专利名称：猕猴桃提取物及其提取方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种猕猴桃提取物，此外，还涉及一种该猕猴桃提取物的提取方法，以及其在制备降血糖药物方面的应用；尤其涉及一种猕猴桃提取部位在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物在降血糖方面的应用。
背景技术：
称猴桃为称猴桃科植物称猴桃(Actinidia chinensis Planch)的果实，又名藤梨、猕猴梨、羊桃等，生于山地林间或灌丛中，常缠绕在他物上。分布于中南及陕西、江苏、安徽、浙江、江西、福建、四川、贵州、云南等地，味酸、甘，性寒。归胃。肝、肾经。具有解热、止渴，健胃，通淋之功能。主治烦热、消渴，肺热干咳，消化不良，湿热黄疸，石淋，痔疮。查阅文献发现，猕猴桃果中富含挥发性成分、多种维生素、有机酸、黄酮、猕猴桃碱、多糖及多种人体必需的氨基酸和微量元素等多种化学成分，药理研究表明，其具有降血脂、抗脂质过氧 化、拮抗细胞毒性、抗突变、保肝、防癌、提高免疫力等方面的药理活性，具备了食用兼药用的功能，但关于猕猴桃在α -葡萄糖苷酶抑制剂方面的研究未见报道，需要进一步深入研究，开发其在糖尿病治疗药物方面的实际应用。糖尿病(diabetes)是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，包括以胰岛素绝对缺乏为主的I型糖尿病及以胰岛素相对缺乏和胰岛素抵抗为主的II型糖尿病、妊娠糖尿病及其他特殊类型的糖尿病。临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状，糖尿病(血糖)一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。目前，糖尿病在世界范围内已成为继心脑血管疾病、肿瘤之后严重危害人类健康的第三大慢性病。糖尿病是世界公认的顽症之一，人们得了糖尿病后很难治愈，通常需要长期服药；病症的持续期可以长达几十年。糖尿病的主要危害不是糖尿病本身，而是在糖尿病发展过程中出现的各种慢性并发症。糖尿病引起的大血管病变可以导致动脉硬化、舒缩功能障碍及加重血管损伤后内皮炎性反应和血管平滑肌增殖等，造成动脉粥样硬化和冠心病等糖尿病心血管疾病；而糖尿病微血管病变则会引起高血压、糖尿病肾病和糖尿病视网膜病变。虽然现代医学技术已能有效地控制大多数患者的血糖，但仍无法有效地预防和治疗糖尿病引发的慢性并发症。由于糖尿病并发症的高发性和严重性，糖尿病已经成为世界第五大致死性疾病。随着我国近年来经济和社会发展水平迅速提高，引起了人们生活方式和饮食结构的变化，我国糖尿病患病率也呈明显上升趋势。我国糖尿病患病率已从1980年的O. 67%上升到2004年的5. 5%，增加了 9倍，在2012年世界卫生统计中首次把关于高血糖患者的数据纳入了其中，尽管全球平均患病率约为10%，但在一些太平洋岛屿国家，高达三分之一的人口患有该病症。不及时治疗，糖尿病会导致心血管疾病、失明和肾功能衰竭。目前，我国的糖尿病患者数量仅次于印度，是世界上糖尿病第二大国。更令人担忧的是，据世界卫组织预测，到203年时，我国的糖尿病患者人数有可能翻一倍，因此，预防和治疗糖尿病已成为我国乃至全球性的保健问题。近年来研究发现，糖尿病病发过程中往往先出现餐后高血糖，而后发展成糖尿病，即前者是后者的先期征兆。对于糖尿病患者，特别是II型病人，餐后高血糖对机体的危害远远超过空腹高血糖,餐后高血糖不仅极易诱发各种并发症,还会极大地提高糖尿病的死亡率，所以降低餐后血糖是预防糖尿病，减少并发症和降低死亡率的重要措施之一，也就是说控制餐后血糖是控制高血糖、防治糖尿病的重要举措。在糖尿病病人中，约90%以上的糖尿病病人属II型糖尿病，目前主要通过口服降糖药，控制空腹血糖来达到治疗目的，治疗药物长期以来主要集中于促胰岛素分泌剂如磺脲类(格列本脲、格列吡嗪)，主要用于降低正常人或者胰岛素功能尚未完全丧失的糖尿病患者的血糖；增强外周葡萄糖利用的药物如双胍类药物(苯乙双胍、二甲双胍)，对无论有无胰岛功能的糖尿病患者均有降糖作用，这两类药在降低空腹血糖的同时也会带来较大的副作用，而且对降低餐后血糖的作用不明显。 α -葡萄糖苷酶抑制剂是一类以延缓肠道碳水化合物吸收而达到治疗糖尿病的口服降糖药物。目前逐渐取代磺脲类和双胍类降糖药，被广泛应用于临床，此类药物有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇。其作用机制为竞争性抑制位于小肠的各种α-葡萄糖苷酶，使淀粉类分解为葡萄糖的速度减慢，从而减缓肠道内葡萄糖的吸收，降低餐后高血糖。α -葡萄糖苷酶抑制剂能有效的控制餐后血糖的升高，预防糖尿病的发生，减少并发症的出现，降低死亡率，此外，不刺激β细胞分泌胰岛素，但可降低餐后胰岛素水平，说明可增加胰岛素的敏感性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种猕猴桃提取物。本发明的目的还在于提供一种该猕猴桃提取物的提取方法。进一步地，本发明的目的在于提供一种猕猴桃提取物在降血糖方面的应用。更进一步地，本发明的目的还在于提供一种猕猴桃提取部位在制备降血糖药物方面的应用，尤其是制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物方面的应用。为了实现上述目的，本发明的技术方案采用了一种猕猴桃提取物，由以下方法提取获得取新鲜的带皮猕猴桃，将其切碎，用甲醇加热回流提取两次，依次为I. 5 — 2. 5h、
