGC-823的96孔板中，每孔200 iU，每组设5个复孔，平行设置细胞对照组。置 于37°C，5% C02培养箱中培养，每日观察细胞状态。药物作用72小时后，取出96孔板，吸去 各孔内培养液，并加入0. 5mg/ml的MTT溶液200 u 1，平行设置空白对照组，置于37°C，5% C02培养箱中继续培养4小时后取出，吸出各孔内的MTT溶液，分别加入DMS0溶液200 yl， 室温放置10分钟，充分震荡60秒后，于96孔板酶标检测仪上测定570nm处的0D值，计算 各个浓度组药物对细胞的生长抑制率和IC5(I，共进行两批实验，第一批实验中药物浓度从 lmg/ml设起，依次2倍比稀释成9个浓度，分别为1,0. 5,0. 25,0. 125,0. 063,0. 031,0. 016、 0. 008,0. 004mg/ml ；根据第一批实验结果，第二批实验中将药物2倍比稀释成5个浓度，依 次为 0. 125,0. 063,0. 031,0. 016,0. 008mg/ml，具体实验结果见表 2 表2 Fomefficinol B体外对胃癌细胞BGC-823的影响 注:FomefficinolB 毒性结果，第一批 IC50 为(0. 029士0. 002)mg/ml，第二批 IC50 为(0.031 士0.002)mg/ml。“——”第二批实验中未设该剂量组.Fomefficinol B 对 BGC-823 细胞的 IC50 平均为(0. 030士0. 002)mg/ml，可知其具 有很好的抗胃癌活性。实验例3 :Fomefficinol B体外对肝癌细胞H印G2的影响用含10% FBS的DMEM细胞培养液将Fomefficinol B稀释成不同浓度，加入接种有肝癌细胞H印G2的96孔板中，每孔200 μ 1，每组设5个复孔，平行设置细胞对照组。置于 37°C,5% CO2培养箱中培养，每日观察细胞状态。药物作用72小时后，取出96孔板，吸去 各孔内培养液，并加入0. 5mg/ml的MTT溶液200 μ 1，平行设置空白对照组，置于37°C，5% CO2培养箱中继续培养4小时后取出，吸出各孔内的MTT溶液，分别加入DMSO溶液200 μ 1， 室温放置10分钟，充分震荡60秒后，于96孔板酶标检测仪上测定570nm处的OD值，计算 各个浓度组药物对细胞的生长抑制率和IC5tl，共进行两批实验，第一批实验中药物浓度从 lmg/ml设起，依次2倍比稀释成9个浓度，分别为1,0. 5,0. 25,0. 125,0. 063,0. 031,0. 016、 0. 008,0. 004mg/ml ；根据第一批实验结果，第二批实验中将药物2倍比稀释成5个浓度，依 次为 0. 125,0. 063,0. 031,0. 016,0. 008mg/ml，具体实验结果见表 3 表3 Fomefficinol B体外对肝癌细胞H印G2的影响 注=FomefficinolB 毒性结果，第一批 IC50 为(0. 037士0. 002)mg/ml，第二批 IC50 为(0.038士0.002)mg/ml。“——”第二批实验中未设该剂量组。本实验中Fomefficinol B 对 H印G2 细胞的 IC5tl 平均为(0. 0375士0. 002)mg/ml 可见，Fomefficinol B有很好的抗肝癌活性。由表1-3的数据可知，一定浓度的Fomefficinol B,能明显的抑制结肠癌细胞 HCT-8、胃癌细胞BGC-823和肝癌H印G2细胞的生长，可见Fomeff icinol B抑制大肠肿瘤上 皮细胞生长的作用明显，表现了对消化道内引发的肿瘤具有较好的抑制活性。随着药物浓 度的增大，抑制作用增强，呈现良好的量效关系。并且，其抑制细胞生长的半数有效剂量IC5q 远小于< 0. 3mg/ml，对正常细胞的毒性较小。表现Fomefficinol B在防治消化道内引发的 多种肿瘤，尤其结肠癌、胃癌和肝癌时有效剂量低，作用明显，毒性低的特点。
权利要求
如式I所示的3″β，4″α-二甲基-2″(R)，3″(S)，4″(S)-四氢呋喃-5″-酮-2″-螺-23-5′β-甲基-5′(S)-六氢氧杂并[3′，4′13，17]-3α-羟基-甾-8烯化合物。F2009101358408C0000011.tif,F2009101358408C0000012.tif
2.权利要求1的式I化合物在制备防治肿瘤疾病药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于式I化合物在制备防治消化系统肿瘤药物 中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，消化系统肿瘤包括肝癌、结肠癌、直肠癌。
5.含权利要求1式1化合物的药物组合物，其特征在于由有效量的式I化合物和药学 上可接受的辅料组成。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于所述药物可通过口服、舌下、经皮、 肌肉或皮下、皮肤粘膜、尿道、阴道或静脉途径给药。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述药物以口服剂、注射剂及局部给药制 剂形式存在。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述口服剂包括胶囊剂、口服液、口嚼剂、 丸剂、片剂、颗粒剂；所述注射剂包括注射液、注射用冻干粉针剂型；局部给药制剂包括霜 剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂。基-留-8烯化合物。
全文摘要
本发明涉及一种四环三萜化合物在制备防治肿瘤疾病药物中的应用。本发明的试验证明，该化合物具有显著防治消化系统肿瘤疾病的作用，尤其具有较好的防治结肠癌、直肠癌、肝癌等作用。本发明同时还提供该化合物用于制备防治肿瘤疾病的药物制剂。
文档编号A61K31/585GK101875687SQ200910135840
公开日2010年11月3日 申请日期2009年4月29日 优先权日2009年4月29日
发明者周亚伟 申请人:周亚伟