铂配位化合物及其利用的制作方法

专利名称：铂配位化合物及其利用的制作方法
技术领域：
本发明涉及四氮杂茂(tetrazolato)交联型的钼配位化合物、该钼配位化合物的 制造方法及其利用。其中，本申请主张2008年1月16日提出的日本专利申请第2008-007357号的优 先权，该申请的全部内容在本说明书中引用作为参照。
背景技术：
顺钼(cis-diamminedichloroplatinum(II))是2个氯化物离子基团和2个氨 合物基团顺式配位得到的钼(II)单核配合物，作为最有效的抗癌剂之一，在化学疗法 中广泛应用。另外，作为顺钼疗法中对副作用或者癌细胞耐性的对策，临床上利用卡钼 (Carboplatin)、奈达钼(Nedaplatin)和奥沙利钼(Oxaliplatin)的顺钼类似物。可以认为在顺钼的作用机制和体内代谢路径中，该配合物参与与细胞内的DNA链 形成1，2-链内交联从而使DNA链产生明显的变形(非专利文献1)。认为具有类似于顺钼 的结构的上述钼制剂也以相同的方式结合于DNA。另一方面，期望开发出具有与这些现有的钼制剂不同的药剂特性(profile)的钼 制剂。作为一个有效手段，可以考虑设计与现有的顺钼类制剂在作用机制和体内代谢路径 方面不同的钼配位化合物。例如，期待利用由于与顺钼分子结构大幅不同而能够以与顺钼 不同的方式结合于DNA的钼配合物(例如钼多核配合物)，实现与顺钼类钼制剂不同的药剂 特性。作为涉及这种技术的现有技术文献，可以列举专利文献1和非专利文献2、3。专利文献1 国际公开第96/16068号小册子非专利文献 1 Jamieson, E. R. and Lipperd, S. J. “ Structure, Recognition, and Processing of Cisplatin-DNA Adducts" Chem. Rev. ,1999,99,2467-2498.非专利文献2 :Kasparkova，J. ；Zehnulova, J. ；Farrell,N. ；and Brabec，V. 〃 DNA interstrand cross-links of the novel antitumor trinuclearplatinum complex BBR3464. Conformation, recognition by high mobilitygroup domain proteins, and nucleotide excision repair. “ J Biol Chem 2002,277, (50)，48076—48086.非专禾O 文献 3 Komeda, S. ；Lutz, Μ. ；Spek, A. L. ；Chikuma, Μ. ；andReedijk, J. " New antitumor-active azole-bridged dinuclear platinum(II)complexes synthesis, characterization, crystal structures, and cytotoxicstudies. " Inorg Chem 2000,39, (19),4230-4236.

发明内容
本发明的目的在于提供能够以与顺钼类制剂不同的方式结合于DNA的新型的钼双核配位化合物和含有该化合物作为有效成分的抗癌剂。本发明的其它目的在于提供 这样的配位化合物的制造方法。 根据本发明，可以提供下述式(I)所示的钼配位化合物。
这里，A是可以具有取代基的四氮杂茂，B是有机或无机的阴离子，m和η是对应于 钼配位部分(方括号内的配离子)的电荷数和阴离子的电荷数而决定的整数。其中，在本说明书中，“四氮杂茂”通常指IH-四唑类化合物(C5位具有取代基或 者不具有取代基的IH-四唑)的脱质子化(m位的质子脱离)而得到的阴离子。即，表示 IH-四唑类化合物的m位的质子脱离而得到的阴离子。上述式(I)所示的化合物，根据A与构成配位中心的两个钼(II)离子的交联方 式，大致区分为构成A的四唑环的m和N2分别与两个钼离子配位的m，N2-交联结构的钼 配位化合物、和该四唑环的N2和N3分别与两个钼离子配位的N2，N3-交联结构的钼配位化 合物。