专利名称：锝-99m标记的聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺配合物及制备方法
技术领域：
本发明涉及到锝_99m标记的放射性药物化学和临床核医学技术领域，特别是涉 及到一种锝-99m标记的聚(N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺)配合物及其制备方法和应用。
背景技术：
ASGP 受体(Asialoglycoprotein receptor, ASGP-R)是去唾液酸糖白蛋白 受体的简写，存在于哺乳动物肝细胞膜上，是介导肝脏清除血液中去唾液酸糖蛋白 (Asialoglycoprotein,ASGP)的专一位点。除了白蛋白之外几乎所有血浆蛋白都为糖蛋白， 在被肝脏合成并释放到血液时，其糖链末端为唾液酸。唾液酸与其它糖基形成较弱的连接， 在血液中并不稳定，很易被清除。唾液酸部分被清除，标志着这个糖蛋白寿命的结束。大部 分血浆蛋白中半乳糖结构都位于末端的第二位上，因此当末端的糖被酶解后，以半乳糖结 尾的糖蛋白就可以作为ASGP受体的作用底物。去唾液酸糖蛋白一旦在细胞表面与ASGP受 体结合，所形成的配体-受体复合物迅速内化，5分钟左右进入前溶酶体囊泡后由于pH的作 用而解离，受体再循环到质膜，大部分配体经溶酶体酶的作用而被分解代谢，小部分配体则 绕过溶酶体的降解而排入胆汁，或穿过细胞膜返回细胞表面仍与受体相结合。这个过程可 以维持血浆糖蛋白的动态平衡。ASGP受体可以在一定程度上反映出有效肝细胞功能，在肝 炎、肝硬化或肝癌等肝损伤性疾病发生时，其数量和活性均受到损害。肝炎疾病在世界范围 内都是一种高发疾病，特别是肝硬化继发肝癌患者众多，严重影响人类健康与生活质量，其 重要性现在已经引起广泛关注突现。1984年Vera等通过化学合成方法将半乳糖结构与人 血清白蛋白偶联得到新乳糖白蛋白(galactosyl-neoglycoalbumin，NGA)，并经"mTc标记 后进行肝显像研究。1986 年 Kubota 等研制 了一种 99mTc 标记 GSA(99mTc-diethylenetriamine pentaaceticacid-galactosyl-human serum albumin)，通过增力口双功能连接齐[JDTPA(二乙 烯三胺五乙酸)结构，简化了标记条件，减少了非特异性结合。日本已经利用ASGH 显像剂 为核医学肝脏SPECT显像建立了三维肝脏模型，该显像技术可以真实、数字化地反映肝脏 功能，这样既可以对肝硬化患者术前肝功能进行正确的评估，帮助预测手术风险、制定治疗 方案，降低肝脏手术的围手术期死亡率。聚(N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺)化合物(poly-N-p-vinylbenzyl-D-lactonami de)对ASGP受体具有良好的亲和力，目前主要用为一种人工合成的肝组织工程支架材料。 1994年Goto等报道了用碘-125标记的聚(N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺)化合物，其对ASGP 受体具有很高的亲和力，在肝脏中有较好的浓集。锝_99m是目前临床使用最常见的放射性 核素，具有良好的核素性质。目前锝_99m标记的ASGP受体显像剂如99mTc_GSA等采用人血 清白蛋白作为分子骨架进行修饰、标记。但是人血清白蛋白容易变质，不易保存。找到一种 稳定性好、可用于锝_99m标记的人工聚合物开发用于肝ASGP受体显像的SPECT显像剂是 本技术领域需要解决的重要课题。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有化学稳定性强、生物性能好、初始摄取值及化学纯 度高、制备简单及使用成本低，应用在肝脏受体SPECT显像领域的锝_99m标记的聚N-乙烯 基苄基-D-乳糖酰胺配合物。并且提供其制备方法。