专利名称：2-氯吡啶衍生物及其制法与在制备抗肝癌药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及2-氯吡啶衍生物及其制备方法与在制备抗肝癌药物中的应用。
技术背景。肝癌(h印atocellular carcinoma，HCC)是指肝细胞或肝内胆管细胞发生的癌，是 恶性程度及转移率很高的肿瘤之一，并且是是当今世界上最具威胁的疾病之一。目前有几 种治疗肝癌的药物，但它们都有严重的副作用，因此限制了其临床应用。由于缺乏治疗肝癌 的有效药物，发现有效的具有抗肝癌细胞增殖活性的新化合物是一个很迫切的任务。2-氯-5-氯甲基吡啶(2-chloro-5-chloromethylpyridine，简称 CCMP)，纯品为浅 黄色晶体，熔点33-35°C，沸点75-85°C /133. 322Pa，通过它的烷基化反应、与杂环的缩合反 应以及氨化后的进一步反应，可以制备一系列新的具有好的生物活性的先导化合物，是合 成农药和医药的重要中间体。1，3，4_噁二唑杂环化合物具有抗炎、抗菌、抗惊厥、抗肿瘤等生物活性。据文献报 道，在具有杂环化合物的分子中引入硫原子供电原子可以显著增加受体与配体形成复合物 的亲和力，有利于提高生物活性。噁二唑硫醇环外有-SH，它可以作为活泼的亲核试剂和各种亲电试剂发生反应生 成硫醚，硫醚可进一步转化为非常有用的另一种噁二唑硫酮衍生物，由于其硫酮结构的存 在，3-位活泼的NH还可以和醛、仲胺或伯胺的盐酸盐缩合，生成更具广谱生物活性的杂环 Mannich碱。因此，含各种取代基的噁二唑硫醚的合成，迄今仍方兴未艾。本发明将2-氯吡啶分子中引入1，3，4_噁二唑杂环，制备的2-氯吡啶衍生物，对 人肝癌细胞(Hep-G2)生长有明显的抑制作用，因此2-氯吡啶衍生物作为很有潜力的抗肝 癌药物的前景十分值得关注。随着对2-氯吡啶类药物研究的不断深入，在对其抗肿瘤作用 机制不断了解的基础上进行有效的结构改造与修饰和分子设计，将会有越来越多的高效、 低毒的2-氯吡啶类抗肝癌药物用于临床，造福人类。
发明内容
本发明的目的在于提供一类2-氯吡啶衍生物以及它们的制备方法与用途。本发明的技术方案如下一类2-氯吡啶衍生物，其特征是它有如下通式 式中R为
3 一种制备上述的2_氯吡啶衍生物的方法，其特征是它由下列步骤组成步骤1.将按通法制备的2謹ol 5-取代-2-巯基-1，3，4-噁二唑，2謹olNaOH，适 量乙腈加入到IOOml圆底烧瓶中，加热搅拌溶解；步骤2.用恒压滴液漏斗滴加5ml 2_氯_5_氯甲基吡啶的乙腈溶液(含2mmol，即 0. 324g 2-氯-5-氯甲基吡啶)，回流8-24h，薄层色谱(TLC)跟踪反应；步骤3.冷却至室温，减压蒸除溶剂，用EtOAC溶解，水洗，饱和食盐水洗；步骤4.有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，减压蒸除EtOAC，得粗产物；步骤5.将步骤4得到的粗产物重结晶得到本发明的2-氯吡啶衍生物。本发明的2-氯吡啶衍生物对人肝癌细胞0fep_G2)生长有明显的抑制作用，因此 本发明的2-氯吡啶衍生物可以应用于制备抗肝癌药物。
具体实施例方式通过以下实施例进一步详细说明本发明，但应注意本发明的范围并不受这些实施 例的任何限制。实施例一 2_氯-5-[5-(2-甲基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化 合物1)的制备 邻甲基苯甲酸在浓硫酸催化作用下进行酯化反应，得到邻甲基苯甲酸乙酯。得到的芳香酸酯溶于适量无水乙醇，加入稍过量的85%的水合胼，搅拌下回流8_12h。减压蒸除 溶剂，然后加水，待固体析出后，过滤并用水洗，乙醇重结晶，得到取代的酰胼。将0.02mol 酰胼，0. 02mol KOH溶于适量95%乙醇后，再慢慢滴加稍过量的CS2搅拌回流至无H2S气体 产生为止，反应终止后蒸除多余乙醇，倒入冷水中，用稀盐酸调PH值至5-6，产生大量沉淀， 抽滤，水洗，晾干，用50%乙醇重结晶得到2-取代-5-巯基-1，3，4-噁二唑(本实施例得 到2- (2-甲苯基)-5-巯基-1，3，4-噁二唑)。将2mmol 2-取代-5-巯基-1，3，4-噁二唑， 2mmOlNa0H，适量乙腈加入到IOOml圆底烧瓶中，加热溶解，滴加5ml 2-氯-5-氯甲基吡啶 的乙腈溶液(含2mmol，即0. 324g 2-氯-5-氯甲基吡啶)，回流8_24h，TLC跟踪反应。