基因工程tslpr抗体的制作方法

专利名称：基因工程tslpr抗体的制作方法
技术领域：
本发明一般地涉及胸腺基质淋巴细胞生成素受体(TSLPR)特异性抗体及其用途， 特别是在炎性和过敏性炎性病症中的用途。
背景技术：
免疫系统起作用来保护个体免受感染剂例如细菌、多细胞生物和病毒以及癌症的 侵袭。该系统包括几种类型的淋巴样和髓样细胞，如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞(DCs)、 嗜酸性细胞、T细胞、B细胞和中性粒细胞。这些淋巴样和髓样细胞通常产生称作细胞因子 的信号传递蛋白。免疫应答包括炎症，即，免疫细胞系统地积累或积累在身体的特定部位。 反应于感染剂或外来物质，免疫细胞分泌细胞因子，其随后调节免疫细胞增殖、发育、分化 或迁移。例如，当免疫应答涉及过多炎症，如在过敏性炎性病症中，其可以产生病理后果。TSLP是诱导具有前异基因表型(proal logenic phenotype)的树突细胞介 导的 CD4+T 细胞应答的免疫细胞因子(Gilliet et al.，J. Exp. Medicine 197 (8) 1059-1063(2003)。TSLP 参与过敏性炎症的起始(Watanabe et al.，Nature Immunology 5:426-434(2004) ；Soumelis et al. , Nature Immunology 3:673-680(2002))。TSUR链是促红细胞生成素受体家族的成员，并且以低亲和力结合TSLP。TSUR和 IL-7Ra链的组合导致高亲和力结合并且导致STAT5激活和细胞增殖到TSLP刺激。针对参与免疫疾病的一些抗原靶产生了抗体。体内使用抗体作为治疗剂的最显 著的限制是抗体的免疫原性。由于大多数单克隆抗体来源于啮齿动物，在人类中的重复使 用导致抗治疗性抗体的免疫应答的产生。所述免疫应答最低限度会导致疗效丧失，最大限 度会导致潜在的致死过敏反应。降低啮齿动物抗体的免疫原性的最初努力涉及生产嵌合抗 体，其中将小鼠可变区与人恒定区融合。Liu et al. (1987)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 3439-43。但是，注射了人可变区与小鼠恒定区的杂合体的小鼠发生了针对人可变区的强 抗-抗体应答，表明在这种嵌合抗体中完整啮齿动物Fv区的保留可能仍然导致患者中不希 望的免疫原性。通常认为可变区的互补决定区(OTR)环包含抗体分子的结合位点。因此，试图将 啮齿动物CDR环移植到人构架区上(即人源化)，以使啮齿动物序列进一步最少化。Jones et al. (1986) Nature 321 522 ；Verhoeyen et al. (1988) Science 239 :1534。但是，CDR环 交换可能不能统一地得到具有相同结合特性的抗体作为抗体来源。可能也需要人源化抗体 中构架残基(FR)，S卩，参与CDR环支持的残基来保持抗原结合亲和力。Kabat et al. (1991) J. Immunol. 147 :1709。尽管已经报道了一些人源化抗体构建体中⑶R移植的使用和构架残 基的保留，但难以预测特定序列是否将得到具有需要的结合特性(以及有时具有需要的生 物特性)的抗体。参见例如Queen et al. (1989)Proc. Natl. Acad. Sci. USA86 10029,Gorman et al. (1991)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 :4181 和 Hodgson(1991)Biotechnology(NY)9 : 421-5。本发明提供了基因工程TSUR抗体以及其在治疗炎性病症，特别是过敏性炎性病 症中的用途。
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发明概述本发明包括结合于人TSLPR的抗体。在一个实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含(i)至少一个抗体重链可变区或其TSUR结合片段，所述重链可变区包含至少一个选 自 SEQ ID NOs :1、2、3、73、7、8、9、13、14、15、19、20、21、25、26、27、31、32、33、37、38、39、43、 44和45的CDR序列或任何所述序列的变体；或(ii)至少一个抗体轻链可变区或其TSLPR 结合片段，所述轻链可变区包含至少一个选自SEQ ID NOs :4、5、6、74、10、11、12、16、17、18、 22、23、24、28、29、30、34、35、36、40、41、42、46、47 和 48 的 CDR序列，或任何所述序列的变体。