专利名称：一种胰岛素过敏原检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种检测试剂盒，尤其是涉及一种胰岛素过敏原检测试剂盒。
技术背景
随着经济的发展、生活方式的改变，糖尿病已经成为全球的公共卫生问题，而胰岛 素是糖尿病治疗必不可少的药物。由于动物胰岛素与人胰岛素氨基酸组成的差异，使其具 有抗原性，导致临床中糖尿病人对胰岛素过敏的现象屡有发生。基因重组人胰岛素及人胰 岛素类似物的问世，过敏反应明显减少。但是，随着近年来基因重组人胰岛素及类似物的广 泛应用，过敏反应并不少见。对于糖尿病患者胰岛素过敏的治疗，目前，国内没有统一的方 法，只是调整胰岛素种类、剂型，应用抗组胺药物、糖皮质激素、皮试脱敏治疗。
能够第一时间诊断胰岛素过敏，同时明确过敏原对于胰岛素过敏的治疗非常重 要，它能指导医生进行正确、及时的判断并给予相应的治疗，从而避免对病情的延误，同时 减少病人的痛苦和经济负担。
目前，对于胰岛素过敏患者过敏原的检测国内外尚无统一标准和检测方法，一般 仅通过不断更换胰岛素剂型来判断过敏成分，如此既耗时又增加费用，同时不利于血糖控 制，增加病人身心痛苦及经济负担，个别病人甚至危及生命。发明内容
本发明主要是解决现有技术所存在的问题即对于胰岛素过敏患者过敏原的检测 国内外尚无统一标准和检测方法，一般仅通过不断更换胰岛素剂型来推测过敏成分，如此 既耗时又增加费用，同时不利于血糖控制，增加病人身心痛苦及经济负担；本发明提供了一 种可以非常迅速的进行胰岛素过敏原检测的方法，操作简单，结果迅速、准确，费用低，非常 适合于临床推广应用，为临床和科研工作提供了一种非常有价值的检测手段的一种胰岛素 过敏原检测试剂盒。
本发明的上述技术问题主要是通过下述技术方案得以解决的
—种胰岛素过敏原检测试剂盒，其特征在于，包括以下成分
重组人胰岛素1. 0ml，浓度为5U/ml ；
门冬胰岛素1. 0ml，浓度为5U/ml ；
赖脯胰岛素1. 0ml，浓度为5U/ml ；
甘精胰岛素1. 0ml，浓度为5U/ml ；
猪胰岛素1. 0ml，浓度为5U/ml ；
精蛋S 1.0ml,浓度为 350ug/ml ；
间甲酚1. 0ml，浓度为 3mg/ml ；
氯化锌1. 0ml，浓度为 50ug/ml ；
对羟基苯甲酸脂1. 0ml，浓度为lmg/ml ；
苯酸1. 0ml，浓度为 2mg/ml ；
低精蛋白1. 0ml，浓度为2. 4mg/ml
磷酸组胺溶液1. Oml，浓度为0. lmg/ml ；
生理盐水1. 0ml，浓度为0. 9% ；
所述的磷酸组胺溶液为阳性对照液；所述的0. 9%生理盐水为阴性对照液。
因此，本发明具有如下优点可以非常迅速的进行胰岛素过敏原的检测，操作简 单，结果直接、准确，成本低，特别适合于临床推广应用，为临床和科研工作提供了一种非常 有价值的检测方法。
具体实施方式
下面通过实施例，并结合附图
，对本发明的技术方案作进一步具体的说明。
实施例
本发明的胰岛素过敏原检测试剂盒的制备方法包括如下步骤
(1)按照上述浓度要求配制重组人胰岛素、门冬胰岛素、赖脯胰岛素、甘精胰岛素 及猪胰岛素稀释液，
(2)按照上述浓度要求配制精蛋白、间甲酚、氯化锌、对羟基苯甲酸脂、苯酸、低精 蛋白稀释液，