冷却 至室温，减压蒸除溶剂，用EtOAC，先用水洗涤，然后用饱和食盐水洗。有机相用无水Na2SO4 干燥，过滤，减压蒸除EtOAC，重结晶得目标化合物。白色固体，产率65.8%，m. p. 80-810C51H NMR (300MHz, DMS0_d6) δ :2· 55(s，3H)，4· 59(s，2H)，7· 38-7. 43(m，2H)，7· 46-7. 52 (m, 2Η)， 7. 81 (d, J = 7. 9Hz, 1Η)，7. 98 (d, J = 8. 2Hz, 1Η)，8· 51 (s，1Η) · MS (ESI) :318· 8 (C15H13ClN3OS, [M+H]+)· Anal. Calcd for C15H12ClN3OS :C, 56. 69 ；H, 3. 81 ；N, 13. 22 % ；Found :C,56. 66 ；H, 3. 78 ；N, 13. 26% · 实施例二 2-氯-5-[5-(4-甲基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化 合物2)的制备 制备方法同实施例一。以对甲基苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。淡黄 色晶体，产率 65. 1%，m. p. 148-149 °C ；1H NMR (500MHz, DMS0-d6) δ :2· 40 (s，3Η)，4· 60 (s， 2H)，7. 41(d，J = 8. 0Hz，2H)，7. 53(d，J = 9. OHz, 1H), 7. 84 (d, J = 8. 0Hz，2H)，8. 00 (d， J = 8. 5Hz,lH),8. 52(s,lH). MS(ESI) :318. 8 (C15H13ClN3OS, [M+H]+). Anal. Calcd for C15H12ClN3OS :C, 56. 69 ；H, 3. 81 ；N, 13. 22% ；Found :C，56. 76 ；H, 3. 75 ；N, 13. 28% ·实施例三2-氯-5-[5_(2-甲氧基苯基)_1，3，4_噁二唑_2_硫代甲基]吡啶(化 合物3)的制备 制备方法同实施例一。以邻甲氧基苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。淡黄色晶体，产率 52.7%，m. ρ· 73-74°C ；屯 NMR(300MHz, DMS0-d6) δ :3· 88 (s，3Η)，4· 57 (s， 2Η)，7· 11 (t，J = 7. 3Hz, 1H), 7. 26 (d, J = 8. 4Hz，1H)，7. 52 (d，J = 8. 2Hz，1H)，7. 60 (t， J = 7. 3Hz, 1H) ,7. 77 (d, J = 7. 8Hz，1H)，7. 98 (d，J = 8. 3Hz，1H)，8. 51 (s，1H) · MS (ESI) 334. 8 (C15H13ClN3O2S, [M+H] +) · Anal. Calcd for C15H12ClN3O2S :C，53. 97 ；H, 3. 62 ；N, 12. 59% ； Found :C, 53. 91 ；H, 3. 55 ；N, 12. 65% · 实施例四2-氯-5-[5_(4-甲氧基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化 合物4)的制备制备方法同实施例一。以对甲氧基苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。淡 黄色粉末，产率 53.9%，m.p. 120-121°C ；力匪R(500MHz，DMS0_d6) δ :3· 85 (s，3Η)，4· 58 (s， 2Η)，7. 13 (d, J = 8. 8Hz,2H)，7. 51 (d, J = 8. 2Hz, 1H)，7. 88 (d, J = 8. 8Hz,2H)，7. 98 (d, J = 8. 2Hz, 1H) ,8. 50 (s, 1H). MS(ESI) 334. 8 (C15H13ClN3O2S, [M+H]+). Anal. Calcd for C15H12ClN3O2S :C, 53. 97 ；H, 3. 62 ；N, 12. 59% ；Found :C，53. 88 ；H, 3. 53 ；N, 12. 