专利名称：表现出对胰岛素受体的高活性的基于yl的胰岛素-样生长因子的制作方法
表现出对胰岛素受体的高活性的基于YL的胰岛素-样生长
因子相关申请的交叉引用
本申请要求2008年12月19日提交的美国临时专利申请号61/139，223的优先权，其公开内容特别地通过引用整体并入本文。
背景技术：
胰岛素是被证实的用于治疗青少年型糖尿病和晚期成年型糖尿病的治疗。不幸地，它的药理学不是葡萄糖敏感的，如此它能过度作用，所述过度作用可以导致威胁生命的低血糖症。不一致的药理学是胰岛素治疗的标志，使得非常难以在不发生低血糖症的情况下标准化血糖。此外，天然的胰岛素具有短的作用持续时间，并需要修饰来使它适用于控制基础葡萄糖。胰岛素治疗的一个中心目标是，设计能提供每天一次作用的胰岛素制剂。通过降低胰岛素在注射部位的溶解度，可以延长胰岛素剂量的作用持续时间。存在3种经证实的且不同的降低溶解度的分子方案，它们包括(1)作为含有锌的不溶性悬浮液的胰岛素制剂，(2)通过加入阳离子氨基酸，使它的等电点升高至生理pH，共价修饰，以提供降低溶解度和结合白蛋白的疏水配体。所有这些方案受到与下述一起发生的固有变化性的限制在注射部位处沉淀，和随后作为活性激素再增溶和运输至血液。前药化学提供了精确地控制从给药位点清除以后胰岛素作用的开始和持续时间以及在非常确定的浓度在血浆中平衡的替代机理。与现有的长效胰岛素类似物和制剂相比，这样的方案的重要优点是，胰岛素蓄池不是进行注射的皮下脂肪组织，而是血液隔室。这消除了沉淀和溶解度的变化性。使用前药形式的胰岛素，也允许通过皮下注射以外的途径施用肽激素。为了构建成功的前药-激素，需要活性部位结构分析(structural address)，其可以形成前药结构元件的可逆连接的基础。结构分析需要提供2个关键特征 (1)选择性化学修饰的潜力，和O)在去除前药结构元件以后，在天然形式提供完全活性的能力。胰岛素是通过酶加工从低效价单链胰岛素原前体生物合成地衍生出的双链异源二聚体。人胰岛素由通过二硫键连接到一起的2条肽链(“A链”(SEQ ID NO: 1)和“B 链”(SEQ ID NO: 2))组成，且共具有51个氨基酸。天然胰岛素结构在活性部位残基处具有有限的独特化学元件，它们可能用于酰胺连接的前药元件的选择性装配。因此，存在对胰岛素模仿物的需求，所述胰岛素模仿物起胰岛素受体激动剂的功能，但是具有有利的性质， 诸如提供用于连接前药元件的位点、合成容易性增加、和在胰岛素受体以外的受体处的共激动剂活性。已经从不同的动物物种分离出胰岛素-样生长因子(IGF)，且被认为是有活性的生长促进分子，其介导诸如生长激素和胎盘催乳激素等激素的合成作用。迄今为止，已经鉴别出几类IGF。它们包括胰岛素-样生长因子-I (IGF-1;生长调节素C)、胰岛素-样生长因子-II (IGF-2;生长调节素A)和称作“繁殖-刺激活性”的肽混合物。该异源肽集合在体外(Daughaday, W. H. (1977) Clin. Endocrin. Metab. 6: 117-135. ； Clemmons, D. R.禾口 Van Wyk, J. J. (1981) J. Cell Physiol. 106: 362-367.)和在体内(Schoenle, Ε. Zapf, J. , HumbeU R. Ε.禾口 Froesch, Ε. R. (1982) Nature 296: 252-253)表现出重要的生长促进作用。人IGF-I是具有SEQ ID NO: 3所示的蛋白序列的70氨基酸碱性肽，且与胰岛素原具有 43% 同源性(Rinderknecht 等人(1978) J. Biol. Chem. 253:2769-2776)。人 IGF-2是具有SEQ ID N0: 4所示的蛋白序列的67氨基酸碱性肽。对于IGF-I和IGF-2具有非常高结合容量的高分子量的特异性结合蛋白起载体蛋白或IGF-I功能调节剂的作用 (Holly 等人(1989) J. Endocrinol. 122:611-618)。申请人:已经鉴别出了表现出对胰岛素受体的高活性的基于1的IGF类似物(在本文中称作IGFb16b17衍生肽)。这样的衍生物比胰岛素更容易合成，且允许开发胰岛素和 IGF- 1受体的共激动剂类似物，以及潜在选择性的胰岛素受体同种型特异性的类似物。