为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案一种锝_99m标记的聚N-乙烯基苄 基-D-乳糖酰胺配合物，其表达式为99mTc-PVLA，配体结构通式为 以99mTc为中心核，配体为含有6-胼基吡啶-3-甲酰胺基团(HYOTC)和半乳糖基 团的聚合物——聚(N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺)-(N-乙烯基苄基-6-胼基吡啶-3-甲酰 胺)(p(VLA-co-VNI))；式中m与n的比例为1 99 30 70，胼基选用苯甲醛(R = C6H5)、4_ 二甲氨基 苯甲醛(R = 4-NMe2-C6H4)、苯甲醛_2_磺酸钠(R = 2-Na03S-C6H4)或4-羧基苯甲醛(R = 4-H02C-C6H4)通过成腙反应进行保护。共配体选自N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)、 N，N-(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)或N_(2_羟乙基)-亚乙基二氨三乙酸(HEDTA)中的 一种；当使用N-三(羟甲基)甲基甘氨酸作为共配体时，可选用三(3-磺酰苯基)膦钠盐 (TPPTS)或三苯基膦单磺酸单钠盐(TPPMS)中的一种作为协同配体。本发明优选的配体中，m与n的比例为4 96 15 85。锝-99m标记的聚N-乙烯基苄基_D_乳糖酰胺配合物的制备方法如下当不使用协同配体时，以聚(N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺)-(N_乙烯基苄基-6-胼 基吡啶-3-甲酰胺)(p(VLA-co-VNI))为配体，在共配体、还原剂的存在下反应制备得到放 射性锝_99m标记的聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺配合物，其制备步骤为a.将p (VLA-co-VNI)配体溶于缓冲液中；按照配体比共配体为1 5 1000的 重量比，加入共配体N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)、N，N-(2-羟乙基)甘氨酸 (Bicine)或N-(2-羟乙基)-亚乙基二氨三乙酸(HEDTA)中的一种；b.然后按还原剂比配体为1 1 800的重量比称取还原剂并溶于盐酸溶液中；加入到步骤a所得溶液中，混合均勻，控制其pH在5. 5 6. 5之间；c.将从医用99Mo-99mTc发生器中淋洗获得的高锝酸根99mTc04_淋洗液加入步骤b制 备的溶液中，密封后在沸水浴条件下反应10 100分钟；d.将步骤c所得标记化合物通过凝胶色谱柱进行纯化。上述步骤a中优选的p (VLA-co-VNI)配体的用量为0. lmg 4mg ；上述步骤a中p (VLA-co-VNI)配体中胼基可选用苯甲醛、4_ 二甲氨基苯甲醛、苯 甲醛-2-磺酸钠或4-羧基苯甲醛等进行保护，以增加配体的稳定性；胼基保护基团在步骤 c中加热时解离，脱保护后的胼基与"mTc中心核配位。上述步骤a中所述共配体为N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(TriCine)、N，N-(2-羟 乙基)甘氨酸(Bicine)或N-(2-羟乙基)-亚乙基二氨三乙酸(HEDTA)中的一种，其分子 结构式为 共配体为锝_99m标记时参与配位的小分子配体，优选的共配体用量为20mg lOOmg ；上述步骤a中所述的缓冲液为0. 05mol/L pH6. 0磷酸缓冲液，用量为0. lmL 5mL ；上述步骤b中所述的还原剂为将高价锝(99mTcVII04-)还原为低价锝的常规化学试 剂二水合氯化亚锡(SnCl2 2H20)，优选的还原剂用量为0. 005mg 0. lmg ；上述步骤c中，配体中胼基的保护基团水解离去，使胼基裸露出来，从而进行标 记。上述步骤d中所述的凝胶色谱柱选用填料为葡聚糖凝胶G25(S印hadex G25)的凝 胶柱(HiTrap Desalting 凝胶柱)；上述制备方法中所述聚(N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺)-(N-乙烯基苄基-6-胼基 吡啶-3-甲酰胺)(p (VLA-co-VNI))配体为自行合成，其优选的配体用量为0. lmg-4mg。配 体比共配体为1 5 1000的重量比；还原剂比配体为1 1 800的重量比。上述制备方法中所述的共配体、缓冲液、还原剂等试剂均以从市场购得。