67%实施例五2-氯-5-[5-(4-羟基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化 合物5)的制备制备方法同实施例一。以4-羟基苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。黄 色晶体，产率 67. 5 %，m. ρ· 198-200 "C ；1H NMR(500MHz, DMS0_d6) :4· 58(s，2H)，6· 93 (d, J = 9. 0Hz，2H)，7. 53 (d, J = 8. OHz, 1Η)，7. 78 (d, J = 8. 5Ηζ,2Η)，7. 98 (d, J = 8. 5Hz, 1Η), 8. 50 (s, 1Η), 10. 35 (s, 1Η). MS (ESI) :320. 8 (C14H11ClN3O2S, [Μ+Η]+)· Anal. Calcd for C14H10ClN3O2S :C, 52. 59 ；H, 3. 15 ；N, 13. 14% ；Found :C，52. 66 ；H, 3. 18 ；N, 13. 17% ·实施例六2_氯-5-[5-(2_氟苯基)-1，3，4_噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化合 物6)的制备 制备方法同实施例一。以2-氟苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。白色晶 体，产率 62. 8%，m. p. 109-1IO0C ；1H NMR(300MHz, DMS0_d6) δ :4· 60 (s，2Η)，7· 40-7. 53 (m， 3H)，7. 65-7. 73 (m, 1H)，7. 95-8. 01 (m, 2H)，8. 52 (s, 1H) · MS (ESI) 322. 8 (C14H10ClFN3OS, [M+H]+)· Anal. Calcd for C14H9ClFN3OS :C, 52. 26 ；H, 2. 82 ；N, 13. 06 % ；Found :C,52. 21 ；H, 2. 73 ；N, 13. 12%实施例七2_氯-5-[5-(4_氟苯基)-1，3，4_噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化合 物7)的制备制备方法同实施例一。以4-氟苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。淡黄 色晶体，产率 56.2%，m. p. 132-133 °C ；1H NMR (500MHz, DMS0_d6) δ :4· 61 (s，2Η)，7· 45 (t， J = 8· 5Hz，2H)，7· 53(d，J = 8. OHz, 1H) ,7. 99-8. 04(m,3H) ,8. 53 (s, 1H). MS (ESI) 322. 8 (C14H10ClFN3OS, [M+H] +) · Anal. Calcd for C14H9ClFN3OS :C，52. 26 ；H, 2. 82 ；N, 13. 06% ； Found :C, 52. 33 ；H, 2. 77 ；N, 13. 01% .实施例八2-氯-5-[5_(2-氯苯基)-l，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化合 物8)的制备 制备方法同实施例一。以2-氯苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。白色晶 体，产率 58. 4%，m. ρ· θ-δΟτνΗ NMR(300MHz，DMS0_d6) δ :4. 61 (s，2Η)，7. 51-7. 58 (m，2Η)， 7. 61-7. 72(m，2H)，7· 94 (d, J = 7. 7Hz, 1H)，7· 99 (d, J = 8. 2Hz, 1Η)，8· 52 (s, 1Η). MS (ESI) 339. 2 (C14H10Cl2N3OS, [Μ+Η] +) · Anal. Calcd for C14H9Cl2N3OS :C，49. 72 ；H, 2. 68 ；N, 12. 42% ； Found :C,49. 62 ；H, 2. 60 ；N, 12. 45% 实施例九2_氯-5-[5-(4_氯苯基)-1，3，4_噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化合 物9)的制备 制备方法同实施例一。