这里公开的化合物的一个优选方式为N2，N3-交联结构的钼配位化合物。这样的交 联结构的钼配位化合物作为抗癌剂和其它药剂的有效成分更有用(例如，发挥更高的细胞 毒性)。其中，特别优选式(I)中的A是不具有取代基的四氮杂茂的N2，N3-交联钼配位化 合物。根据本发明，还可以提供上述式(I)中的A是具有取代基(即，与四唑环的5位C 结合的取代基)的四氮杂茂的N2，N3-交联钼配位化合物。该取代基可以是直链状、支链状 或环状的任一种，该取代基中可以进一步具有取代基。例如，可以是选自碳原子数为1 6 的烃基、-CH2COCT以及-CH2COORx (这里，Rx是碳原子数为1 4的烷基)中的任一种。这 样的具有取代基的N2，N3-交联钼配位化合物容易得到高纯度的物质，因而优选。另外，这里公开的任一种钼配位化合物，能够以顺钼在病理学上的利用方式为基 准而利用。例如，可以将上述钼配位化合物的至少一种用作抗癌剂的有效成分之一。此时， 上述式(I)中的B优选为药理学上可接受的阴离子。根据本发明，上述式(I)所示的钼配位化合物优选通过下述制造方法制得，该制 造方法包括使下述式(II)所示的化合物与具有取代基或不具有取代基的IH-四唑类化合 物以1 1 1 1.2的摩尔比反应的工序。在该工序中，生成m，N2-交联钼配位化合物 和N2，N3-交联钼配位化合物的混合物时，根据本发明，从该混合物中所含的上述2种化合 物的任一种中分离另一种，从而对上述化合物中的至少一种进行精制。
3 3 H H N N
\\ Pt
HO\ /OH /\
\\ N N
3 3
H H
/ I I /|\
Br 上述制造方法的一种优选方式中，在从上述混合物分离上述化合物的至少一种的 工序中，利用使用高氯酸盐水溶液作为移动相的反相色谱法。另外，该水溶液中的高氯酸盐 优选为高氯酸锂。


图1是例1中得到的混合物的1H-NMR谱。图2是例3中得到的5-H-N1，N2的1H-NMR谱。图3是例3中得到的5-H-N2，N3的1H-NMR谱。图4是例4中得到的混合物的1H-NMR谱。图5是例3中得到的5-H-N1，N2的质谱。图6是例3中得到的5-H-N2，N3的质谱。图7是例5中得到的5-甲基-N2，N3的质谱。图8是例6中得到的5-乙酸乙酯-N2，N3的质谱。图9是例7中得到的5-乙酸酯-N2，N3的质谱。图10是例8中得到的5-苯基-N2，N3的质谱。图11是利用X射线解析得到的上述5-甲基的结晶结构。图12是利用X射线解析得到的上述5-乙酸酯的结晶结构。
具体实施例方式以下，说明本发明的优选实施方式。其中，本说明书中特别提及的事项(例如化合 物的合成方法和分离精制方法)以外的事项、且是本发明的实施所必需的事项(例如调制 将钼化合物作为有效成分的抗癌剂(药剂组合物)的一般事项)，本领域技术人员可以基于 有机化学、无机化学、药学、医学、病理学、卫生学等领域中的现有技术的设计事项把握。本 发明可以基于本说明书中公开的内容和本领域的技术常识实施。这里公开的钼配位化合物的上述式中的A是通过IH-四唑类化合物的脱质子化 (Ni位的质子脱离)而得到的四氮杂茂。A优选为C5位具有氢原子或低级烃基的四氮杂茂。另外，上述式中的B没有特别限制，例如可以是选自无机酸离子和有机酸离子中 的一种或者两种以上。作为无机酸离子，例如，可以列举氯化物、溴化物、硝酸根、磷酸根、硫 酸根、高氯酸根等。作为有机酸离子，例如，可以列举乙酸根、柠檬酸根、乳酸根、马来酸根、 酒石酸根、苯甲酸根(《^，一卜)等。其中，上述式(I)所示的配位化合物可以以水合物 的方式存在。因此，本发明提供的钼配位化合物中，包括上述式(I)所示的化合物的水合 物。上述式中的m和η是根据钼配位部分(方括号内的配离子)的电荷数和B的阴离 子的电荷数而决定的整数。这里，各钼(II)离子的电荷数为+2，羟基的电荷数为-1。因此， 例如在A为不具有取代基或具有不带电荷的取代基的四氮杂茂时，四氮杂茂环上的电荷数 为-1，因此钼配位部分的电荷数为+2。因此，如果B的电荷数为-2，则m和η均为1 ；如果 B的电荷数-1，则m为1、η为2。这里公开的任一种钼配位化合物能够基于顺钼在病理学上的利用方式利用。