当使用协同配体时，以聚(N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺)-(N_乙烯基苄基-6-胼 基吡啶-3-甲酰胺)(p (VLA-co-VNI))为配体，在以tricine为共配体、协同配体、还原剂的 存在下反应制备得到放射性锝_99m标记的聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺配合物，其制备 步骤为a.将p (VLA-co-VNI)配体溶于缓冲液中；按照配体比共配体为1 5 1000的 重量比，加入共配体N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)；
b.按照协同配体比共配体为1 2 10的重量比，加入协同配体；c.然后按还原剂比配体为1 1 800的重量比称取还原剂并溶于盐酸溶液中； 加入到步骤b所得溶液中，混合均勻，控制其pH在5. 5 6. 5之间；d.将从医用99Mo-99mTc发生器中淋洗获得的"mTc04_淋洗液加入步骤c制备的溶液 中，密封后在沸水浴条件下反应10 100分钟；e.将步骤d所得标记化合物通过凝胶色谱柱进行纯化。上述步骤a中优选的p (VLA-co-VNI)配体的用量为0. lmg 4mg ；上述步骤a中p(VLA-co-VNI)配体中胼基可选用苯甲醛、4_二甲氨基苯甲醛、苯甲 醛-2-磺酸钠或4-羧基苯甲醛进行保护，以增加配体的稳定性；胼基保护基团在步骤d中 加热时解离，脱保护后的胼基与"mTc中心核配位。上述步骤a中所述共配体为N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)，优选的共配 体用量为:20mg lOOmg ；上述步骤b中所述协同配体为三(3-磺酰苯基)膦钠盐(TPPTS)或三苯基膦单磺 酸单钠盐(TPPMS)中的一种，其分子结构式为 协同配体为锝_99m标记时参与配位的小分子单齿配体，优选的协同配体用量为 lmg 10mg ；上述步骤a中所述的缓冲液为0. 05mol/L pH6. 0磷酸缓冲液，用量为0. lmL 5mL ；上述步骤c中所述的还原剂为将高价锝(99mTcVII04-)还原为低价锝的常规化学试 剂二水合氯化亚锡(SnCl2 2H20)，优选的原剂用量为0. 005mg-0. lmg ；上述步骤d中，配体中胼基的保护基团水解离去，使胼基裸露出来，从而进行标 记。上述步骤e中所述的凝胶色谱柱选用填料为葡聚糖凝胶G25(S印hadex G25)的凝 胶柱(HiTrap Desalting 凝胶柱)；上述制备方法中所述聚(N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺)-(N-乙烯基苄基-6-胼基 吡啶-3-甲酰胺)(p(VLA-co-VNI))配体为自行合成，其优选的配体用量为0. lmg 4mg。 配体比共配体为1 5 1000的重量比；协同配体比共配体为1 2 10的重量比；还原 剂比配体为1 1 800的重量比。上述制备方法中所述的共配体、协同配体、缓冲液、还原剂等试剂均以从市场购
本发明以放射性高锝酸盐(99mTc04_)与聚(N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺)_ (N-乙 烯基苄基-6-胼基吡啶-3-甲酰胺)(p(VLA-co-VNI))配体，辅以N-三(羟甲基)甲基甘 氨酸(TriCine)、N，N-(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)或N_(2_羟乙基)-亚乙基二氨三乙 酸(HEDTA)中的一种为共配体；当使用N-三(羟甲基)甲基甘氨酸作为共配体时，可选用 三(3-磺酰苯基)膦钠盐(TPPTS)或三苯基膦单磺酸单钠盐(TPPMS)中的一种作为协同配 体；在还原剂SnCl2 2H20的存在下，反应制备得到一种放射性锝_99m标记的聚N-乙烯基 苄基-D-乳糖酰胺配合物(99mTc-PVLA)，化学稳定性及生物性能好、比活度高、肝脏摄取值 及靶与非靶比值高、制备简单及使用成本低，可以用于制备新型的肝受体显像剂。