以4-氯苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。白 色固体，产率 61.3%，m. p. 147-148 °C ；1H NMR(300MHz, DMS0_d6) δ :4· 61 (s，2Η)，7· 52 (d， J = 8· 2Hz，2H)，7· 67(d，J = 8. 4Hz,2H) ,7. 95-8. 00(m,3H) ,8. 52 (s, 1H). MS (ESI) 339. 2 (C14H10Cl2N3OS, [M+H] +) · Anal. Calcd for C14H9Cl2N3OS :C，49. 72 ；H, 2. 68 ；N, 12. 42% ； Found :C,49. 83 ；H, 2. 61 ；N, 12. 38% ·实施例十2-氯-5-[5-(4-异丙基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化 合物10)的制备制备方法同实施例一。以4-异丙基苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合 物。黄色粉末，产率 51. 4 %, m. ρ· 195-197 "C ；1HNMR(500MHz, DMS0_d6) δ :1· 24(d, J = 7· 0Ηζ，6Η)，2· 97-3. 00(m，1Η)，4· 54(s，2H)，4· 60(s，2H)，7· 47(d，J = 8. 5Ηζ,2Η) ,7. 53 (d, J = 8. 5Hz, 1Η) ,7. 87 (d, J = 8. 5Ηζ,2Η) ,8. 00 (d, J = 8· ΟΗζ，1Η)，8· 52 (s，1Η) · MS (ESI) 346. 9 (C17H17ClN3OS, [Μ+Η]+) · Anal. Calcd for C17H16ClN3OS :C, 59. 04 ；H, 4. 66 ；N, 12. 15 % ； Found :C, 59. 07 ；H, 4. 61 ；N, 12. 21% .实施例i^一 2_氯-5-[5-(4-氨基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化 合物11)的制备 制备方法同实施例一。以4-氨基苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。黄 色粉末，产率 58. 9 %，m. ρ· 154-155 "C ；1H NMR(500MHz, DMS0_d6) :4· 54(s，2H)，5· 97 (s, 2H)，6. 66 (d, J = 9. 0Hz，2H)，7. 52 (d, J = 8. 5Hz, 1H)，7. 58 (d, J = 8. 5Hz，2H)，7. 96 (d, J = 8. OHz, 1H), 8. 49 (s, 1H). MS (ESI) :319. 8 (C14H12ClN4OS, [M+H]+). Anal. Calcd for C14H11ClN4OS :C, 52. 75 ；H, 3. 48 ；N, 17. 58% ；Found :C，52. 71 ；H, 3. 50 ；N, 17. 55% ·实施例十二 2-氯-5-[5-(4-二甲氨基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡 啶(化合物12)的制备 制备方法同实施例一。以4-二甲氨基苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。 黄色固体，产率 61. 3%，m. p. 151-153 °C ；1H NMR (500MHz, DMS0_d6) :3· 02 (s，6H)，4· 56 (s， 2Η)，6· 82 (d, J = 9. 0Ηζ，2Η)，7· 53 (d, J = 8. OHz, 1Η)，7. 72 (d, J = 8. 5Ηζ，2Η)，7· 98 (d, J = 8. OHz, 1Η), 8. 50 (s, 1Η). MS (ESI) :347. 8 (C16H16ClN4OS, [Μ+Η]+). Anal. Calcd for C16H15ClN4OS :C,55. 41 ；Η，4· 36 ；N, 16. 15% ；Found :C，55. 48 ；Η，4· 31 ；N, 16. 