包含聚合物缀合的脂质的脂质体和有关用途
【专利摘要】本发明提供了包含脂质双层和聚合物缀合的脂质的脂质体，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。本发明也提供了：生产脂质体的方法以及将核酸递送给受试者的方法，所述方法包括施用被包囊在混合型脂质体中的核酸的步骤；用于在受试者中执行诊断成像的方法，所述方法包括施用被包囊在混合型脂质体中的诊断剂的步骤；和用于治疗、抑制或遏制受试者的病理学状况的方法，所述方法包括：给所述受试者施用混合型脂质体。
【专利说明】包含聚合物缀合的脂质的脂质体和有关用途
【技术领域】
[0001]本发明提供了包含脂质双层和聚合物缀合的脂质的脂质体，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。本发明也提供了:生产脂质体的方法以及将核酸递送给受试者的方法，所述方法包括施用被包囊在混合型脂质体中的核酸的步骤；用于在受试者中执行诊断成像的方法，所述方法包括施用被包囊在混合型脂质体中的诊断剂的步骤；和用于治疗、抑制或遏制受试者的病理学状况的方法，所述方法包括:给所述受试者施用混合型脂质体。
【背景技术】
[0002]长期以来一直在寻求这样的药物递送系统的应用:所述药物递送系统会提供药物缓释和药物向期望的受影响器官/系统的特异性靶向，从而降低全身性分布和非靶器官的暴露。一种有前途的候选物是磷脂(PL)脂质体和它们的衍生物。脂质体是由磷脂组成的球形小囊泡，且由一个或多个包封水性内容物的脂质双层组成。脂质体可以包囊亲水药物(在水性内容物中)和亲脂药物(在脂质双层中)，因而非常适合用于药物递送。
[0003]磷脂脂质体可以当持续释放或控制释放药物蓄池，从而促进药物效力的改善并实现给药频率的降低。通过为被包封的药物和生物环境提供保护，脂质体会降低药物失活和药物降解的风险。由于从颗粒中释放出的游离药物的药代动力学不同于直接施用的游离药物，这些载体可用于降低毒性和不希望的副作用。
[0004]可以制备宽范 围尺寸(50_500nm)的磷脂脂质体。由于在发炎组织中，细胞间隙从50nm至IOOnm的正常距离扩大,所以小于IOOnm的携带药物的脂质体适合用于向祀系统选择性地递送药物。
[0005]尽管具有优点，仍存在着一些与使用药物包囊脂质体相关的困难。例如，脂质体具有有限的靶向能力、在循环中的有限保留和稳定性、长期施用后的潜在毒性以及不能外渗
坐寸ο
[0006]为了防止已知的纳米脂质体的缺点，我们已经使用聚合物缀合的脂质(Po-L)来形成混合型脂质/Po-L纳米脂质体。
【发明内容】
[0007]在一个实施方案中，本发明提供了一种脂质体，其包含脂质双层和聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
[0008]在另一个实施方案中，本发明提供了一种脂质体，其包含脂质双层和糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
[0009]在另一个实施方案中，本发明提供了一种脂质体，其包含脂质双层和聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中，且其中所述聚合物不是糖胺聚糖。
[0010]在另一个实施方案中，本发明提供了一种生产混合型脂质体的方法，所述方法包括下述步骤:使脂质与聚合物缀合以形成聚合物缀合的脂质，和使所述聚合物缀合的脂质与脂质体接触以生产混合型脂质体。
[0011]在另一个实施方案中，本发明提供了一种混合型脂质体，其通过包括下述步骤的方法生产:使脂质与聚合物缀合以形成聚合物缀合的脂质，和使所述聚合物缀合的脂质与脂质体接触以生产混合型脂质体。
[0012]在另一个实施方案中，本发明提供了一种包含脂质体的组合物，所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
[0013]在另一个实施方案中，本发明提供了一种包含脂质体的组合物，所述脂质体包含脂质双层和糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
[0014]在另一个实施方案中，本发明提供了一种包含脂质体的组合物，所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中，且其中所述聚合物不是糖胺聚糖。
[0015]在另一个实施方案中，本发明提供了一种包含脂质体的药物递送系统，所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
[0016]在另一个实施方案中，本发明提供了一种将核酸递送给受试者的方法，所述方法包括给所述受试者施用所述被包囊在脂质体中的核酸的步骤，所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