在另一实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含(i)至少一个抗体重链可变区或其TSUR结合片段，所述重链可变区包含至少一个选 自 SEQ ID NOs :1、2、3、73、7、8、9、13、14、15、19、20、21、25、26、27、31、32、33、37、38、39、43、 44和45的CDR序列或任何所述序列的变体；和(ii)至少一个抗体轻链可变区或其TSLPR 结合片段，所述轻链可变区包含至少一个选自SEQ ID NOs :4、5、6、74、10、11、12、16、17、18、 22、23、24、28、29、30、34、35、36、40、41、42、46、47 和 48 的 CDR序列，或任何所述序列的变体。在另一实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含(i)至少一个抗体重链可变区或其TSUR结合片段，所述重链可变区包含至少两个选 自 SEQ ID NOs :1、2、3、73、7、8、9、13、14、15、19、20、21、25、26、27、31、32、33、37、38、39、43、 44和45的CDR序列或任何所述序列的变体；和(ii)至少一个抗体轻链可变区或其TSLPR 结合片段，所述轻链可变区包含至少两个选自SEQ ID NOs :4、5、6、74、10、11、12、16、17、18、 22、23、24、28、29、30、34、35、36、40、41、42、46、47 和 48 的 CDR序列，或任何所述序列的变体。在另一实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含(i)至少一个抗体重链可变区或其TSLPR结合片段，所述重链可变区包含至少3个选 自 SEQ ID NOs :1、2、3、73、7、8、9、13、14、15、19、20、21、25、26、27、31、32、33、37、38、39、43、 44和45的CDR序列或任何所述序列的变体；和(ii)至少一个抗体轻链可变区或其TSLPR 结合片段，所述轻链可变区包含至少3个选自SEQ ID NOs :4、5、6、74、10、11、12、16、17、18、 22、23、24、28、29、30、34、35、36、40、41、42、46、47 和 48 的 CDR 序列，或任何所述序列的变体。在另一实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含(i)至少一个抗体重链可变区或其TSUR结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NOs :1、2和3所示的3个CDR序列或任何所述序列的变体；和(ii)至少一个抗体轻链可变 区或其TSUR结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NOs :4、5和6所示的3个⑶R序列或 任何所述序列的变体。在另一实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含SEQ ID NO :1的CDR-Hl序列或其变体、SEQ IDNO :2的CDR-H2序列或其变体和SEQ ID NO :3或SEQ ID NO 73的CDR-H3序列或其变体；以及SEQ ID NO 4的CDR-Ll序列或其 变体、SEQ ID NO 5 的 CDR-L2 序列或其变体和 SEQ ID NO :6 或 SEQ IDNO 74 的 CDR-L3 序 列或其变体。在另一实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含(i)至少一个抗体重链可变区或其TSUR结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NOs :7、8和9所示的3个CDR序列或任何所述序列的变体；和(ii)至少一个抗体轻链可变区或其TSLPR结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID N0s:10、ll和12所示的3个⑶R序 列或任何所述序列的变体。