专利名称：一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法
技术领域：
本发明属医药技术领域，具体来说是涉及同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物 碱的方法。
背景技术：
枳实始载于《神农本草经》，具有破气消积，化痰散痞的功效。主要有效成分为挥 发油、黄酮类和生物碱类[1]，它们均对枳实的功效发挥一定作用。现代药理研究表明，挥 发油对大鼠离体肠平滑肌的收缩呈先兴奋后抑制作用，并有一定程度的镇痛作用和中枢抑 制作用[2]黄酮类对大鼠离体肠平滑肌具有收缩作用[3]；生物碱具有升压、抗休克的作用 [4]0《中华人民共和国药典》2010版规定枳实来源于芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果[5]。另有香橙Citurs junos Sieb部分地区也作为枳实使用目前有关枳实黄酮、生物碱成分制备方法的专利有 申请号 % :200410042658.5, CN200410077903. 6,200410070123. 9, CN200910183265. 9， CN200710163452. 1，CN200710111229. 2，CN200710099903. X，CN200710098445. 8 的专利等。 但本发明专利公开的是一种同时提取分离来源于酸橙及其栽培变种、香橙或甜橙的枳实中 挥发油、总黄酮和总生物碱的制备方法，采用该技术方法能使枳实中三类有效成分同时被 提取，有效避免了单一提取所带来的资源浪费，提高了枳实的综合利用率，降低了成本，并 且制备方法适宜工业化大生产。参考文献
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发明内容
本发明的目的在于提供一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法。
本发明的技术方案如下
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取枳实加5-12倍量水，浸泡0-4 h， 水蒸汽蒸馏法提取2-12 h，得挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计6-12 倍量(L/kg)的55-95%乙醇回流提取2-3次，每次0. 5-1. 5 h，滤过，合并各提取液，减压回 收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使以生药量计上样液浓度为0. 4-0. 8 g/ml ；通过-阳离 子交换树脂，吸附流速1-3 BV/h，树脂柱径高比为1 5-8，以生药量计上样量为0.8-1. 6 g/ml，先用30-80%乙醇洗脱2-4 BV，洗脱流速为1-4 BV/h，洗脱液待用；然后用0.8-2 mol/ L 30-80%乙醇氨水洗脱3-5 BV，洗脱流速为2-4 BV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生 物碱提取物；上述乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使以生药量 计上样液浓度为0.4-1. Og/ml，通过大孔吸附树脂，吸附流速1-3 BV/h，树脂柱径高比为 1 5-8，以生药量计上样量为0. 3-0. 6g/ml，先用0-20%乙醇洗脱2-3BV进行除杂，除杂流 速为1-3 BV/h，然后用50-90%乙醇洗脱3-4 BV，洗脱流速为0. 8-2 BV/h。此洗脱液浓缩， 干燥，得枳实总黄酮提取物。本发明所述原料枳实，来源于是芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽 培变种黄皮酸橙 Citrus aurantium ‘Huangpi，、代代花 Citrus aurantium ‘Daidai，、 7^； Citrus aurantium iChuluan' > ijf Citrus aurantium iTangcheng' | S C. aurantium iXiucheng'> 香澄 C. aurantium iXiangcheng'> 积澄 C. aurantium ΧΡ· trifoliata，甜橙 Citrus sinensis Osbeck 的干燥幼果。作为提取枳实挥发油、总生物碱和总黄酮的原材料，包括枳实市售饮片，也可以是 这些植物的成熟果实、茎、叶、花穗、根茎及根等任一部位或全部植株，其中优选的药材部位 为干燥根及根茎。上述所述的枳实包括未经任何炮制处理的原药材及饮片，还包括各种炮 制品，如“炒枳实”、“麸炒枳实”等。本发明利用离子交换树脂法进行制备时，所用的离子交换树脂可以是强酸性或弱 酸性任意一种类型，如 UBK530、WK40、SK1B、WK10、731 等。本发明利用大孔吸附树脂法进行制备时，所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、 中等极性等任意一种类型，如SP825，HP20, HPDl00A, D-101, NKA II等。本发明其中BV和BV/h的含义是通常将树脂装于圆筒形的树脂柱中，溶液连续地 通过。树脂柱内装载树脂的体积称为床容积(bed volume)，简写为BV。工业用的树脂柱的 床容积通常由l-0m3，也有较小或较大的。这是树脂柱的基本单位，它工作时的各种物料量 都以BV为单位。例如溶液通过树脂柱的流量速度为2-4BV/h，即每小时通过溶液的体积为 树脂床容积的2-4倍。树脂的处理能力亦常以BV为单位计算。本发明质量控制方法可以包括以下一种或几种含量测定方法 1、挥发油
