专利名称：用于治疗低密度脂蛋白相关蛋白质6(lrp6)的抗体的组合物及使用方法
技术领域：
本发明涉及与LRP6特异性结合的抗体。本发明更特别地涉及LRP6拮抗剂的特异性抗体。
背景技术：
Wnt/β -联蛋白通路通过调节β -联蛋白的蛋白质稳定性，在发育和组织内稳态期间调节多种生物学过程(Clevers等人，(2006)Celll27 :469-480 ;和Logan等人，(2004)Annu. Rev Cell Dev. Biol20 =781-810) 在不存在Wnt信号的情况下，胞质β -联蛋白与β -联蛋白破坏复合物结合，所述β -联蛋白破坏复合物包含多种蛋白质，包括腺瘤性结肠息肉(adenomatous polyposis coli) (APC)、Axin 和糖原合酶激酶 3 (GSK3)。在该复合物中，联蛋白被GSK3组成性磷酸化，并通过蛋白酶通路降解。Wnt信号通过两种不同的受体，蛇根碱受体Frizzled和单次跨膜蛋白质 LRP5或LRP6跨质膜转导。Wnt蛋白促进Frizzled-LRP5/6信号复合物的组装，并诱导LRP5/6的胞质PPPSPxS基序被GSK3和酪蛋白激酶I磷酸化。磷酸化的LRP5/6与Axin结合并失活β -联蛋白降解复合物。稳定的β -联蛋白进入细胞核，与TCF家族转录因子结合，并启动转录。LRP5/6的巨大胞外结构域含有4个YWTD型β -螺旋桨区(每一个YWTD型β -螺旋桨区的后面是EGF样结构域)，以及LDLR结构域。每一螺旋桨区含有形成6叶片β-螺旋桨结构的6个YWTD基序。生物化学研究提示，Wnt蛋白质与Frizzled和LRP6 二者物理结合，并诱导Frizzled_LRP6信号复合物的形成(Semenov等人，(2001) Curr. Biol 11,951-961 ;和 Tamai，等人(2000) Nature407, 530-535)。除 Wnt 蛋白质外，LRP5/6 的巨大胞外结构域与多种分泌性Wnt调节物结合，包括Wnt拮抗剂DKKl和Sclerostin (SOST)，以及Wnt 激动剂 R-Spondins。Wnt信号通路的失调与许多人类疾病相关。Wnt/LRP5/6信号通路在组织内稳态和再生中发挥着重要作用。fct信号通过增加成骨细胞的生长和分化，促进骨形成(Baron等人，(2006) Curr. Top. Dev. Biol76 :103-127)。LRP5 的功能获得突变(Boyden 等人，(2002) N. Engl. J Med346 :1513-1521 ；Little 等人，(2002) Am. J Hum. Genet. 70 :11-19 ；VanWesenbeeck 等人，(2003) Am. J Hum. Genet. 72 :763-71)和 Wnt 拮抗剂 SOST 的功能丢失突变(Balemans 等人，(2001) Hum. Mol Genet. 10 :537-543 ;Brunkow 等人,(2001) Am. J Hum.Genet. 68 :577-589) 二者都导致高骨量病(high bone mass disease)。Wnt 信号通过维持肠隐窝中干细胞的增殖状态，对肠上皮细胞的内稳态也是关键的(Pinto等人，(2005)BiolCell97 :185-196)。Wnt 信号对肾修复和再生也是关键的(Lin SL PNAS 107:4194,2010)。此外，通路组分例如APC和β -联蛋白的突变与人类癌症相关。最近的研究表明，过表达Wnt蛋白和/或沉默Wnt拮抗剂例如DKKl、WISP和sFRP促进癌症的发展和进程(Akiri等人，(2009)0ncogene28 :2163-2172 ;Bafico 等人，(2004) Cancer Cell6 :497-506 ;Suzuki 等人，(2004) Nat Genet. 36 :417-422 ;Taniguchi 等人，(2005) Oncogene. 24 :7946-7952 ;Veeck等人，(2006)Oncogene. 25 :3479-3488 ；Zeng 等人，(2007)Hum. Pathol. 38 :120-133)。此外，Wnt信号还涉及肿瘤干细胞的维持(Jamieson等人，(2004)Cancer Cell 6 :531-533和Zhao等人，(2007)Cancer Cell 12:528-541)。因此，存在在胞外水平拮抗Wnt信号的试剂的需求，作为用于与异常的经典(canonical)Wnt信号相关疾病的疗法。发明概述本发明提供了抑制或者增强经典Wnt信号通路的LRP6抗体(例如，单价、二价LRP6抗体)和制备LRP6抗体的方法。本发明LRP6抗体与不同的LRP6 β -螺旋桨区结合。螺旋桨I抗体与β -螺旋桨I结构域结合，并阻断螺旋桨I依赖的fct，例如Wntl、Wnt2、Wnt6、Wnt7A、Wnt7B、Wnt9、WntlOA、WntlOB。螺旋桨3抗体与β -螺旋桨3结构域结合，并阻断螺旋桨3依赖的Wnt，例如Wnt3a和Wnt3。本发明基于LRP6抗体可以将螺旋桨I和螺旋桨3配体区分成两种不同的种类，并与靶LRP6的不同表位结合的意外发现。另一意外发现是，将LRP6抗体的片段(例如，Fab)转变成全长IgG抗体产生了在另一蛋白质例如Wntl或Wnt3配体存在的情况下能加强(增强)Wnt信号的抗体。除Wnt配体外，LRP6螺旋桨I抗体预期会抑制与其他螺旋桨I结合配体(例如Sclerostin、Dkkl)的相互作用。类似地，螺旋桨3抗体预期会抑制与其他螺旋桨3结合配体(例如Dkkl)的相互作用。此外，螺旋桨I和3结合抗体预期可能会影响其他Wnt信号调节物(例如R-spondins)的活性。因此，在一个方面，本发明涉及分离的针对低密度脂蛋白相关蛋白质6 (LRP6)的二价抗体或其二价片段，在未封闭的LRP6结合蛋白质存在的情况下，所述二价抗体或其二价片段通过成簇一个或多个LRP6受体来增强Wnt信号。在一个实施方案中，抗体通过与选自螺旋桨I和螺旋桨3的螺 旋桨区结合来成簇一个或多个LRP6。在一个实施方案中，LRP6结合蛋白质是选自Wntl、Wnt3和Wnt3a的Wnt结合蛋白质。在另一方面，本发明涉及分离的针对低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)的二价抗体或其二价片段，在未封闭的LRP6结合蛋白质存在的情况下，所述二价抗体或其二价片段通过成簇一个或多个LRP6受体来避免Wnt信号的加强。在另一方面，本发明涉及分离的针对低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)的单价抗体或其单价片段，在未封闭的LRP6结合蛋白质存在的情况下，所述单价抗体或其单价片段通过成簇一个或多个LRP6受体来避免Wnt信号的加强。在一个方面，本发明涉及分离的针对低密度脂蛋白相关蛋白质6 (LRP6)的抗体或其片段，所述抗体或其片段具有至少I X IO7M-1UO8M-1UO9M-1UOiqM-1或IO11M^1 UO1VUO13M^1的解离(Kd)，其中抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个实施方案中，如通过溶液平衡滴定测定(Solution Equilibrium Titration assay)中与人LRP6的体外结合所测量,所述抗体或其片段以0. OOlnM-1 μ M的Kd抑制经典Wnt通路，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在另一方面，本发明涉及分离的针对低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)的抗体或其片段，如通过溶液平衡滴定(SET)测定中与人LRP6的体外结合所测量，所述抗体或其片段以低于或等于300 μ M(O. 3ρΜ)的EC5tl抑制经典Wnt通路，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在另一方面，本发明涉及分离的针对低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)的二价抗体或其二价片段，在未封闭的LRP6结合蛋白质存在的情况下，所述二价抗体或其二价片段通过成簇一个或多个LRP6受体来增强Wnt信号。抗体通过与选自螺旋桨I和螺旋桨3的LRP6分子的螺旋桨区结合来成簇一个或多个LRP6。