[0017]在另一个实施方案中，本发明提供了一种用于在受试者中执行诊断成像的方法，所述方法包括给所述受试者施用被包囊在脂质体中的诊断剂和对所述患者成像的步骤，所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
[0018]在另一个实施方案中，本发明提供了一种用于治疗、抑制或遏制受试者的病理学状况的方法，所述方法包括:给所述受试者施用脂质体，所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]在本说明书的结束部分中特别地指出并明确地要求保护被视作本发明的主题。但是，当阅读附图时参考下述详细描述会最佳地理解本发明。
[0020]图1:描绘聚合物缀合的脂质(Po-L)/脂质体比例和聚合物大小的变化如何影响Po-L/脂质体的结构和功能的模型:(a)蘑菇；在较低Po-L/脂质体比例得到。(b)刷子，在较高Po-L/脂质体比例得到；(c)表面包被，用高分子量HA (或其它GAG)得到。
[0021]图2 =HyPE对由EggPC = Chol:HyPE组成的脂质体的稳定性的影响，通过脂质体的添加剂填装参数(Additive Packing Parameter, PP)来表示:该图将PP显示为脂质体中与HyPE缀合的PE的摩尔百分比的函数。当PP接近于1.0 (但是不高于I)时，得到最佳稳定性。垂直线显示了增加脂质体稳定性的HyPE浓度。EggPC=卵磷脂酰-胆碱；Chol=胆固醇；HyPE=透明质酸(HA)缀合的磷脂酰-乙醇胺(PE)。
[0022]图3:含有不同的聚合物缀合的脂质(Po-L)的脂质体的大小稳定性:将含有或不含指定的Po-L的脂质体在55°C温育17天，并使用动态光散射监测它们的大小的变化。该图显示了在第I天和第17天的大小(nm)。DMPC= 二肉豆蘧酰基磷脂酰-胆碱；HyPE=HyPE=透明质酸(HA)缀合的磷脂酰-乙醇胺(PE) ；Dex(5)-PE=葡聚糖(分子量5K)缀合的PE ；Dex (40) =葡聚糖(分子量40K)缀合的PE ;Heta-PE=HetaStarch (羟乙基淀粉)缀合的PE ；Hem-PE=Hemac c e I (聚明胶肽)缀合的PE。
[0023]图4:Po-L会抑制外部PLA2的脂质体分解。含有或不含HyPE的、由二-油酰基-磷脂酰-胆碱(DOPC)和在碳2处被C6-NBD (荧光脂肪酸)标记的PC组成的脂质体会与外部磷脂酶A2 (PLA2)相互作用。通过由PLA2作用释放的C6-NBD-脂肪酸PC的荧光强度的释放，确定脂质体磷脂的水解。该图描绘了水解5%的脂质体C6-NBD-PC (代表总脂质体磷脂)所需的时间。
[0024]图5:通过包囊化的药物(菊粉荧光素=InFl)的保留来检验的脂质体稳定性:将含有InFl的脂质体(由二肉豆蘧酰基磷脂酰-胆碱(DMPC)组成，含有或含Pol-PLI (HyPE))在血浆中在37°C温育，并持续6天监测释放到脂质体外介质中的In-Fl。
[0025]图6 =Pol-PLI对脂质体在大鼠血液(体内)中的稳定性的影响:将含有InFl的脂质体注射给大鼠尾静脉，并持续28小时如下监测药物在循环中的保留:确定在注射后5分钟和28小时采集的血液样品中的药物水平，并表示为最初注射的InFl量的百分比。该图表明，Hem-PE向脂质体的添加会显著地减慢药物从脂质体的释放。
【具体实施方式】
[0026]纳米脂质体或亚微米双层脂囊泡是一种用于包囊和递送生物活性剂的技术。可以掺入纳米脂质体中的生物活性物质的列表是巨大的，从药物至化妆品和营养制品。因为它们的生物相容性和生物可降解性以及它们的纳米尺寸，纳米脂质体在众多领域中具有潜在应用，包括纳米治疗(例如诊断、癌症治疗、基因递送)、化妆品、食品技术和农业。纳米脂质体能够如下增强生物活性剂的性能:提高它们的溶解度和生物利用度、体外和体内稳定性、以及防止它们与其它分子的不希望的相互作用。纳米脂质体的另一个优点是细胞特异性的靶向，这是在靶位达到最适治疗效果所需的药物浓度同时使对健康细胞和组织的不良作用最小化的先决条件。
[0027]聚合物缀合的脂质(Pol-L)脂质体
[0028]在一个实施方案中，本发明提供了一种脂质体，其包含脂质双层和聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
[0029]在一个实施方案中，所述脂质体由第一种脂质制成，而所述聚合物缀合的脂质的脂质由第二种脂质制成，所述第二种脂质是与所述第一种脂质不同的脂质。例如，且在一个实施方案中，所述脂质体可以用磷脂酰胆碱、用或不用胆固醇制成，而所述缀合物可以用磷脂酰乙醇胺制成。在一个实施方案中，所述聚合物是多糖。在一个实施方案中，所述多糖是糖胺聚糖。
[0030]在一个实施方案中，所述聚合物经由共价键与所述脂质缀合。在一个实施方案中，所述聚合物与所述脂质交联。
[0031]在一个实施方案中，本发明提供了一种脂质体，其包含2种或更多种聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