0.5-1. 5h ;将两次提取液合并、过滤，浓缩得猕猴桃甲醇总提取物；猕猴桃甲醇总提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压抽滤，浓缩分别得到猕猴桃石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位。所述的提取物为猕猴桃的石油醚提取物、乙酸乙酯提取的或正丁醇提取物中的一种或其任意组合。本发明的技术方案还在于采用了一种猕猴桃提取物的提取方法，包括以下步骤的方法取新鲜的带皮猕猴桃，将其切碎，用甲醇加热温度为60— 80°C回流提取两次，依次为
1.5-2. 5h、0. 5-1. 5h ;将两次提取液合并、过滤，浓缩得猕猴桃甲醇总提取物；猕猴桃甲醇总提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压抽滤，浓缩分别得到猕猴桃石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位。
另外，本发明的技术方案还采用了一种猕猴桃提取物在降血糖方面的应用；尤其是在制备降血糖药物方面的应用。同时，本发明的技术方案还采用了一种猕猴桃提取物在制备α -葡萄糖苷酶抑制剂类药物方面的应用及猕猴桃提取物制备的α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物在糖尿病体内降血糖方面的应用。本发明的猕猴桃提取部位来自于猕猴桃的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇提取部位。本发明所采用的猕猴桃提取部位来源于猕猴桃科猕猴桃属植物猕猴桃的果实，生于山地林间或灌丛中，常缠绕在他物上。分布于中南及陕西、江苏、安徽、浙江、江西、福建、四川、贵州、云南等地。经体外α-葡萄糖苷酶抑制活性实验筛选，阿卡波糖(Acarbose)为阳性对照药，观察猕猴桃石油醚提取部位(ACPE)、乙酸乙酯提取部位(ACEA)和正丁醇提取部位(ACBU)三种提取部位对α-葡萄糖苷酶的抑制作用，实验结果表明猕猴桃各提取部位对α-葡萄糖苷酶均有一定的抑制作用，而且在一定质量浓度范围内呈剂量依赖性，当抑制率达到一定程度后，在增加其质量浓度，抑制活性不在增加。其中在相同初筛质量 浓度(1500yg/mL)时，各提取部位的抑制率均大于96%，接近100%，均大于阳性对照药(57. 26%);从各提取部位的半数抑制浓度IC5tl值分析ACPE对α -葡萄糖苷酶的抑制活性最高(IC50=57. 8 μ g/mL)，其次为 ACEA (IC50=84. 7 μ g/mL)和 ACBU (IC50=124. 7 μ g/mL)，其活性均远高于阳性对照(IC5tl=I 103. 01 μ g/mL)。经体内实验以阿卡波糖(Acarbose)为阳性对照，观察猕猴桃石油醚、乙酸乙酯和正丁醇三种提取部位对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的治疗作用，实验结果表明，猕猴桃ACPE、ACEA和ACBU对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠均有一定的治疗作用，可以通过促进肝糖原的合成，降低肝糖元的分解等途径，降低糖尿病的空腹血糖以及餐后血糖水平；降低血清中TCH和TG的含量，改善糖尿病并发症，如高血脂，纠正糖尿病小鼠的脂质代谢紊乱；通过降低血清中MDA的含量，升高SOD水平，增强糖尿病小鼠机体的抗氧化功能，保护机体免受自由基的进一步伤害，进而达到治疗糖尿病的作用。
图I为本发明的不同提取部位质量浓度对α-葡萄糖苷酶抑制活性影响的曲线图。
具体实施例方式实施例I本实施例的猕猴桃提取物由以下方法提取获得，取新鲜的带皮猕猴桃，将其切碎，用甲醇加热70°C回流提取两次，依次为2h、lh，两次提取液合并、过滤，浓缩得猕猴桃甲醇总提取物，总提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压抽滤，浓缩得到猕猴桃石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位。不同溶剂猕猴桃提取部位的得率见表I。实施例2本实施例为猕猴桃提取物的体外α -糖苷酶抑制活性试验方法96微孔板法