挥发油得率=挥发油量(ml)/生药量(g) X 100% 柠檬烯和芳樟醇百分含量测定
色谱条件Restek Rxi-5ms石英毛细管柱(0.25 mm X 30 m,0. 25 μ m)；进样口温 度250 V ；程序升温起始温度50 °C，保持1 min，以5 V /min程序升温至140 °C，保持 1 min，再以10 °C min-l升温至200 °C，保持3 min。进样量1 μ L ；分流比1 60 ；载气氦 气。质谱分析条件电离方式为ΕΙ，离子源温度200 °C，接口温度为250 °C，电子能量70eV，电离电压1760 V，质量扫描范围45-450 amu。百分含量测定取3批枳实挥发油样品各3份，精密吸取0. 2 ml,加丙酮溶解并定 容于5 ml量瓶中，摇勻，作为柠檬烯和β-芳樟醇百分含量测定的供试品溶液。精密吸取 上述供试品溶液2 μ L，注入气相色谱仪，测定，记录三种成分百分含量。2、总生物碱
精密称取辛弗林对照品适量，加甲醇溶解制成每1 ml含辛弗林0.831 mg的溶液。 精密吸取辛弗林对照品溶液0.5 ml, 1.0 ml, 1.5 ml, 2.0 ml, 2. 5 ml，置带刻度具塞试管中， 分别加水至3 ml，加入pH5.0溴百里香草酚兰缓冲溶液4 ml，摇勻，放入37°C水浴中保温 0. 5小时，取出放冷，于420 nm处测定吸光度，以辛弗林浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘 制曲线。精密称取3批枳实总生物碱提取物样品各3份，每份约8 mg,加甲醇溶解并定容 于5 ml量瓶中，摇勻。精密吸取1.5 ml置带刻度具塞试管中，加水至3 ml，加入pH5.0溴 百里香草酚兰缓冲溶液4 ml，摇勻，放入37°C水浴中保温0.5小时，取出放冷，于420 nm处 测定吸光度，计算含量。3、辛弗林
色谱条件Zobax Eclipse XDB-C18 (4. 6 mmX150 mm, 5 μ m)色谱柱；流动相乙 腈-水-磷酸-十二烷基硫酸钠(24 76 0. 1 0.2);流速1. 2 ml/min ；检测波长275 nm;柱温30 °C。标准曲线精密吸取辛弗林对照品溶液(浓度为0.36 mg/ml)l，3，5，7,9 ml, 加甲醇分别定容至10 ml。分别精密吸取各浓度对照品溶液5 μ L，注入液相色谱仪，测定 峰面积，以辛弗林量(Pg)为横坐标，色谱峰峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线
含量测定精密称取3批枳实总生物碱提取物样品各3份，每份约5 mg,加甲醇溶解并 定容于10 ml量瓶中，摇勻，作为辛弗林含量测定的供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液 10 UL,注入液相色谱仪，测定峰面积，计算含量。4、总黄酮
精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1 ml含橙皮苷0.22 mg的溶液。分别 精密吸取橙皮苷对照品溶液1，2，3，4，5 ml，于5 ml量瓶中，加甲醇定容，摇勻。分别精密吸 取上述对照品溶液0.5 ml，置25 ml量瓶中，准确加入10% A1C13溶液1.0 ml，再用蒸馏水 定容至刻度，摇勻，室温放置15 min，于310 nm处测定吸光度，以橙皮苷浓度为横坐标，吸光 度为纵坐标，绘制曲线。精密称取3批枳实总黄酮提取物样品各3份，每份约5 mg,加甲醇溶解并定容于 25 ml量瓶中，摇勻。分别精密吸取上述对照品溶液0.5 ml，置25 ml量瓶中，准确加入10% A1C13溶液1.0 ml，再用蒸馏水定容至刻度，摇勻，室温放置15 min，于310 nm处测定吸光
度，计算含量。5、柚皮芸香苷，柚皮苷，橙皮苷和新橙皮苷
色谱条件Agilent Zobax Extend_C18 (4. 6 mmX50 mm，1· 8 μ m)色谱柱，流动相 为甲醇- 醋酸(30:70)；检测波长285 nm;流速1 ml/min ；柱温30 °C。标准曲线精密称取橙皮苷对照品、柚皮苷对照品适量，加甲醇溶解分别制成每1 ml含橙皮苷103. 2 μ g、柚皮苷87. 2 μ g的溶液。精密吸取等体积的两种对照品溶液混勻，得到每1 ml含橙皮苷和柚皮苷各51. 6 μ g、43. 6 μ g的混合对照品溶液。精密吸取混合对 照品溶液1，3，5，7,9 μ L注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以测得的峰面 积积分值为纵坐标，进样量(Pg)为横坐标，绘制标准曲线。含量测定精密称取3批枳实总黄酮提取物样品各3份，每份约3 mg,加甲醇溶解 并定容于25 ml量瓶中，摇勻，作为柚皮芸香苷，柚皮苷，橙皮苷和新橙皮苷含量测定的供试 品溶液。精密吸取上述供试品溶液2 UL,注入液相色谱仪，测定峰面积。计算橙皮苷和柚 皮苷含量。柚皮芸香苷与柚皮苷、新橙皮苷与橙皮苷分别为两对同分异构体，它们在紫外吸 收光谱中的吸收系数相同。因此在缺少柚皮芸香苷和新橙皮苷对照品的情况下，根据DAD 检测器测定的色谱峰紫外吸收光谱图，确认柚皮芸香苷和新橙皮苷色谱峰。并分别根据橙 皮苷和柚皮苷对照品的峰面积和进样量计算样品中新橙皮苷和柚皮芸香苷的含量。
具体实施例方式实施例1
