专利名称：一种刺五加提取物及其药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药原料提取物，具体地说是一种刺五加提取物，本发明还涉及 含有该提取物药物组合物。
背景技术：
刺五加注射液是由五加科植物刺五加中提出的有效成分制成的中药注射液，其中 含有多种刺五加苷、异秦皮苷、丁香苷、金丝桃苷、刺五加多糖等有效成分。刺五加能调节机 体新陈代谢的功能，提高机体对有害刺激因子的非特异性抵抗力，能增强垂体-肾上腺皮 质系统的功能，提高机体的适应性和耐受性，减低体内外多种致病因子对机体的损害，对中 枢神经系统即有兴奋作用又有抑制作用。刺五加注射液可扩张血管、增加冠状动脉血流量、 减少耗氧量、降低血液粘度、改善血液循环，并有镇静、改善睡眠、增加食欲等作用。主要用 于肝肾不足所致的短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化、脑血栓形成、脑栓塞等。
近年来由于其在临床上广泛的应用所引起的不良反应时有报道。其不良反应类型 主要有过敏反应、过敏性休克、全身性过敏反应等，临床主要表现为头晕、头痛、胸闷、呼吸 困难、血压下降、烦躁，部分患者伴有皮疹、全身瘙痒、发热、寒战、鼻塞、流涕等。造成上述不良反应的原因主要有目前刺五加制品主要采用溶剂提取法进行粗 提，溶剂多采用含有乙醇的水溶液，然后再根据不同的需要进行精制，该方法导致刺五加制 品中含有的杂质多、有效成分少，并且含有致敏物质。到目前为止，还没有解决上述问题的 报道。
发明内容
本发明的第一个目的在于针对上述不足提供一种刺五加提取物，其具有较好的安 全性。本发明第二个目的在于提供制备上述刺五加提取物的方法。本发明第三个目的在于提供上述刺五加提取物在医药领域中的应用。本发明刺五加提取物是将刺五加经水提醇沉、石灰乳调pH至10. 0-12. 0，静置4小 时以上、硫酸调PH至5. 0-6. 0、再次醇沉后获得。该刺五加提取物中不含绿原酸，并且很好 的保留了有效成分而杂质成分则被有效减少。具体地，本发明刺五加提取物可通过如下方法制备获得将刺五加切成碎片，加水 煎煮，合并煎液，减压浓缩，加入乙醇至醇含量为70 75 %，静置滤过，回收乙醇后加水稀 释至生药重量的3-6倍，用石灰乳调pH值至10. 0 12. 0，静置4小时以上，再用硫酸将pH 值调至5. 0-6. 0，静置过滤，浓缩，加入乙醇至醇含量为80 85 %，静置过滤，离心分离杂 质，药液回收乙醇后浓缩干燥，即得。上述步骤中，水提时通常加水煎煮2 3次，每次加4 10倍量(重量)的水煎 煮30 60分钟；减压浓缩通常浓缩至80°C时检测相对密度为1. 11 11. 4 ；静置过滤过程 通常静置12 24小时，使杂质能够有效沉淀；离心通常以1500-3000rpm，离心20-40min，去除沉淀。该方法中采用水提醇沉、新鲜石灰乳调PH至10. 0-12. 0、硫酸调PH至5. 0-6. 0、再 次醇沉等步骤，很好的保留了有效成分，同时去除绿原酸等非药效成分，减少了杂质的引入 量，降低了毒性，保证了药品的安全。经上述方法提取得到的刺五加提取物中刺五加总苷占2% -20%，总黄酮占 3.5% -35%，总氨基酸和总糖占30% -40%，其余为有机酸、常量元素和微量元素等，且不 含绿原酸。通常刺五加总苷占5% -10%，刺五加总黄酮占8. 5% -10. 5%，总氨基酸和总糖 占35%-40%，余量为有机酸、常量元素和微量元素等，且不含绿原酸。其中，提取物中紫丁 香苷占刺五加总苷的10% -20%。
实验表明，本发明刺五加提取物过敏反应小，具有治疗老年痴呆的作用。本发明刺五加提取物可以与药学上可接受的载体制备成各种药物组合物，包括但 不限于注射液、冻干粉针剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、分散片、滴丸、泡腾片、软胶囊、口服液。 其中优选为注射剂。此外，本发明刺五加提取物还可以与其它药物联合使用，例如直接替换现有药物 组合物中的刺五加提取物，用于治疗各种疾病。本发明具有以下优点1)提取物中不含绿原酸，杂质含量少，减少了不良反应的发生，应用更安全。2)制备方法在用石硫法处理药液的过程中，用石灰乳调pH至10. 0-12. 0并静置 4小时以上，溶液为强碱性，在此条件下，绿原酸被完全水解掉；在石硫法后又增加了一步 醇沉反应，显著减少了硫酸、石灰乳等带来的外援性杂质；同时，石灰乳与硫酸的用量也降 低至目前常用量的四分之一至五分之一，减少了杂质的带入，尤其是钙离子的引入。