[0032]在一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质是磷脂酶A2的抑制剂，或在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质会抑制磷脂酶A2的活性、功能或表达。
[0033]在一个实施方案中,所述聚合物是海藻酸。在一个实施方案中，所述海藻酸是低分子量海藻酸。在另一个实施方案中，所述海藻酸是截短的。
[0034]在另一个实施方案中，本发明提供了一种脂质体，其包含脂质双层和糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
[0035]在另一个实施方案中，本发明提供了一种脂质体，其包含2种或更多种糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质，其中所述GAG缀合的脂质包含2种或更多种与单一 GAG缀合的脂质。
[0036]在另一个实施方案中，本发明提供了一种脂质体，其包含2种或更多种糖胺聚糖(GAG)缀合的磷脂，其中所述GAG缀合的磷脂包含2种或更多种与单一 GAG缀合的磷脂。
[0037]在一个实施方案中，所述GAG是透明质酸。在一个实施方案中，所述透明质酸是低分子量透明质酸。在另一个实施方案中，所述透明质酸是截短的。
[0038]在另一个实施方案中，本发明提供了一种脂质体，其包含2种或更多种低分子量透明质酸缀合的磷脂酰乙醇胺，其中所述低分子量透明质酸缀合的磷脂酰乙醇胺包含2种或更多种与单一透明质酸缀合的透明质酸缀合的磷脂酰乙醇胺。
[0039]在另一个实施方案中，本发明提供了一种脂质体，其包含脂质双层和聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中，且其中所述聚合物不是糖胺聚糖。
[0040]在另一个实施方案中，本发明提供了一种脂质体，其包含聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物不是糖胺聚糖。在另一个实施方案中，本发明提供了一种脂质体，其包含聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物不是透明质酸。
[0041]在一个实施方案中，所述聚合物是多糖。在一个实施方案中，所述脂质是磷脂。在一个实施方案中，所述脂质体包含脂质双层。在一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质掺入脂质体的脂质双层。在一个实施方案中，所述脂质体是经修饰的脂质体。
[0042]在一个实施方案中，所述脂质体是纳米脂质体。在一个实施方案中，所述脂质体具有小于IOOnm的直径。在另一个实施方案中,所述脂质体具有小于150nm的直径。在另一个实施方案中，所述脂质体具有小于75nm的直径。在另一个实施方案中，所述脂质体具有小于50nm的直径。在另一个实施方案中,所述脂质体具有1-1OOnm的直径。在另一个实施方案中，所述脂质体具有20-100nm的直径。在另一个实施方案中，所述脂质体具有50_100nm的直径。在另一个实施方案中，所述脂质体具有50-150nm的直径。在另一个实施方案中,所述脂质体具有20-150nm的直径。在另一个实施方案中，所述脂质体具有10_50nm的直径。
[0043]在一个实施方案中，所述脂质体包含脂质双层，且所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的内层和外层。在另一个实施方案中，所述脂质体包含脂质双层，且所述聚合物缀合的脂质仅掺入所述脂质双层的外层。在另一个实施方案中，所述脂质体包含脂质双层，且所述聚合物缀合的脂质仅掺入所述脂质双层的内层。
[0044]在另一个实施方案中，本发明的Po-L脂质体会提供异常稳定的脂质体。在一个实施方案中，本发明的Po-L脂质体对称地插入脂质体的内层和外层中，即，在两个脂质体表面处具有所述聚合物，在一个实施方案中，与小聚合物仅插入在脂质体的外表面(层)上时的脂质体稳定性相比，这会增加脂质体稳定性。在一个实施方案中，大聚合物仅向外脂质体表面的插入会在脂质体中产生过度的不对称和损害脂质体稳定性。[0045]在另一个实施方案中，本发明提供了一种经修饰的包含脂质双层的脂质体，其中所述脂质体包含2种或更多种掺入所述脂质双层中的多糖缀合的磷脂(PoS-PL)。
[0046]在一个实施方案中，本发明的脂质体是经修饰的脂质体，因为所述脂质体将如本文中所述的聚合物缀合的脂质掺入它的脂质双层中，在一个实施方案中，所述脂质双层包含与所述聚合物缀合的脂质的脂质不同的脂质。在一个实施方案中，本发明的经修饰的脂质体被称作混合型脂质体。
[0047]在另一个实施方案中，本发明提供了一种经修饰的包含脂质双层的脂质体，其中所述脂质体包含掺入所述脂质双层中的多糖缀合的磷脂(PoS-PL)，其中所述多糖是糖胺聚糖。