检测表明所得锝-99m标记的聚N_乙烯基苄基_D_乳糖酰胺配合物通过薄层层 析及HPLC鉴定，其放射化学纯度大于99 %，且在室温下放置4小时后放化纯度无变化，有较 好的稳定性。以实施例1中使用tricine为共配体得到的配合物"mTc (PVLA) (tricine)2为例， 实验表明，锝-99m标记的聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺配合物的基本的性能如下1. "mTc (PVLA) (tricine) 2在正常小鼠体内生物分布取25只正常昆明小白鼠，于尾静脉注射0. lmL "mTc (PVLA) (tricine) 2 (约 0. 185MBq，含1 ii g PVLA)。于注射后5、10、30、60和120min后断头处死。取出心、肝、肺、 肾、肌肉、骨、血等组织，称量并在Y计数器中测其放射性计数。"mTc (PVLA) (tricine) 2在正常小鼠中的生物分布见表1。在正常小鼠中的生物分布结果显示，99mTc(PVLA) (tricine)2在肝脏中有很高的初 始摄取，注射5min后，在肝脏中有(125. 33士 10.99) % ID/g的摄取值。在心、肺、肾、脾等 非靶器官的放射性浓集较低。特别是血液、肾脏中的放射性浓集明显低于目前临床使用 的99mTc-GSA，这对于肝脏部位的定量评价具有重要的意义。基于以上生物分布实验结果， "mTc(PVLA) (tricine)2表现了优良的生物性能，有利于在未来的显像中够获得更清晰的图 像和更准确的数据。表1. "mTc (PVLA) (triCine)2在正常小鼠体内生物分布数据(％ ID/g士sd，n = 5)
脾 2. "mTc (PVLA) (tricine) 2 在小鼠体内抑制实验取同批次5只正常昆明小白鼠，于尾静脉预注射0. lmL抑制剂(NGA溶于生理盐 水，按10mg/kg体重的剂量注射)，5min后，于尾静脉注射0. lmL99mTc (PVLA) (tricine) 2(约 0. 185MBq，含1 ii g PVLA)。注射后5min后断头处死。取出心、肝、肺、肾、肌肉、骨、血等组 织，称量并在锝分析仪内测其放射性计数。"mTc (PVLA) (tricine) 2在正常小鼠体内抑制实验结果见表2。抑制实验的结果表明，在通过预注射NGA，在5min时能够明显的抑制99mTc (PVLA) (tricine)2在小鼠肝脏中的摄取(P < 0.001)，大量未进入肝脏的"mTc (PVLA) (tricine)2 滞留在血液中，在心、肺、肾等各脏器摄取也明显增加。抑制实验的结果说明通过预注射NGA，可有效抑制99mTc(PVLA) (tricine) 2在肝中 的摄取。证明"mTc (PVLA) (tricine) 2对ASGP受体具有亲和性。表2. "mTc (PVLA) (tricine) 2在正常小鼠体内抑制实验数据(注药后 5min，% ID/g士 sd，n = 5) 上述各项实验说明，本发明所述的锝_99m标记的聚N_乙烯基苄基_D_乳糖酰胺 配合物(99mTc-PVLA)，放射化学纯度大于99%，有很高的化学稳定性。具有优良的生物性能， 在肝脏中有较高的初始摄取；与"mTc-GSA相比有较低的非靶脏器摄取，满足用作肝细胞受 体显像剂的条件，能减少不必要的放射性损伤，并且可减少对肝脏功能定量评价时的干扰， 可作为新型的肝细胞去唾液酸糖蛋白受体显像剂，99mTc_PVLA作为新型配合物具有高化学 稳定性和良好的生物分布性质，可作为肝细胞受体SPECT显像剂在临床上推广应用。
具体实施例方式下面通过实施例详述本发明，一种锝_99m标记的聚N_乙烯基苄基_D_乳糖酰胺 配合物1.对乙烯基苯甲氨的合成4-氯甲基苯乙烯15. 3g(0. lOmol)和邻苯二甲酰亚胺钾18. 5g(0. lOmol)溶于50mL DMF中，加热至50°C反应4h。旋蒸除去DMF，将残余物溶于氯仿，先后用0. 2N的氢氧化钠溶 液和水清洗，旋干有机相后，得到产物N-(4-乙烯基苄基)_邻苯二甲酰亚胺。于甲醇中重 结晶。mp 107-108°C。18. 4g(0. 07mol)N-(4-乙烯基苄基)_邻苯二甲酰亚胺溶于50mL乙醇中，加热回 流，滴加入溶于10mL乙醇的80%的水合胼6. 6g(0. 105mol)。立即出现白色沉淀，机械搅拌 回流90min。