在一个实施方案中，LRP6结合蛋白质是选自fctl、Wnt3和Wnt3a的Wnt结合蛋白质。在另一方面，本发明涉及针对LRP6蛋白的抗体或其片段，所述抗体或其片段与表I中所述的抗体交叉竞争，其中抗体或其片段是单价的或者二价的；抗体或其片段与和表I中所述抗体相同的表位相互作用(例如，通过结合、立体阻碍、稳定化/去稳定化、空间分布)。在一个实施方案中，抗体或其片段是单克隆抗体。在另一个实施方案中，抗体或其片段是人抗体或人源化抗体。在另一个实施方案中，抗体或其片段是嵌合抗体。在一个实施方案中，抗体或其片段包含人重链恒定区和人轻链恒定区。在一个实施方案中，抗体或其片段是单链抗体。在另一个实施方案中，抗体或其片段是Fab片段。又在另一个实施方案中，抗体或其片段是scFv。在一个实施方案中，抗体或其片段与人LRP6和食蟹猴LRP6 二者结合。在一个实施方案中，抗体或其片段是IgG同种型。在另一个实施方案中，抗体或其片段包含这样的框架，其中已经将氨基酸取代成来自分别的人Vh或\种系序列的抗体框架。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其包含表I中任一抗体的1、2、3、4、5或6个⑶R，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
在一个方面，本文中所公开的LRP6抗体与LRP6的螺旋桨I区结合。因此，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其包含选自SEQ ID NO :3、SEQ ID N0:25、SEQ和SEQ ID NO :43的重链⑶R3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其包含选自SEQ IDNO 14,SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :44、SEQ ID N0:60 和 SEQ ID NO :62 的重链 CDRl 和选自 SEQ ID NO 13, SEQ ID NO 33, SEQ ID NO 35, SEQ ID NO 43, SEQ ID NO:59和SEQ ID NO 61的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其中所述抗体包含含SEQ ID勵14的￥11和含SEQ ID NO :13的Vl，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其中所述抗体包含含SEQ ID勵34的￥11和含SEQ ID NO :33的'，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其中所述抗体包含含SEQ ID勵36的￥11和含SEQ ID NO :35的'，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其中所述抗体包含含SEQ ID勵44的￥11和含SEQ ID NO :43的'，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其中所述抗体包含含SEQ ID勵36的￥11和含SEQ ID NO :35的'，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其中所述抗体包含含SEQ ID N0:6(^^VH和含SEQ ID NO :59的'，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其中所述抗体包含含SEQ ID N0:6U^VH和含SEQ ID NO :62的'，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的抗体或其片段，其包含与SEQ ID N0:l、2、3、21、22、23、47、48和49相同的至少一个重链⑶R序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的抗体或其片段，其包含与SEQ ID NO :4、5、6、24、25、2650、51和52相同的至少一个轻链⑶R序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的抗体或其片段，其包含与SEQ ID N0:l、2、3、21、22、23、47、48和49具有至少95%序列同一性的至少一个重链⑶R序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的抗体或其片段，其包含与SEQ ID N0:4、5、6、24、25、2650、51和52具有至少95%序列同一性的至少一个轻链⑶R序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的抗体或其片段，其包含SEQ ID NO :1的重链可变区CDRl ；SEQ ID NO 2 的重链可变区 CDR2 ；SEQ ID NO 3 的重链可变区 CDR3 ；SEQ ID NO 4 的轻链可变区CDRl ；SEQ ID NO 5的轻链可变区CDR2 ;和SEQ ID NO 6的轻链可变区CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的抗体或其片段，其包含SEQ ID NO 21的重链可变区 CDRl ；SEQ ID NO :22 的重链可变区 CDR2 ；SEQ ID NO :23 的重链可变区 CDR3 ；SEQ ID NO 24的轻链可变区CDRl ；SEQ ID NO :25的轻链可变区CDR2 ;和SEQ ID NO 26的轻链可变区CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的抗体或其片段，其包含SEQ ID NO 47的重链可变区 CDRl ；SEQ ID NO :48 的重链可变区 CDR2 ；SEQ ID NO :49 的重链可变区 CDR3 ；SEQ ID NO 50的轻链可变区CDRl ；SEQ ID NO 51的轻链可变区CDR2 ;和SEQ ID NO 52的轻链可变区CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个实施方案中，与LRP6结合的抗体片段选自Fab、F (ab2) ’、F (ab) 2’、scFv、VhH、Vh、\、dAb，其中所述片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及药物组合物，其包含抗体或其片段和可药用载体，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及包含编码含与SEQ ID NO14、34、36、44、60和62相同的重链可变区的多肽的核苷酸序列的核酸；包含编码含与SEQID NO :13、33、35、43、59和61相同的轻链可变区的多肽的核苷酸序列的核酸；包含编码含与SEQ ID N0:14、34、36、44、60和62具有至少98%序列同一性的重链可变区的多肽的核苷酸序列的核酸；包含编码含与SEQ ID N0:13、33、35、43、59和61具有至少98%序列同一性的轻链可变区的多肽的核苷酸序列的核酸。在一个方面，本文中所公开的LRP6抗体与LRP6的螺旋桨3区结合。