具体实施例方式以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离 本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明 的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例1现有工艺制备的提取物将刺五加杆切成碎片，加10倍量60%乙醇提取2次，每次1小时，合并滤液，减压 浓缩，上D201型树脂，用70%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，即得。经检测，提取物中含绿原酸1. 24%，杂质占4. 2%。实施例2本发明方法制备的提取物将刺五加杆切成碎片，加水煎煮3次，第一次加5倍量水，煎煮30分钟；第二次加 6倍量水，煎煮40分钟；第三次加4倍量水，煎煮30分钟。合并煎液，减压浓缩至80°C时检 测相对密度为1. 11，加入乙醇使含醇量达75%，静置滤过，回收乙醇后加水稀释至生药重 量的4倍。用重量百分比为20%的石灰乳调pH值至11.0，再用重量百分比为20%的硫酸 将PH值调至5. 1，静置过滤，浓缩至80°C时检测相对密度为1. 13，再次加入乙醇使含醇量达 84%,静置过滤，离心分离杂质，药液回收乙醇后浓缩干燥，即得。经检测，提取物中未检出绿原酸，杂质占1. 5%。
实施例3本发明方法制备的提取物
将刺五加杆切成碎片，加水煎煮2次，第一次加8倍量水，煎煮60分钟；第二次加 6倍量水，煎煮40分钟；第三次加6倍量水，煎煮30分钟。合并煎液，减压浓缩至80°C时检 测相对密度为1. 14，加入乙醇使含醇量达70%，静置滤过，回收乙醇后加水稀释至生药重 量的5倍。用重量百分比为20%的石灰乳调pH值至11. 5，再用重量百分比为20%的硫酸 将PH值调至5. 4，静置过滤，浓缩至80°C时检测相对密度为1. 12，再次加入乙醇使含醇量达 80%,静置过滤，离心分离杂质，药液回收乙醇后浓缩干燥，即得。经检测，提取物中未检出绿原酸，杂质占1. 7%。实施例4本发明方法制备的提取物将刺五加杆切成碎片，加水煎煮3次，第一次加8倍量水，煎煮60分钟；第二次加 4倍量水，煎煮40分钟；。合并煎液，减压浓缩至80°C时检测相对密度为1. 13，加入乙醇使 含醇量达73%，静置滤过，回收乙醇后加水稀释至生药重量的3倍。用重量百分比为20% 的石灰乳调PH值至12. 0，再用重量百分比为20%的硫酸将pH值调至6. 0，静置过滤，浓缩 至80°C时检测相对密度为1. 11，再次加入乙醇使含醇量达83%，静置过滤，离心分离杂质， 药液回收乙醇后浓缩干燥，即得。经检测，提取物中未检出绿原酸，杂质占2. 1%。实施例5注射液取实施例2所得提取物100g，加入注射用水稀释，100-120°C热处理，过滤，0_4°C 冷藏处理，过滤，调PH值至5. 5，活性炭处理，过滤，灭菌，冷藏处理，超滤，灌装，每支20ml， 灭菌，即得。经检测，总苷含量为2. 8mg/ml，其中紫丁香苷为0. 41mg/ml，总黄酮含量为5. 3mg/ ml，总糖和总氨基酸为19. 7mg/ml，未检出绿原酸。实施例6注射液取实施例3所得提取物300g，加入注射用水稀释，100-120°C热处理，过滤，0_4°C 冷藏处理，过滤，调PH值至5. 5，活性炭处理，过滤，灭菌，冷藏处理，超滤，灌装，每支IOOml， 灭菌，即得。经检测，总苷含量为1. 68mg/ml，其中紫丁香苷为0. 26mg/ml，总黄酮含量为 2. 97mg/ml，总糖和总氨基酸含量为18. 