专利名称：一种稳定的人源化单克隆抗体制剂的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了一种生物制剂。
背景技术：
哮喘是一种常见病，仅在美国用于各种类型哮喘治疗上的直接和间接的费用总额为140亿美元。另外，根据美国疾病控制中心(CDC)和卫生统计国家预防中心(PNCHS)的资料，哮喘每年至少引发了 2百万起的急诊和超过5千人的死亡。IgE是导致哮喘过敏症状的主要原因，抗IgE人源化单抗是第一个用于治疗哮喘的人源化的治疗性抗体(Xolair)，也是第一个被认可的针对IgE抗体设计的治疗方法，它可以应用于中到重度持续性哮喘的成人和青少年患者，作皮下使用，适用于患中到重度持续性哮喘的成人和青少年(12岁或者12岁以上)患者，他们对四季气源性过敏源皮试反应或者体外反应为阳性，或使用吸入性皮质激素制剂不能缓解症状。研究证实Xolair可以降低上述病人哮喘加重的发生率。抗IgE人源化单抗目前的制剂是以抗IgE人源化单抗为主药，以蔗糖、L-组氨酸、 L-组氨酸盐酸盐和吐温-20为辅料制成的冻干制剂，此制剂稳定性不高而且在溶解后液体的粘滞度较高，注射使用不方便，在使用过程中有不少患者表示有很强的疼痛感。无论是贮存还是临床使用相对不便。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的申请人进行了大量的实验，对可以使用于抗IgE人源化单抗的辅料的类型和用量进行了大量的筛选，得到了相对稳定的方便于临床使用的抗 IgE人源化单抗制剂，从而达到了本发明的目的。具体地，本发明公开了一种稳定的抗IgE人源化单抗制剂，由抗IgE人源化单抗、保护剂、 缓冲剂、表面活性剂和等渗调节剂组成。本发明公开的制剂，为冻干制剂。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中保护剂是非还原性糖、谷氨酸
单钠、组氨酸、三元醇之一或其组合。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中非还原性糖为蔗糖或海藻糖。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中缓冲剂为组氨酸缓冲液、琥珀酸缓冲液、柠檬酸缓冲液之一。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中缓冲剂为组氨酸缓冲液。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中表面活性剂为吐温-20或吐温-80。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，等渗调节剂为氯化钠。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中抗IgE人源化单抗、保护剂、缓冲剂、表面活性剂和等渗调节剂的含量分别为抗IgE人源化单抗20 80mg/ml，保护剂4 16mg/ml，缓冲剂0. 909 4. 6848mg/ml，表面活性剂0. 05 0. 198mg/ml，等渗调节剂0. 5 2. 56mg/ml。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中抗IgE人源化单抗、溶解保护剂、缓冲液、表面活性剂和等渗调节剂的含量分别为抗IgE人源化单抗40mg/ml，保护剂 8mg/ml，缓冲剂0. 909mg/ml，表面活性剂0. 099mg/ml，等渗调节剂1. 28mg/mL·本发明公开的上述制剂，优选冻干制剂，这些冻干制剂按照《中华人民共和国药典;)〉2005年版，二部附录XIX C原料药与药物制剂稳定性试验指导原则进行了稳定性实验， 实验结果表明，本发明公开的制剂在4°C保存3年，制剂的体外生物活性在95%以上，本发明公开的制剂在30°C保存1年，制剂的体外生物活性在95%以上。本发明公开的制剂(冻干)进行了 BWFI重建，重建后各组分的含量为重建前的2. 5倍，重建制剂在2 8°C保存三个月，制剂的体外生物活性保持在95%以上。本发明公开的制剂(冻干)溶解后粘滞度较低，注射使用方便，而且在注射过程中患者普遍反映没有疼痛感。
具体实施例方式以下结合实施例、实验例进一步说明本发明，下述实施例、实验例不应理解为对本发明的限制。抗IgE 人源化单抗按照 Presta LG, Lahr SJ, Shields RL, Porter JP, Gorman CM,Fendly BM,Jardieu PM. J Immunol. 1993S印 1 ；151 (5) :2623-32. Humanization of an antibody directed against IgE公开的方法制备，本发明所述的抗IgE人源化单抗不仅仅限于此，本领域的技术人员利用通用的基因工程技术得到的抗IgE人源化单抗也在本发明所述的抗IgE人源化单抗之列。除非特别说明，其它原辅料均为市售药用辅料级别。体外活性检测方法参见Presta LG, Lahr SJ,Shields RL, Porter JP, Gorman CM, Fendly BM, Jardieu PM. J Immunol. 1993Sep 1 ； 151 (5) :2623-32. Humanization of an antibody directed against IgE0实施例抗IgE人源化单抗制剂的制备实施例1配方组分含量抗IgE人源化单抗40mg/ml蔗糖8mg/mlL-组氨酸0. 356mg/mlL-组氨酸盐酸盐一水合物 0. 553mg/ml吐温-200. 099mg/ml氯化钠U8mg/ml制备过程重组抗IgE人源化单克隆抗体纯化最后一步采用分子排阻层析，流动相为L-组氨酸0. 356mg/ml