因此，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其包含选自SEQ ID NO :69、SEQ ID NO :93和SEQID NO :115的⑶R3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明 涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其包含选自SEQ IDNO 69,SEQ ID N0:93和SEQ ID NO :115 的重链CDRl ;选自 SEQ ID NO :70、SEQ ID NO :94和SEQ ID NO 116 的 CDR2 ;和选自 SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :95 和 SEQ ID NO :117 的 CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其包含选自SEQ IDNO 72,SEQ ID N0:96和SEQ ID NO :118 的轻链CDRl ;选自 SEQ ID NO :73、SEQ ID NO :97和SEQ ID NO :119 的 CDR2 ;和选自 SEQ ID NO 74,SEQ ID NO 98 和 SEQ ID NO :120 的 CDR3,其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，其包含选自SEQ IDNO :82、SEQ ID NO :89、SEQ ID NO :106、SEQ ID NO :108、SEQ ID NO :128、SEQ ID NO :130和 SEQ ID NO :138 的 Vh ;选自 SEQ ID NO 8USEQ ID NO 90, SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO:107,SEQ ID NO 127,SEQ ID NO :129和SEQ ID NO : 137的'，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，所述抗体包含SEQ IDNO 82和包含SEQ ID NO 81的Vl，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，所述抗体含有包含SEQ ID NO :90的Vh和包含SEQ ID NO :89的Vl，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，所述抗体含有包含SEQ ID NO :106的Vh和包含SEQ ID NO : 105的\，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，所述抗体含有包含SEQ ID NO :108的Vh和包含SEQ ID NO : 107的\，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发 明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，所述抗体含有包含SEQ ID NO :128的Vh和包含SEQ ID NO : 127的\，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，所述抗体含有包含SEQ ID NO :128的Vh和包含SEQID NO :127的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，所述抗体含有包含SEQ ID NO :130的Vh和包含SEQ ID NO : 129的\，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的针对LRP6的抗体或其片段，所述抗体含有包含SEQ ID NO :138的Vh和包含SEQ ID NO : 137的\，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的抗体或其片段，其包含与SEQ ID NO :69、70、71、93、94、95、115、116和117相同的至少一个重链⑶R序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的单克隆抗体或其片段，其包含与SEQ ID NO 72,73、74、96、97、98、118、119和120相同的至少一个轻链CDR序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的单克隆抗体或其片段，其包含与SEQ ID NO 70,71、93、94、95、115、116和117具有至少95%序列同一性的至少一个重链⑶R序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的单克隆抗体或其片段，其包含与SEQ ID NO :72、73、74、96、97、98、118、119和120具有至少95%序列同一性的至少一个轻链⑶R序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的单克隆抗体或其片段，其包含SEQ ID NO 69的重链可变区CDRl ；SEQ ID NO :70的重链可变区CDR2 ；SEQ IDNO 71的重链可变区CDR3 ；SEQID NO :72的轻链可变区CDRl ；SEQ ID NO :73的轻链可变区CDR2 ;和SEQ ID NO 74的轻链可变区CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的单克隆抗体或其片段，其包含SEQ ID NO 93的重链可变区CDRl ；SEQ ID NO :94的重链可变区CDR2 ；SEQ ID NO :95的重链可变区CDR3 ；SEQID NO :96的轻链可变区CDRl ；SEQ ID NO :97的轻链可变区CDR2 ;和SEQ ID NO 98的轻链可变区CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及分离的单克隆抗体或其片段，其包含SEQ ID NO :115的重链可变区CDRl ；SEQ ID NO :116的重链可变区CDR2 ；SEQ ID NO :117的重链可变区CDR3 ；SEQ ID NO :118 的轻链可变区 CDRl ;SEQ ID NO :119 的轻链可变区 CDR2 ;和 SEQ ID NO :120的轻链可变区CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。 在一个方面，本发明涉及与LRP6的β -螺旋桨I结构域结合的单克隆抗体和与LRP6的β -螺旋桨3结构域结合的单克隆抗体的组合，其中所述抗体或其片段是单价的。在一个方面，本发明涉及与LRP6的β -螺旋桨I结构域结合的单克隆抗体和与LRP6的β -螺旋桨3结构域结合的单克隆抗体的组合，其中所述抗体或其片段是二价的。在一个实施方案中，与LRP6结合的抗体片段选自Fab、F(ab2)’、F(ab)2’、scFv、VhH、Vh、\、dAb，其中所述片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及药物组合物，其包含抗体或其片段和可药用载体，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及包含编码多肽的核苷酸序列的核酸，所述多肽包含选自SEQ ID NO :82、89、106、108、128、130和138的重链可变区。在一个方面，本发明涉及包含编码多肽的核苷酸序列的核酸，所述多肽包含选自SEQ ID NO81、90、105、107、127、129和137的轻链可变区。在一个方面，本发明涉及包含编码多肽的核苷酸序列的核酸，所述多肽包含与SEQ ID NO :82、89、106、108、128、130和138具有至少98%序列同一性的重链可变区。在一个方面，本发明涉及包含编码多肽的核苷酸序列的核酸，所述多肽包含与SEQ ID NO :81、90、105、107、127、129和137具有至少98%序列同一性的轻链可变区。在一个方面，本发明涉及包含核酸的载体；以及分离的宿主细胞，所述分离的宿主细胞包含(I)编码抗体的重链的重组DNA片段和(2)编码抗体的轻链的第二重组DNA片段。DNA片段与启动子有效连接，并能在所述宿主细胞中表达。抗体是人单克隆抗体；并且宿主细胞是非人哺乳动物细胞系。在一个方面，本发明涉及治疗癌症的方法，包括选择具有LRP6表达的癌症的个体，给个体施用有效量的包含LRP6抗体(例如，单价或二价LRP6抗体或其片段)的组合物。在一个方面，本发明涉及使用针对LRP6的抗体或其片段治疗由经典Wnt信号通路介导的疾病的方法，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及治疗由经典Wnt信号通路介导的癌症的方法，包括选择具有LRP6表达的癌症的个体，并施用有效量的包含抗体或其片段的组合物，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的，并且其中所述癌症选自乳腺癌、肺癌、多发性骨髓瘤、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、胃癌、前列腺癌、急性髓样白血病、慢性髓样白血病、骨肉瘤、鳞状细胞癌和黑素瘤。