专利名称：使用选择性细胞周期蛋白依赖性激酶4/6抑制剂对抗化疗化合物的造血防护的制作方法
技术领域：
本发明公开的主题涉及保护健康细胞免受因细胞毒性化合物如DNA损伤性化合物导致的损伤的方法。具体地，本发明公开的主题涉及向已暴露于、正在或将暴露于、或者有风险暴露于细胞毒性化合物的对象给药的细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和/或细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)抑制剂的保护作用。缩写
权利要求
1.减轻或预防细胞毒性化合物对已暴露于、将暴露于或有风险遭受暴露于细胞毒性化合物的对象中的健康细胞的效应的方法，其中所述健康细胞是造血干细胞或造血祖细胞， 所述方法包括向所述对象给药有效量的抑制剂化合物或其药学可接受的形式，其中所述抑制剂化合物选择性地抑制细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和/或细胞周期蛋白依赖性激酶 6(CDK6)。
2.权利要求1的方法，其中所述抑制剂化合物选择性地抑制细胞周期蛋白依赖性激酶 4(CDK4)和细胞周期蛋白依赖性激酶6 (CDK6)。
3.权利要求1的方法，其中所述抑制剂化合物是非天然的化合物。
4.权利要求1的方法，其中所述抑制剂化合物基本上没有脱靶效应。
5.权利要求4的方法，其中所述脱靶效应是长期毒性、抗氧化效应、雌激素效应、酪氨酸激酶抑制、抑制除细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(CDK4/6)之外的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)、和非CDK4/6依赖性细胞中的细胞周期停滞中的一种或多种。
6.权利要求1的方法，其中所述抑制剂化合物选择性地诱导细胞周期蛋白依赖性激酶 4(CDK4)依赖性细胞和/或细胞周期蛋白依赖性激酶6 (CDK6)依赖性细胞中的Gl停滞。
7.权利要求6的方法，其中所述抑制剂化合物在细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)依赖性细胞和/或细胞周期蛋白依赖性激酶6 (CDK6)依赖性细胞中诱导基本上纯粹的Gl停滞。
8.权利要求1的方法，其中所述抑制剂化合物选自吡啶并[2，3-d]嘧啶、三氨基嘧啶、 芳基[a]吡咯并[3，4-c]咔唑、含氮的杂芳基取代的脲、5-嘧啶基-2-氨基噻唑、苯并噻二嗪和吖啶硫酮。
9.权利要求8的方法，其中所述吡啶并[2，3-d]嘧啶是吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮或 2-氨基-6-氰基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-酮。
10.权利要求9的方法，其中所述吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮是2- ’-吡啶基)氨基吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮。
11.权利要求10的方法，其中所述吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮是6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶_7_酮。
12.权利要求8的方法，其中所述芳基[a]吡咯并[3，4_c]咔唑选自萘基[a]吡咯并 [3,4-c]咔唑、吲哚并[a]吡咯并[3，4_c]咔唑、喹啉基[a]吡咯并[3，4_c]咔唑和异喹啉基[a]吡咯并[3,4-c]咔唑。
13.权利要求12的方法，其中所述芳基[a]吡咯并[3，4-c]咔唑是2-溴-12，13-二氢-5H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4]咔唑-5，6-二酮。
14.权利要求1的方法，其中所述对象是哺乳动物。
15.权利要求1的方法，其中所述抑制剂化合物通过口服给药、局部给药、鼻内给药、吸入和静脉内给药之一向所述对象给药。
16.权利要求1的方法，其中在暴露于所述细胞毒性化合物之前、在暴露于所述细胞毒性化合物期间、在暴露于所述细胞毒性化合物之后或其任何组合向所述对象给药所述抑制剂化合物。
17.权利要求16的方法，其中在暴露于所述细胞毒性化合物之前M小时或更短时间向所述对象给药所述抑制剂化合物。
18.权利要求16的方法，其中在暴露于所述细胞毒性化合物之后M小时或更长时间向所述对象给药所述抑制剂化合物。
19.权利要求1的方法，其中所述细胞毒性化合物是DNA损伤性化合物。