原理a -D-葡萄糖苷酶催化水解4-硝基苯-a -D-吡喃葡萄糖苷(PNP-G)，产生硝基苯酹(ΡΝΡ,黄色物质,在405nm处有最大吸收)，α -葡萄糖苷酶抑制剂可抑制α -葡萄糖苷酶与底物结合从而降低PNP的释放量。以一定时间内反应体系中PNP的含量变化来计算提取部位的酶抑制活性。仪器LRH_150恒温培养箱(上海一恒科技有限公司);DELTA 320型pH计(美国Mettler-Toledo 公司)；Multiskan MK3 酶标仪(美国 Thermo Electron 公司);电子天平(美国Mettler-Toledo公司);旋转蒸发仪(德国Heidolph公司)。试剂α-葡萄糖苷酶(a-glucosidase，EC3. 2. I. 20)和 4_ 硝基苯-a-D-吡喃葡萄糖苷(4-N-trophenyl-a-D-glucopyranoside, PNPG,026K1516)均购自美国 Sigma 公司；阿卡波糖(Acarbose, Lot 16869,德国Serva公司);二甲亚砜(DMS0,分析纯,天津市德恩化学试剂有限公司)；磷酸盐缓冲液(pH 6.8)。检测方法112 μ L磷酸钾缓冲液(pH 6. 8)，加入浓度为O. 2U/mL α -葡萄糖苷酶20 μ L，8 μ L样品溶液，37 V恒温15min，加入20 μ L2. 5mmol/L PNPG, 37 V恒温反应15min。再加入80 μ L、浓度为O. 2mol/L的终止剂Na2CO3溶液，于405nm波长下测OD值。实验共设一下4组样品组(样品+缓冲液+酶+底物)、样品对照组(样品+缓冲液)、空白组(DMS0+缓冲液+酶+底物)、空白对照组(DMS0+缓冲液)，每组3个平行，于405nm处测OD值，按下面计算公式计算抑制率，并用Origin 6. O软件求出相应的IC5tl值。
权利要求
1.一种猕猴桃提取物，其特征在于由以下方法提取获得取新鲜带皮猕猴桃，将其切碎，用甲醇加热回流提取两次，依次为I. 5— 2. 5h、O. 5— I. 5h ;将两次提取液合并、过滤，浓缩得猕猴桃甲醇总提取物；猕猴桃甲醇总提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压抽滤，浓缩分别得到猕猴桃石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位。
2.根据权利要求I所述的猕猴桃提取物，其特征在于所述的提取物为猕猴桃的石油醚提取物、乙酸乙酯提取的或正丁醇提取物中的一种或其任意组合。
3.一种猕猴桃提取物的提取方法，其特征在于包括以下步骤的方法取新鲜的带皮猕猴桃，将其切碎，用甲醇加热回流提取两次，依次为I. 5—2. 5h、0. 5—1. 5h ;将两次提取液合并、过滤，浓缩得猕猴桃甲醇总提取物；猕猴桃甲醇总提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压抽滤，浓缩分别得到猕猴桃石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位。
4.根据权利要求3所述的猕猴桃提取物的提取方法，其特征在于所述的加热温度为60—80。。。
5.一种如权利要求I所述的猕猴桃提取物在降血糖方面的应用。
6.一种如权利要求I所述的猕猴桃提取物在制备降血糖药物方面的应用。
7.—种如权利要求I所述的猕猴桃提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物方面的应用。
8.—种如权利要求I所述的猕猴桃提取物制备的α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物在糖尿病体内降血糖方面的应用。
全文摘要
本发明涉及一种猕猴桃提取物及其提取方法和应用，该猕猴桃提取物由以下方法提取获得:取新鲜带皮猕猴桃，将其切碎，用甲醇加热回流提取两次，依次为1.5-2.5h、0.5-1.5h；将两次提取液合并、过滤，浓缩得猕猴桃甲醇总提取物；猕猴桃甲醇总提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压抽滤，浓缩分别得到猕猴桃石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位。经体内实验以阿卡波糖(Acarbose)为阳性对照，观察猕猴桃石油醚、乙酸乙酯和正丁醇三种提取部位对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的治疗作用，实验结果表明，猕猴桃ACPE、ACEA和ACBU对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠均有一定的治疗作用。
文档编号A61K36/185GK102861114SQ20121038536
公开日2013年1月9日 申请日期2012年10月8日 优先权日2012年10月8日
发明者康文艺, 杨保成, 彭涛, 尹震花 申请人:河南大学