18% ·实施例十三2_氯-5-[5_(2-乙氧基苯基)_1，3，4_噁二唑_2_硫代甲基]吡啶 (化合物13)的制备 制备方法同实施例一。以2-乙氧基苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。棕色晶体，产率 52. 2%，m. p. 87-88°C ；1H NMR(500MHz, DMS0-d6) δ 1· 33 (t，J = 6. 5Hz，3Η)， 4. 17 (q, J = 7· 0Ηζ，2Η)，4· 58(s，2H)，7· 11 (t，J = 8. OHz, 1Η), 7. 25 (d, J = 8·5Ηζ，1Η)， 7. 54 (d, J = 8. 5Hz, 1Η)，7. 57-7. 60 (m, 1Η)，7. 78 (d, J = 7. 5Hz, 1Η)，7. 98 (d, J = 8. 5Hz, 1Η),8. 50(s,lH).MS (ESI) 348. 8 (C16H15ClN3O2S, [Μ+Η]+) · Anal. Calcd for C16H14ClN3O2S :C， 55. 25 ；Η，4· 06 ；N, 12. 08% ；Found :C，55. 33 ；Η，4· 01 ；N, 12. 11% · 实施例十四2-氯-5-[5-(4-乙氧基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶 (化合物14)的制备 制备方法同实施例一。以4-乙氧基苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合 物。白色粉末，产率 57. 1 %，m.p· 117-119 °C ；力匪 R(500MHz，DMS0_d6) :1· 36 (t，J = 7. 0Hz，3H)，4· 13 (q，J = 6. 5Hz，2H)，4· 59(s，2H)，7· 12 (d，J = 8. 5Hz，2H)，7. 53 (d, J =8. 0Hz, 1H) ,7. 87 (d, J = 9. 0Hz,2H) ,8. 00 (d, J = 8. 5Hz, 1H), 8. 52 (s, 1H). MS (ESI) 348. 8 (C16H15ClN3O2S, [M+H] +) · Anal. Calcd for C16H14ClN3O2S :C，55. 25 ；H, 4. 06 ；N, 12. 08% ； Found :C，55. 29 ；H，4. 05 ；N, 12. 11% ·实施例十五2-氯-5-[5-(3，4-二甲氧基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡 啶(化合物15)的制备 制备方法同实施例一。以3，4_ 二甲氧基苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化 合物。白色固体，产率 58. 1 %，m. p. 123-124 °C /H 匪R(500MHz，DMS0_d6) δ :3. 85(s， 6Η)，4· 59(s，2H)，7· 16 (d, J = 8. 5Hz, 1Η)，7· 40 (s, 1Η)，7· 53 (d, J = 9. 0Ηζ，2Η)，7· 99 (d, J = 8. OHz, 1Η) ,8. 52 (s, 1Η). MS(ESI) :364. 8 (C16H15ClN3O3S, [Μ+Η]+). Anal. Calcd for C16H14ClN3O3S :C,52. 82 ；Η，3· 88 ；N, 11. 55% ；Found :C，52. 76 ；Η，3· 91 ；N, 11. 51% ·实施例十六2_氯-5-[5-(3，5-二甲氧基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡 啶(化合物16)的制备