在一个实施方案中，所述癌症是乳腺癌。在一个实施方案中，所述个体是人类。在一个方面，本发明涉及治疗癌症的方法，包括选择具有LRP6表达的癌症的个体，给所述个体施用有效量的组合物，所述组合物包含与LRP6的螺旋桨I区结合的抗体或其抗体片段，以及与LRP6的螺旋桨3区结合的抗体或其抗体片段，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及治疗癌症的方法，包括选择具有LRP6表达的癌症的个体，给所述个体施用有效量的组合物，所述组合物包含与LRP6结合的并通过LRP6抑制Wnt信号的抗体或其片段，以及与LRP6结合并通过LRP6抑制Wnt3信号的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及用于产生抗体或其片段的方法，包括培养宿主细胞，并分离抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在另一方面，本发明涉及抗体或其片段在生产用于治疗由经典Wnt信号通路介导的癌症的药物中的用途，所述癌症选自乳腺癌、肺癌、多发性骨髓瘤、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、胃癌、前列腺癌、急性髓样白血病、慢性髓样白血病、骨肉瘤、鳞状细胞癌和黑素瘤，其中所述抗体或其片段是 单价的或者二价的。在一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID N0:14的VjPSEQ ID N0:13的Vl的抗体，用于治疗由经典fct信号通路介导的癌症，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :34的SEQ ID N0:36的'的抗体，用于治疗由经典fct信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :36的SEQ ID NO :35的八的抗体，用于治疗由经典fct信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :44的SEQ ID NO :43的八的抗体，用于治疗由经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :60的SEQ ID NO :59的Vl的抗体，用于治疗由经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :62的SEQ ID NO :61的八的抗体，用于治疗由经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ IDNO :82的SEQ ID NO :81的\的抗体，用于治疗由经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID N0:9(^3Vh和SEQ ID NO 89的\的抗体，用于治疗由经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :106的SEQ IDNO :105的\的抗体，用于治疗由经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID N0:108的VH和SEQ ID NO 107的'的抗体，用于治疗由经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :128的SEQ ID NO :127的Vl的抗体，用于治疗由经典fct信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :130的SEQ ID NO : 129的八的抗体，用于治疗由经典fct信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :138的SEQ ID NO :137的八的抗体，用于治疗由经典fct信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。在一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO =HWVi^PSEQ ID N0:13的Vl的抗体，用于用作为药物，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :34的SEQ ID NO :33的\的抗体，用于用作为药物，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID N0:36的
SEQ ID NO :35的'的抗体，用于用作为药物，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :44的SEQ ID NO :43的Vl的抗体，用于用作为药物，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQID NO 62的SEQ ID NO 61的\的抗体，用于用作为药物，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :82的SEQ ID NO :81的'的抗体，用于用作为药物，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO 90的SEQ ID NO 89的\的抗体，用于用作为药物，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :106的Vh和SEQID NO :105的'的抗体，用于用作为药物，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :108的SEQ ID NO : 107的八的抗体，用于用作为药物，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :128的SEQ ID NO :127的Vl的抗体，用于用作为药物，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :130的SEQ IDNO 129的'的抗体，用于用作为药物，其中所述抗体是单价的或者二价的。在另一个实施方案中，本发明涉及具有SEQ ID NO :138的SEQ ID NO :137的'的抗体，用于用作为药物，其中所述抗体是单价的或者二价的。在一个方面，本发明涉及用作为药物的本发明抗体或其片段。在一个方面，本发明涉及用作为治疗表达LRP6癌症的药物的本发明抗体或其片段。在一个方面，本发明涉及用作为治疗表达LRP6的癌症的药物的本发明抗体或其片段，其中所述癌症选自乳腺癌、肺癌、多发性骨髓瘤、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、胃癌、前列腺癌、急性髓样白血病、慢性髓样白血病、骨肉瘤、鳞状细胞癌和黑素瘤。附图简述
图1是显示在PAl细胞、U266细胞和Daudi细胞上所选择的Fab的FACS EC50测定，以及相应的mRNA表达数据㈧和通过shRNA击倒LRP6的FACS EC50测定及相应的mRNA表达数据B的图；图2A-L是显示表达1社1或1社34配体的册1(2931'/17 STF细胞(基因报告测定)中抗LRP6 Fab片段活性的图。数据显示，抗LRP6 Fab选择性阻断Wntl和Wnt3信号；