此 时，式(I)中的B优选为药理学上可接受的阴离子。这样的钼配位化合物，例如能够与顺钼 同样作为抗癌剂利用。基于本发明的抗癌剂的调制，除了含有本发明的钼配位化合物的至 少一种作为有效成分以外，没有特别限制。作为有效成分，可以仅含有上述钼配位化合物的 任一种，也可以含有两种以上。另外，作为其它的有效成分，可以含有其它的抗癌剂、缓和副 作用的药剂和/或提高抗癌作用的药剂等。关于给药方法，在能够得到药理效果的范围内CN剂同样，使该钼配位化合物溶解在生理盐水等 中，通过静脉注射向患者给药。本发明的钼配位化合物优选通过下述制造方法制造，该制造方法包括使式(II) 所示的化合物(起始物质)与IH-四唑类化合物在适当的溶剂中以1 1 1 1.2的摩 尔比反应的工序。这里，如果IH-四唑类化合物的用量比上述摩尔比多得过多，则大量产生 副产物(式(I)所示的钼配位化合物以外的生成物，即杂质)，因而目的物的分离精制变得 困难。通过使起始物质与IH-四唑类化合物以上述优选的摩尔比反应，典型地能够以白色 粉末状态得到几乎不含杂质、处理容易的生成物(可以是m，N2-交联钼配位化合物和N2， N3-交联钼配位化合物的混合物)。特别是在式(I)中的A是不具有取代基的四氮杂茂的 钼配位化合物的制造中，通过使上述起始物质与IH-四唑类化合物以上述范围的摩尔比反 应，在目的物的产率和分离精制的容易性等方面可以得到显著的效果。在使起始物质与IH-四唑类化合物反应时，典型地将起始物质溶解在适当的溶剂 中，在得到的溶液中添加IH-四唑类化合物。作为能够使用的溶剂，只要是能够溶解该起始 物质且不损害期望的钼配位化合物的生成则没有特别限制，优选水(蒸馏水)。IH-四唑类 化合物可以一次添加或分割为几次添加。可以将该化合物溶解在适当的溶剂(优选与溶解 起始物质所使用的溶剂相同的溶剂)中而得到的溶液一次添加或分割为几次添加，或者也 可以缓慢滴下。例如，优选采用将上述IH-四唑类化合物溶液一次性添加的方式。得到的反应液优选在遮光下进行搅拌。此时的温度只要不损害该反应则没有 特别限制，但优选25 55°C左右，更优选35 45°C，进一步优选约40°C。另外，反应 时间只要在不显著减少产率的范围内则没有特别限制，但优选24小时 64小时，更优 选36小时 52小时，进一步优选40小时 48小时。其中，上述式(II)所示的起始物 质(例如，式[{cis-Pt(NH3)2}(y-0H)]2(N03)2所示的化合物)能够根据公知的合成方 法合成° 例如，优选米用 R. Faggiani. R. ；B. Lippert. B ；Lock, C. J. L. ；and Rosenberg, B. “ Hydroxo-bridged platinum(II)complexes. 1. Di-μ -hydroxo-bis[diammineplatinu m(II) Jnitrate, [(NH3)2Pt(OH)2Pt(NH3)2] (NO3)2. Crystalline structure and vibrational spectra. “ J Am Chem Socl977，99，(3)，777-781 (以下称为“非专利文献 4”)中记载的合 成方法。在上述反应中，作为IH-四唑类化合物，优选使用C5位具有氢原子或者低级烃基 的IH-四唑，特别优选使用C5位具有氢原子的IH-四唑。在使用C5位为氢原子的IH-四 唑时，通过上述反应，能够生成附，N2-交联钼配位化合物和N2，N3-交联钼配位化合物的混 合物(两种异构体的混合物)。但是，根据这里公开的制造方法，该混合物除了这些异构体 之外，几乎不含副产物(杂质)。因此，与上述含有大量杂质的混合物相比，由于吸湿性极低 等特性而操作容易。另外，通常与如上所述结构非常类似的异构体的混合物很难以高纯度分离精制， 但是根据本发明，通过从该混合物中分离至少任一种异构体，能够高效地以高纯度精制上 述混合物中所含的异构体。在该分离精制中，例如，使用反相色谱。作为使用的色谱，可以 使用市售的色谱，例如，优选使用高速液相色谱或中压梯度色谱等。特别优选使用中压梯度 色谱。作为使用的色谱柱，只要能够进行目的物的分离精制则没有特别限制，优选使用