(3)按照上述浓度要求配制磷酸组胺稀释液，
(4)取重组人胰岛素、门冬胰岛素、赖脯胰岛素、甘精胰岛素、猪胰岛素、精蛋白、间 甲酚、氯化锌、对羟基苯甲酸脂、苯酸、低精蛋白及磷酸组胺溶液1.0ml，0. 9%生理盐水Iml 作为一个检测试剂盒。
胰岛素过敏原检测试剂盒，包括以下成分
重组人胰岛素1. 0ml，浓度为5U/ml ；
门冬胰岛素1. 0ml，浓度为5U/ml ；
赖脯胰岛素1. 0ml，浓度为5U/ml ；
甘精胰岛素1. 0ml，浓度为5U/ml ；
猪胰岛素1. 0ml，浓度为5U/ml ；
精蛋白1. Oml，浓度为 350ug/ml ；
间甲酚1. 0ml，浓度为;3mg/ml ；
氯化锌1. Oml，浓度为 50ug/ml ；
对羟基苯甲酸脂1. 0ml，浓度为lmg/ml ；
苯酸1. Oml，浓度为 ang/ml ；
低精蛋白1. 0ml，浓度为2. 4mg/ml
磷酸组胺溶液1. Oml，浓度为0. lmg/ml ；
0. 9% 生理盐水 1. Oml ；
其中磷酸组胺溶液为阳性对照液；0. 9%生理盐水为阴性对照液。
在本实施例中，本发明的胰岛素过敏原检测试剂盒，其组成包括重组人胰岛素、 门冬胰岛素、赖脯胰岛素、甘精胰岛素和猪胰岛素，以及精蛋白，间甲酚，氯化锌，对羟基苯 甲酸脂，苯酸，低精蛋白。磷酸组胺和0.9%生理盐水分别作为阳性和阴性对照液。其中，重 组人胰岛素、门冬胰岛素、赖脯胰岛素、甘精胰岛素和猪胰岛素均为1.0ml，浓度5U/ml ；精蛋白，间甲酚，氯化锌，对羟基苯甲酸脂，苯酸，低精蛋白均为1.0ml，浓度分别为350ug/ml， 3mg/ml，50ug/ml，lmg/ml, 2mg/ml, 2. 4mg/ml ；组胺溶液 1. 0ml，浓度为 0. lmg/ml，0. 9%生理 盐水Iml。
在本实施例中，上述配置步骤中(1)的具体操作如下
配制重组人胰岛素(5U/ml)、门冬胰岛素(5U/ml)、赖脯胰岛素(5U/ml)、甘精胰 岛素(5U/ml)、猪胰岛素(5U/ml)。胰岛素原液门冬胰岛素采用丹麦诺和诺德公司-诺 和锐，规格300U/3ml、赖脯胰岛素采用美国礼来公司-优泌乐，规格300U/3ml、甘精胰岛素 采用赛诺菲安万特公司-来得时，规格300U/3ml ；重组人胰岛素采用诺和诺德公司，规格 300U/3ml ；猪胰岛素即普通胰岛素(上海生化制药厂)，规格400U/10ml，瓶装。具体步骤如 下
分别取500U (即5ml，普通胰岛素为12. 5ml)上述胰岛素原液放入IOOml的容量瓶 中，加入注射用水(蒸馏水或去离子蒸馏水)稀释至100ml，既得到浓度为5U/ml的稀释液 (皮试液)。
在本实施例中，上述配置步骤中O)的具体操作如下
配制精蛋白(350ug/ml)，间甲酚(3mg/ml)，氯化锌(50ug/ml)，对羟基苯甲酸脂 (lmg/ml)，苯酸(2mg/ml)，低精蛋白(2. %ig/ml)，磷酸组胺(0. lmg/ml)溶液。具体步骤如 下
A.准确称量35mg精蛋白，加入注射用水溶于20ml烧杯中，将烧杯中的溶液倒入 IOOml的容量瓶中，用注射用水洗涤烧杯2-3次并将洗涤液倒入容量瓶中，加入注射用水定 容至100ml，既得所需精蛋白溶液(350ug/ml)；