制备方法同实施例一。以呋喃-2-羧酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。淡黄 色晶体，产率 59.3%，m.p.97-98°C/H 匪R(300MHz，DMS0_d6) δ :4· 58 (s，2Η)，6· 80 (s，1Η)， 制备方法同实施例一。以3，5_ 二甲氧基苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合 物。白色粉末，产率58. 4%,m. ρ· 122-123°0；^ 匪R(500MHz，DMS0-d6) 3. 88(s，6H)，4· 61 (s, 2H), 6. 76 (s，1H), 7. 05(s，2H)，7· 54 (d, J = 8. OHz, 1H) ,8. 00 (d, J = 8. 5Hz, 1H)，8· 53 (s, 1H). MS(ESI) 364. 8 (C16H15ClN3O3S, [M+H]+). Anal. Calcd for C16H14ClN3O3S :C,52. 82 ；H, 3. 88 ；N, 11. 55% ；Found :C，52. 91 ；H, 3. 92 ；N, 11. 48% ·实施例十七2-氯-5-[5- (3，4，5_三甲氧基苯基)_1，3，4_噁二唑_2_硫代甲基] 批啶(化合物17)的制备 制备方法同实施例一。以3，4，5_三甲氧基苯甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标 化合物。黄色晶体，产率 60. 1 %, m. p. 119-120 °C ；1H NMR (500MHz, DMS0_d6) δ 3. 75(s, 3H)，3. 88(s，6H)，4. 60(s，2H)，7. 18(s，2H)，7. 54 (d, J = 8. 5Hz, 1H)，8. 00 (d, J = 8. OHz, 1H),8. 54(s,lH).MS (ESI) :394. 8 (C17H17ClN3O4S, [M+H]+) · Anal. Calcd for C17H16ClN3O4S :C， 51. 84 ；H,4. 09 ；N, 10. 67% ；Found :C，51. 75 ；H,4. 08 ；N, 10. 70% ·实施例十八2-氯-5-[5-(2-呋喃基)_1，3，4_噁二唑_2_硫代甲基]吡啶(化 合物18)的制备
7. 33 (s, 1H) ,7. 53 (d, J = 8. OHz, 1H), 7. 98 (d, J = 8. 5Hz，1H)，8. 06 (s，1H)，8. 51 (s，1H). MS(ESI) 294. 7 (C12H9ClN3O2S, [M+H]+) · Anal. Calcd f OrC12H8ClN3O2S :C,49. 07 ；H, 2. 75 ；N, 14. 31% ；Found :C，49. 16 ；H, 2. 80 ；N, 14. 25% · 实施例十九-.2-氯-5-[5-(2-噻吩基)_1，3，4_噁二唑_2_硫代甲基]吡啶(化 合物19)的制备 制备方法同实施例一。以噻吩-2-羧酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。白色粉 末，产率 58. 3%，m. p. QSifC51H NMR(300MHz，DMS0_d6) δ :4. 58 (s，2Η)，7. 27-7. 30 (m，1Η)， 7. 52 (d, J = 8. 2Hz, 1H)，7. 78-7. 79 (m, 1H)，7. 94-7. 95 (m, 1H)，7. 97-8. 00 (m, 1H)，8. 51 (s， 1H). MS (ESI) 310. 8 (C12H9ClN3OS2, [M+H]+) · Anal. Calcd for C12H9ClN3OS2 :C,46. 52 ；H, 2. 60 ；N, 13. 56% ；Found :C，46. 48 ；Η，2· 53 ；N, 13. 62% ·实施例二十2-氯-5-[5-(1-萘基)-1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化合 物20)的制备制备方法同实施例一。以1-萘甲酸代替邻甲基苯甲酸，得目标化合物。淡黄色 晶体，产率 61.4%，m. p. 110-111°C ；1H NMR(500MHz, DMS0-d6) δ :4. 66 (s，2Η)，7. 55 (d，J = 8. 5Hz, 1H)，7· 66-7. 76(m，3H)，8· 03 (d, J = 8. OHz，1H)，8· 10 (d, J = 7. 5Hz, 1H)，8· 15 (d, J = 7. 5Hz, 1H) ,8. 22 (d, J = 8. 5Hz，1H)，8. 57 (s，1H)，8. 99 (d，J = 9. 0Hz，1H). MS (ESI) 354. 