6ODS(C18)柱。作为该ODS柱，例如，优选使用山善株式会社的商品名为“Ultrapack”的产品。作为移动相，只要能够从混合物中分离至少一种的异构体则没有特别限制，但优 选使用高氯酸盐溶液(典型的是水溶液)。该高氯酸盐只要不损害所得到的钼配位化合物 则没有特别限制，优选锂盐、钠盐等，特别优选使用锂盐。由此，能够简便地进行精制后的钼 配位化合物的脱盐。即，通过将冷冻干燥分取的溶液而得到的钼配位化合物用少量的醇类 (甲醇、乙醇、丙醇等)洗净，能够容易地除去高氯酸盐。高氯酸盐溶液的浓度可以设定为， 该溶液的PH为大致2. 5 3. 5 (例如大致为3. 0)。例如使用高氯酸锂溶液作为高氯酸盐 溶液时，如果进行调制使得该溶液中的高氯酸锂浓度约为0. 1M，则pH落入上述范围内而优 选。对于其它事项(柱的大小、流速等)可以根据注入的样品量而适当设定。另外，根据本发明的制造方法，能够制造C5位具有取代基的四氮杂茂交联钼配位 化合物。对该取代基没有特别限制，可以是直链状、支链状、环式的任一种。特别优选低级烃 基。例如为碳原子数1 6的低级烷基(例如甲基、乙基、丙基、异丙基等)或芳基等(例 如苯基)。另外，该取代基可以被进一步取代。例如，可以是取代有乙酸酯基或乙酸乙酯基 等的低级烷基。作为C5位的取代基的其它例子，可以列举氨基(可以是N带有+1的电荷 或者不带电荷的氨基)、甲硫基、氨甲酰基等。其中，在上述制造方法中使C5位具有取代基的IH-四唑反应时，主要生成N2，N3 交联的异构体。在这种情况下，即使采用省略上述混合物的分离精制工序的制造方法，也能 够以高纯度得到该异构体。因此，本说明书公开的技术包括下述钼配位化合物的制造方法， 其用于制造上述式(I)中的A是具有取代基的四氮杂茂的钼配位化合物，其特征在于，使上 述式(II)所示的化合物与具有取代基的IH-四唑类化合物以1 1 1 1. 2的摩尔比 反应。这里使用的IH-四唑类化合物所具有的取代基，可以是与式(I)中的A所具有的取 代基相同的基团，也可以是式(I)中所示的化合物与IH-四唑类化合物反应后能够通过简 单的工序变换为上述A所具有的取代基的基团。以下，说明本发明的几个实施例，但是，本发明不受这些实施例的限制。其中，作为以下所示的例1、例4 6、例8的起始物质[{cis-Pt (NH3) J (μ -0Η)]2(Ν03)2，使用根据上述非专利文献4合成的物质。〈例 1>在本例中，通过使式(II)所示的化合物与IH-四唑(即，不具有取代基的IH-四 唑类化合物)以1 1.1的摩尔比反应，合成式(I)中的A是不具有取代基的四氮杂茂的 钼配位化合物。即，在75mL蒸馏水中溶解有2. Og[ {cis-Pt (NH3)2I ( μ _0H) ]2 (NO3)2的溶液中，添加 0. 252g IH-四唑(同仁化学)(1. 1当量)，将得到的反应液在遮光下以40°C搅拌约40小 时。为了避免得到的钼配合物的聚合物化反应，使用旋转式蒸发器在30°C以下对该反应液 进行减压浓缩，用甲醇和二乙醚洗净残留的粗产物并进行滤取后，用真空干燥器进行干燥， 得到1. 9g白色粉末。在图1中表示该白色粉末的1H-NMR谱(VarianMercury300NMR)。由 该NMR谱可知，上述白色粉末是以约6. 5 3.5的摩尔比含有Ni，N2交联型钼配位化合物 [{cis-Pt (NH3)2I2 (μ -0H) (μ -tetrazolato-Nl, N2)] (NO3)2 禾口 N2，N3 交联型钼配位化合物 [{cis-Pt (NH3)2I2 (μ -0H) (μ -tetrazolato-N2，N3)] (NO3)2 的混合物，基本不含其它杂物。 另外，上述白色粉末操作处理。
7
< 例 2>反复将由例1得到的混合物(样品1)从水中重结晶，从而对N2，N3-交联钼配位 化合物进行精制，直至Ni，N2交联型和Ni，N2交联型的摩尔比为4 6左右(样品2)。利用以下方法评价样品1、样品2和作为比较例的顺钼(样品3)的细胞毒性。<对H460非小细胞肺癌细胞的In-Vitro细胞毒性(癌细胞增殖抑制活性)的研