B.准确称量300mg间甲酚，加入注射用水溶于20ml烧杯中，将烧杯中的溶液倒入 IOOml的容量瓶中，用注射用水洗涤烧杯2-3次并将洗涤液倒入容量瓶中，加入注射用水定 容至100ml，既得所需间甲酚溶液(3mg/ml)；
C.准确称量5mg氯化锌，加入注射用水溶于20ml烧杯中，将烧杯中的溶液倒入 IOOml的容量瓶中，用注射用水洗涤烧杯2-3次并将洗涤液倒入容量瓶中，加入注射用水定 容至100ml，既得所需氯化锌溶液(50ug/ml)；
D.准确称量IOOmg对羟基苯甲酸脂，加入注射用水溶于20ml烧杯中，将烧杯中的 溶液倒入IOOml的容量瓶中，用注射用水洗涤烧杯2-3次并将洗涤液倒入容量瓶中，加入注 射用水定容至100ml，既得所需羟基苯甲酸脂溶液(lmg/ml)；
E.准确称量200mg苯酸，加入注射用水溶于20ml烧杯中，将烧杯中的溶液倒入 IOOml的容量瓶中，用注射用水洗涤烧杯2-3次并将洗涤液倒入容量瓶中，加入注射用水定 容至100ml，既得所需苯酸溶液Omg/ml)；
F.准确称量MOmg低精蛋白，加入注射用水溶于20ml烧杯中，将烧杯中的溶液倒 入IOOml的容量瓶中，用注射用水洗涤烧杯2-3次并将洗涤液倒入容量瓶中，加入注射用水 定容至100ml，既得所需低精蛋白溶液(2.%ig/ml)；
G.准确称量IOmg组胺基质，加入注射用水溶于20ml烧杯中，将烧杯中的溶液倒入 IOOml的容量瓶中，用注射用水洗涤烧杯2-3次并将洗涤液倒入容量瓶中，加入注射用水定 容至100ml，既得所需磷酸组胺溶液(0. lmg/ml)。
本实施例中，检测试剂盒总共有13种小瓶装液体(11种皮试液和2种对照液)，具体如下
皮试液包括
a、门冬胰岛素，5U/ml，l 瓶(Iml)
b、赖脯胰岛素，5U/ml，l 瓶(Iml)
C、甘精胰岛素，5U/ml，l 瓶(Iml)
d、重组人胰岛素，5U/ml，1瓶(Iml)
e、猪胰岛素，5U/ml，l 瓶(Iml)
f、精蛋白，350ug/ml，l 瓶(Iml)
g、间甲酚，3mg/ml，l 瓶(Iml)
h、氯化锌，50ug/ml，1 瓶(Iml)
i、对羟基苯甲酸脂，lmg/ml，1瓶(Iml)
j、苯酸，2mg/ml，l 瓶(Iml)
k、低精蛋白，2.%ig/ml，l 瓶(Iml)
对照液包括
a、磷酸组胺，0. lmg/ml，1 瓶(Iml)
b、0. 9%生理盐水，1 瓶(Iml)
本发明的试剂盒使用方法，具体步骤如下
(1)皮试方法及结果观察(皮内试验)A. —般选择前臂进行皮试，用75%酒精消 毒皮试处皮肤。B.抽取皮试液0.05ml，皮内注射成一皮丘。C. 15-20分钟后，如局部出现红 肿、红晕或伴有小水泡、皮下硬结者为阳性。对可疑阳性者，应在另一前臂用组胺和生理盐 水做对照试验。
(2)注意事项a.极少数患者可在皮肤试验时发生过敏性休克，常于注射后数秒至 5分钟内开始。应做好抢救准备，如止血带、肾上腺素、氢化可的松、多巴胺、氧气、气管切开 包等，皮试前选择大静脉留置静脉通道，如迅速发生胰岛素过敏时，可快速给予抗过敏药物 及抢救药物。b.试剂盒应在常温冰箱中保存。