[0048]在另一个实施方案中，本发明提供了一种经修饰的包含脂质双层的脂质体，其中所述脂质体包含掺入所述脂质双层中的多糖缀合的磷脂(PoS-PL)，其中所述多糖是低分子
量糖胺聚糖。
[0049]在另一个实施方案中，本发明提供了一种经修饰的包含脂质双层的脂质体，其中所述脂质体包含掺入所述脂质双层中的多糖缀合的磷脂(PoS-PL)，其中所述多糖不是糖胺聚糖。
[0050]在一个实施方案中，本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的脂质体。在另一个实施方案中，本发明提 供了包含聚合物缀合的脂质的胶束。在另一个实施方案中，本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的纳米脂质体。在另一个实施方案中，本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的四醚脂质体。在另一个实施方案中，本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的免疫脂质体。在另一个实施方案中，本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的病毒体。在另一个实施方案中，本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的超变形的囊泡。在另一个实施方案中，本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的隐形脂质体。在一个实施方案中，所述聚合物是多糖。
[0051]在一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
[0052]在一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:2至1:1000之间。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在2:4至2:2000之间。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:28至1:62之间。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:100至1:500之间。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:25至1:35之间。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:55至1:65之间。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:20至1:70之间。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:10至1:100之间。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:50至1:500之间。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例低于1:100。
[0053]在一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是在20和70之间。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是在28和62之间。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是在10和80之间。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是大约30。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是28。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是25-30。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是20-35。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是15-40。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是大约60。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是62。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是60-65。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是55-70。在另一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是50-75。在一个实施方案中，所述数目或范围大约是在上文中描述的数目或范围。在一个实施方案中，所述重复聚合物单元与脂质的比例是摩尔比。