过滤沉淀，母液旋干溶剂，将固体合并后，溶于K0H溶液(20gK0H，120mLH20)。 用乙醚萃取(140mLXl，70mLX4)合并乙醚相用2%的碳酸钾溶液洗(40mLX 4)，用碳酸钾 干燥后，除去溶剂，加压蒸馏(72-73°C /3mmHg)。2. N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺(VLA)的制备称取1. 27g乳糖酸，加入25mL甲醇，分散溶解后旋蒸除去溶剂。再加入25mL甲醇， 分散溶解后旋蒸除去溶剂。重复20次。得到乳糖酸内酯。将乳糖内酯1. 7g(5mmol)溶于17mL甲醇中回流，将对乙烯基苯甲氨0. 7g(5mmol)溶于3. 75mL甲醇中加入反应瓶。回流反应120min，冷却至室温，产生白色晶体。过滤后，固 体用少量的冷的甲醇洗，真空干燥。3. N-乙烯基苄基-6-胼基吡啶-3-甲酰胺(VNI)的制备将6-胼基吡啶-3-甲酸(HYNIC) lg(6. 5mmol)溶于40mLDMF中，加入等物质量的醛 类进行胼基保护，室温搅拌3h。加入琥珀酰亚胺748mg(6. 5mmol)和DCC2. 76g(13. 4mmol)， 室温反应18h。过滤，滤液旋干，加入50mL乙酸乙酯，加热回流lh，热过滤，得到黄色粉末。所加入的醛类可通过成腙反应对胼基进行保护，可选用苯甲醛、4-二甲氨基苯甲 醛、苯甲醛-2-磺酸钠或4-羧基苯甲醛等。保护基团在标记过程中通过加热水解离去，使 胼基裸露从而进行配位。将N-琥珀酰亚胺-6-胼基吡啶-3-甲酸和乙烯基苯甲氨按1.2 1投料，在DMF 中室温反应24h。旋蒸除去溶剂，分别用乙酸乙酯和甲醇洗涤后得到浅黄色粉末。4.聚(N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺)-(N-乙烯基苄基_6_胼基吡啶_3_甲酰胺) (p (VLA-co-VNI))的制备VLA及VNI按95 5的比例溶于DMS0中，加入偶氮二异丁腈(AIBN)(按单体物 质的量的0.5%)。低温下抽真空并密封。60°C反应16h。倒入冷的甲醇中，出现浅黄色沉 淀。将沉淀溶于水后，于5000MWcut的透析带中透析48h，冷冻干燥。实施例1 以Tricine 作为共配体，"mTc (PVLA) (tricine) 2 的制备取p(VLA-co_VNI)0. 2mg 溶于 0. 5mL 磷酸缓冲液(0. 05mol/L pH6. 0，含有 30mg 共配体tricine)中，待全部溶解后加入2mg/mL SnCl2 2H20溶液10 u L，充分摇勻。最后 加入新鲜99mTc04_洗脱液0. 5mL(37MBq)，充分振荡，密封后于沸水浴中反应20min。即得到 "mTc(PVLA) (tricine)2。将HiTrap脱盐凝胶柱(S印hadex G25)用25mL淋洗液(0. 05mol/L pH 7. 5的磷酸 缓冲液)平衡，控制流速在1 lOmL/min之间。将0. 25mL标记好的"mTc (PVLA) (tricine) 2 用lmL注射器上样，先用1.25mL淋洗液淋洗后，收集lmL淋洗液，得到除去杂质、回收率> 95% 的"mTc (PVLA) (tricine) 2 溶液。通过层析及RP-HPLC鉴定，其保留时间为11. 9min，放射化学纯度大于99%。HPLC 条件为高效液相色谱仪 SHIMADZU(SCL-lOAvp) ；Kromaisl C4 柱 250X4. 6mm, 5 u m 300A ；A相为水(含0.1%TFA)，B相为乙腈(含0.1%TFA)；淋洗梯度为0 5min B相， 5 30min 30% 70% B 相；流速 lmL/min。实施例2:以Bicine 作为共配体，"mTc (PVLA) (bicine)的制备取p (VLA-co-VNI) lmg 溶于 0. 5mL 磷酸缓冲液(0. 05mol/L pH6. 0，含有 20mg 共配 体bicine)中，待全部溶解后加入2mg/mL SnCl2 *2H20溶液5 y L，充分摇勻。最后加入新鲜 99mTc04-洗脱液0. 5mL(37MBq)，充分振荡，密封后于沸水浴中反应20min。即得到"mTc (PVLA) (bicine)。将HiTrap脱盐凝胶柱(S印hadex G25)用25mL淋洗液(0. 05mol/L pH 7. 