发明内容
如本文公开的，胰岛素的B16酪氨酸已经被鉴别为对于高亲和力胰岛素激动极其重要的氨基酸。分别用酪氨酸和亮氨酸选择性地置换与天然胰岛素的位置B16和B17相对应的天然IGF残基，会使得到的IGF类似物对胰岛素受体的效价增加至十倍。因此，胰岛素和IGF之间的其它氨基酸序列差异似乎对于胰岛素-样配体和胰岛素受体的高亲和力相互作用而言重要性较低。该发现允许使用基于IGF-胰岛素的杂交肽作为完整的且超有效的胰岛素激动剂。新发现的B16酪氨酸在这些肽中的重要性，将它鉴别为胰岛素-激动剂前药的选择性装配部位。IGFb16b17衍生肽的其它优点包括、但不限于相对容易合成，开发胰岛素和IGF- 1受体的共激动剂，和潜在选择性的胰岛素受体同种型特异性的类似物。根据一个实施方案，提供了表现出对胰岛素受体的完全效价的IGF蛋白的类似物，其中所述IGF类似物具有二肽Tyr-Leu，该二肽置换在与天然胰岛素的B16和B17相对应的位置处的IGF-I和IGF-2的天然氨基酸。根据一个实施方案，提供了包含序列 X3UTGX刊XWLVX. X.;.,LYLVCX][》X. GFY (SEQ ID NO: 9)的 IGF 类似物，
其中L选自组氨酸和苏氨酸；
选自丙氨酸、甘氨酸和丝氨酸； X3tl选自组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、高半胱氨酸和磺基丙氨酸；
选自天冬氨酸和谷氨酸； )(34选自丙氨酸和苏氨酸；且
)(42选自丙氨酸、鸟氨酸和精氨酸。在一个实施方案中，所述IGF类似物另外包含通过分子内二硫键连接到SEQ ID N0: 9的肽上的第二个肽，或所述2个肽通过肽键共价地彼此相连，形成连续的单链氨基酸序列。在一个实施方案中，所述第二个肽包含序列
GIVX4ECCXxX4iSCDLXI4XI^LEXιKXi^CXii-Rti (SEQ ID XO; 19)，其中 X4是谷氨酸或天冬氨酸； X8是组氨酸或苯丙氨酸； X9和X14独立地选自鸟氨酸、精氨酸或丙氨酸； X15是精氨酸、丙氨酸、鸟氨酸或亮氨酸；X18是甲硫氨酸、天冬酰胺或苏氨酸； X19是酪氨酸或4-氨基苯丙氨酸； X21是丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；且 R13 是 COOH 或 CONH2。根据一个实施方案，提供了 IGFb16b17衍生肽，其包含具有序列 G1VX—,X5CCXsX,,Xi,..CiXl2LXl..,XpLfXlsXi,,CX2rR ,USEiQ ID NO: 821 的 A 链和具有序列 X-LCXIX,,X, LVX,,X^4LYLVCGΧ,,X,,GFX^R1-R4s- Rw-R14 <SEQ ID Ν : 67·的 B 链，其中
X4是谷氨酸或天冬氨酸；
X5是谷氨酸或谷氨酰胺；
X8是组氨酸、苏氨酸或苯丙氨酸；
X9是丝氨酸、鸟氨酸、精氨酸或丙氨酸；
X10是丝氨酸或异亮氨酸；
X12是丝氨酸或天冬氨酸；
)(14独立地选自酪氨酸、鸟氨酸、精氨酸或丙氨酸；
X15是谷氨酰胺、鸟氨酸、精氨酸、丙氨酸或亮氨酸；
X18是甲硫氨酸、天冬酰胺或苏氨酸；
X19是酪氨酸、4-甲氧基-苯丙氨酸或4-氨基苯丙氨酸；
X21是丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；
X25是组氨酸或苏氨酸；
选自丙氨酸、甘氨酸和丝氨酸； X3tl选自组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、高半胱氨酸和磺基丙氨酸；
选自天冬氨酸和谷氨酸； X34选自丙氨酸和苏氨酸； )(41选自谷氨酸和天冬氨酸； )(42选自丙氨酸、鸟氨酸和精氨酸； X45是苯丙氨酸或酪氨酸； R13 是 COOH 或 CONH2 ；
R47是苯丙氨酸-天冬酰胺二肽、苯丙氨酸-丝氨酸二肽或酪氨酸-苏氨酸二肽； R48是天冬氨酸盐-赖氨酸二肽、精氨酸-脯氨酸二肽、脯氨酸-精氨酸二肽、赖氨酸-脯氨酸二肽或脯氨酸-赖氨酸二肽；