16mg/ml，未检出绿原酸。实施例7注射液取实施例3所得提取物400g，加入注射用水稀释，100-120°C热处理，过滤，0_4°C 冷藏处理，过滤，调PH值至5. 5，活性炭处理，过滤，灭菌，冷藏处理，超滤，灌装，每支250ml， 灭菌，即得。经检测，总苷含量为1. 16mg/ml，其中紫丁香苷为1. 14mg/ml,总黄酮含量为 1. 89mg/ml，总糖和总氨基酸含量为20. 05mg/ml，未检出绿原酸。实施例8取实施例4所得提取物，加入蔗糖粉混合均勻，制粒、干燥、整粒混合、装袋、包装， 得颗粒剂。实施例9取实施例5所得提取物，加入糊精混合均勻，制粒、低温干燥、整粒混合、压片、包衣，得片剂。实施例10取实施例2所得提取物，加入淀粉混合均勻，低温干燥，粉碎成细粉，装入胶囊，得 胶囊剂。实施例11取实施例2所得提取物，加水溶解，加入矫味剂，搅勻过滤，补加水至规定量，得口 服液。实施例12取实施例2所得提取物，加入注射用水稀释，过滤，调pH值至5. 5，活性炭处理，过 滤，灭菌，冷藏处理，过滤，超滤，灌装，冷冻干燥，得冻干粉针剂。试验例1过敏试验对比研究样品实施例5样品、市售刺五加注射液方法取体重250_300g豚鼠24只，随机分为四组，每组6只。阴性对照组腹腔 注射0. 9%氯化钠注射液；阳性对照组腹腔注射5%新鲜蛋清溶液。试验1组腹腔注射 实施例5样品；试验2组腹腔注射市售刺五加注射液。给药剂量均为0. 5ml/只。隔日一 次，共三次。首次给药后14天，21天，每组随机取2只，试验1组和2组分别由耳缘静脉注 射实施例5样品和市售刺五加注射液；阴性对照组注射0. 9%氯化钠注射液，阳性对照组注 射5%新鲜蛋清溶液。给药剂量均为1.0ml/只。给药后立即观察动物有无喷嚏、搔鼻、干 咳或咳嗽、颤抖、竖毛、抽搐、呼吸困难、大小便失禁、休克和死亡的过敏反应，观察时间为15 分钟。过敏反应分级见表1。表1过敏反应分级及结果判定方法
i应分级ι反映症状I结果判断
0 无明显反应_如两次豚鼠均无明显反
ι ^有轻微抓鼻、颤抖或竖毛应’认为受试药过敏试验
2^几次咳嗽，有抓鼻颤抖或竖毛合格，反映级数达2级以
3多次或连续咳嗽，伴有呼吸困难或痉挛、上(包括2级)时’认为 __ _受试药物过敏反应不合
4痉挛、抽搐、大小便失禁、休克、死亡I格。_结果注射0. 9%氯化钠注射液的阴性对照组的豚鼠过敏反应级数均为0，无过敏 反应；注射5%蛋清的阳性对照组豚鼠出现喷嚏、搔鼻、干呕或咳嗽、抽搐、颤抖、呼吸困难、 大小便失禁、休克等过敏反应，且皆于15min内死亡，过敏反应级数为4级，试验条件成立。 注射实施例5样品的试验1组的6只豚鼠均无过敏反应，过敏反应级数均为0。注射市售刺 五加注射液的试验2组的6只豚鼠中有1只豚鼠出现轻微抓鼻、竖毛现象，过敏反应级数为 1。表明实施例5样品的安全性高于市售刺五加注射液。用实施例6和7的注射液进行实 验亦取得了类似的结果。试验例2对老年痴呆大鼠学习记忆功能影响试验样品实施例2样品、脑复康药液
造模动物适应性喂养1周后，经水迷宫检测去掉反应过快或过慢者，其余大鼠随 机分为空白对照组(10只)与造模组(50只)。造模组大鼠每天背颈部注射D-半乳糖，空 白对照组背颈部皮下注射0. 9%氯化钠溶液，剂量均为0. lml/100g，连续30天。造模后进 行水迷宫训练，以造模后空白对照组大鼠逃避潜伏期的平均值为参考值，计算造模后30天 每只大鼠平均逃避潜伏期值，如大鼠平均逃避潜伏期值与参考值之差占该大鼠平均逃避潜 伏期值的20%以上，为造模成功。分组给药选造模成功大鼠40只，随机分为痴呆模型组、低剂量组、高剂量组和 阳性对照组，每组10只。空白对照组和痴呆模型组灌胃给予0.9%氯化钠溶液，剂量为 lml/100g ；低剂量组灌胃给予实施例2样品，剂量为0. 42g/100g ；高剂量组灌胃给予实施例 2样品，剂量为0. 84g/100g ；阳性对照组灌胃给予脑复康药液0. lg/100g。每天次，连续30天。大鼠学习记忆功能检测采用水迷宫系统，并用图像自动采集系统进行自动跟踪 分析，记录各种参数。水温控制在24°C左右，试验人员及周围环境保持恒定。试验于造模 前、造模后、给药后各进行一次。结果从大鼠入水开始至找到隐藏在水面下平台的时间为逃避潜伏期，以逃避潜 伏期时间的长短代表大鼠学习能力。造模前，各组大鼠的逃避潜伏期相近；造模后，造模组 大鼠逃避潜伏期明显比空白对照组长；给药后，低剂量和高剂量给药组及阳性对照组大鼠 逃避潜伏期明显缩短，而低剂量和高剂量给药组与阳性对照组大鼠逃避潜伏期相近。结果 表明，实施例2样品具有改善老年痴呆大鼠学习记忆功能的作用。结果详见表2。表2对老年痴呆大鼠学习记忆功能的影响