[0054]在一个实施方案中，所述聚合物是多糖，在一个实施方案中，所述多糖是低分子量多糖。在一个实施方案中，重复聚合物单元是重复二糖单元。在另一个实施方案中，所述聚合物不是多糖，在一个实施方案中，它是海脉素(Haemaccel)。
[0055]在一个实施方案中，所述多糖的分子量是在5_20kD之间。在一个实施方案中，所述PoS-PL如下制备:使多糖与磷脂分别以约1:50至约1:1的质量PI/质量eA(；比例反应。在另一个实施方案中，所述质量m/质量_比例是约1:50至约1:10。在另一个实施方案中，所述质量pl/质量比例是约1:40至约1:1。在另一个实施方案中,所述质量P1/质量比例是约1:10至约1:40。
[0056]在另一个实施方案中，所述质量J1/质量ω(；比例是约1:25。在另一个实施方案中，所述质量pl/质量CM比例是约0.5:15。在另一个实施方案中,所述质量P1/质量比例是约1:15。在另一个实施方案中，所述质量η/质量_比例是约2:15。在另一个实施方案中，所述质量pl/质量CM比例是约5:15。
[0057]在另一个实施方案中，所述GAG的多分散性是约1:50直到50:50。在另一个实施方案中，所述GAG的多分散性是约1:1.75。在另一个实施方案中，所述GAG的多分散性是约
1.25:1.5o
[0058]在一个实施方案中，本发明的脂质-聚合物缀合物包含低分子量多糖，其中所述多糖的平均分子量是在5kD至90kD之间。在另一个实施方案中，所述多糖的平均分子量是在5kD至60kD之间。在另一个实施方案中，所述多糖的平均分子量是在5kD至40kD之间。在另一个实施方案中，所述多糖的平均分子量是在5kD至15kD之间。在另一个实施方案中，所述多糖的平均分子量是在5kD至20kD之间。
[0059]在另一个实施方案中，所述多糖的平均分子量是在IOkD至30kD之间。在另一个实施方案中，所述多糖的平均分子量是在IOkD至50kD之间。在另一个实施方案中，所述多糖的平均分子量大于10kD。
[0060]在一个实施方案中，所述多糖是糖胺聚糖(GAG)。在一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质是糖胺聚糖缀合的磷脂。在一个实施方案中，糖胺聚糖是粘多糖。在一个实施方案中，糖胺聚糖是由重复二糖单元(氨基糖-酸性糖重复单元)组成的长链。在一个实施方案中，所述氨基糖是葡糖胺或半乳糖胺。在一个实施方案中，所述氨基糖被硫酸化。在一个实施方案中，所述酸性糖是D-葡糖醛酸或L-艾杜糖醛酸。
[0061]在一个实施方案中，糖胺聚糖包括糖胺聚糖的盐和游离酸以及已经经过化学修饰但是仍然保留它们的功能的糖胺聚糖。这些修饰包括酯化、硫酸化、多硫酸化和甲基化。例如，透明质酸酯包括透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸镁和透明质酸钙。
[0062]在一个实施方案中，糖胺聚糖可以被化学修饰成含有比它们的最初提取形式更多的硫基。在另一个实施方案中，糖胺聚糖可以是部分地或完全地合成的，且可以具有植物或动物起源。
[0063]在一个实施方案中，糖胺聚糖得自天然来源。在一个实施方案中，糖胺聚糖的天然来源包括植物和动物源，即，山毛榉木树和动物软骨形式，包括鲨鱼软骨、牛科动物气管、鲸鱼隔膜、猪鼻孔和软体动物类(诸如青边贻贝)和海参。在另一个实施方案中，用于本发明中的糖胺聚糖是重组糖胺聚糖。
[0064]在一个实施方案中，然后将糖胺聚糖截短至大约10_30kD，用于本发明的组合物和方法中。
[0065]在本发明的一个实施方案中，所述糖胺聚糖可以是:除了别的以外，透明质酸、肝素、硫酸类肝 素、硫酸软骨素、角蛋白、硫酸角质素、硫酸皮肤素或其衍生物。
[0066]在一个实施方案中，所述GAG是透明质酸。在一个实施方案中，所述透明质酸是低分子量透明质酸、截短的透明质酸或它们的组合。在一个实施方案中，所述低分子量透明质酸具有大约10-50kD的平均分子量。
[0067]在一个实施方案中，本发明的聚合物与本发明的脂质共价地结合。在一个实施方案中，在本发明的脂质体的制备中不使用高分子量GAG，诸如具有大于IOOkD的分子量的透明质酸，因为发现它们会非共价地附着于脂质体。
[0068]在一个实施方案中，低分子量GAG，诸如透明质酸钠，通过如在W02010/132402的实施例9中描述的透明质酸钠的酸水解来制备，其通过引用整体并入本文。
[0069]在一个实施方案中，所述透明质酸和衍生物的分子量通过如在W02010/132402中描述的尺寸排阻色谱法和多角度光散射(SEC-MALS)来确定。
[0070]在一个实施方案中，所述多糖不是糖胺聚糖(GAG)。在一个实施方案中，所述多糖是壳聚糖、海藻酸、羟乙基淀粉、葡聚糖或它们的组合。