R49是苏氨酸或丙氨酸；且R13和R14独立地选自COOH和CONH2,条件是，所述B链不是天然胰岛素B链序列(例如，不是SEQ ID NO: 2)。根据一个实施方案，提供了 IGFb16b17衍生肽，其包含具有序列 GlVDirXXrX^SCDLRRLEMX ,CiCX^i-Rj.ι iSEQ ID NO: 21 的 A 链和具有序列
Blis-R47-R4rR4 -RM (SEQ ID NO: 20)的 β
13
链，其中
丙氨酸或组氨酸； X9是精氨酸或丙氨酸；X19是酪氨酸；
X21是丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺； X25是组氨酸或苏氨酸；
选自丙氨酸、甘氨酸和丝氨酸； X3tl选自组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、高半胱氨酸和磺基丙氨酸；
选自天冬氨酸和谷氨酸； X34选自丙氨酸和苏氨酸； X36是酪氨酸；
)(42选自丙氨酸、鸟氨酸和精氨酸； X45是酪氨酸；
R22选自三肽甘氨酸-脯氨酸-谷氨酸、二肽脯氨酸-谷氨酸、谷氨酸和N-端胺； R47是苯丙氨酸-天冬酰胺二肽、苯丙氨酸-丝氨酸二肽或酪氨酸-苏氨酸二肽； R48是天冬氨酸盐-赖氨酸二肽、精氨酸-脯氨酸二肽、赖氨酸-脯氨酸二肽或脯氨酸-赖氨酸二肽；
R49是苏氨酸或丙氨酸；且R13和R14独立地选自COOH和CONH2。
根据一个实施方案，提供了 IGFb16b17衍生肽的前药衍生物。在一个实施方案中，这样的肽包含修饰的IGF A链和B链，其中所述A链包含 Z - Givx4EcCXxXliSCDLXj4X15LEXlsXl9CX^rR1, CSEQ ID NO; 19> 的序
列或与SEQ ID NO: 19相差1-3个氨基酸修饰的序列，所述氨基酸修饰选自 SEQ ID NO: 19 的位置 5、8、9、10、12、14、15、17、18 和 21，且所述 B 链序列包含
权利要求
1.一种多肽，其中包含序列
2.如权利要求1所述的多肽，另外包含连接到SEQID NO: 9的肽上的第二个肽，其中所述第二个肽包含序列GlVX^1ECCXsX.,SCDLX X,,LEX,.,CXij-R1, (SFQ ID NO: 19:.,其中X4是谷氨酸或天冬氨酸；X8是组氨酸或苯丙氨酸；X9和X14独立地选自精氨酸、鸟氨酸或丙氨酸；X15是精氨酸、丙氨酸、鸟氨酸或亮氨酸；X18是甲硫氨酸、天冬酰胺或苏氨酸；X19是酪氨酸、4-甲氧基-苯丙氨酸或4-氨基苯丙氨酸；X21是丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；且R13 是 COOH 或 CONH2。
3.如权利要求2所述的多肽，其中SEQID NO: 9的肽和所述第二个肽通过分子间二硫键彼此相连。
4.如权利要求2所述的多肽，其中SEQID NO: 9的羧基端通过肽接头连接到所述第二个肽的N-端，形成连续的氨基酸链。
5.如权利要求3或4所述的多肽，其中所述第二个肽包含序列R2LCXLX29X il.VX5,X;ULX36LVCODX42GR1.1SEQ ID NO; 20 ,其中X25是组氨酸或苏氨酸；选自丙氨酸、甘氨酸和丝氨酸； X3tl选自组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、高半胱氨酸和磺基丙氨酸；选自天冬氨酸和谷氨酸； X34选自丙氨酸和苏氨酸； X36是酪氨酸；)(42选自丙氨酸、鸟氨酸和精氨酸； X45是酪氨酸；R22 选自=AYRPSE (SEQ ID NO 14)、PGPE (SEQ ID NO 68)、三肽甘氨酸 _ 脯氨酸 _ 谷氨酸、二肽脯氨酸-谷氨酸、谷氨酸和N-端胺；R47是苯丙氨酸-天冬酰胺二肽、苯丙氨酸-丝氨酸二肽或酪氨酸-苏氨酸二肽； R48是天冬氨酸盐-赖氨酸二肽、精氨酸-脯氨酸二肽、脯氨酸-精氨酸二肽、赖氨酸-脯氨酸二肽或脯氨酸-赖氨酸二肽；R49是苏氨酸或丙氨酸；且 R14 是 COOH 或 CONH2。
6.如权利要求5所述的多肽，其中 X4是天冬氨酸；X8是苯丙氨酸或组氨酸；X9是精氨酸、鸟氨酸或丙氨酸，X21是丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；X25是组氨酸或苏氨酸；X29是丙氨酸；X30是谷氨酸或天冬氨酸；X33是天冬氨酸；X34是丙氨酸；R22是甘氨酸-脯氨酸-谷氨酸三肽；R47是苯丙氨酸-天冬酰胺二肽；R48是天冬氨酸盐-赖氨酸二肽或赖氨酸-脯氨酸二肽；R49是苏氨酸；R13 是 COOH ；且队4是 CONH2。