究〉在添加药物之日的前一天，在24孔平底微孔板上接种H460非小细胞肺癌细胞，使 其为12000 20000个/孔。将各样品(参照表1中的样品序号)分别溶解于Q-H2O水中， 使浓度为100 μ M，准备各水溶液。将稀释这些水溶液而得到的各种浓度的溶液ImL注入各 孔中。将该微孔板以37°C培养24小时之后，在各孔中添加200 μ L溴化-3-(4，5- 二甲基 噻唑-2-基)-2，5_ 二苯基四唑(MTT)溶液(5mg/mL)，以37°C再培养4小时。为了将通过 MTT的还原而生成、析出的甲腊溶解，在各孔中添加200 μ L 二甲基亚砜(DMSO)。使用酶标 仪测定各孔的550nm的吸光度。各孔的吸光度测定三次，各实验至少重复三次。IC5tl值通过与不添加药剂的对照 比较，以甲腊生成量为50%的浓度算出。在表1中表示该结果。可知对N2，N3-交联钼配位化合物进行粗精制而得到的样 品2显示更高的细胞毒性。[表 1]对H460非小细胞肺癌细胞的钼配位化合物的IC5tl值 < 例 3>在本例中，将例1中得到的混合物以高纯度分离精制为Ni，Ν2交联型和Ni，Ν2交 联型。S卩，利用中压梯度色谱分离上述混合物。该分离使用山善株式会社的中压梯度色 谱装置“YFLC-pr印”，以下述条件进行。移动相0· IM高氯酸锂(ρΗ3· 0)柱(D26mmX300mmUltra Pack ODS 柱(山善株式会社)检测波长254nm流速20mL/min样品注入量1次5mL用二乙醚清洗将各洗脱液冷冻干燥而得到的白色粉末，得到0.86gNl，N2交 联型的钼配位化合物[{cis-Pt (NH3) J 2 ( μ -OH) ( μ -tetrazolato-Nl, Ν2)] (ClO4) 2(以 下称为5-Η-Ν1，N2)和0. 47g N2，N3交联型的钼配位化合物[{cis-Pt (NH3) J2 ( μ-0H) (μ -tetrazolato-N2,N3)] (ClO4) 2 (以下称为 5_H_N2，N3)。该 5_H_N1，N2 相当于上述式(I) 中的取代基A是下述式(III)所示基团的钼配位化合物。另外，该5-H-N2，N3相当于上述式(I)中的取代基A是下述式(IV)所示基团的钼配位化合物。用分离精制后的5-Η-Ν1，Ν2和5_H_N2，N3的产量之和除以理论产量而算出的最终 产率为56. 5%。另外，分离精制后的5-Η-Ν1，Ν2(样品4)和5_H_N2，N3(样品5)的产率分 别为 36. 5%和 20. 0%。 用于鉴定5-Η-Ν1，Ν2和5_H_N2，N3所使用的结构分析数据(分离精制后)记录如 下(NMR谱仪Varian INOVA 500，质量分析装置 JOEL JMX-700)。另外，将 5-H-N1，N2 和 5-H-N2,N3的NMR谱分别表示在图2和图3中，将它们的质谱分别表示在图5和图6中。[{cis-Pt (NH3)2I2 (μ-0H) ( μ-tetrazolato-Nl，Ν2) ] (ClO4) 2 (5_H_N1，N2)NMR 分析1H-NMR(D2O, TSP_d4) δ (ppm) 8. 84 (s, 1H, NH)13C-NMR (D2O, TSP_d4) δ (ppm) 152. 6195Pt-NMR (D2O，Na2PtCl6) δ (ppm) -2127, -2177质量分析(ESI)[M-H+] 542. 2 (理论值 543. 1)[M+C1041 642. 8 (理论值 643. 0)(M= [Icis-Pt(NH3)2I2(U-OH) ( μ -tetrazolato-Nl, N2)]2+)[{cis-Pt(NH3)2}2(y-0H) ( μ -tetrazolato_N2，N3) ] (ClO4)2 (5_H_N2，N3)NMR 分析1H-NMR(D2O, TSP_d4) δ (ppm) 8. 66 (s, 1H, NH)13C-NMR (D2O, TSP_d4) δ (ppm) 152. 6195Pt-WR (D20，Na2PtCl6) δ (ppm) -2192质量分析(ESI)[M-H+] 542. 2 (理论值 543. 1)[M+C104_] =642. 8 (理论值 643. 0)(M= [{cis-Pt(NH3)2}2(y-0H) ( μ -tetrazolato-N2, N3)]2+)< 例 4>在本例中，使式(II)所示的化合物与IH-四唑(即，不具有取代基的IH-四唑类化