L-组氨酸盐酸盐一水合物 0. 553mg/ml氯化钠1. 28mg/ml经过该步骤纯化获得重组抗IgE人源化单克隆抗体的原液。原液中重组抗IgE人源化单克隆抗体的浓度应大于40mg/ml。制剂的配制根据原液的体积计算所需的蔗糖及吐温20的用量(终浓度分别为8mg/ml及 0. 099mg/ml)，并加入原液中。调整溶液中所有组分的浓度，使各组分含量如下组分含量抗IgE人源化单抗40mg/ml蔗糖8mg/mlL-组氨酸0. 356mg/mlL-组氨酸盐酸盐一水合物 0. 553mg/ml吐温-200. 099mg/ml氯化钠1. 28mg/ml获得半成品，将半成品无菌分装入西林瓶中，冷冻千燥并加盖橡胶塞及铝塑盖，获得成品。实施例2
配方
组分含量
抗IgE人源化单抗40mg/ml
蔗糖28.736mg/ml
L-组氨酸0.356mg/ml
L-组氨酸盐酸盐一水合物 0. 553mg/ml
吐温-200.099mg/ml
氯化钠0. 5mg/ml
制备方法同实施例1。
实施例3
配方
组分含量
抗IgE人源化单抗20mg/ml
蔗糖4mg/ml
琥珀酸0. 283mg/ml
琥珀酸二钠六水合物1. 08mg/ml
吐温-200. 05mg/ml
氯化钠0. 64mg/ml
制备方法同实施例1。
实施例4
组分含量0071]抗IgE人源化单抗80mg/ml0072]蔗糖16mg/ml0073]柠檬酸一水合物0.0768mg/ml0074]柠檬酸钠4. 608mg/ml0075]吐温-800.198mg/ml0076]氯化钠2. 56mg/ml0077]制备方法同实施例1。0078]实施例50079]组分含量0080]抗IgE人源化单抗40mg/ml0081]蔗糖6. 4mg/ml0082]L-组氨酸0. 356mg/ml0083]L-组氨酸盐酸盐一水合物 0. 553mg/ml0084]吐温-800. 198mg/ml0085]氯化钠2. 56mg/ml0086]制备方法同实施例1。0087]实施例60088]组分含量0089]抗IgE人源化单抗60mg/ml0090]蔗糖9.6mg/ml0091]L-组氨酸0.534mg/ml0092]L-组氨酸盐酸盐一水合物 0. 830mg/ml0093]吐温-200.1485mg/ml0094]氯化钠1. 92mg/ml0095]制备方法同实施例1。0096]实施例70097]组分含量0098]抗IgE人源化单抗40mg/ml0099]蔗糖16mg/ml0100]L-组氨酸0.356mg/ml0101]L-组氨酸盐酸盐一水合物 0. 553mg/ml0102]吐温-200.099mg/ml0103]氯化钠1. 28mg/ml0104]制备方法同实施例1。0105]实验例0106]实施例1-7所得到的样品为No. 1-7进行稳定性实验，实验结果见表10107]表1 体外生物活性结果0108]
权利要求
1.一种稳定的人源化单克隆抗体制剂，由抗IgE人源化单抗、保护剂、缓冲剂、表面活性剂和等渗调节剂组成。
2.权利要求1所述的制剂，为冻干制剂。
3.权利要求1所述的制剂，其中保护剂是非还原性糖、谷氨酸单钠、组氨酸、三元醇之一或其组合。
4.权利要求3所述的制剂，其中非还原性糖为蔗糖或海藻糖之一。
5.权利要求1所述的制剂，其中缓冲剂为组氨酸缓冲液、琥珀酸缓冲液、柠檬酸缓冲液之一。
6.权利要求5所述的制剂，其中缓冲剂为组氨酸缓冲液。
7.权利要求1所述的制剂，其中表面活性剂为吐温-20或吐温-80。
8.权利要求1所述的制剂，其中等渗调节剂为氯化钠。
9.权利要求1所述的制剂，其中各组分的含量分别为抗IgE人源化单抗20 80mg/ml， 保护剂4 16mg/ml，缓冲剂0. 909 4. 6848mg/ml，表面活性剂0. 05 0. 198mg/ml，等渗调节剂 0. 5 2. 56mg/ml。
10.权利要求9所述的制剂，其中各组分的含量分别为抗IgE人源化单抗40mg/ml，保护剂8mg/ml，缓冲剂0. 909mg/ml，表面活性剂0. 099mg/ml，等渗调节剂1. 28mg/mL·
全文摘要
本发明公开了一种稳定的人源化单克隆抗体制剂，由抗IgE人源化单抗、保护剂、缓冲剂、表面活性剂和等渗调节剂组成。本发明公开的组合物具有稳定、便于使用的优点。
文档编号A61K47/26GK102327612SQ20101022535
公开日2012年1月25日 申请日期2010年7月13日 优先权日2010年7月13日
发明者侯盛, 寇庚, 李晶, 王皓 申请人:上海张江生物技术有限公司