在另一实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含(i)至少一个抗体重链可变区或其TSUR结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NOs :13、14和15所示的3个⑶R序列或任何所述序列的变体；和(ii)至少一个抗体轻链 可变区或其TSUR结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NOs :16、17和18所示的3个⑶R 序列或任何所述序列的变体。在另一实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含(i)至少一个抗体重链可变区或其TSUR结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NOs :19、20和21所示的3个⑶R序列或任何所述序列的变体；和(ii)至少一个抗体轻链 可变区或其TSUR结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NOs :22、23和24所示的3个⑶R 序列或任何所述序列的变体。在另一实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含(i)至少一个抗体重链可变区或其TSUR结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NOs :25、26和27所示的3个⑶R序列或任何所述序列的变体；和(ii)至少一个抗体轻链 可变区或其TSUR结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NOs :28、29和30所示的3个⑶R 序列或任何所述序列的变体。在另一实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含(i)至少一个抗体重链可变区或其TSUR结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NOs :31、32和33所示的3个⑶R序列或任何所述序列的变体；和(ii)至少一个抗体轻链 可变区或其TSUR结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NOs :34、35和36所示的3个⑶R 序列或任何所述序列的变体。在另一实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含(i)至少一个抗体重链可变区或其TSUR结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NOs :37、38和399所示的3个CDR序列或任何所述序列的变体；和(ii)至少一个抗体轻链 可变区或其TSUR结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NOs :40、41和42所示的3个⑶R 序列或任何所述序列的变体。在另一实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含(i)至少一个抗体重链可变区或其TSUR结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NOs :43、44和45所示的3个CDR序列或任何所述序列的变体；和(ii)至少一个抗体轻链 可变区或其TSUR结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NOs :46、47和48所示的3个⑶R 序列或任何所述序列的变体。在一个实施方案中，本发明包括结合化合物，其包含含有SEQ IDN0:51的残基 1-116或所述序列的变体的重链可变区；和含有SEQ IDNO 52的残基1-108或所述序列的 变体的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明包括结合化合物，其包含含有SEQ IDNO :57的残基 1-116或所述序列的变体的重链可变区；和含有SEQ IDNO 58的残基1-108或所述序列的 变体的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明包括结合化合物，其包含含有SEQ IDN0:61的残基1-116或所述序列的变体的重链可变区；和含有SEQ IDNO 62的残基1-108或所述序列的 变体的轻链可变区。在任何上述实施方案中，变体可以包含最多三个保守修饰的氨基酸残基。在一个 实施方案中，变体可以包含三个保守修饰的氨基酸残基。