5-H-N 1, N 2
5 -H-N 2, N 3合物)以1 4的摩尔比反应。即，IH-四唑相对于[{ci s-Pt (NH3) 2} (μ-OH) L(NO3)2的用 量为4当量。其它的方面与例1同样进行，得到生成物。由图4的NMR谱可知，该生成物除 了含有 Ni，N2 交联型的钼配位化合物[{ci s-Pt (NH3) 2}2(μ -OH) ( μ -tetrazolato-Nl, Ν2)] (NO3)2和 N2, N3 交联型的钼配位化合物[Icis-Pt(NH3)2I2(U-OH) ( μ-tetrazolato_N2， N3)] (NO3)2以外，还含有至少一种的副产物(杂质)，吸湿性非常高，处理困难。另外，含有 杂质的该混合物(粗产物)的产率为10%以下。假设按照实施例1的方法进行该混合物的 分离精制，则异构体的总产率进一步降低至其一半左右。其为根据本发明的制造方法制造 时的约九分之一以下。〈例 5>在本例中，合成式(I)中的A是C5位具有甲基的四氮杂茂的钼配位化合物。即，在30mL 蒸馏水中溶解有 1. Og [ {cis-Pt (NH3) J ( μ -OH) ] 2 (NO3) 2 的溶液 中，添加0.150g 1H-5-甲基四唑(Aldrich) (1.1当量)，将得到的反应液在遮光下 以40°C搅拌约40小时。使用旋转式蒸发器将该反应液在30°C以下进行减压浓缩，通 过重结晶(50% (v/v)2-甲基-2，4-戊二醇水溶液)对残留的粗产物进行精制，得到 0. 15g[ {cis-Pt (NH3)2I2 (μ -0H) ( μ -5-methyltetrazolato_N2，Ν3) ] (NO3)20 该化合物是式 (I)中的A为下述式(V)所示基团的钼配位化合物。以下，称该化合物为5-甲基-N2，N3(样 品6) ο 5-甲基 _N2，N3用于鉴定该5-甲基_N2，N3所使用的结构分析数据(利用与例3相同的分析仪器 进行测定)记录如下。另外，将5-甲基-N2，N3的质谱表示在图7中，利用X射线解析的结 晶结构表示在图11中。NMR 分析1H-NMR (D2O, TSP_d4) δ (ppm) 2. 64(s，3H，CH3)13C-NMR (D2O, TSP_d4) δ (ppm) 10. 1，162. 2195Pt-WR (D20，Na2PtCl6) δ (ppm) -2179质量分析(ESI)[M-H+] 556. 3 (理论值 557. 1)(Μ = [Icis-Pt(NH3)2I2(U-OH) ( μ -5-methyltetrazolato_N2，Ν3)]2+)〈例6>在本例中，合成式(I)中的A是C5位具有乙酸乙酯基的四氮杂茂的钼配位化合 物。即，在38mL蒸馏水中溶解有1. Og[ {cis-Pt (NH3)2I ( μ _0H) ]2 (NO3)2的溶液中，添加0. 279g乙基-IH-四唑-5-乙酸酯(Aldrich) (1. 1当量)，将得到的反应液在遮光下以40°C 搅拌约48小时。使用旋转式蒸发器将该反应液在40°C减压浓缩，用2-丙醇和二乙醚清洗得 到的白色粉末并进行滤取后，用真空干燥器进行干燥，得到0. 8g[{cis-Pt (NH3) J2(U-OH)( μ -tetrazolato-5-ethylacetate-N2,Ν3) ] (NO3)20 该化合物是式(I)中的 A 为下述式(VI) 所示基团的钼配位化合物。以下，称该化合物为5-乙酸乙酯-N2，N3(样品7)。5-乙酸乙酯-N2，N3用于鉴定该5-乙酸乙酯_N2，N3所使用的结构分析数据(利用与例3相同的分析 仪器进行测定)记录如下。另外，将5-乙酸乙酯-N2，N3的质谱表示在图8中。匪R分析1H-WR(D2OJSP-Cl4) δ (ppm) 1. 28 (t，3Η，CH3)，4. 11 (s，2Η，CH2)，4. 