本发明胰岛素过敏原检测试剂盒，可以非常迅速的进行胰岛素过敏原的检测，操 作方便，结果准确，成本低，适合于临床推广应用，为临床和科研工作提供了一种非常有价 值的检测手段。
本发明的试剂盒检测种类基本涵盖目前市售胰岛素种类及添加剂成分。
本发明试剂盒检测试剂浓度均为检测标准浓度，可达到检测最佳效果。
本发明的试剂盒包括阴性和阳性对照液，对于准确判断过敏原具有非常可靠的参 考价值。
本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领 域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替 代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。
权利要求
1.一种胰岛素过敏原检测试剂盒，其特征在于，包括以下成分 重组人胰岛素0. 5ml，浓度为5U/ml ；重组人胰岛素类似物0. 5ml，浓度为5U/ml ； 猪胰岛素0. 5ml，浓度为5U/ml ； 胰岛素添加剂0. 5ml 3ml，浓度50ug/ml 3mg/ml ； 对照液 Iml 2ml，浓度 0. 01mg/ml 0. 9mg/ml ；
2.根据权利要求1所述的胰岛素过敏原检测试剂盒，其特征在于，所述的重组人胰岛 素(诺和灵R)0. 5ml，浓度为5U/ml。
3.根据权利要求1所述的胰岛素过敏原检测试剂盒，其特征在于，所述的重组人胰岛 素类似物为门冬胰岛素、赖脯胰岛素、甘精胰岛素，其中门冬胰岛素0. &nl，浓度为5U/ml ； 赖脯胰岛素0. &nl，浓度为5U/ml ； 甘精胰岛素0. &nl，浓度为5U/ml。
4.根据权利要求1所述的胰岛素过敏原检测试剂盒，其特征在于，猪胰岛素0.&iil，浓 度为5U/ml ；
5.根据权利要求1所述的胰岛素过敏原检测试剂盒，其特征在于，人胰岛素添加剂包 括精蛋白、间甲酚、锌、对羟基苯甲酸脂、苯酸、低精蛋白；其中，精蛋白0. 5ml，浓度为350ug/ml ； 间甲酚0. 5ml浓度为:3mg/ml ； 锌 0. 5ml 浓度为 50ug/ml ； 对羟基苯甲酸脂0. 5ml浓度为lmg/ml ； 苯酸0. 5ml浓度为2mg/ml。
6.根据权利要求1所述的胰岛素过敏原检测试剂盒，其特征在于，所述的对照液包括 组胺溶液1ml，浓度为0. lmg/ml或0. Olmg/ml ；生理盐水Iml ；浓度为0.9% ；所述的组胺为阳性对照液；所述的生理盐水溶液为阴性对照液。
全文摘要
本发明涉及一种检测试剂盒，尤其是涉及一种胰岛素过敏原检测试剂盒。本发明的胰岛素过敏原检测试剂盒，其组成包括重组人胰岛素及人胰岛素类似物(门冬胰岛素、赖脯胰岛素、甘精胰岛素)和猪胰岛素，以及各种胰岛素添加剂，包括精蛋白、间甲酚、锌、对羟基苯甲酸脂、苯酸、低精蛋白。组胺和盐溶液分别作为阳性和阴性对照液。因此，本发明具有如下优点可以非常迅速的进行胰岛素过敏原的检测，操作简单，结果准确，成本低，适合于临床推广应用，为临床和科研工作提供了一种非常有价值的实用检测方法。
文档编号A61K49/00GK102038962SQ201010530279
公开日2011年5月4日 申请日期2010年10月29日 优先权日2010年10月29日
发明者杨宝峰, 闫爽 申请人:哈尔滨医科大学