在另一实施方案中，变体可以包含 两个保守修饰的氨基酸残基。在另一实施方案中，变体可以包含一个保守修饰的氨基酸残基。在一个实施方案中，本发明包括特异性结合人TSLPR的结合化合物，所述化合物 包含⑴与选自51、57和61的氨基酸序列具有至少90%同源性的重链可变区；和(ii)与 选自52、58和62的氨基酸序列具有至少90%同源性的轻链可变区。在一个实施方案中，上述结合化合物阻断TSLP与TSLPR的结合和/或阻断TSLPR 介导的活性。在任何上述实施方案中，结合化合物是抗体或抗体片段。在任何上述实施方案中，结合化合物可以是人源化抗体或其TSLPR结合片段。在一个实施方案中，结合化合物是选自Fab、Fab，、Fab，_SH、Fv、scFv、F (ab，)2和 双抗体(diabody)的TSUR结合抗体片段。在任何上述实施方案中，结合化合物可以进一步包含人重链恒定区或其变体，其 中所述变体包含最多20个保守修饰的氨基酸取代；或人轻链恒定区或其变体，其中所述变 体包含最多20个保守修饰的氨基酸取代。在任何上述实施方案中，结合化合物可以进一步包含Y 4或Y 1人重链恒定区或 其变体，其中所述变体包含最多20个保守修饰的氨基酸取代。在一个优选实施方案中，人重链可变区将移植到IgG4主链上以消除效应物功能。本发明还包括特异性结合于人TSLPR上的表位的抗体或其抗原结合片段，所述表 位被选自抗体 13H5、70E8、54C11、49A5、4G8、54A11、61C11 禾Π 18Β3 的抗体结合。本发明还包括竞争性抑制选自抗体13H5、70E8、54C11、49A5、4G8、54A11、61C11和 18B3的抗体的结合的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括编码本发明的结合化合物的分离的核酸。本发明还包括包含上述核 酸的表达载体。在一个实施方案中，表达载体可操作性连接于控制序列，所述控制序列在用 载体转染宿主细胞时被宿主细胞识别。本发明还包括生产多肽的方法，所述方法包括在表 达核酸序列的条件下在培养基中培养上述宿主细胞，从而产生包含轻链和重链可变区的多 肽；以及从宿主细胞或培养基回收多肽。本发明还包括抑制人受试者中的免疫应答的方法，该方法包括给有需要的受试者 施用任何一种上述结合化合物或其TSLPR结合片段，施用的量能有效阻断TSLPR的生物活 性。在一个实施方案中，免疫应答是炎症反应。在一个实施方案中，受试者患有选自下组的 病症过敏性鼻-鼻窦炎(rhinosinusitis)、过敏性哮喘、过敏性结膜炎或特应性皮炎。在 一个优选实施方案中，受试者患有哮喘。本发明还包括组合物，所述组合物包含与药学可接受的载体或稀释剂组合的任何 上述结合化合物。本发明还包括任何本发明的结合化合物在制备用于抑制免疫应答的药物中的用 途。
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本发明还包括任何本发明的结合化合物在制备用于治疗炎症的药物中的用途。本发明还包括任何本发明的结合化合物在制备用于治疗过敏性炎症的药物中的 用途。本发明还包括任何本发明的结合化合物在制备用于治疗过敏性鼻_鼻窦炎、过敏 性哮喘、过敏性结膜炎或特应性皮炎的药物中的用途。本发明还包括任何本发明的结合化合物在制备用于治疗哮喘的药物中的用途。附图
简述图IA是鼠和人源化13H5抗体的重链可变区的比对(分别是SEQID NOs :49和51)。 用星号表示鼠和人源化抗体之间的差异。CDR序列用粗体表示。图IB是鼠和人源化13H5抗体的轻链可变区的比对(分别是SEQID NOs :50和52)。 用星号表示鼠和人源化抗体之间的差异。CDR序列用粗体表示。图 2A是大鼠抗体 18B3(SEQ ID NO 71)和小鼠抗体70E8 (SEQ IDNO :55)、13H5 (SEQ ID NO :49)、49A5(SEQ ID NO :63)、4G8(SEQ IDNO :65)、54A11(SEQ ID NO :67)、54C11(SEQ ID NO 59)和61C11(SEQID NO 69)的重链可变区的比对。CDR序列是突出表示的。图 2A是大鼠抗体 18B3(SEQ ID NO 72)和小鼠抗体70E8 (SEQ IDNO :56)、13H5 (SEQ ID NO :50)、49A5(SEQ ID NO :64)、4G8(SEQ IDNO :66)、54A11(SEQ ID NO :68)、54C11(SEQ ID NO 60)和61C11(SEQID NO 70)的轻链可变区的比对。CDR序列是突出表示的。