专利名称：一种靶向治疗难治性癫痫的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明属生物医药领域，涉及靶向治疗难治性癫痫的药物，具体涉及一种含有小分子化合物/单克隆抗体/携带小分子干扰RNA的病毒载体的靶向治疗难治性癫痫的药物组合物。
背景技术：
近年来,难治性癫痫尽管在抗癫痫药物(antiepileptic drugs,AEDs)治疗和外科手术治疗方面均取得了很大进展，但难治性癫痫仍然是困扰临床医生的一个重要课题。难治性癫痫患者的重要特征就是对多种作用机制不同的AEDs均有抗药性，这提示可能存在某种非特异性机制导致了难治性癫痫患者的多药抵抗，其中多药转运体过度表达假说获得了本领域研究者的广泛关注。
P-糖蛋白(P-glycoprotein, Pgp)是ATP结合蛋白超家族多药转运体中的重要成员。目前多项研究结果均提示，难治性癫痫多药抵抗的多药转运体假说在生物学上是可能的，但尚缺乏有力的证据来证实这一假说。虽然有研究在人类难治性癫痫的致痫脑组织中检测到Pgp的过度表达，但这一研究结果尚缺乏有效的实验对照组，因为将其与药物敏感型癫痫患者相应脑组织中的PgP表达水平相比较是不可能的一这样的患者不会进行外科手术治疗。因此，研究者就不能确定PgP的过度表达是否为导致药物抵抗的真正原因，也许这仅仅是难以控制的痫性发作所产生的结果，亦或是发生在致痫脑组织中的一种附带现象，而与药物敏感性无关。因此，有关研究设想通过能够出现反复自发性痫性发作(spontaneous recurrent seizures, SRS)的癫痫动物模型,然后通过给予抗癫痫药物筛选出药物敏感型和药物抵抗型亚组，从而研究血脑屏障中Pgp的表达在药物敏感组和药物抵抗组中是否存在差异，区域范围，以及发挥的病理生理学作用。以便开发出相应的靶向治疗药物，为治疗难治性癫痫服务。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术存在的缺陷和不足，提供一种靶向治疗难治性癫痫的药物，具体涉及一种含小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体的靶向治疗难治性癫痫的药物组合物。本发明提供含小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体的靶向治疗难治性癫痫的药物组合物，此组合物中的小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体的有效剂量为对P-糖蛋白的表达抑制效率达到30 %及以上时的量，该有效剂量能发挥出其抑制癫痫发作频率、持续时间的作用。本发明还提供所述的的药物组合物能靶向治疗难治性癫痫的的方法，该方法包括给予含小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体的的药物组合物，其中，小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体的有效剂量是对P-糖蛋白的表达抑制效率达到30%及以上时的量。
本发明提供制备此组合物的方法。本发明所述的靶向治疗难治性癫痫的药物组合物，它含以下的物质作为抗癫痫活性成分(I)小分子化合物，共包括四种，第一代，第二代，第三代，以及新一代制剂；(2)单克隆抗体，包括各种种源的单克隆抗体；(3)携带小分子干扰RNA的病毒载体，包括各种可以降低P-糖蛋白表达的小干扰RNA ；上述活性成分的有效剂量为抑制效率达到P-糖蛋白表达量的30%。 本发明的靶向药物组合物，应用抑制P-糖蛋白表达的小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体进行系统即全身用药(小分子化合物或单克隆抗体)和靶器官(小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体)水平用药抗癫痫作用实验研究。并通过上述药物在难治性癫痫模型中的的药效学、药理学、药代动力学作用和早期安全性的研究，设定本发明的靶向药物合理有效的剂量，制成能靶向抑制P-糖蛋白表达的抗难治性癫痫发作频率、持续时间的新的药物组合物。本发明中，小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体，制备成不同的药物剂型供使用，如制成口服液、胶囊、粉剂或针剂等。本发明所述的靶向药物可以采用皮下注射、静脉注射，以及靶器官注射方式使用。本发明中，采用反复自发性痫性发作(spontaneous recurrent seizures, SRS)的癫痫动物模型，然后通过给予抗癫痫药物筛选出药物敏感型和药物抵抗型亚组，从而研究血脑屏障中PgP的表达水平在药物敏感组和药物抵抗组中是否存在差异，以及确定Pgp的表达水平发生变化的脑区域范围，以及发挥的病理生理学作用。试验研究结果显示，药物抵抗型亚组大脑皮层Pgp的表达水平较敏感组上调50%左右，小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体的对P-糖蛋白的表达抑制效率达到30 %及以上时，其癫痫发作频率、持续时间的抑制作用即发挥出来，同时相应脑波也呈现癫痫发作频率、持续时间相似的改变。本发明实验证实，所述的药物组合物能靶向抑制P-糖蛋白的表达，可显著提高抑制癫痫发作频率、持续时间。本发明的药物组合物为解决目前临床应用中出现的难治性癫痫药效减低难题提供了新的治疗靶点及解决方法，可进一步制备靶向抑制P-糖蛋白表达的药物；制备抗癫痫尤其是难治性癫痫发作频率、持续时间的药物。