图3显示抗LRP6 β螺旋桨I和β螺旋桨3抗体对人、小鼠和食蟹猴的交叉反应值；图4是显示在ΗΕΚ293Τ/17 STF细胞(基因报告测定)中瞬时表达多种WNT配体并用抗LRP6抗体处理的图，其显示，基于抗体与LRP6的特定β螺旋桨区的结合/阻断，特定WNT的活性抑制；图5是显示Fab转变成IgG导致来自未阻断的Wnt配体的信号的增强的柱状图；图6是显示在细胞系统中选择性靶向抑制LRP6的蛋白质印迹；图7是显示在啮齿类动物中，单次静脉内给药与β螺旋桨I区结合的LRP6抗体的图；图8Α是显示MMTV-Wntl肿瘤中相对于t = O对照上调> 2倍的基因的表(调整的P值< O. 01)和图8B是显示将单剂量的M0R08168 (5mg/kg)施用给携带MMTV-Wntl肿瘤的小鼠后8小时，相对于t = O对照下调> 2倍的基因的表(调整的P值< O. 01)；图9A是显示在MMTV-Wntl模型中，螺旋桨1，而不是螺旋桨3mAb在体内引起肿瘤消退的图。图9B是显示不同剂量的螺旋桨ImAb对MMTV-Wntl肿瘤模型生长的影响的图；图10是显示在MMTV_Wnt3模型中，螺旋桨3，而不是螺旋桨ImAb引起肿瘤生长抑制的图； 图11是显示在PA-1细胞中，螺旋桨3，而不是螺旋桨ImAb在体内引起Wnt3A诱导的Super Top Flash活性的抑制的图；图12是显示通过HDx MS测定的被M0R06475溶剂保护的LRP6PD3-4的区域(A)和导致结合scFv M0R06475丧失的特定残基突变的图(B)；图13是显示LRP6的β螺旋桨区的简图；图14是显示从大肠杆菌中成功表达并纯化的全部scFv分子的SDS-PAGE凝胶的图；图15A-D是多价抗体的示意性实例。(15A)与完全IgG的羧基端连接的scFvscFv (15B)与Fe的氨基端连接的scFv scFv (15C)与Fe的羧基端连接的scFv scFv (15D)与Fe的氨基端和羧基端连接的scFv scFv ；图16是显示在非还原(泳道I)和还原(泳道2)条件下纯化的双旁原位(biparatopic)抗 LRP6IgG scFv 的 SDS-PAGE 凝胶的图；图17显示双旁原位抗体和单独的各个组分部分在STF测定中的活性；图18显示scFv分子中，接头长度比较在STF测定中的活性；图19是显示双旁原位抗体的结合活性的表；图20显示了双旁原位抗体和Prop3抗体,而不是Propl抗体在PA_1/Wnt3a L细胞共培养模型中的活性；图21是显示在啮齿类动物中，对比5mg/kg单次静脉内给药ProplLRP6抗体和Prop 1/3双旁原位抗体的图；图22是显示在MMTV-Wntl模型中螺旋桨I和双旁原位螺旋桨1/3抗体二者在体内引起肿瘤消退的图；图23是显示在MMTV-Wntl模型中，Propl/3结合双旁原位抗体的剂量应答关系的图24显示鼠MMTV-Wntl乳房肿瘤的分化受拮抗性LRP6抗体诱导。A_B)将MMTV-Wntl肿瘤的碎片皮下移植到裸鼠中。用单剂量的PBS (对照)或5mg/kgM0R08168IgGlLALA 6475 scfv处理荷瘤小鼠。A) Oil Red O染色脂质的代表性图像。B) OilRed O染色的定量。图标表示为平均值土SEM值。在72小时组中η = 4，在24小时组中η=3，在5天组中η = 2，并且对于PBS (对照)η = I ；图25是显示在E-钙粘着蛋白阴性的MDA-MB231异种移植模型中，Propl/3结合双旁原位抗体的活性的图；图 26 显示 M0R08168、M0R06475 和 M0R08168IgGlLALA 6475 scfv 与重组LRP6PD1/2和TO3/4的亲和性和结合动力学。A)如通过Biacore分析测定，亲和性和开/关速率的总结表。B)抗LRP6分子与相应的LRP6受体结构域，PD1/2和PD3/4的代表性结合曲线。C) LRP6PD1/2 和 PD3/4 与 M0R08168IgGlLALA 6475 scfv 的顺次结合；图27显示基于IgG的双旁原位抗体的示意图；图28是显示优化大肠杆菌中抗LRP6scFv表达的SDS-PAGE凝胶的图；图29是显示M0R06475 scFv中单突变对Tm的影响的表。图30是显示M0R08168scFv中单突变对Tm的影响的表；图31是显示在细菌和哺乳动物系统二者中表达的物质中，在M0R08168scFv中双突变对Tm的影响的表； 图32是总结在ELISA、Proteon亲和性和STF报告基因测定中，野生型和M0R06475和M0R08168 scFvs的单 /双突变形式的结合和功能活性的表；图33是设计的突变的所选择的实例的图解。在全部图例中，蛋白质骨架以带状图表示，而所选择的侧链表示为棒状。(a):在scFv6475的同源性模型中，VH:137与两个芳香族残基(Vl:F98 和 Vh:W103)邻近。(b)在 scFv6475 的 VH:137F 突变体中，VH:F37 和 VH:W103可以形成垂直的P1-Pi垛叠相互作用，而Vh:F37和':F98可以形成另一垂直的pi_pi垛叠相互作用。(c)在scFv8168的同源性模型中，疏水残基Vh:V33与极性残基Vh: NlOOa邻近。(d)在scFv8168的VH:V33N突变体中，通过同源性建模提示，VH:N33侧链可以与VH:N100a形成氢键。两个残基之间的氢键通过键表示。(e):在scFv8168的同源性模型中，带电荷残基VH:K43并不与疏水残基VH:V85形成盐桥。(f):由于scFv8168上的Vh:V85E突变，Vh:K43
和Vh:E85的两个带电荷的侧链可以形成盐桥。两个带电荷基团之间的距离可以为2.61人丨
和图34是显示双旁原位抗体的热稳定性测量的表。发明详述
权利要求
1.低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)的分离的二价抗体或其二价片段，所述低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)的分离的二价抗体或其二价片段在未封闭的LRP6结合蛋白质存在的情况下，通过成簇一种或多种LRP6受体来增强Wnt信号。
2.权利要求1的分离的二价抗体或其二价片段，其中所述抗体通过与选自螺旋桨I和螺旋桨3的螺旋桨区结合来成簇一种或多种LRP6受体。
3.权利要求2的分离的二价抗体或其片段，其中所述LRP6结合蛋白质是选自Wntl、Wnt3和Wnt3a的Wnt结合蛋白质。
4.低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)的分离的单价抗体或其单价片段，所述低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)的分离的单价抗体或其单价片段在未封闭的LRP6结合蛋白质存在的情况下，通过成簇一种或多种LRP6受体来避免Wnt信号的增强。
5.低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)蛋白质的分离的抗体或其片段，所述低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)蛋白质的分离的抗体或其片段具有至少IxIOI1UO8M-1UO9M'IoioM-1UO11M-1UO12M-1UO13M-1的解离(Kd)，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
6.权利要求5的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段如通过在溶液平衡滴定测定中与人LRP6体外结合所测量的以0. OOlnM-1 y M的Kd抑制经典Wnt通路，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
7.低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)蛋白质的分离的抗体或其片段，所述低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)蛋白质的分离的抗体或其片段抑制如通过Wnt配体诱导的磷酸化测定评估的LRP6的磷酸化，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
8.低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)蛋白质的分离的抗体或其片段，所述低密度脂蛋白相关蛋白质6(LRP6)蛋白质的分离的抗体或其片段如通过在溶液平衡滴定测定(SET)中与人LRP6体外结合所测量的以低于或等于300 y M的EC5tl抑制经典Wnt通路，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
9.LRP6蛋白的抗体或其片段，所述LRP6蛋白的抗体或其片段与表I中所述的抗体交叉竞争，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