图3A说明hul3H5的重链的可能可变区序列(SEQ ID NO 53)。图3B说明hul3H5的轻链的可能可变区序列(SEQ ID NO 54)。详细说明除非上下文指出其它的意思，如本文，包括所附权利要求中使用的单数形式的词 语如“一个”、“一种”和“该”包括它们相应的复数形式。本文引用的所有参考文献通过引 用的形式并入本文，其程度如同将每单个公开文献、专利申请或专利特别和单独地通过引 用并入本文。I.定义除非上下文或明确指出其它的意思，当应用于细胞或应用于受体时，“激活”、“刺 激”和“处理”可具有相同的含义，例如，用配体激活、刺激或处理细胞或受体。“配体”包括 天然和合成配体，例如，细胞因子、细胞因子变体、类似物、突变蛋白和来源于抗体的结合组 合物。“配体”也包括小分子，例如，细胞因子的肽模拟物和抗体的肽模拟物。“激活”可以 指通过内部机制以及通过外部或环境因素调节的细胞激活。“反应”，例如细胞、组织、器官 或生物的反应，包括生物化学或生理行为，例如浓度、密度、粘附、或生物区室内的迁移、基 因表达速率或分化状态的改变，其中所述改变与激活、刺激或处理或与内部机制，如遗传编 程相关。分子的“活性”可以描述或表示分子与配体或与受体的结合，表示催化活性；表示 刺激基因表达或细胞信号传递、分化或成熟的能力；表示抗原活性；表示其它分子的活性 调节，等等。分子的“活性”也可以表示调节或维持细胞与细胞相互作用如粘附的活性或维 持细胞结构如细胞膜或细胞骨架的活性。“活性”也可以表示比活性，例如[催化活性]/[mg 蛋白]或[免疫活性]/[mg蛋白]、生物区室中的浓度，等等。“增殖活性”包括促进例如正 常细胞分裂以及癌、肿瘤、发育不良、细胞转化、转移和血管发生的活性、例如正常细胞分裂以及癌、肿瘤、发育不良、细胞转化、转移和血管发生所必须的活性、或与例如正常细胞分裂 以及癌、肿瘤、发育不良、细胞转化、转移和血管发生特别相关的活性。当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，“施用”和“处理” 是指外源药剂、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的 接触。“施用”和“处理”可以表示例如治疗、药代动力学、诊断、研究和实验方法。处理细胞 包括使试剂与细胞接触，以及试剂与流体接触，其中流体与细胞接触。“施用”和“处理”也 表示通过试剂、诊断剂、结合组合物或另一种细胞进行的例如细胞的体外和离体处理。当应 用于人、兽医或研究受试者时，“处理”是指治疗性处理、预防或防范措施、研究和诊断应用。如本文使用的，术语“抗体”是指表现出需要的生物活性的任何形式的抗体或其片 段。因此，其是以最广泛的含义使用，并且特别涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多 克隆抗体、多特异性抗体(如双特异性抗体)，以及抗体片段，只要它们表现出需要的生物 活性。如本文使用的，术语“TSUR结合片段”或“其结合片段”包括抗体的片段或衍生物， 其仍然实质上保留其抑制TSLPR活性的生物活性。因此，术语“抗体片段”或TSLPR结合片 段是指全长抗体的部分，通常是其抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、 F(ab' 片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子，如sc-Fv ；结构域抗体；和从抗体片 段形成的多特异性抗体。典型地，结合片段或衍生物保留了其TSUR抑制活性的至少10%。 优选地，结合片段或衍生物保留了其TSLPR抑制活性的至少25 %、50 %、60 %、70 %、80 %、 90 %、95 %、99 %或100 % (或更多)，但任何具有足够亲和力以施加需要的生物作用的结合 片段都将是有用的。也预期TSUR结合片段可以包括不显著改变其生物活性的保守氨基酸 取代。本文使用的术语“单克隆抗体”是指获自基本同质的抗体的群体(S卩，除了可少量 存在的可能的天然存在的突变外，构成群体的单个抗体是相同的)的抗体。单克隆抗体是 高度特异性的，其针对单个抗原性表位。相反，常规(多克隆)抗体制剂典型地包括多个针 对(或特异于)不同表位的抗体。修饰语“单克隆”表示从基本同质的抗体群体获得的抗 体的特征，并且不解释为需要通过任何特殊方法产生抗体。例如，根据本发明使用的单克隆 抗体可以通过首先由Kohler et al.，(1975) Nature 256 :495描述的杂交瘤方法制备或可 以通过重组DNA方法(参见例如美国专利号4，816，567)制备。也可以使用例如Clackson et al.