—组别 造模前逃避潜伏期 造模后逃避潜伏期 治疗后逃避潜伏期
空白对照组 21.04 ±5.26_13.45 ±4.68_5.91 ±2.49
痴呆模型组 20.86 土 6.15_23.08 ±4.38_14.62 ±2.67
阳性对照组 20.32 ±6.34_21.79 ±5.16_8.75 ± 4.24
高剂量组_20.62 土 5.08_22.38 ±4.27_8.46 ±3.86
低剂量组_21.12 ±6.01_22.84 ± 5.04_8.93+4.21用实施例3和4的提取物进行上述实验，亦取得了类似的结果。
权利要求
一种刺五加提取物，其通过如下方法制备获得刺五加经水提醇沉、石灰乳调pH至10.0-12.0，静置4小时以上、硫酸调pH至5.0-6.0、再次醇沉。
2.如权利要求1所述的刺五加提取物，其特征在于，其通过如下方法制备获得将刺五 加切成碎片，加水煎煮，合并煎液，减压浓缩，加入乙醇至醇含量为70 75%，静置滤过，回 收乙醇后加水稀释至生药重量的3-6倍，用石灰乳调pH值至10. 0 12. 0，静置4小时以 上，再用硫酸将PH值调至5. 0-6. 0，静置过滤，浓缩，加入乙醇至醇含量为80 85%，静置 过滤，离心，浓缩干燥，即得。
3.如权利要求1或2所述的刺五加提取物，其特征在于，该提取物不含绿原酸。
4.如权利要求3所述的刺五加提取物，其特征在于，该提取物中刺五加总苷占 2% _20%，总黄酮占3. 5% -35%，总氨基酸和总糖占30% -40%。
5.如权利要求4所述的刺五加提取物，其特征在于，提取物中紫丁香苷占刺五加总苷 的 10% -20%。
6.一种制备权利要求1所述刺五加提取物的方法，其包括如下步骤刺五加经水提醇 沉、新鲜石灰乳调pH至10. 0-12. 0，静置4小时以上、硫酸调pH至5. 0-6. 0、再次醇沉。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤将刺五加切成碎片， 加水煎煮，合并煎液，减压浓缩，加入乙醇至醇含量为70 75 %，静置滤过，回收乙醇后加 水稀释至生药重量的3-6倍，用石灰乳调pH值至10. 0 12. 0，静置4小时以上，再用硫酸 将PH值调至5. 0-6. 0，静置过滤，浓缩，加入乙醇至醇含量为80 85%，静置过滤，离心分 离杂质，药液回收乙醇后浓缩干燥，即得。
8.权利要求1 5任一项所述刺五加提取物在制备老年痴呆药物中的应用。
9.一种治疗老年痴呆症的药物组合物，其以权利要求1 5任一项所述刺五加提取物 作为有效成分。
10.如权利要求9所述的药物组合物，其为有效成分与药学上可接受的载体制备成的 注射液、冻干粉针剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、分散片、滴丸、泡腾片、软胶囊或口服液。
全文摘要
本发明提供了一种刺五加提取物及其药物组合物，该刺五加提取物是将刺五加经水提醇沉、石灰乳调pH至10.0-12.0、静置4小时以上、硫酸调pH至5.0-6.0、再次醇沉后获得。该刺五加提取物中不含绿原酸，并且很好的保留了有效成分而杂质成分则被有效减少。实验表明，本发明刺五加提取物过敏反应小，并具有治疗老年痴呆的作用。
文档编号A61K125/00GK101810656SQ20101016555
公开日2010年8月25日 申请日期2010年4月27日 优先权日2010年4月27日
发明者方同华 申请人:哈尔滨珍宝制药有限公司