20.权利要求1的方法，其中所述健康细胞选自长期造血干细胞(LT-HSC)、短期造血干细胞(ST-HSC)、多能祖细胞(MPP)、髓共同祖细胞(CMP)、淋巴共同祖细胞(CLP)、粒细胞-单核细胞系祖细胞(GMP)和巨核细胞-红细胞系祖细胞(MEP)。
21.权利要求1的方法，其中给药所述抑制剂化合物产生造血干细胞和造血祖细胞的短暂药理性静止。
22.权利要求1的方法，其中所述对象已接受、正在接受或预定要接受用细胞毒性化合物的医学治疗以治疗疾病。
23.权利要求22的方法，其中给药所述抑制剂化合物不影响患病细胞的生长。
24.权利要求22的方法，其中所述疾病是癌症。
25.权利要求对的方法，其中所述癌症的特征在于以下一个或多个方面细胞周期蛋白依赖性激酶I(CDKl)活性增高、细胞周期蛋白依赖性激酶2 (CDD)活性增高、丧失或缺乏视网膜母细胞瘤抑癌蛋白(RB)、高水平的MYC表达、细胞周期蛋白E增多和细胞周期蛋白AJ·日夕O
26.权利要求22的方法，其中与在不给药所述抑制剂化合物的情况下会使用的剂量相比，给药所述抑制剂化合物允许使用更高剂量的所述细胞毒性化合物来治疗所述疾病。
27.权利要求1的方法，其中所述对象已意外地暴露于所述细胞毒性化合物或者过量的所述细胞毒性化合物。
28.权利要求1的方法，其中所述方法没有长期的血液毒性。
29.权利要求1的方法，其中与在不给药所述抑制剂化合物的情况下暴露于所述细胞毒性化合物后预期的状况相比，给药所述抑制剂化合物致使贫血减轻、淋巴细胞减少减轻、 血小板减少减轻或中性白细胞减少症减轻。
30.筛选用于预防细胞毒性剂在健康细胞中的效应的化合物的方法，所述方法包括 使细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)依赖性细胞群和/或细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)依赖性细胞群与测试化合物接触一段时间； 进行所述细胞群的细胞周期分析；和选择选择性地诱导所述细胞群中的Gl停滞的测试化合物。
31.权利要求30的方法，其中所述细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)依赖性细胞群和 /或细胞周期蛋白依赖性激酶6 (CDK6)依赖性细胞群包括调聚的人类二倍体成纤维细胞或缺少INMa/ARF的黑素瘤细胞。
32.权利要求30的方法，其中使用选自流式细胞术、荧光测定法、细胞成像和荧光光谱法的一种或多种技术进行所述细胞周期分析。
33.权利要求30的方法，其中所述细胞周期分析包括用选自5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU) 和碘化丙锭的一种或多种标记剂标记所述细胞群。
34.权利要求30的方法，其中所述方法还包括使另一种细胞群与选择性地诱导细胞周期蛋白依赖性激酶4 (CDK4)依赖性细胞和/或细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)依赖性细胞中的Gl停滞的测试化合物接触一段时间，其中所述另一种细胞群包括非⑶K4和/或⑶K6依赖性细胞； 进行所述另一种细胞群的细胞周期分析；和选择没有选择性地诱导所述另一种细胞群中的Gl停滞的测试化合物。
35.权利要求34的方法，其中所述另一种细胞群是癌细胞系。
36.权利要求34的方法，其中所述另一种细胞群是视网膜母细胞瘤抑癌蛋白(RB)无效的。
37.权利要求30的方法，其中所述方法还包括通过评价所述测试化合物在与细胞毒性剂接触的离体细胞群中减轻DNA损伤的能力、维持细胞活力的能力或此二者来证实所述化合物的预防能力。
38.权利要求37的方法，其中通过进行Y-H2AX测定评价所述细胞群中的DNA损伤。
39.权利要求37的方法，其中通过进行细胞增殖测定评价细胞活力。
40.权利要求37的方法，其中所述细胞毒性剂是DNA损伤性化合物。
41.权利要求40的方法，其中所述DNA损伤性化合物选自多柔比星、依托泊苷和卡钼。
全文摘要
提供减轻或预防细胞毒性化合物对健康细胞的效应的方法。所述方法涉及使用选择性细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4/6抑制剂来诱导CDK4/6依赖性细胞例如造血干细胞和/或造血祖细胞中的暂时静止。还描述选择用于减轻或预防细胞毒性剂化合物在健康细胞中的效应的化合物的方法。
文档编号A61P35/00GK102231984SQ200980148408
公开日2011年11月2日 申请日期2009年10月1日 优先权日2008年10月1日
发明者J·C·斯特鲁姆, J·E·比希, M·R·拉姆齐, N·E·沙普尔斯, P·J·罗伯茨 申请人:北卡罗来纳大学查珀尔希尔分校