，(1991)Nature 352 :624_628and Marks et al.，(1991)J. Mol. Biol. 222 581-597 中描述的技术从噬菌体抗体文库分离“单克隆抗体”。本文的单克隆抗体特别包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的 一个部分与来源于特定物种或属于特定抗体类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而 链的其余部分与来源于另一物种或属于另一抗体类或亚类的抗体中的相应序列相同或同 源，并且包括所述抗体的片段，只要它们表现出需要的生物活性(美国专利号4，816，567 ； 和 Morrison et al.，(1984)Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 :6851_6855)。“结构域抗体”是免疫功能性免疫球蛋白片段，其仅仅包含重链的可变区或轻链的 可变区。在某些情况下，用肽接头将两个或更多个共价连接，产生二价结构域抗体。二 价结构域抗体的两个Vh区可以靶定相同或不同的抗原。“二价抗体”包括两个抗原结合位点。在某些情况下，两个结合位点具有相同的抗
9原特异性。但是，二价抗体可以是双特异性的(参见下文)。如本文使用的，术语“单链Fv”或“scFv”抗体是指包含抗体的Vh和\结构域的 抗体片段，其中这些结构域存在于单个多肽链中。通常，Fv多肽进一步包含V1^nt结构 域之间的多肽接头，其使得sFv能够形成用于抗原结合的所需结构。对于sFv的综述，参 JaL Pluckthun (1994) The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp.269—315。本文的单克隆抗体也包括骆驼化(camelized)单结构域抗体。参见例如 Muyldermans et al. (2001)Trends Biochem. Sci. 26 230 ；Reichmann et al. (1999) J. Immunol. Methods 231 25 ；WO 94/04678 ；W094/25591 ；美国专利号 6，005，079，通过全文 引用并入本文。在一个实施方案中，本发明提供了单结构域抗体，其包含两个具有修饰的Vh 结构域，使得形成单结构域抗体。如本文使用的，术语“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，所述片 段包含在相同多肽链或中与轻链可变区连接的重链可变区(Vh)。通过 使用太短以致于不能允许相同链上的两个结构域之间配对的接头，结构域被迫与另一链 的互补结构域配对，并且产生两个抗原结合位点。双抗体更详细描述于例如EP404，097 ； WO 93/11161 ；和 Holliger et al. (1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448。关 于基因工程抗体变体的综述，通常参见Holliger and Hudson (2005)Nat. Biotechnol. 23 1126-1136。如本文使用的，术语“人源化抗体”是指包含来自非人(如鼠)抗体以及人抗体 的序列的抗体形式。所述抗体包含最小限度的来自非人免疫球蛋白的序列。一般地，人源 化抗体将包含基本上所有的至少一个、典型地两个可变区，其中所有或基本所有的高变环 相应于非人免疫球蛋白的高变环，并且所有或基本所有的FR区是人免疫球蛋白序列的FR 区。人源化抗体任选也将包含免疫球蛋白恒定区(Fe)的至少一部分，典型地包含人免疫球 蛋白的恒定区的至少一部分。当必须区分人源化抗体(如“hul3H5”)与亲本啮齿动物抗 体(如小鼠13H5或“ml3H5”)时，在抗体克隆命名中添加前缀“hu”或“hum”。人源化形式 的啮齿动物抗体通常将包含亲本啮齿动物抗体的相同CDR序列，但可以引入某些氨基酸取 代，以增加人源化抗体的亲和力或增加人源化抗体的稳定性。本发明的抗体也包括具有修饰的(或阻断的)Fc区的抗体，以提供改变的效应物 功能。参见例如美国专利号 5，624，821 ；W02003/086310 ；W02005/120571 ；W02006/0057702 ； Presta(2006) Adv. Drug Delivery Rev. 58 :640_656。所述修饰可以用于增加或抑制免疫系 统的各种反应，在诊断和治疗中具有可能的有益效果。Fc区的改变包括氨基酸改变(取代、 缺失和插入)、糖基化或去糖基化，以及添加多个Fe。