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取枳实饮片2 kg，加8倍量水，浸泡2 h，水蒸汽蒸馏法提取7 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计9倍量 75%乙醇回流提取3次，每次1. 0 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得 提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.6 g/ml ；通过1.8 L UBK530阳离子交 换树脂，吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1 6，以生药量计上样量为1. 2 g/ml，先用50% 乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为3 BV/h，50%乙醇洗脱液待用；然后用1.4 mol/L 50%乙醇氨水 洗脱4 BV，洗脱流速为3 BV/h, 1. 4 mol/L 50%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物 碱提取物；上述50%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为 0.7 g/ml，通过SP-825大孔吸附树脂，吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1 6，以生药量 计上样量为0. 4 g/ml，先用10%乙醇洗脱2 BV进行除杂，除杂流速为2 BV/h，然后用70% 乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为1.4 BV/h。70%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。实施例2
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取枳实饮片5 kg,加5倍量水，浸泡4 h，水蒸汽蒸馏法提取12h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计12倍量 95%乙醇回流提取3次，每次1. 5 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得 提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 8 g/ml ；通过WK40阳离子交换树脂， 吸附流速1 BV/h，树脂柱径高比为1 8，以生药量计上样量为1.6 g/ml，先用80%乙醇洗 脱4BV，洗脱流速为4 BV/h，80%乙醇洗脱液待用；然后用2 mol/L 80%乙醇氨水洗脱5 BV, 洗脱流速为4 BV/h, 2 mol/L 80%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上 述80%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为1.0 g/ml，通 过HP20大孔吸附树脂，吸附流速3 BV/h，树脂柱径高比为1 8，以生药量计上样量为0.6 g/ml，先用20%乙醇洗脱3 BV进行除杂，除杂流速为3 BV/h,然后用90%乙醇洗脱4 BV,洗 脱流速为2 BV/h。90%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。实施例3
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片1 kg，加5倍量水， 水蒸汽蒸馏法提取2 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计6倍量55%乙醇回流提取2次，每次0. 5 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提 取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 4 g/ml ；通过UBK530阳离子交换树脂， 吸附流速1 BV/h，树脂柱径高比为1 5，以生药量计上样量为0. 8 g/ml，先用30%乙醇洗 脱2 BV，洗脱流速为1 BV/h，30%乙醇洗脱液待用；然后用0. 8 mol/L 30%乙醇氨水洗脱3 BV，洗脱流速为2 BV/h, 0.8 mol/L 30%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取 物；上述30%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0.4 g/ ml，通过SP-825大孔吸附树脂，吸附流速1 BV/h，树脂柱径高比为1 5，以生药量计上样 量为0. 3 g/ml，先用水洗脱2 BV除杂，除杂流速为1 BV/h，然后用50%乙醇洗脱3 BV,洗脱 流速为0.8 BV/h。50%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。实施例4
