专利名称：菲律宾刺参硫酸软骨素多糖及其提取方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种大分子化合物--菲律宾刺参硫酸软骨素多糖及其提取方法和用途，属于天然高分子领域。
背景技术：
研究发现存在于海参体壁的多糖主要分两类一类为岩藻糖基化的海参硫酸软骨素(sea cucumber fucolysated chondroitin sulfate) (38，39)，是由 D-N-乙酰氨基半乳糖、D-葡萄糖醛酸和L-岩藻糖组成的分支杂多糖，相对分子质量为4万-5万；另一类为海参岩藻多糖(Holothurian fucan) 00，41)，是由L-岩藻糖所构成的直链多糖，相对分子质量为8万-10万。两者的组成糖基虽不同，但糖链上都有部分羟基发生硫酸酯化，并且硫酸酯基类多糖含量均在32%左右，两种海参多糖的特殊结构，均为海参所特有。海参硫酸软骨素是海参两种主要多糖之一，其结构复杂，且因海参种类和生长环境的不同而有差别。近年来，国内外对海参硫酸软骨及其异构物的药理作用进行了研究，证明其具有抗肿瘤，提高机体免疫力，抗血栓，抗凝血，降低血粘度，保护神经组织及抑菌等多种生理活性，对人体的生理功能调控、维系生命最佳状态具有极其重要的意义。目前，文献研究报道的海参硫酸软骨素主要有以下两种其一为Paulo A. S.等从L. grisea海参中提取出一种海参多糖，类似硫酸软骨素的结构，糖组成分析表明其含有Fuc GalNAc GlcA S04约为1 1 1 2. 7，采用稀酸酸水解并结合NMR技术观察水解过程中核磁共振屯NMR谱图变化表明，岩藻糖支链主要连接在葡萄糖醛酸的3位上。采用硫酸软骨素ABC酶并对产物进行二糖组成分析，表明主链含有硫酸软骨素，硫酸软骨素4-S和的硫酸软骨素4，6-S。而核磁分析表明其支链岩藻糖以4-0-S04取代为主，并含有3，4和2，4-0-S04取代。其二为Kariya等从日本刺参(S. japonicus)体壁中分离纯化出海参糖胺聚糖，经酸解后测定其单糖和硫酸基组成，发现其为硫酸软骨素E型结构，硫酸基(SO/—)、氨基半乳糖(GalN)、葡萄糖醛酸(GlcUA)和岩藻糖(Fuc)的摩尔比为3 2 2 1。进一步的结构分析表明这种硫酸软骨素的岩藻糖支链以2，4-0-S04为主，并且含有3，4和4-0-S04取代。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种菲律宾刺参硫酸软骨素多糖及其提取方法和用途；该菲律宾刺参硫酸软骨素多糖具有抗凝血、抗血栓活性等活性。为了解决上述技术问题，本发明提供一种菲律宾刺参硫酸软骨素多糖，其结构式如下
权利要求
1.菲律宾刺参硫酸软骨素多糖，其特征是其结构式如下
2.根据权利要求1所述的菲律宾刺参硫酸软骨素多糖，其特征是主链为硫酸软骨素 E结构，同时带有硫酸岩藻糖构成的支链，该支链通过糖苷键连接在主链的β -D-葡萄糖醛酸上，且硫酸基的取代方式为75% 3,4-0-S04,20% 2，4_0_S04以及5% 4_0_S04。
3.如权利要求1或2所述的菲律宾刺参硫酸软骨素多糖的提取方法，其特征是包括以下步骤1)、将固体海参粉碎或切成小块，加入木瓜蛋白酶于50 70°C酶解12 48小时；所述木瓜蛋白酶与固体海参的质量比为1 8 12;2)、将步骤1)所得的酶解后产物离心，取上清；向上清中加入质量浓度为8% 12%的氯化十六烷基吡啶溶液放置20 观小时后，离心，弃去上清液；得沉淀；所述氯化十六烷基吡啶溶液与步骤1)中的固体海参的液料比为1. 4 1. 8ml氯化十六烷基吡啶溶液/Ig固体海参；3)、将步骤2)所得的沉淀溶解于NaCl的乙醇水溶液中，再加入体积浓度彡95%的乙醇，3 5°C放置22 沈小时，离心，沉淀用体积浓度> 80%的乙醇洗涤后干燥；将干燥后沉淀先用蒸馏水溶解，然后用截流分子量为6000Da的中空纤维膜超滤并脱盐，浓缩，冻干， 得菲律宾刺参硫酸软骨素多糖的粗产物；所述NaCl的乙醇水溶液中=NaCl的浓度为2. 5 3. 53mol/L，所述乙醇水溶液为乙醇与水按照100 10 20的体积比混合而得；所述体积浓度彡95%的乙醇与于NaCl的乙醇水溶液的体积比为1 2 1。
4.根据权利要求3所述的菲律宾刺参硫酸软骨素多糖的提取方法，其特征是将菲律宾刺参硫酸软骨素多糖的粗产物经离子交换树胶纯化，得菲律宾刺参硫酸软骨素多糖。
5.根据权利要求4所述的菲律宾刺参硫酸软骨素多糖的提取方法，其特征是所述纯化方法为将菲律宾刺参硫酸软骨素多糖的粗产物采用DEAE阴离子交换树脂(2. 6*20cm)分离纯化，采用0-1. 4mol/LNaCl缓冲盐溶液进行梯度洗脱，通过液相TSK4000柱子检测所收集的洗脱液，将组分单一的洗脱液经截留分子量为HOOODa的透析袋透析，真空冷冻干燥，得菲律宾刺参硫酸软骨素多糖。
6.如权利要求1或2所述的菲律宾刺参硫酸软骨素多糖的用途，其特征是用于抗凝血或者抗血栓。
全文摘要
本发明公开了一种菲律宾刺参硫酸软骨素多糖，其结构式如下主链为硫酸软骨素E结构，同时带有硫酸岩藻糖构成的支链，该支链通过糖苷键连接在主链的β-D-葡萄糖醛酸上，且硫酸基的取代方式为75％3，4-O-SO4，20％2，4-O-SO4以及5％4-O-SO4。本发明还同时公开了上述菲律宾刺参硫酸软骨素多糖的提取方法。该多糖具有抗凝血或者抗血栓的作用。
文档编号A61K31/737GK102367285SQ20111034731
公开日2012年3月7日 申请日期2011年11月6日 优先权日2011年11月6日
发明者叶兴乾, 廖宁波, 李国云, 薛长湖, 陈士国 申请人:浙江大学