10.抗体或其片段，所述抗体或其片段与表I中所述的抗体结合相同的表位，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
11.权利要求1、4、9或10的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
12.权利要求11的抗体，其中所述抗体是人抗体或人源化抗体。
13.权利要求11的抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。
14.权利要求11的抗体，其中所述抗体包含人重链恒定区和人轻链恒定区。
15.权利要求11的抗体，其中所述抗体是单链抗体。
16.权利要求11的抗体，其中所述抗体是Fab片段。
17.权利要求11的抗体，其中所述抗体是scFv。
18.权利要求11的抗体，所述抗体与人LRP6和食蟹猴LRP6二者结合。
19.权利要求11的抗体，所述抗体是IgG同种型。
20.权利要求11的抗体，其中所述抗体包含这样的框架，其中已经将氨基酸取代成来自各个人Vh或\种系序列的抗体框架。
21.LRP6的分离的抗体或其片段，所述LRP6的分离的抗体或其片段包含表I中任一抗体的1、2、3、4、5或6个⑶R，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
22.LRP6的分离的抗体或其片段，所述LRP6的分离的抗体或其片段包含选自SEQ IDNO :3、SEQ ID NO :25、SEQ和SEQ ID NO 43的重链CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
23.LRP6的分离的抗体或其片段，所述抗体包含选自SEQ ID NO 14,SEQ ID NO :34、SEQID NO 36, SEQ ID NO : 44、SEQ ID NO :60 和 SEQID N0:62 的 Vh 和选自 SEQ ID NO: 13、SEQID NO 33, SEQ ID NO 35, SEQ ID NO 43, SEQ ID NO :59 和 SEQ ID NO :61 的 VL，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
24.LRP6的分离的抗体或其片段，所述抗体包含含SEQ ID NO :14的￥11和含SEQ ID NO:13的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
25.LRP6的分离的抗体或其片段，所述抗体包含含SEQ ID NO :34的Vh和含SEQ ID NO:33的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
26.LRP6的分离的抗体或其片段，所述抗体包含含SEQ ID NO :36的Vh和含SEQ ID NO:35的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
27.LRP6的分离的抗体或其片段，所述抗体包含含SEQ ID NO :44的Vh和含SEQ ID NO:43的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
28.LRP6的分离的抗体或其片段，所述抗体包含含SEQ ID NO :36的Vh和含SEQ ID NO:35的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
29.LRP6的分离的抗体或其片段，所述抗体包含含SEQ ID NO :60的Vh和含SEQ ID NO:59的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
30.LRP6的分离的抗体或其片段，所述抗体包含含SEQ ID NO :61的Vh和含SEQ ID NO:62的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
31.分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段包含与SEQIDNO :1、2、3、21、22、23、47、48和49相同的至少一个重链⑶R序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合。
32.分离的单价单克隆抗体或其片段，所述分离的单价单克隆抗体或其片段包含与SEQID NO :4、5、6、24、25、2650、51和52相同的至少一个轻链CDR序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
33.分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段包含与SEQIDN0:1、2、3、21、22、23、47、48和49、47、48和49具有至少95%序列同一性的至少一个重链⑶R序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
34.分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段包含与SEQIDNO :4、5、6、24、25、2650、51和52具有至少95%序列同一性的至少一个轻链⑶R序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
35.分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段包含SEQID NO :1的重链可变区CDRl ；SEQ ID NO 2 的重链可变区 CDR2 ；SEQ ID NO 3 的重链可变区 CDR3 ；SEQ ID NO 4 的轻链可变区CDRl ；SEQ ID NO 5的轻链可变区CDR2 ;和SEQ ID NO 6的轻链可变区CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
36.分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段包含SEQID N0:21的重链可变区CDRl ；SEQ ID NO :22 的重链可变区 CDR2 ；SEQ ID NO :23 的重链可变区 CDR3 ；SEQ ID NO 24的轻链可变区CDRl ；SEQ ID NO :25的轻链可变区CDR2 ;和SEQ ID NO 26的轻链可变区CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价。
37.分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段包含SEQID N0:47的重链可变区CDRl ；SEQ ID NO :48 的重链可变区 CDR2 ；SEQ ID NO :49 的重链可变区 CDR3 ；SEQ ID NO 50的轻链可变区CDRl ；SEQ ID NO 51的轻链可变区CDR2 ;和SEQ ID NO 52的轻链可变区CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
38.与LRP6结合的前述权利要求中任一项的抗体片段，所述抗体片段选自Fab、F(ab2)’、F(ab)2’、ScFV、VHH、VH、VL、dAbs，其中所述片段是单价的或者二价的。
39.药物组合物，其包含选自权利要求1-38的抗体或其片段和药用载体，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
40.核酸，其包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与SEQID N0:14、34、36、44、60和62相同的重链可变区。
41.核酸，其包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与SEQID NO :13、33、35、43、59和61相同的轻链可变区。
42.核酸，其包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与SEQID N0:14、34、36、44、60和62具有至少98%的序列同一性的重链可变区。