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片2 kg，加12倍量水， 浸泡0 h，水蒸汽蒸馏法提取4 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入ML75%乙 醇回流提取3次，每次1. 0 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取 物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 6 g/ml ；通过731阳离子交换树脂，吸附 流速2 BV/h，树脂柱径高比为1 6，上样量以生药量计为1.2 g/ml，先用50%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为3 BV/h，50%乙醇洗脱液待用；然后用1 mol/L 50%乙醇氨水洗脱4 BV，洗脱 流速为3 BV/h, 1 mol/L 50%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述50% 乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0. 8 g/ml，通过DlOl 大孔吸附树脂，吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1 6，以生药量计上样量为0.4 g/ml, 先用水洗脱2 BV进行除杂，除杂流速为2 BV/h，然后用70%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为1 BV/h。70%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。实施例5
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片3 kg，加5倍量水， 浸泡3 h，水蒸汽蒸馏法提取6 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入ML95%乙 醇回流提取3次，每次1. 5 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取 物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 8 g/ml ；通过UBK530阳离子交换树脂，吸 附流速3 BV/h，树脂柱径高比为1 8，上以生药量计样量为1.6 g/ml，先用80%乙醇洗脱 4BV，洗脱流速为4 BV/h，80%乙醇洗脱液待用；然后用2 mol/L 80%乙醇氨水洗脱5 BV，洗 脱流速为4 BV/h, 2 mol/L 80%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述 80%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为1.0 g/ml，通过 HPD100A大孔吸附树脂，吸附流速3 BV/h，树脂柱径高比为1 8，以生药量计上样量为0. 6 g/ml，先用20%乙醇洗脱3 BV进行除杂，除杂流速为3 BV/h,然后用90%乙醇洗脱4 BV,洗 脱流速为2 BV/h。90%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。实施例6
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片2 kg，加4倍量水， 浸泡2 h，水蒸汽蒸馏法提取5 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入16L55%乙 醇回流提取2次，每次0. 5 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取 物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.4 g/ml ；通过SKlB阳离子交换树脂，吸附 流速1 BV/h，树脂柱径高比为1 5，以生药量计上样量为0.8 g/ml，先用30%乙醇洗脱2BV，洗脱流速为1 BV/h，30%乙醇洗脱液待用；然后用0.8 mol/L 30%乙醇氨水洗脱3 BV, 洗脱流速为2 BV/h, 0.8 mol/L 30%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上 述30%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0. 4 g/ml，通 过D-101大孔吸附树脂，吸附流速1 BV/h，树脂柱径高比为1 5，以生药量计上样量为 0. 3 g/ml，先用水洗脱2 BV除杂，除杂流速为1 BV/h，然后用50%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速 为0.8 BV/h。50%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。实施例7
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片2 kg，加4倍量水， 浸泡2 h，水蒸汽蒸馏法提取6 h，得挥发油。提提取挥发油后药液留用，药渣加入20L70% 乙醇回流提取3次，每次1. 0 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提 取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 5 g/ml ；通过731阳离子交换树脂，吸 附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1 6，以生药量计上样量为1. 2 g/ml，先用60%乙醇洗脱 3 BV，洗脱流速为3 BV/h，60%乙醇洗脱液待用；然后用1 mol/L 60%乙醇氨水洗脱4 BV, 洗脱流速为3 BV/h, 1 mol/L 60%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述 60%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0. 8 g/ml，通过 NKA II大孔吸附树脂，吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1 6，上以生药量计样量为0.4 g/ml，先用水洗脱2 BV进行除杂，除杂流速为2 BV/h，然后用80%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速 为1 BV/h。80%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。实施例8