8 (C18H13ClN3OS, [M+H]+) · Anal. Calcd fOrC18H12ClN3OS :C,61. 10 ；H, 3. 42 ；N, 11. 88 % ； Found :C,61. 02 ；H, 3. 37 ；N, 11. 92% ·实施例二i^一 2-氯吡啶衍生物体外抗人肝癌细胞(Hep_G2)活性研究采用MTT [3-(4，5)-双甲基-2-噻唑-(2，5)-苯基溴化四氮唑蓝]法来测定2-氯 吡啶衍生物对人肝癌细胞(Hep-G2)的抑制率，计算IC5tl值(μ M)。1.培养液等的配制RPMI1640培养基一袋加水一升，补加2克碳酸氢钠，10万单位青霉素和IOOmg链 霉素，调节PH值至7. 4，用0. 22 μ m除菌滤膜过滤除菌。90mL培养基加灭活新生牛血清IOmL
即为完全培养液。胰蛋白酶用D-hanks缓冲液配成0. 25%溶液，过滤除菌后4°C保存备用。2.药液配制准确称取被测样品1. Omg,加到灭菌的1. 5mL离心管中，加入DMSO ImL,配成Img/ mL原液，-40°c冷冻保存。临用前融化后用适量D-hanks稀释成相应浓度应用。3.细胞培养及传代细胞均贴壁培养于含IOmL完全培养液细胞培养瓶中，于37°C、5% C02、饱和湿度 下培养。细胞长满瓶底后用灭菌D-hanks液洗两次，加0. 25%胰蛋白酶消化细胞2min，倒 掉胰蛋白酶，待轻摇细胞能完全脱落后，加完全培养液30ml后，用移液管吹散细胞，分装于 3个新的细胞培养瓶中，继续培养。4.抗增殖活性测试取刚刚长成完整单层的细胞一瓶，胰蛋白酶消化后收集细胞，用移液管吹打均勻， 取两滴细胞悬液台盼蓝(Trypan Blue)染色，于显微镜下计数活细胞数目(死细胞数目不 得超过5% )，用完全培养液调整细胞数目至IX IO5个细胞/mL。于96孔细胞培养板中每 孔加入100 μ L细胞悬液，将培养板置于CO2培养箱中培养12h，取出培养板后于每孔中加含 不同浓度梯度的被测样品的溶液，每个浓度设3个平行孔，另设3孔细胞不加被测药作正常 对照孔。加完药后培养板于微孔板振荡器上振荡混勻，置于CO2培养箱中继续培养48h。取 出培养板，每孔加入25 μ L 4mg/mL的MTT液，振荡混勻，继续培养6h。加入每孔100 μ L SDS 裂解液(90mL三蒸水+IOg SDS+5mL异丙醇+2mL浓盐酸)后培养12h。于酶标仪测定各孔 光吸收(0D值)，测定波长570nm，参考波长630nm。根据各孔OD值计算药物对细胞增殖的 抑制率抑制率的计算细胞生长的抑制率按照下列公式计算抑制率=[1-(测试样品OD值-空白OD值)/(阴性对照OD值-空白OD值)]X 100半数抑制浓度(IC5tl)定义为当50%的肿瘤细胞存活时的药物浓度。根据测定的 光密度(0D值)，制作细胞生长抑制率的标准曲线，在标准曲线上求得其对应的药物浓度。测得的IC5tl见表1所示表1本发明所列2-氯吡啶衍生物的对人肝癌细胞0fep_G2)的抑制IC5tl值(μ M) 5-Fua)，5-Fluorouracil，阳性对照,
权利要求
一类2 氯吡啶衍生物，其特征是它有如下通式式中R为FSA00000216489000011.tif,FSA00000216489000012.tif
2.一种制备权利要求1所述的2-氯吡啶衍生物的方法，其特征是它由下列步骤组成 步骤1.将按通法制备的2mmol 2-取代-5-巯基-1，3，4-噁二唑，2mmolNa0H，溶剂乙腈加入到IOOml圆底烧瓶中，加热搅拌溶解；步骤2.；滴液漏斗滴加5ml含2mmol的2-氯-5-氯甲基吡啶的乙腈溶液，回流8_24h， 薄层色谱跟踪反应；步骤3.冷却至室温，减压蒸除溶剂，用EtOAC溶解，水洗，饱和食盐水洗； 步骤4.有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，减压蒸除EtOAC，得粗产物； 步骤5.将步骤4得到的粗产物重结晶得到2-氯吡啶衍生物。
3.权利要求1所述的2-氯吡啶衍生物在制备抗肝癌药物中的应用。
全文摘要
一类2-氯吡啶衍生物，它有如下通式式中R为本发明的2-氯吡啶衍生物对人肝癌细胞(Hep-G2)生长有明显的抑制作用，因此本发明的2-氯吡啶衍生物可以在制备抗肝癌药物中应用。本发明公开了其制法。
文档编号A61K31/4439GK101914095SQ201010244869
公开日2010年12月15日 申请日期2010年8月4日 优先权日2010年8月4日
发明者张晓敏, 朱海亮, 焦庆才, 董凯, 郑庆忠 申请人:南京大学