43.核酸，其包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与SEQID NO:13、33、35、43、59和61具有至少98%序列同一性的轻链可变区。
44.载体，其包含权利要求40-43所述的核酸。
45.LRP6的分离的抗体或其片段，其包含选自SEQ ID NO :69、SEQID NO 93和SEQ IDNO :115的CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
46.LRP6的分离的抗体或其片段，其包含选自SEQ ID NO :69、SEQID NO 93和SEQ IDNO :115 的重链 CDRl ;选自 SEQ ID NO :70、SEQID NO :94 和 SEQ ID NO :116 的 CDR2 ;和 SEQID NO 7USEQ ID NO :95和SEQ ID NO :117的CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
47.LRP6的分离的抗体或其片段，其包含选自SEQIDNO :72、SEQID NO :96和SEQ ID NO:118 的轻链 CDRl ;选自 SEQ ID NO :73、SEQID NO 97 和 SEQ ID NO :119 的 CDR2 ;和 SEQ IDNO :74、SEQ ID NO 98和SEQ ID NO :120的CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
48.LRP6的分离的抗体或其片段，其中所述抗体包含选自SEQ ID NO : 82、SEQ ID NO:89,SEQ ID NO 106,SEQ ID NO :108、SEQ ID NO 128,SEQ ID NO :130和 SEQ ID NO :138 的Vh ;选自 SEQ ID NO :81、SEQ IDNO :90、SEQ ID NO :105、SEQ ID NO :107、SEQ ID NO :127、SEQ ID NO :129和SEQ ID NO :137的'，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
49.LRP6的分离的抗体或其片段，其中所述抗体包含含SEQ ID NO 82的Vh和含SEQIDNO 81的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
50.LRP6的分离的抗体或其片段，其中所述抗体包含SEQ ID NO 90的Vh和含SEQ IDNO 89的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
51.LRP6的分离的抗体或其片段，其中所述抗体包含SEQ ID NO :106的Vh和含SEQ IDNO :105的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
52.LRP6的分离的抗体或其片段，其中所述抗体包含SEQ ID NO :108的Vh和含SEQ IDNO :107的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
53.LRP6的分离的抗体或其片段，其中所述抗体包含SEQ ID NO :128的Vh和含SEQ IDNO :127的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
54.LRP6的分离的抗体或其片段，其中所述抗体包含SEQ ID NO :128的Vh和含SEQ IDNO :127的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
55.LRP6的分离的抗体或其片段，其中所述抗体包含SEQ ID NO :130的Vh和含SEQ IDNO :129的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
56.LRP6的分离的抗体或其片段，其中所述抗体包含SEQ ID NO :138的Vh和含SEQ IDNO :137的 '，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
57.分离的抗体或其片段，其包含与SEQID NO :69、70、71、93、94、95、115、116和117相同的至少一个重链CDR序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
58.分离的抗体或其片段，其包含与SEQID NO :72、73、74、96、97、98、118、119和120相同的至少一个轻链CDR序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
59.分离的抗体或其片段，其包含与SEQID NO :70、71、93、94、95、115、116和117具有至少95%序列同一性的至少一个重链CDR序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
60.分离的抗体或其片段，其包含与SEQID NO :72、73、74、96、97、98、118、119和120具有至少95%序列同一性的至少一个轻链CDR序列，其中所述抗体与人LRP6蛋白结合，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
61.分离的抗体或其片段，其包含SEQID NO :69的重链可变区CDRl ；SEQ ID NO :70的重链可变区CDR2 ；SEQ ID NO 71的重链可变区CDR3 ；SEQ ID NO :72的轻链可变区CDRl ；SEQ ID NO :73的轻链可变区CDR2 JPSEQ ID NO :74的轻链可变区CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
62.分离的抗体或其片段，其包含SEQID NO :93的重链可变区CDRl ；SEQ ID NO :94的重链可变区CDR2 ；SEQ ID NO :95的重链可变区CDR3 ；SEQ ID NO :96的轻链可变区CDRl ；SEQ ID NO 97的轻链可变区CDR2 ;和SEQ ID NO 98的轻链可变区CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
63.分离的抗体或其片段，其包含SEQID NO :115的重链可变区CDRl ;SEQ ID NO :116的重链可变区CDR2 ；SEQ ID NO :117的重链可变区CDR3 ；SEQ ID NO :118的轻链可变区CDRl ；SEQ ID NO :119的轻链可变区CDR2 JPSEQ ID NO : 120的轻链可变区CDR3，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
64.选自权利要求35-37中任一抗体的单克隆抗体或其片段与权利要求65-63中任一抗体的组合，其中所述抗体或其片段是单价的。
65.选自权利要求35-37中任一抗体的单克隆抗体或其片段与权利要求65-63中任一抗体的组合，其中所述抗体或其片段是二价的。
66.与LRP6结合的任一前述权利要求的抗体片段，其选自Fab、F(ab2) ’、F (ab) 2’、ScFV、VHH、VH、VL、dAbs，其中所述片段是单价的或者二价的。
67.药物组合物，其包含选自45-63的抗体和可药用载体，其中所述抗体是单价的或者二价的。
68.核酸，其包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含选自SEQIDNO :82、89、106、108、128、130和138的重链可变区。
69.核酸，其包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含选自SEQIDNO :81、90、105、107、127、129和137的轻链可变区。
70.核酸，其包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与SEQID N0:82、89、106、108、128,130和138具有至少98%序列同一性的重链可变区。