5的磷酸 缓冲液)平衡，控制流速在1 10mL/min之间。将0. 25mL标记好的"mTc (PVLA) (bicine) 用lmL注射器上样，先用1.25mL淋洗液淋洗后，收集lmL淋洗液，得到除去杂质、回收率>95% 的"mTc(PVLA) (bicine)溶液。实施例3 以HEDTA 作为共配体，"mTc (PVLA) (HEDTA)的制备取p (VLA-co-VNI) 3mg 溶于 0. 5mL 磷酸缓冲液(0. 05mol/L pH6. 0，含有 50mg 共配 体HEDTA)中，待全部溶解后加入2mg/mL SnCl2 *2H20溶液20 y L，充分摇勻。最后加入新鲜 99mTc04-洗脱液0. 5mL(37MBq)，充分振荡，密封后于沸水浴中反应20min。即得到"mTc (PVLA) (HEDTA)。将HiTrap 脱盐凝胶柱(S印hadex G25)用 25mL 淋洗液(0. 05mol/L pH 7. 5 的磷 酸缓冲液)平衡，控制流速在1 lOmL/min之间。将0. 25mL标记好的"mTc (PVLA) (HEDTA) 用lmL注射器上样，先用1.25mL淋洗液淋洗后，收集lmL淋洗液，得到除去杂质、回收率> 95% 的 99mTc(PVLA) (HEDTA)溶液。实施例4 以 Tricine 作为共配体，TPPMS 作为协同配体，"mTc (PVLA) (tricine) (TPPMS)的制 备取p (VLA-co-VNI) 0. lmg 溶于 0. 5mL 磷酸缓冲液(0. 05mol/L pH6. 0，含有 25mg 共 配体tricine, 5mg协同配体TPPMS)中，待全部溶解后加入2mg/mL SnCl2 2H20溶液5 u L, 充分摇勻。最后加入新鲜99mTc04_洗脱液0.5mL(37MBq)，充分振荡，密封后于沸水浴中反应 20min。即得到"mTc (PVLA) (tricine) (TPPMS)。将HiTrap脱盐凝胶柱(S印hadex G25)用25mL淋洗液(0. 05mol/L pH 7. 5的磷酸 缓冲液)平衡，控制流速在1 10mL/min之间。将0. 25mL标记好的"mTc (PVLA) (tricine) (TPPMS)用lmL注射器上样，先用1. 25mL淋洗液淋洗后，收集lmL淋洗液，得到除去杂质、回 收率> 95% 的"mTc (PVLA) (tricine) (TPPMS)溶液。实施例5 以 Tricine 作为共配体，TPPTS 作为协同配体，99mTc (PVLA) (tricine) (TPPTS)的制 备取p (VLA-co-VNI) 0. 5mg 溶于 0. 5mL 磷酸缓冲液(0. 05mol/L pH6. 0，含有 30mg 共 配体tricine, 3mg协同配体TPPTS)中，待全部溶解后加入2mg/mL SnCl2 2H20溶液5 u L, 充分摇勻。最后加入新鲜99mTc04_洗脱液0.5mL(37MBq)，充分振荡，密封后于沸水浴中反应 20min。即得到"mTc (PVLA) (tricine) (TPPTS)。将HiTrap脱盐凝胶柱(S印hadex G25)用25mL淋洗液(0. 05mol/L pH 7. 5的磷酸 缓冲液)平衡，控制流速在1 10mL/min之间。将0. 25mL标记好的"mTc (PVLA) (tricine) (TPPTS)用lmL注射器上样，先用1. 25mL淋洗液淋洗后，收集lmL淋洗液，得到除去杂质、回 收率> 95% 的"mTc (PVLA) (tricine) (TPPTS)溶液。
权利要求
一种锝-99m标记的聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺配合物，其表达式为99mTc-PVLA，配体结构通式为以99mTc为中心核，配体为含有6-肼基吡啶-3-甲酰胺基团和半乳糖基团的聚合物——聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺-N-乙烯基苄基-6-肼基吡啶-3-甲酰胺；式中m与n的比例为1∶99～30∶70，肼基选用R＝C6H5的苯甲醛、R＝4-NMe2-C6H4的4-二甲氨基苯甲醛、R＝2-NaO3S-C6H4的苯甲醛-2-磺酸钠或R＝4-HO2C-C6H4的4-羧基苯甲醛，通过成腙反应进行保护；共配体选自N-三羟甲基甲基甘氨酸、N，N-2-羟乙基甘氨酸或N-2-羟乙基-亚乙基二氨三乙酸中的一种；当使用N-三羟甲基甲基甘氨酸作为共配体时，可选用三3-磺酰苯基膦钠盐或三苯基膦单磺酸单钠盐中的一种作为协同配体。FSA00000128676300011.tif