[0071]在一个实施方案中，脂质或磷脂可以用于本发明的组合物和方法中。在一个实施方案中，“脂质”表示任意类型的脂质，包括:除了别的以外，磷脂、甘油脂、鞘脂、留醇脂质、戍二稀醇脂质、糖脂质等。
[0072]在一个实施方案中，所述聚合物缀合的脂质是聚合物缀合的磷脂。在另一个实施方案中，所述磷脂是磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酸或磷脂酰甘油。在另一个实施方案中，所述磷脂包含棕榈酸、肉豆蘧酸、肉豆蘧烯酸、棕榈油酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸或二十二碳六烯酸的残余物。
[0073]在一个实施方案中，用于本发明的组合物和方法中的磷脂可以具有变化的链长度。在一个实施方案中，所述磷脂是二肉豆蘧酰基磷脂。在另一个实施方案中，所述磷脂是二棕榈酰基磷脂。在另一个实施方案中，所述磷脂是二月桂基-磷脂。在另一个实施方案中，所述磷脂是二硬脂酰基-磷脂。在另一个实施方案中，所述磷脂是二油酰基-磷脂。[0074]在一个实施方案中，本发明提供了一种脂质体，其包含由通式(A)的结构表示的
脂质-聚合物缀合物:
[0075]
【权利要求】
1.一种脂质体，其包含脂质双层和聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
2.根据权利要求1所述的脂质体，其中所述脂质体是纳米脂质体。
3.根据权利要求1所述的脂质体，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的内层和外层。
4.根据权利要求1所述的脂质体，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的外层。
5.根据权利要求1所述的脂质体，其中所述脂质体包含2种或更多种掺入其中的聚合物缀合的脂质。
6.根据权利要求1所述的脂质体，其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
7.根据权利要求6所述的脂质体，其中所述聚合物缀合的脂质中的脂质与聚合物单元的比例是在2:4至2: 2000之间。
8.根据权利要求1所述的脂质体，其中所述聚合物是海脉素。
9.根据权利要求8所述的脂质体，其中所述海脉素经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
10.根据权利要求1所述的脂质体，其中所述聚合物是多糖。
11.根据权利要求10所述的脂质体，其中所述多糖是糖胺聚糖。
12.根据权利要求11所述的脂质体，其中所述糖胺聚糖是透明质酸。
13.根据权利要求12所述的脂质体，其中所述透明质酸具有大约10-50kD的平均分子量。
14.根据权利要求11所述的脂质体，其中所述糖胺聚糖是硫酸软骨素。
15.根据权利要求11所述的脂质体，其中所述糖胺聚糖是硫酸皮肤素。
16.根据权利要求1所述的脂质体，其中所述糖胺聚糖是肝素。
17.根据权利要求10所述的脂质体，其中所述多糖是壳聚糖。
18.根据权利要求17所述的脂质体，其中所述壳聚糖经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
19.根据权利要求10所述的脂质体，其中所述多糖是海藻酸。
20.根据权利要求10所述的脂质体，其中所述多糖是羟乙基淀粉。
21.根据权利要求10所述的脂质体，其中所述多糖是葡聚糖。
22.根据权利要求21所述的脂质体，其中所述葡聚糖经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
23.根据权利要求1所述的脂质体，其中所述脂质是磷脂。
24.根据权利要求23所述的脂质体，其中所述磷脂是磷脂酰乙醇胺。
25.根据权利要求1所述的脂质体，其中所述脂质体进一步包含第二种聚合物缀合的脂质。
26.根据权利要求25所述的脂质体，其中所述第二种聚合物缀合的脂质是聚乙二醇(PEG)缀合的脂质。
27.一种脂质体，其包含脂质双层和糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
28.根据权利要求27所述的脂质体，其中所述脂质体是纳米脂质体。
29.根据权利要求27所述的脂质体，其中所述GAG缀合的脂质掺入所述脂质双层的内层和外层。
30.根据权利要求27所述的脂质体，其中所述GAG缀合的脂质掺入所述脂质双层的外层。
31.根据权利要求27所述的脂质体，其中所述脂质体包含2种或更多种掺入其中的GAG缀合的脂质。
32.根据权利要求27所述的脂质体，其中所述GAG缀合的脂质包含2种或更多种与单一 GAG缀合的脂质。
33.根据权利要求27所述的脂质体，其中所述GAG中的脂质与二糖单元的比例是2:4至 2:2000。
34.根据权利要求 27所述的脂质体，其中所述GAG是透明质酸。