71.核酸，其包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与SEQID N0:81、90、105、107、127,129和137具有至少98%序列同一性的轻链可变区。
72.包含权利要求68-71所述核酸的载体。
73.治疗癌症的方法，包括选择具有LRP6表达的癌症的个体，给所述个体施用有效量的包含选自权利要求1-38和45-65的抗体或其片段的组合物，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
74.权利要求73的方法，其中所述个体是人类。
75.治疗由经典Wnt信号通路介导的癌症的方法，包括选择具有LRP6表达的癌症的个体，给所述个体施用有效量的包含选自权利要求1-39和45-65的抗体或其片段的组合物，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的，并且其中所述癌症选自乳腺癌、肺癌、多发性骨髓瘤、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、胃癌、前列腺癌、急性髓样白血病、慢性髓样白血病、骨肉瘤、鳞状细胞癌和黑素瘤。
76.权利要求75的方法，其中所述癌症是乳腺癌。
77.治疗癌症的方法，包括选择具有LRP6表达的癌症的个体，给所述个体施用有效量的组合物，所述组合物包含与LRP6的螺旋桨I区结合的抗体或其片段，以及与LRP6的螺旋桨3区结合的抗体与其片段，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
78.治疗癌症的方法，包括选择具有LRP6表达的癌症的个体，给所述个体施用有效量的组合物，所述组合物包含与LRP6结合并通过LRP6抑制Wntl信号的抗体或其片段，以及与LRP6结合并通过LRP6抑制Wnt3信号的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
79.任一前述权利要求的抗体或其片段在生产用于治疗由经典Wnt信号通路介导的癌症的药物中的用途，所述癌症选自乳腺癌、肺癌、多发性骨髓瘤、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、胃癌、前列腺癌、急性髓样白血病、慢性髓样白血病、骨肉瘤、鳞状细胞癌和黑素瘤，其中所述抗体或其片段是单价的或者二价的。
80.具有SEQID N0:14的VdPSEQ ID NO : 13的Vl的抗体，用于治疗通过经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。
81.具有SEQID NO 34的Vh和SEQ ID NO 36的\的抗体，用于治疗通过经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。
82.具有SEQID NO 36的Vh和SEQ ID NO 35的\的抗体，用于治疗通过经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。
83.具有SEQID NO :44的Vh和SEQ ID NO :43的\的抗体，用于治疗通过经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。
84.具有SEQID NO 60的Vh和SEQ ID NO 59的\的抗体，用于治疗通过经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。
85.具有SEQID NO 62的Vh和SEQ ID NO 61的\的抗体，用于治疗通过经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。
86.具有SEQID NO 82的Vh和SEQ ID NO 81的\的抗体，用于治疗通过经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。
87.具有SEQID NO 90的Vh和SEQ ID NO 89的\的抗体，用于治疗通过经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。
88.具有SEQID NO :106的SEQ ID NO :105的\的抗体，用于治疗通过经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。
89.具有SEQID NO :108的SEQ ID NO :107的\的抗体，用于治疗通过经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。
90.具有SEQID NO :128的SEQ ID NO :127的\的抗体，用于治疗通过经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。
91.具有SEQID NO :130的SEQ ID NO :129的Vl的抗体，用于治疗通过经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。
92.具有SEQID NO :138的SEQ ID NO :137的\的抗体，用于治疗通过经典Wnt信号通路介导的癌症，其中所述抗体是单价的或者二价的。
93.具有SEQID NO :14的SEQ ID NO :13的Vl的抗体，用于作为药物的用途，其中所述抗体是单价的或者二价的。
94.具有SEQID NO 34的Vh和SEQ ID NO 33的\的抗体，用于作为药物的用途，其中所述抗体是单价的或者二价的。
95.具有SEQID NO :36的SEQ ID NO :35的Vl的抗体，用于作为药物的用途，其中所述抗体是单价的或者二价的。
96.具有SEQID NO 44的Vh和SEQ ID NO 43的\的抗体，用于作为药物的用途，其中所述抗体是单价的或者二价的。
97.具有SEQID NO :60的SEQ ID NO :59的Vl的抗体，用于作为药物的用途，其中所述抗体是单价的或者二价的。
98.具有SEQID NO 62的SEQ ID NO :61的\的抗体，用于作为药物的用途，其中所述抗体是单价的或者二价的。
99.具有SEQID NO 82的SEQ ID NO :81的\的抗体，用于作为药物的用途，其中所述抗体是单价的或者二价的。
100.具有SEQID NO :90的SEQ ID NO :89的Vl的抗体，用于作为药物的用途，其中所述抗体是单价的或者二价的。
101.具有SEQID NO :106的SEQ ID NO :105的Vl的抗体，用于作为药物的用途，其中所述抗体是单价的或者二价的。
102.具有SEQID NO :108的SEQ ID NO :107的Vl的抗体，用于作为药物的用途，其中所述抗体是单价的或者二价的。
103.具有SEQID NO :128的V1^P SEQ ID NO :127的Vl的抗体，用于作为药物的用途，其中所述抗体是单价的或者二价的。
104.具有SEQID NO :130的SEQ ID NO :129的Vl的抗体，用于作为药物的用途，其中所述抗体是单价的或者二价的。
105.具有SEQID NO :138的SEQ ID NO :137的Vl的抗体，用于作为药物的用途，其中所述抗体是单价的或者二价的。
106.权利要求1-38和45-66的抗体或其片段，用于作为药物的用途。
107.权利要求1-38和45-66的抗体或其片段，用于作为治疗表达LRP6的癌症的药物的用途。
108.权利要求1-38和45-66的抗体或其片段，用于作为治疗表达LRP6的癌症的药物的用途，其中所述癌症选自乳腺癌、肺癌、多发性骨髓瘤、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、胃癌、前列腺癌、急性髓样白血病、慢性髓样白血病、骨肉瘤、鳞状细胞癌和黑素瘤。
全文摘要
本发明涉及靶向LRP6的抗体和组合物及其使用方法。
文档编号A61P35/00GK103038258SQ201180035808
公开日2013年4月10日 申请日期2011年5月5日 优先权日2010年5月6日
发明者丛枫, S·埃滕伯格, F·哈特勒普, I·克拉格 申请人:诺瓦提斯公司