对Fc的改变也可以改变治疗性抗体 中抗体的半衰期，并且更长的半衰期将导致更低的给药频率，并且伴有增加的方便性和使 用材料的减少。参见 Presta(2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116 731 第 734-35 页。术语“全人抗体”是指仅包含人免疫球蛋白序列的抗体。如果在小鼠中、在小鼠细 胞或在来源于小鼠细胞的杂交瘤中产生，则全人抗体可以包含鼠碳水化合物链。类似地， “小鼠抗体”是指仅仅包含小鼠免疫球蛋白序列的抗体。如本文使用的，术语“高变区”是指负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。高变区 包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(如轻链可变区中的残基24-34(CDRLl)、
1050-56 (CDRL2)和 89-97 (CDRL3)和重链可变区中的残基 31-35 (CDRHl)、50-65 (CDRH2) 禾口 95-102(CDRH3) ；Kabat et al. , (1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.)和/或来自“高变环”的那些残基(即轻链可变区中的残基26-32 (Li)、50-52(L2)和 91-96 (L3)和重链可变区中的 26-32 (HI)、53-55(H2)和 96-101 (H3) ；Chothia and Lesk, (1987) J. Mol. Biol. 196 :901_917)。如本文使用的，术语“构架”或“FR”残基是指除了本文 定义为CDR残基的高变区残基以外的那些可变区残基。上述残基编号是参照Kabat编号系 统，并且不一定具体对应于所附序列表中的序列编号。参见表2和3，其中序列编号是参照 序列表。“结合”是指结合组合物与靶的缔合，其中在结合组合物能够溶解或悬浮于溶液中 的情况下，所述缔合导致结合结合组合物的正常布朗运动的减少。“结合化合物”是指包含一个或多个特异性结合于人TSLPR的氨基酸序列的分子。 在一个优选实施方案中，结合化合物是抗体。在另一优选实施方案中，结合化合物包括抗体 片段。“结合组合物”是指与能够与靶结合的、与稳定剂、赋形剂、盐、缓冲剂、溶剂或添加 剂组合的TSLPR结合化合物。“保守修饰的变体”或“保守取代”是指本领域技术人员已知，并且通常可以进行 而不改变得到的分子的生物活性的氨基酸取代(参见，例如Watson，et al.，Molecular Biology of the Gene,The Benjamin/Cummings Pub. Co. ,p. 224(4th Edition 1987))。所 述示例性取代优选根据下文表1所示进行表 1示例性保守氨基酸取代
权利要求
特异性结合人和猕猴TSLPR的结合化合物，包含至少一个抗体重链可变区或其TSLPR结合片段，所述重链可变区包含至少一个选自SEQ ID NOs1、2、3、73、7、8、9、13、14、15、19、20、21、25、26、27、31、32、33、37、38、39、43、44和45的CDR序列或任何所述序列的变体；或至少一个抗体轻链可变区或其TSLPR结合片段，所述轻链可变区包含至少一个选自SEQ ID NOs4、5、6、74、10、11、12、16、17、18、22、23、24、28、29、30、34、35、36、40、41、42、46、47和48的CDR序列或任何所述序列的变体。
2.权利要求1的结合化合物，其中所述结合化合物包含至少一个抗体重链可变区或其TSLPR结合片段，所述重链可变区包含至少一个选自 SEQ ID NOs :1、2、3、73、7、8、9、13、14、15、19、20、21、25、26、27、31、32、33、37、38、39、43、44 和45的CDR序列或任何所述序列的变体；和至少一个抗体轻链可变区或其TSLPR结合片段，所述轻链可变区包含至少一个选自 SEQ ID NOs :4、5、6、74、10、11、12、16、17、18、22、23、24、28、29、30、34、35、36、40、41、42、46、 47和48的CDR序列或任何所述序列的变体。
3.权利要求2的结合化合物，其中所述抗体重链可变区或其TSUR结合片段包含至少两个选自SEQID NOs :1、2、3、73、7、 8、9、13、14、15、19、20、21、25、26、27、31、32、33、37、38、39、43、44 和 45 的 CDR 序列或任何所 述序列的变体；并且所述抗体轻链可变区或其TSLPR结合片段包含至少两个选自SEQID NOs :4、5、6、74、 10、11、12、16、17、18、22、23、24、28、29、30、34、35、36、40、41、42、46、47 和 48 的 CDR序列或任 何所述序列的变体。