24 (q，2Η，CH2)13C-WR(D2O，TSP-d4) δ (ppm) 16. 1,34. 2,65. 7,174. 0195Pt-WR (D20，Na2PtCl6) δ (ppm) -2182质量分析(ESI)[M-H+] 628. 7 (理论值 629· 4)(M= [{cis-Pt (NH3)2I2 (μ-0H) ( μ -tetrazolato-5-ethylacetate-N2, N3) ]2+)〈例7>在本例中，通过简单的工序变换例6中得到的化合物的取代基，从而合成式(I)中 的A是C5位具有乙酸酯基的四氮杂茂的钼配位化合物。即，在5mL 蒸馏水中溶解有 0. 2g 例 6 中得到的[{cis-Pt (NH3)2}2 ( μ-0H) ( μ-tet razolato-5-ethylacetate-N2, N3) ] (NO3) 2 的溶液中，添加 300 μ LlM 的氢氧化锂溶液，将得 到的反应液以室温搅拌约10分钟。用0. IM的硝酸水溶液将该反应液调节至ρΗ7，使用旋 转式蒸发器进行减压浓缩。用2-丙醇和二乙醚清洗得到的白色粉末并进行滤取之后，用真 空干燥器进行干燥，得到 0. 15g[ {cis-Pt (NH3)2I2 (μ -0Η) ( μ -tetrazolato-5-acetate_N2， Ν3)](Ν03)2。该化合物是式(I)中的A为下述式(VII)所示基团的钼配位化合物。以下，称 该化合物为5-乙酸酯-N2，N3。
5-乙酸酯 _N2，N3用于鉴定该5-乙酸酯_N2，N3所使用的结构分析数据(利用与例3相同的分析仪 器进行测定)记录如下。另外，将5-乙酸酯-N2，N3的质谱表示在图9中，利用X射线解析 的结晶结构表示在图12中。NMR 分析1H-NMR (D2O, TSP_d4) δ (ppm) 3. 84(s，2H，CH2)13C-NMR (D2O, TSP_d4) δ (ppm) 37. 0，164. 1，179. 2195Pt-WR (D20，Na2PtCl6) δ (ppm) -2181质量分析(ESI)[M-H+] :600. 5 (理论值 600. 4)(Μ = [Icis-Pt(NH3)2I2(U-OH) ( μ -tetrazolato-5-acetate_N2，Ν3)]+)〈例8>在本例中，合成式(I)中的A是C5位具有苯基的四氮杂茂的钼配位化合物。即，混合在40mL蒸馏水中溶解有1. 0g[ {cis-Pt (NH3)2I ( μ _0H) ]2 (NO3)2的溶液和 在IOmL甲醇中溶解有0. 273g 1H-5-苯基四唑(Aldrich) (1. 1当量)的溶液，将得到的 反应液在遮光下以40°C搅拌约48小时。使用旋转式蒸发器将得到的白色悬浊液在30°C 以下减压浓缩，在残留的粗产物中添加200mL甲醇，通过过滤除去不溶于甲醇的成分。对 滤液进行减压浓缩，用二乙醚清洗残留的白色粉末并进行滤取，在真空干燥器中干燥之 后，通过重结晶(60% (ν/ν)甲醇水溶液)进行精制，得到0.55g[{Cis-Pt(NH3)2}2(y-0H) (μ -5-phenyltetrazolato-N2, N3)] (NO3)20 该化合物是式(I)中的 A 为下述式(VIII)所 示基团的钼配位化合物。以下，称该化合物为5-苯基-N2，N3。 5-苯基 _N2，N3用于鉴定该5-苯基_N2，N3所使用的结构分析数据(利用与例3相同的分析仪器进行测定)记录如下。另外，将5-苯基-N2，N3的质谱在图10中表示t
匪R分析