35.根据权利要求34所述的脂质体，其中所述透明质酸具有大约10-50kD的平均分子量。
36.根据权利要求27所述的脂质体，其中所述GAG是硫酸软骨素。
37.根据权利要求27所述的脂质体，其中所述GAG是硫酸皮肤素。
38.根据权利要求27所述的脂质体，其中所述GAG是肝素。
39.根据权利要求27所述的脂质体，其中所述脂质是磷脂。
40.根据权利要求39所述的脂质体，其中所述磷脂是磷脂酰乙醇胺。
41.根据权利要求27所述的脂质体，其中所述脂质体进一步包含第二种聚合物缀合的脂质。
42.根据权利要求41所述的脂质体，其中所述第二种聚合物缀合的脂质是聚乙二醇(PEG)缀合的脂质。
43.一种脂质体，其包含脂质双层和聚合物缀合的脂质，其中所述聚合物缀合的脂质掺入 所述脂质双层中，且其中所述聚合物不是糖胺聚糖。
44.根据权利要求43所述的脂质体，其中所述脂质体是纳米脂质体。
45.根据权利要求43所述的脂质体，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的内层和外层。
46.根据权利要求43所述的脂质体，其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的外层。
47.根据权利要求43所述的脂质体，其中所述脂质体包含2种或更多种掺入其中的聚合物缀合的脂质。
48.根据权利要求43所述的脂质体，其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
49.根据权利要求48所述的脂质体，其中所述聚合物缀合的脂质中的脂质与聚合物单元的比例是在2:4至2:2000之间。
50.根据权利要求43所述的脂质体，其中所述聚合物是海脉素。
51.根据权利要求43所述的脂质体，其中所述海脉素经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
52.根据权利要求43所述的脂质体，其中所述聚合物是多糖。
53.根据权利要求52所述的脂质体，其中所述多糖是壳聚糖。
54.根据权利要求53所述的脂质体，其中所述壳聚糖经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
55.根据权利要求52所述的脂质体，其中所述多糖是海藻酸。
56.根据权利要求52所述的脂质体，其中所述多糖是羟乙基淀粉。
57.根据权利要求52所述的脂质体，其中所述多糖是葡聚糖。
58.根据权利要求57所述的脂质体，其中所述葡聚糖经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
59.根据权利要求43所述的脂质体，其中所述脂质是磷脂。
60.根据权利要求59所述的脂质体，其中所述磷脂是磷脂酰乙醇胺。
61.根据权利要求43所述的脂质体，其中所述聚合物缀合的脂质的脂质不同于所述脂质体的所述脂质双层的脂质。
62.根据权利要求43所述的脂质体，其中所述脂质体进一步包含第二种聚合物缀合的脂质。
63.根据权利要求62所述的脂质体，其中所述第二种聚合物缀合的脂质是聚乙二醇(PEG)缀合的脂质。
64.一种生产混合型脂质体的方法，所述方法包括下述步骤:使脂质与聚合物缀合以形成聚合物缀合的脂质，和使所述聚合物缀合的脂质与脂质体接触以生产混合型脂质体。
65.根据权利要求64所述的方法，所述方法另外包括下述步骤:在所述接触步骤之前，分离所述聚合物缀合的脂质。
66.根据权利要求64所述的方法，其中所述脂质体包含2种或更多种聚合物缀合的脂质。
67.根据权利要求64所述的方法，其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
68.根据权利要求64所述的方法，其中所述脂质体是纳米脂质体。
69.根据权利要求64所述的方法，其中所述脂质体包含脂质双层，且所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的内层和外层。
70.根据权利要求64所述的方法，其中所述脂质体包含脂质双层，且所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的外层。
71.根据权利要求64所述的方法，其中所述脂质体包含2种或更多种掺入其中的聚合物缀合的脂质。
72.根据权利要求64所述的方法，其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
73.根据权利要求72所述的方法，其中所述聚合物缀合的脂质中的脂质与聚合物单元的比例是在2:4至2:2000之间。
74.根据权利要求64所述的方法，其中所述聚合物是海脉素。
75.根据权利要求74所述的方法，其中所述海脉素经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
76.根据权利要求64所述的方法，其中所述聚合物是多糖。
77.根据权利要求76所述的方法，其中所述多糖是糖胺聚糖。