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片3 kg，加6倍量水， 水蒸汽蒸馏法提取0.5 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入30L70%乙醇回流 提取2次，每次1. 0 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水 分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 6 g/ml ；通过SP-825大孔吸附树脂，吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1 6，上以生药量计样量为0.6 g/ml，先用水洗脱2 BV除杂，除杂 流速为2 BV/h，然后用30%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为2 BV/h, 30%乙醇洗脱液浓缩，干燥， 得枳实总生物碱提取物；树脂柱继续用70%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为1 BV/h，洗脱液浓 缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。实施例9
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片1 kg，加8倍量水， 浸泡3 h，水蒸汽蒸馏法提取1 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入8L70%乙醇 回流提取3次，每次1 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加 水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.6 g/ml ；通过WK40阳离子交换树脂，吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1 6，以生药量计上样量为1. 2 g/ml，先用水洗脱2 BV除杂，除杂 流速为3 BV/h，再用50%乙醇洗脱，洗脱流速为3 BV/h，接收洗脱液3 BV，50%乙醇洗脱液 浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物；树脂柱然后用1 mol/L 50%乙醇氨水洗脱4 BV，洗脱流 速为3 BV/h, 1 mol/L 50%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物。实施例10
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片2 kg，加6倍量水， 浸泡2 h，水蒸汽蒸馏法提取1 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入20L水提取3次，每次1. 0 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，以生药量计使上样液 浓度为0.6 g/ml ；通过UBK530阳离子交换树脂，吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1 6， 以生药量计上样量为1.2 g/ml，先用50%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为3 BV/h，50%乙醇洗脱 液待用；然后用1 mol/L 50%乙醇氨水洗脱4 BV，洗脱流速为3 BV/h, 1 mol/L 50%乙醇氨 水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述50%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取 物，加水分散溶解，使上样液浓度为0.8 g/ml，通过SP-825大孔吸附树脂，吸附流速2 BV/ h，树脂柱径高比为1 6，以生药量计上样量为0.4 g/ml，先用水洗脱2 BV进行除杂，除杂 流速为2 BV/h，然后用70%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为1 BV/h。70%乙醇洗脱液浓缩，干燥， 得枳实总黄酮提取物。 以上实施例利用上述质量检测方法测得总黄酮和生物碱含量如下
权利要求