7.如权利要求1-6中任一项所述的多肽，另外包含被连接到所述多肽的氨基酸上的亲水部分。
8.如权利要求7所述的多肽，其中所述亲水部分是聚乙二醇。
9.如权利要求8所述的多肽，其中所述聚乙二醇被连接到B链的N-端氨基酸上，或在 B-链的位置28或四处的氨基酸侧链上。
10.如权利要求1-9中任一项所述的多肽，其中所述多肽在选自A9、A14、A15、B22、B^ 或B29的一个或更多个位置处被酰化。
11.如权利要求10所述的多肽，其中所述二肽被脂肪酸或脂肪酸酰化。
12.—种二聚体或多聚体，其包含如权利要求1-11中任一项所述的多肽。
13.一种药物组合物，其包含如权利要求1-12中任一项所述的多肽和药学上可接受的载体。
14.一种治疗糖尿病的方法，所述方法包括，施用有效量的如权利要求13所述的药物组合物。
15.一种包含A链和B链的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述A链包含序列 Z.GlHECCXHXuSCDLXuXpLEXwXhC&i-Ru (SEQiDNO: 19》或与SEQ ID NO: 19相差1-3个氨基酸修饰的序列，所述氨基酸修饰选自 SEQ ID NO: 29的位置5、8、9、10、14、15、17、18和21，且所述B链序列包含序列J-RzrX^lJCGKinXi( LVXvX LXVCGDXj2GFX4^《SEQ ID NO: 20:i或与 SEQ ID NO: 20相差1-3个氨基酸修饰的序列，所述氨基酸修饰选自SEQ ID NO: 20的位置5、6、9、10、16、 18,19 和 21 ；其中Z和J独立地是H或包含一般结构U-O的二肽元件，其中U是氨基酸或羟酸，且0是N-烷基化的氨基酸；X4是天冬氨酸或谷氨酸；X8是组氨酸或苯丙氨酸；X9和X14独立地选自精氨酸或丙氨酸；X15是精氨酸或亮氨酸；X18是甲硫氨酸、天冬酰胺或苏氨酸；X19是下述一般结构的氨基酸
16.如权利要求15所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中U、0，或连接U-O的胰岛素-样生长因子类似物的氨基酸是非编码的氨基酸。
17.如权利要求15或16所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中 m是1 ；且U-O包含式I的二肽元件
18.如权利要求15或16所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中 m是1 ；且U-O是具有式I 一般结构的化合物
19.如权利要求18所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述B链包含序列中R47是苯丙氨酸-天冬酰胺二肽、苯丙氨酸-丝氨酸二肽或酪氨酸-苏氨酸二肽； R48是天冬氨酸盐-赖氨酸二肽、精氨酸-脯氨酸二肽、赖氨酸-脯氨酸二肽，或脯氨酸-赖氨酸二肽；R49是苏氨酸或丙氨酸；且 R14 是 COOH 或 CONH2。
20.如权利要求19所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述A链包含序列 Z-G 1VDECCXsXvSCDLRRLEMXI9CX21-Rb (SEQ ID NO; 21),且 B 链具有序列J-R11-XlfLCCAK =IiLVDALYLVCGDX42GFYFN-R4K-R*-Rw <SEQ ID NO; !5:丨，其中 R22是AYRPSE (SEQ ID NO: 14)或甘氨酸-脯氨酸-谷氨酸三肽； R48是天冬氨酸盐-赖氨酸二肽、精氨酸-脯氨酸二肽、赖氨酸-脯氨酸二肽或脯氨酸-赖氨酸二肽； R49是苏氨酸； R13 是 COOH ；且队4是 CONH2。
21.如权利要求20所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中X42是精氨酸。