具体实施例方式实施例I :含小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体的药物组合物对P-糖蛋白的表达抑制在难治性癫痫发作频率、持续时间的抑制作用。I、实验动物实验动物选用体重为200_230g的雌性Sprague-Dawley大鼠，共20只，购自中国科学院上海实验动物中心。2 实验动物预处理I %戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，麻醉成功后，将大鼠头部固定于立体定向仪上(江湾II型)，参考Paxinos和Walson大鼠脑图谱对左侧杏仁基底外侧核进行定位((AP-2. Omm, ML 5. 0mm, VD 8. 0mm)，将直径0. 2mm的特氟龙双极不锈钢电极植入杏仁基底节外侧核(basolateral nucleus of the amygdala ；BLA) [16]作为刺激电极和记录电极；在左侧顶叶皮质放置不锈钢螺丝钉，作为中间参考电极。以牙托粉将电极固定在颅骨表面，所有电极均用导线连接四孔接插件，以备与刺激器及脑电图放大器连接。手术后，给予实验动物2周的恢复期。3.诱导产生癫痫持续状态(SE)及自发性反复痫性发作(SRS)I)电极植入后2周，对实验大鼠进行电刺激诱导产生SE。刺激参数如下刺激时间为25分钟；电刺激为每毫秒转换正负电极的方波序列组成；时限为100ms,频率为2次/s，序列内部的脉冲频率为50次/s ;峰刺激强度为700uA ;18只大鼠诱发了表现为全面性强制痉挛发作的SSSE。2)当实验大鼠出现全面性强制-痉挛发作癫痫持续状态(SSSE)2小时以后，给予 所有实验动物地西泮(10mg/kg，腹腔注射)终止SSSE。3)4周以后，对实验动物进行视频脑电图监测，最长监测期为2个月[17]。出现SRS的大鼠(n = 11)给予苯巴比妥进行筛选。4.苯巴比妥筛选药物敏感型组和药物抵抗型组I)实验过程为6周，治疗前对照期2周，苯巴比妥治疗期2周，治疗后对照期2周，采用视频脑电图监测痫性发作频率[18]；2)给予能够24小时维持有效血药浓度(10-40ug/ml ；Baulac, 2002)的苯巴比妥最大耐受剂量2周治疗首日给予25mg/kg早上腹腔注射(i. p.), IOh后给予15mg/kg,i. P-，次日起给予15mg/kg, 2次/日，i. p.；3)首次注射给药后IOh和末次给药后12h采血样应用高效液相方法进行血药浓度分析；4)根据实验动物对苯巴比妥的不同个体反应，将这些它们分为癫痫发作得到控制的药物敏感组和癫痫发作频率没有明显减少的药物抵抗组；5.采用反复自发性痫性发作(spontaneous recurrent seizures, SRS)的癫痫动物模型，然后通过给予抗癫痫药物筛选出药物敏感型和药物抵抗型亚组，从而研究血脑屏障中PgP的表达水平在药物敏感组和药物抵抗组中是否存在差异，以及确定Pgp的表达水平发生变化的脑区域范围，以及发挥的病理生理学作用；给予含小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体的药物组合物进行干预；6.实验结果显示，药物抵抗型亚组大脑皮层PgP的表达水平较敏感组上调50%左右，含小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体的药物组合物对P-糖蛋白的表达抑制效率达到30%及以上时，该药物组合物对癫痫发作频率、持续时间的抑制作用即发挥出来，同时相应脑波也呈现癫痫发作频率、持续时间相似的改变。实验证实所述的药物组合物能靶向抑制P-糖蛋白的表达，可显著提高抑制癫痫发作频率、持续时间。
权利要求
1.一种靶向治疗难治性癫痫的药物组合物，其特征在于，该药物组合物含有效剂量的小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体，所述的有效剂量是对P-糖蛋白的表达抑制效率达到30%及以上时的量。
2.按权利要求I所述的靶向治疗难治性癫痫的药物组合物，其特征在于，所述的有效剂量的小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体对P-糖蛋白的表达抑制效率达到30 %及以上时，抑制癫痫发作频率、持续时间。
3.按权利要求I所述的靶向治疗难治性癫痫的药物组合物，其特征在于，所述的小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体其剂型是口服液、胶囊、粉剂或针剂。
4.按权利要求I所述的靶向治疗难治性癫痫的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物采用皮下注射、静脉注射以及靶器官注射方式使用。
5.权利要求I的靶向治疗难治性癫痫的药物组合物在制备靶向抑制P-糖蛋白表达的药物中的用途。
6.权利要求I的靶向治疗难治性癫痫的药物组合物在制备抗癫痫发作频率、持续时间的药物中的用途。
全文摘要
本发明属生物医药领域，涉及一种靶向治疗难治性癫痫的药物组合物，本发明的药物组合物含小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体，此组合物中的小分子化合物或单克隆抗体或携带小分子干扰RNA的病毒载体的有效剂量为对P-糖蛋白的表达抑制效率达到30％及以上时的量，动物实验结果显示，该有效剂量能发挥出其抑制癫痫发作频率、持续时间的作用，同时相应脑波也呈现癫痫发作频率、持续时间相似的改变。
文档编号A61K31/713GK102727895SQ20111008447
公开日2012年10月17日 申请日期2011年4月2日 优先权日2011年4月2日
发明者刘振国, 王枫, 赵永波 申请人:上海市第一人民医院, 潍坊市人民医院