78.根据权利要求77所述的方法，其中所述糖胺聚糖是透明质酸。
79.根据权利要求78所述的方法，其中所述透明质酸具有大约10-50kD的平均分子量。
80.根据权利要求77所述的方法，其中所述糖胺聚糖是硫酸软骨素。
81.根据权利要求77所述的方法，其中所述糖胺聚糖是硫酸皮肤素。
82.根据权利要求77所述的方法，其中所述糖胺聚糖是肝素。
83.根据权利要求76所述的方法，其中所述多糖是壳聚糖。
84.根据权利要求83所述的方法，其中所述壳聚糖经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
85.根据权利要 求76所述的方法，其中所述多糖是海藻酸。
86.根据权利要求76所述的方法，其中所述多糖是羟乙基淀粉。
87.根据权利要求76所述的方法，其中所述多糖是葡聚糖。
88.根据权利要求87所述的方法，其中所述葡聚糖经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
89.根据权利要求64所述的方法，其中所述脂质是磷脂。
90.根据权利要求89所述的方法，其中所述磷脂是磷脂酰乙醇胺。
91.根据权利要求64所述的方法，其中所述脂质体包含脂质双层，且所述聚合物缀合的脂质的脂质不同于所述脂质双层的脂质。
92.根据权利要求64所述的方法，所述方法另外包括下述步骤:使第二种脂质与第二种聚合物缀合以形成第二种聚合物缀合的脂质，和使所述第二种聚合物缀合的脂质与所述混合型脂质体接触。
93.根据权利要求92所述的方法，其中所述第二种聚合物缀合的脂质是聚乙二醇(PEG)缀合的脂质。
94.通过根据权利要求64所述的方法生产的混合型脂质体。
95.一种组合物，其包含根据权利要求1所述的脂质体。
96.一种组合物，其包含根据权利要求27所述的脂质体。
97.一种组合物，其包含根据权利要求43所述的脂质体。
98.一种药物递送系统，其包含根据权利要求1所述的脂质体。
99.一种将核酸递送给受试者的方法，所述方法包括给所述受试者施用所述核酸的步骤，所述核酸被包囊在根据权利要求1所述的脂质体中。
100.根据权利要求99所述的方法，其中为了治疗目的将所述核酸递送给所述受试者。
101.一种用于在受试者中执行诊断成像的方法，所述方法包括给所述受试者施用诊断剂和对所述患者成像的步骤，所述诊断剂被包囊在根据权利要求1所述的脂质体中。
102.一种用于治疗、抑制或遏制受试者的病理学状况的方法，所述方法包括:给所述受试者施用根据权利要求1所述的脂质体。
103.根据权利要求102所述的方法，其中所述病理学状况是癌症。
104.根据权利要求103所述的方法，其中所述癌症是转移性癌症。
105.根据权利要求102所述的方法，其中所述病理学状况是瘤形成。
106.根据权利要求102所述的方法，其中所述病理学状况是感染。
107.根据权利要求106所述的方法，其中所述感染是脓毒症。
108.根据权利要求102所述的方法，其中所述病理学状况是阻塞性呼吸疾病。
109.根据权利要求102所述的方法，其中所述病理学状况是皮肤病学病症。
110.根据权利要求102所述的方法，其中所述病理学状况是囊性纤维化。
111.根据权利要求102所述的方法，其中所述病理学状况是结膜炎。
112.根据权利要求102所述的方法，其中所述病理学状况是炎性肠病。
113.根据权利要求102所述的方法，其中所述病理学状况是神经系统障碍。
114.根据权利要求102所述的方法，其中所述神经系统障碍是多发性硬化。
115.根据权利 要求102所述的方法，其中所述脂质体进一步包含用于治疗所述病理学状况的生物活性剂。
116.根据权利要求115所述的方法，其中所述病理学状况是癌症，且所述生物活性剂是抗癌药物。
117.根据权利要求115所述的方法，其中所述病理学状况是细菌感染、真菌感染、病毒感染或寄生虫感染，且所述生物活性剂是抗细菌药物、抗真菌药物、抗病毒药物或抗寄生虫药物。
118.根据权利要求115所述的方法，其中所述病理学状况是朊病毒感染，且所述生物活性剂是适合用于治疗朊病毒感染的生物活性剂。
119.根据权利要求102所述的方法，其中口服地、静脉内地、鼻内地、眼内地、肌肉内地、皮下地或局部地施用所述药物。
120.根据权利要求102所述的方法，其中所述脂质体充当靶向发炎组织的聚合物-脂质体缀合物的载体。
121.根据权利要求102所述的方法，其中所述聚合物-脂质体缀合物具有抗炎活性。
122.根据权利要求102所述的方法，其中所述聚合物-脂质体缀合物会增加所述脂质体的稳定性。
123.根据权利要求102所述的方法，其中所述聚合物-脂质体缀合物会增加所述脂质体的半衰期。
【文档编号】A61K9/127GK104023708SQ201280022911
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2012年5月10日 优先权日:2011年5月12日
【发明者】索尔·耶德高 申请人:耶路撒冷希伯来大学依苏姆研究发展公司