22.如权利要求18或20所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述A链包含序列Z-GIVDECC:FRSCDLRRLEMXWC:A R1:.,且所述B链包含序列 J-R2rTlJCGAELVDALX 、LVCGDRGFX#FNKPX4,,- R·—；。
23.如权利要求18或20所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述 A链包含序列Z-GIVDECCHASCDI.RRLEMXI.JCN-Rii ,且所述B链包含序列J^r22-Hlcgadlvdalx LvcGDAGFx45FMKpx^r R1,。
24.如权利要求18-23中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中Z包含下述一般结构的二肽元件
25.如权利要求18-23中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中J包含下述一般结构的二肽元件
26.如权利要求M或25所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述二肽元件被1或 2个聚乙二醇链聚乙二醇化，其中聚乙二醇链的组合分子量范围是从约20，000至约80，000道尔顿。
27.如权利要求M或25所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述二肽元件被包含 16-30个碳原子的酰基酰化。
28.如权利要求27所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述二肽元件被以6脂肪酸或以8脂肪酸酰化。
29.如权利要求18-23中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中 Z禾口 J各自是H;X12和X13各自是0H; X 是 NHR10。
30.如权利要求18-23中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中 Z禾口 J各自是H;X和X13各自是0H; X12 是 NHR11 ο
31.如权利要求18-25中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述B链包含序列 I 'VN'Q'i'l IXhMil .VIMLYI.VCCJDRi ；FYI^rKPX-W-Rlj。
32.如权利要求18或20所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中 X，X1JPX13各自是0H;且Z和J之一是H，另一个是包含下述一般结构的二肽元件
33.如权利要求20所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中 Z禾口 J各自是H;X19是下述一般结构的氨基酸
34.如权利要求33所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中 R22是三肽甘氨酸-脯氨酸-谷氨酸；且R49是苏氨酸。
35.如权利要求33或34所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中 R1和&独立地是C1-C18烷基或芳基；R3是C1-C18烷基，或R3和R4与它们连接的原子一起形成4-12杂环； R4和&独立地选自氢、C1-C18烷基和芳基；且 R5是胺或羟基。
36.如权利要求33或34中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中 R1选自氢、C1-Cw烷基和芳基，或队和1 2通过-(CH2)p-相连，其中ρ是2-9 ； R3是C1-C18烷基，或民和R4与它们连接的原子一起形成4-6杂环；R4和&独立地选自氢、C1-C18烷基和芳基；且 R5是胺或N-取代的胺。