1.一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取枳实饮片加5-12倍量(L/ kg)水，浸泡0-4 h，水蒸汽蒸馏法提取2-12 h，得挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加 入以生药量计6-12倍量(L/kg) 55-95%乙醇回流提取2-3次，每次0.5-1. 5 h，滤过，合并 各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液 浓度为0.4-0.8 g/ml ；通过阳离子交换树脂，吸附流速1-3 BV/h，树脂柱径高比为1 5_8， 上以生药量计样量为0. 8-1. 6 g/ml，先用30-80%乙醇洗脱2-4 BV，洗脱流速为1-4 BV/ h，洗脱液待用；然后用0. 8-2 mol/L 30-80%乙醇氨水洗脱3-5 BV，洗脱流速为2-4 BV/h, 此洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，得提取 物，加水分散溶解，使以生药量计上样液浓度为0. 4-1. Og/ml，通过大孔吸附树脂，吸附流 速1-3 BV/h，树脂柱径高比为1 5-8，以生药量计上样量为0.3-0. 6g/ml，先用0-20%乙醇 洗脱2-3 BV进行除杂，除杂流速为1-3 BV/h，然后用50-90%乙醇洗脱3-4 BV，洗脱流速为0.8-2BV/h ；此洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
2.如权利要求1所述的一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，其特 征在于原料枳实，来源是芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种黄皮酸 Citrus aurantium iHuangpi‘> ^ ^ ^ Citrus aurantium iDaidai‘>Citrus aurantium iChuluan' > ijf Citrus aurantium iTangcheng' 臭 C. aurantium iXiucheng'、香澄C. aurantium iXiangcheng'、积澄C. aurantium XP. trifoliata、舌甘澄 Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果中的任意一种。
3.如权利要求1所述的一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，其特征 在于所用的离子交换树脂型号是UBK530、WK40、SK1B、WK10或731中的任意一种。
4.如权利要求1所述的一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，其特征 在于所用的大孔树脂型号是SP825，HP20，HPDl00A, D-101, NKA II中的任意一种。
5.如权利要求1所述的一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，其特征 在于同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取枳实饮片2 kg，加8倍量水，浸泡 2 h，水蒸汽蒸馏法提取7 h，得挥发油。
6.提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计9倍量75%乙醇回流提取3次，每次.1.0 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生 药量计使上样液浓度为0. 6 g/ml ；通过1. 8 L UBK530阳离子交换树脂，吸附流速2 BV/h, 树脂柱径高比为1 6，以生药量计上样量为1. 2 g/ml，先用50%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速 为3 BV/h, 50%乙醇洗脱液待用；然后用.1. 4 mol/L 50%乙醇氨水洗脱4 BV，洗脱流速为3 BV/h, 1. 4 mol/L 50%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述50%乙醇洗 脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0. 7 g/ml，通过SP-825大 孔吸附树脂，吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1 6，以生药量计上样量为0.4 g/ml，先 用10%乙醇洗脱2 BV进行除杂，除杂流速为2 BV/h，然后用70%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速 为1. 4 BV/h ；70%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
全文摘要
本发明公开了一种中药枳实中提取得到的挥发油、总黄酮和总生物碱提取物的制备方法。该方法主要利用水蒸气蒸馏、特定型号的离子交换树脂和大孔吸附树脂联用的方法，同时提取分离枳实中挥发油、总黄酮和总生物碱。所制得的枳实挥发油提取物中柠檬烯和β-芳樟醇的百分含量为5-100%(w/w)；所制得的枳实总黄酮提取物中各种黄酮类成分百分含量的总和为5-100%(w/w),其中柚皮芸香苷，柚皮苷，橙皮苷、新橙皮苷四种成分含量占总黄酮含量的5-100%(w/w)；所制得的枳实生物碱提取物中各种生物碱成分百分含量的总和为5-100%(w/w),其中辛弗林含量占总生物碱含量的5-100%(w/w)。
文档编号A61K36/752GK102106918SQ20111004215
公开日2011年6月29日 申请日期2011年2月22日 优先权日2011年2月22日
发明者刘振丽, 刘铭福, 吕署一, 宋志前, 王淳 申请人:中国中医科学院中医基础理论研究所