2.如权利要求1所述的99mTc标记的聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺)配合物，其特征 在于所述的聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺-N-乙烯基苄基-6-胼基吡啶-3-甲酰胺配体 中，m η的范围为4 96 15 85。
3.制备如权利要求1所述的99mTc标记的聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺配合物的制备 方法，包括以下步骤a.将聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺-N-乙烯基苄基-6-胼基吡啶-3-甲酰胺配体溶 于缓冲液中；按照配体比共配体为1 5 1000的重量比，加入共配体N-三羟甲基甲基甘 氨酸、N, N-(2-羟乙基)甘氨酸或N-2-羟乙基-亚乙基二氨三乙酸中的一种；b.按照协同配体比共配体为1 2 10的重量比，加入协同配体三3-磺酰苯基膦钠 盐或三苯基膦单磺酸单钠盐中的一种；c.然后按还原剂比配体为1 1 800的重量比称取还原剂并溶于盐酸溶液中；加入 到步骤b所得溶液中，混合均勻，控制其pH在5. 5 6. 5之间；d.将从医用99Mo-99mTc发生器中淋洗获得的高锝酸根99mTc04_淋洗液加入步骤c制备的 溶液中，密封后在沸水浴条件下反应10 100分钟；e.将步骤d所得标记化合物通过凝胶色谱柱进行纯化。
4.如权利要求3所述99mTc标记的聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺配合物的制备方法， 其特征在于步骤c所述还原剂为SnCl2 · 2H20。
5.如权利要求3所述99mTc标记的聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺配合物的制备方法， 其特征在于步骤d所述反应物反应时间为20分钟。
6.如权利要求3所述99mTc标记的聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺配合物的制备方法， 其特征在于所述还原剂配体共配体的重量比为1 20 2500。
7.如权利要求3所述99mTc标记的聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺配合物的制备方法，其 特征在于步骤a所述聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺-N-乙烯基苄基-6-胼基吡啶-3-甲 酰胺配体的用量为0. Img 4mg ；所述任一共配体的用量为20mg lOOmg。
全文摘要
本发明公开了一种锝-99m标记的聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺配合物，以99mTc为中心核，配体为含有6-肼基吡啶-3-甲酰胺基团和半乳糖基团的聚合物--聚N-乙烯基苄基-D-乳糖酰胺-N-乙烯基苄基-6-肼基吡啶-3-甲酰胺；共配体选自N-三羟甲基甲基甘氨酸、N，N-2-羟乙基甘氨酸或N-2-羟乙基-亚乙基二氨三乙酸中的一种；并可选用三3-磺酰苯基膦钠盐或三苯基膦单磺酸单钠盐中的一种作为协同配体，经混合、还原、反应及纯化等步骤制备而成。配合物化学稳定性及生物性能好、比活度高、肝脏摄取值及靶与非靶比值高、制备简单及使用成本低，可用于制备成为新型的肝受体显像剂，应用在放射性药物化学和临床核医学技术领域中。
文档编号A61K103/10GK101851313SQ20101017480
公开日2010年10月6日 申请日期2010年5月17日 优先权日2010年5月17日
发明者唐志刚, 张俊波, 张现忠, 杨文江, 王学斌, 陆洁 申请人:北京师范大学;北京师宏药物研制中心