1H-NMR (D2O, TSP-d4) δ (ppm) 7. 60 (1H, p-CH)，7. 62 (2H, CH)，8. 06 (2H, CH) 13C-NMR (D2O, TSP-d4) δ (ppm) 129. 4，129. 4，132. 1，133. 7，166. 3 195Pt-WR (D20，Na2PtCl6) δ (ppm) -2185质量分析(ESI)[M-H+] 618. 6 (理论值 619. 4)(M = [{cis-Pt (NH3)2I2 (μ -0H) ( μ -5-phenyltetrazolato-N2, N3)]2+)通过上述方法一并评价样品4 7和作为比较对象的钼配位化合物(样品3、8、9) 的细胞毒性。该结果在表2中表示。这里，表2 中的 AMPZ (样品 8)是式[{cis-Pt (NH3) J 2 ( μ -OH) ( μ -pyrazolato)] (NO3)2所示的吡唑交联钼(II)双核配合物，AMTA (样品9)是式[{cis-Pt (NH3) J 2 ( μ-0H) (y-l，2，3-triazolato-Nl，N2)] (NO3)2所示的1，2，3-三唑交联钼(II)双核配合物。已知 这些AMPZ和AMTA显示与顺钼不同的抗癌活性图谱(非专利文献3)，并且，可以观察到虽然 与DNA链结合而形成1，2_链内交联，但结合部分的DNA链上不产生如上所述的明显变形。 即，可以认为这些杂氮茂交联钼(II)双核配合物以与上述顺钼类制剂均不相同的方式结 合于DNA。[表 2]对H460非小细胞肺癌细胞的钼配位化合物的IC5tl值
样品序号化合物名IC50 (μΜ)3顺钼2345-Η-Ν1，Ν22155-H-N2，N38.365-甲基-N2，N32075-乙酸乙酯-N2,N3228AMPZ>1009AMTA62 由表2所示的结果可知，样品4 7对H460非小细胞肺癌细胞均显示顺钼的同等 程度以上的细胞毒性。另外，上述样品对癌细胞的细胞毒性显著优于AMPA和AMTA。本发明 的钼化合物能够以结构上与顺钼类制剂不同的方式结合于DNA( S卩，能够遵循不同的作用 机制和体内代谢路径)。另外，上述测定结果暗示，本发明的钼配位化合物可以具有与AMPZ 和AMTA不同的药剂特性。
1权利要求
一种下述式(I)所示铂配位化合物，式中，A是具有取代基或不具有取代基的四氮杂茂，B是有机或无机的阴离子，m和n是对应于铂配位部分的电荷数和所述B的电荷数而决定的整数。FPA00001183208500011.tif
2.如权利要求1所述的钼配位化合物，其特征在于所述钼配位部分具有构成所述A的四唑环的2位和3位的N分别配位于两个钼离子的 Ν2, Ν3-交联结构。
3.如权利要求2所述的钼配位化合物，其特征在于 所述A是不具有取代基的四氮杂茂。
4.如权利要求2所述的钼配位化合物，其特征在于所述A是具有取代基的四氮杂茂，该取代基是选自碳原子数为1 6的烃 基、-CH2COCT和-CH2COORx中的任一种，这里，Rx是碳原子数为1 4的烷基。
5.—种抗癌剂，其特征在于含有权利要求1 4中任一项所述的钼配位化合物作为有效成分。
6.一种制造权利要求1 4中任一项所述的钼配位化合物的方法，其特征在于，包括 使下述式(II)所示的化合物与具有取代基或不具有取代基的IH-四唑以1 1 1 1.2的摩尔比反应，得到Ni，Ν2-交联钼配位化合物和Ν2，Ν3-交联钼配位化合物的混 合物的工序；和通过从该混合物中所含的m，N2-交联钼配位化合物和N2，N3-交联钼配位化合物的任 一种中分离另一种，对所述钼配位化合物的至少一种进行精制的工序， 式中，B是有机或无机的阴离子，η是对应于所述B的电荷数而决定的整数。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于所述对钼配位化合物进行精制的工序，通过使用高氯酸盐溶液作为移动相的反相色谱 法进行。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于所述高氯酸盐是高氯酸锂。
全文摘要
本发明提供一种能够以与顺铂类制剂不同的方式结合于DNA的新型的铂(II)双核配位化合物、该化合物的制造方法以及含有该化合物作为有效成分的抗癌剂。上述化合物是下述式(I)所示的四氮杂茂交联铂配位化合物，这里，A是可以具有取代基的四氮杂茂，B是无机或有机的阴离子，m和n是对应于铂配合物离子的电荷数和阴离子的电荷数而决定的整数。
文档编号A61P35/00GK101918379SQ20098010221
公开日2010年12月15日 申请日期2009年1月7日 优先权日2008年1月16日
发明者千熊正彦, 米田诚治 申请人:天真堂制药株式会社;株式会社益力多本社