37.如权利要求33或34中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中 R1和&独立地选自氢、C1-C8烷基和芳基；R3是C1-C18烷基，或民和R4与它们连接的原子一起形成4-6杂环； R4和&各自是氧；且 &选自胺、N-取代的胺和羟基。
38.如权利要求18-37中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，另外包含被连接到 B链的氨基酸上的亲水部分。
39.如权利要求38所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述亲水部分被连接到B 链的N-端氨基酸上。
40.如权利要求38所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述亲水部分被连接到 C-端赖氨酸氨基酸的侧链上。
41.如权利要求38-40所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述亲水部分是聚乙二
42.如权利要求18-38中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述类似物在选自A9、A14、A15、B22、B28或B29的一个或更多个位置处被酰化。
43.如权利要求18-38中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中其中所述类似物在B链的羧基端的最后5个氨基酸内存在的赖氨酸残基处被酰化。
44.如权利要求18-37中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中包含式I的二肽元件的氨基酸之一的侧链另外包含储库聚合物。
45.如权利要求44所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述储库聚合物是聚乙二
46.一种二聚体或多聚体，其包含如权利要求1-45中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物。
47.如权利要求15-46中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中与U对应的二肽元件氨基酸是处于D-立体化学构型的氨基酸。
48.如权利要求15-46中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述A链和所述B链通过分子间二硫键彼此相连。
49.如权利要求15-46中任一项所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述B链的羧基端通过肽接头连接到所述A链的N-端，形成连续的氨基酸序列。
50.如权利要求49所述的胰岛素-样生长因子类似物，其中所述肽接头包含序列 SRVSRRSR (SEQ ID NO: 79)。
51.一种药物组合物，其包含如权利要求19或33所述的胰岛素-样生长因子类似物和药学上可接受的载体。
52.一种治疗糖尿病的方法，所述方法包括，施用有效量的如权利要求51所述的药物组合物。
53.如权利要求1-50中任一项所述的化合物在生产药物中的应用，所述药物用于治疗高血糖症。
54.如权利要求1-50中任一项所述的化合物用于治疗糖尿病的应用。
全文摘要
公开了胰岛素-样生长因子类似物，其中分别用酪氨酸和亮氨酸置换在与天然胰岛素的位置B16和B17相对应的位置处的IGF天然氨基酸，会使得到的类似物对胰岛素受体的效价增加至10倍。也公开了IGF类似物的前药和储库制剂，其中通过经由酰胺键连接将二肽连接到类似物上，已经修饰了IGF类似物。本文公开的前药和储库制剂具有至少2小时、10小时、更通常大于20小时的延长的半衰期，且通过化学不稳定性驱动的非酶反应，在生理条件下被转化成活性形式。
文档编号A61K38/00GK102307584SQ200980156228
公开日2012年1月4日 申请日期2009年12月18日 优先权日2008年12月19日
发明者D. 迪马基 R., 寇宾宾, 程抒江, 韩杰 申请人:印第安纳大学研究及科技有限公司