4.权利要求2的结合化合物，其中所述抗体重链可变区或其TSLPR结合片段包含3个选自SEQ IDNOs :1、2、3、73、7、8、9、 13、14、15、19、20、21、25、26、27、31、32、33、37、38、39、43、44 和 45 的 CDR 序列或任何所述序 列的变体；并且所述抗体轻链可变区或其TSLPR结合片段包含3个选自SEQ IDNOs :4、5、6、74、10、11、 12、16、17、18、22、23、24、28、29、30、34、35、36、40、41、42、46、47 和 48 的 CDR序列或任何所述 序列的变体。
5.权利要求4的结合化合物，其中所述抗体重链可变区或其TSLra结合片段包含SEQ ID NO :1的⑶R-Hl序列或其变体、 SEQ ID NO 2的CDR-H2序列或其变体和SEQID NO :3或SEQ ID NO 73的CDR-H3序列或其 变体；并且所述抗体轻链可变区或其TSUR结合片段包含SEQ ID NO :4的⑶R-Ll序列或其变体、 SEQ ID NO 5的CDR-L2序列或其变体和SEQID NO :6或SEQ ID NO 74的CDR-L3序列或其变体。
6.权利要求5的结合化合物，包含包含SEQ ID NO 53的残基1-116或其变体的重链可变区；和包含SEQ ID NO 54的残基1-108或其变体的轻链可变区。
7.权利要求5的结合化合物，包含包含SEQ ID NO 51的残基1-116或其变体的重链可变区；和包含SEQ ID NO 52的残基1-108或其变体的轻链可变区。
8.权利要求6的结合化合物，其中所述变体包含最多3个保守修饰的氨基酸残基。
9.特异性结合人和猕猴TSLP的结合化合物，包含(i)与SEQID NO 51的氨基酸序列具有至少90%同源性的重链可变区；和(ii)与SEQID NO :52的氨基酸序列具有至少90%同源性的轻链可变区。
10.分离的核酸，其编码权利要求1的结合化合物的重链可变区或轻链可变区中的至 少一个。
11.表达载体，其包含与控制序列可操作性连接的权利要求10的核酸，当宿主细胞被 载体转染时，所述控制序列被宿主细胞识别。
12.包含权利要求11的表达载体的宿主细胞。
13.生产多肽的方法，包括在表达核酸序列的条件下在培养基中培养权利要求12的宿主细胞，从而产生包含轻 链可变区和重链可变区的多肽；以及从宿主细胞或培养基回收多肽。
14.权利要求1的结合化合物，进一步包含人重链恒定区或其变体，其中所述变体包含最多20个保守修饰的氨基酸取代；或人轻链恒定区或其变体，其中所述变体包含最多20个保守修饰的氨基酸取代。
15.权利要求14的结合化合物，其中所述人重链恒定区包含或Yl人重链恒定区 或其变体，其中所述变体包含最多20个保守修饰的氨基酸取代。
16.权利要求1的结合化合物，其中所述结合化合物是选自Fab、Fab，、Fab，_SH、Fv、 scFv,F(ab' )2和双抗体的TSLPR结合抗体片段。
17.抑制人受试者中的免疫应答的方法，该方法包括给有需要的受试者施用权利要求 1的结合化合物或其TSLPR结合片段，施用的量能有效阻断TSLPR的生物活性。
18.权利要求17的方法，其中所述免疫应答是炎症反应。
19.组合物，其包含与药学可接受载体或稀释剂组合的权利要求1的结合化合物。
20.特异性结合于人TSLP上的表位的抗体或其抗原结合片段，所述表位被选自抗体 13H5、70E8、54C11、49A5、4G8、54A11、61C11 禾Π 18Β3 的抗体结合。
21.抗体或其抗原结合片段，其竞争性抑制TSLPR与选自抗体13Η5、70Ε8、54C11、49Α5、 4G8、54A11、61C11 和 18B3 的抗体结合。
22.权利要求1的结合化合物，其中所述结合化合物在交叉阻断测定中阻断TSUR介导 的活性或TSLP与TSLPR的结合。
23.权利要求1的结合化合物或其TSUR结合片段在制备用于抑制免疫应答的药物中 的用途。
全文摘要
本发明涉及特异性结合于人TSLPR的结合化合物，及其例如在治疗炎性病症中的用途。
文档编号A61P37/06GK101986784SQ200980111075
公开日2011年3月16日 申请日期2009年2月6日 优先权日2008年2月7日
发明者L·G·普雷斯塔, R·德瓦尔梅尔费特 申请人:先灵公司